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    琥珀膽堿的法醫(yī)毒物分析研究

    2021-12-09 22:44:38廖泫棟孫世麟路帆
    科技信息·學(xué)術(shù)版 2021年33期
    關(guān)鍵詞:測定

    廖泫棟 孫世麟 路帆

    摘要:目的:分析琥珀膽堿的法醫(yī)毒物檢測結(jié)果。方法:使用高效液相色譜法對2016年至2020年調(diào)查的70例氯化琥珀膽堿中毒案例進(jìn)行研究,觀察并分析案例的檢驗結(jié)果、法醫(yī)毒物檢驗結(jié)果、案例特征。結(jié)果:氯化琥珀膽堿中毒主要病理改變?yōu)榧毙苑斡傺?、肺水腫等猝死改變,部分死者心肌排列紊亂及斷裂。結(jié)論:氯化琥珀膽堿需要使用科學(xué)的方法進(jìn)行檢驗。

    關(guān)鍵詞:琥珀膽堿;法醫(yī)毒物;測定

    前言

    琥珀酰膽堿是一種骨骼肌松藥,是一種白色或接近白色、無味、含鹽的結(jié)晶粉末,它能與N2受體結(jié)合,產(chǎn)生去極化狀態(tài),減輕骨骼肌,主要用于引起肌肉痙攣,全身麻醉后因支氣管插管、骨折脫位復(fù)位、破傷風(fēng)等急性損傷,靜脈注射后1分鐘便可見效。琥珀酸膽堿釋放量僅為注射毒素的1%,經(jīng)琥珀酸分子與二聚膽堿脫水而硬化,使之在體內(nèi)易于被酶代謝。在日常生活中,很難找到該物質(zhì)的原型開展檢測工作。快速、準(zhǔn)確地定性、定量分析琥珀膽堿有助于司法鑒定工作的順利進(jìn)行。

    1 資料與方法

    1.1臨床資料

    選取70例氯化琥珀膽堿中毒案例作為研究對象,男性有38例,女性32例,年齡在20-70歲之間,平均年齡為(60±2)歲。70例受害者死后心血提取時間≤24h的有45例,提取時間在24h-36h的有25例;提取時間≥36h的有5例。

    1.2研究方法

    準(zhǔn)確提取死者尸體中的全血將其置入10ml的容量瓶中,加入乙腈至刻度。制備1ng/ml儲備溶液,冷凍至-20℃,精密吸收罐在500ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液中用乙腈依次稀釋,備用。高效液相色譜法(HPLC)以其高靈敏度、高特異、重復(fù)性好等優(yōu)點,在天然藥物成分分析、含量分析、質(zhì)量控制、穩(wěn)定性研究等方面得到廣泛應(yīng)用,已成為天然藥物有效成分的分離、分析的重要方法之一。此次應(yīng)用高效液相色譜法對70例氯化琥珀堿的尸體檢查結(jié)果、法醫(yī)學(xué)毒物檢查結(jié)果、判例特征等進(jìn)行了回顧分析,并使用SCIEX OS操作系統(tǒng)軟件研究了氯化琥珀堿中毒的檢查、鑒定的特征及規(guī)律。

    2 結(jié)果

    2.1尸體檢驗結(jié)果

    由表2-1可以看出,大多數(shù)死亡案例出現(xiàn)2個或更多的針孔,死者肺表面有近一半的血點,死者心臟表面有近3/1的血點。發(fā)現(xiàn)多臟器淤血癥狀死者中有8.57%,7.14%死者出現(xiàn)急性肺淤血、肺水腫癥狀,5.71%的死者出現(xiàn)心肌排列紊亂、斷裂癥狀。

    2.2法醫(yī)毒物檢驗結(jié)果

    由表2-2可以看出,70名死者中檢驗出的氯化琥珀膽堿質(zhì)量濃度最低為10ng/mL以下,最高數(shù)值大于50ng/mL。其中,氯化琥珀膽堿質(zhì)量濃度在10ng/mL以下、10-20ng/mL、30-40ng/mL、40-50ng/mL、50以上ng/mL的死者所占比重分別為2.86%、45.71 %、38.57 %、11.43 %、1.43%。

    2.3案例特征分析

    由表2-3可知,案例中明確死亡時間和死亡時間所占比例均為一半,謀害狀態(tài)為自殺、意外、他殺的比例分別為4.29%、28.57%、67.14%,自殺和自殺人數(shù)最少,是他殺的最多。在謀害動機(jī)中,無動機(jī)所占比例為32.86%,在有動機(jī)中,謀財所占比例最高,在27.14%;仇殺所占比例最低,為17.14%。

    3 討論

    (1)琥珀酰膽堿的臨床應(yīng)用現(xiàn)狀

    氯化琥珀酰膽堿(又稱 skolin,sux)是國家管制的 B類有機(jī)劇毒藥物。多用于動物藥物或手術(shù)的麻醉誘導(dǎo)劑。注射劑無色、無色透明粘液。在臨床上主要用于氣管插管及麻醉手術(shù)時,保持肌肉放松,代謝快,半衰期2~4 min。如用藥過度或不使用呼吸機(jī),肌纖維去極化時,細(xì)胞內(nèi)的鉀離子迅速流出,引起高血鉀、重度室性心率異常和心臟驟停。心動松弛可能是醋酸膽堿引起的。結(jié)節(jié)律性心率異常,心臟緊急停止。大劑量的琥珀酰胺膽堿有抗神經(jīng)節(jié)作用,組胺物質(zhì)明顯釋放,導(dǎo)致支氣管痙攣、血壓降低和過敏性休克,有可能導(dǎo)致呼吸筋麻痹和心室死亡。氯化琥珀膽堿中毒死亡多發(fā)生于中毒后10分鐘內(nèi),因氯化琥珀膽堿的藥效特性而引起的。氯化琥珀酰膽堿在水中具有很強的可溶性。它是一種快速的肌肉松弛藥。肌松效應(yīng)始于60~90 s,持續(xù)時間約10 min,大劑量可引起心率減慢、心律失常、早搏、支氣管痙攣或組胺釋放性休克。目前,罪犯們用氯化琥珀酰胺膽堿投擲保鏢和弩來搶劫牲畜,用于搶劫殺人。因為沒有明顯的中毒跡象,毒販很難直接懷疑中毒。但是,不像傳統(tǒng)的毒藥(毒性強),飛鏢注射器的液體暴露在空氣中后迅速蒸發(fā)成白色粉末,上述物理化學(xué)和藥代動力學(xué)特性,如:氯化琥珀酰膽堿,一般的物理和化學(xué)測試,如死者的血液,肝組織和胃內(nèi)容物只能在小便中檢測出來。魷魚水解酶丁酰失去膽堿酯酶活性,從理論方面來看,可將物質(zhì)置于血液中。

    (2)琥珀酰膽堿的檢測方法

    隨著社會的發(fā)展和人民生活水平的提高,人們越來越重視藥品的質(zhì)量和安全性。需要一種快速可靠的分析方法,以確保出口和出口到國內(nèi)市場的氯化琥珀的安全。琥珀膽堿進(jìn)入人體后會很快被清除,對法醫(yī)毒理學(xué)分析的靈敏度和準(zhǔn)確性有更高的要求。同時,藥物的季銨鹽結(jié)構(gòu)具有較大的極性,這給生物樣品的預(yù)處理和分離分析帶來了重大挑戰(zhàn)。第一個放射性標(biāo)記琥珀膽堿被用來研究其體內(nèi)的過程,隨后是薄層色譜法、氣相色譜法和高效液相色譜法作為定性和定量分析工具。生物樣品中的琥珀膽堿。這些色譜法中常見的問題是檢測靈敏度低,最小定量限制在100-200 ng/mL左右?;蛘撸诜治鲞^程中采用色譜柱后,形成過氧化膽堿和間接測量體液中琥珀膽堿的反應(yīng)非常復(fù)雜。目前經(jīng)常使用氣相色譜-質(zhì)譜法、液相色譜法對生物樣品中的琥珀膽堿進(jìn)行分析。

    金培海等使用溴化鉀壓片法在紅外線光譜儀中毒事件中被檢測出,或發(fā)現(xiàn)犯罪道具中殘留的可疑藥物。通過實驗發(fā)現(xiàn)與紅外光譜庫(Georgia State Forence Drugs)相比,相應(yīng)的氯化琥珀膽堿比與樣品和光譜庫中的氯化琥珀膽堿標(biāo)準(zhǔn)紅外光譜圖的吸收峰值特征一致。此外,與檢材的標(biāo)準(zhǔn)比中,樣品的匹配率可以達(dá)到(98.93%)。因此,應(yīng)用紅外光譜學(xué),定性檢查氯化琥珀膽堿具有準(zhǔn)確可靠的特征,可以用于高純度氯化琥珀的膽堿的定性檢查。張姮婕等通過抑制電導(dǎo)率檢測器(4 mm×250 mm),以甲烷磺酸溶液作為流動相進(jìn)行梯度洗脫,流速為1.0 mL/min-1,通過抑制電導(dǎo)率檢測器(4 mm×250 mm),以抑制電導(dǎo)率計(r=0.999)和14.4~449.8 ng/mL (r=0.999)內(nèi)線關(guān)系良好,定量限制均為0.01。氯化膽堿、氯化琥珀酰胺單膽堿回收率分別為103.4%~105.7%、102.4%~107.1%。氯化膽堿、氯化琥珀酰胺注射液單堿回收率分別為95.6%~100.2%,94.4%~103.5%。王香溢等采用UHPLC-HRMS串聯(lián)串聯(lián)高分辨率質(zhì)譜儀(UHPLC-HRMS)方法,利用 LunaNH 2色譜柱(2 mm×100 mm,3μ m),以0.1%的甲酸水溶液-乙腈等度洗脫,流速是0.2 mL·min,進(jìn)樣體積為5μ m。在大鼠皮膚注射部位可檢測到氯化琥珀膽堿,其含量隨劑量增加而增大。王學(xué)虎等在9只動物身上進(jìn)行實驗,采集動物死亡后的血液和心臟血,優(yōu)化氣相色譜-質(zhì)譜條件和注射順序,有效分離空白干擾物和代謝物。他們首先對中毒死亡試驗中的琥珀酰單膽堿進(jìn)行了估算,并分析了琥珀酰單膽堿與琥珀酰單膽堿的比值,以便從實際情況估算琥珀酰膽堿的來源,并將琥珀酰膽堿納入中毒毒理學(xué)試驗的目標(biāo)。琥珀酰膽堿提高了陽性生物檢測材料的陽性檢出率。潘衛(wèi)剛等使用UHPLC串聯(lián)四極桿時間高分辨質(zhì)譜技術(shù)能快速檢測和鑒定毒素。該實驗以凡丹、敵敵畏 AAA、百草枯病和琥珀氯化物為例,用液-液萃取,經(jīng) SPE柱凈化反應(yīng),再用 IDA掃描。利用高分辨單離子法,學(xué)者們從禽膽肝中定量 Frandan,檢測魚塘中敵敵畏,并檢測南瓜葉上的南瓜葉。濃度范圍從0.5到500出現(xiàn)4種有毒物質(zhì)。在0.5μ g/kg范圍內(nèi),線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)為0.999或更高,測量儀器(s/N=3)的測量限為0.2。研究結(jié)果表明:樣品的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.1%~5.4%之間(n=6),樣品的回收率為73.4%~98.9%。該法簡便、快速、準(zhǔn)確、靈敏,可滿足法醫(yī)毒素快速檢測與鑒定的需求。劉縉等在醋酸鹽溶液和白沉降堿中加入“毒鏢”,利用紅外光譜對白沉降進(jìn)行定性分析,通過氣相色譜-質(zhì)譜-醋酸酯成分分析。結(jié)果表明,該方法能快速檢測琥珀膽堿和普魯卡因的組分,與81.3%紅外光譜相似。盛潔等向大鼠皮下注射三劑吸液。4小時后,盛杰等提取大鼠皮膚和器官組織進(jìn)行乙腈蛋白沉淀和固相,提取WCX進(jìn)行純化。流動相為0.1%酸性溶液乙腈等的洗脫液。采用正離子掃描多反應(yīng)監(jiān)測模式(MRM)進(jìn)行質(zhì)量分析。吸入離子對(M/z145.1在壓縮、壓縮、壓縮、壓縮、壓縮離子對(M/z145.1)領(lǐng)域)結(jié)果suc的檢測值為0.01,L的回收率為89,5%~95.4%,平均日回收率小于15%。在NS對照組的基礎(chǔ)上,在三個劑量的蔗糖組中檢測了血清和主要器官組織如心臟、肝臟和腎臟的蔗糖,結(jié)果令人滿意結(jié)果表明,吸力在大鼠心臟、肝臟、腎臟等重要器官均有表達(dá),MS/MS法是測定大鼠體內(nèi)毒性藥物水平的可靠方法。

    (3)琥珀酰膽堿的檢測結(jié)果

    全血中的琥珀膽堿首先由丁酰膽堿酯酶迅速代謝成琥珀單酰膽堿,并在此酶作用下繼續(xù)代謝琥珀酸和膽堿,后者代謝速度比前者慢。琥珀酸和膽堿都是人體內(nèi)的內(nèi)源性成分,其特異性不強,由于琥珀單酰膽堿代謝緩慢,可作為檢測琥珀膽堿中較好的表征成分。由于琥珀膽堿進(jìn)入人體后很快就被清除,因此對法醫(yī)毒物分析的靈敏度和準(zhǔn)確性提出了更高的要求。與此同時,藥物的季銨鹽結(jié)構(gòu)有很大的極性,這給生物樣品的預(yù)處理和分離分析帶來了挑戰(zhàn)。分析對象選用琥珀膽堿原型藥及琥珀單酰膽堿類化合物,嘗試用親水色譜柱代替反相色譜柱,進(jìn)一步優(yōu)化色譜條件,減少內(nèi)源性干擾對定量的影響,提高檢測靈敏度,縮短分析時間。

    氯化琥珀膽堿中毒的征兆是死亡速度快,死亡率高,且多為重尸斑、面部青紫、心肺表面出血點等癥狀,與不治性猝死、室息死亡等類似。更重要的是一般針孔較小,不易發(fā)現(xiàn),容易漏檢。因此這類案件的隱蔽性很強,容易誤檢為疾病猝死或毒物中毒死亡。對懷疑的琥珀膽堿中毒對象,越早取樣品中檢出琥珀膽堿和琥珀單酰膽堿的含量越高,偵破案件就越有利。對于從這類案件中提取的生物檢材,添加酶抑制劑和防腐劑的冷凍保存可最大程度地保護(hù)藥物原型及其代謝物不受酶或微生物影響。對猝死明顯、疾病或一般毒物未檢見且死亡原因不明的案例,務(wù)必再仔細(xì)檢查尸檢,特別是檢查尸表是否有注射針眼,尤其是在頭發(fā)、腋窩、陰阜等隱蔽部位,以氯化琥珀膽堿為常規(guī)檢驗指標(biāo),防止此類案件的漏檢。

    本文使用高效液相色譜法對患者體內(nèi)的氯化琥珀膽堿進(jìn)行法醫(yī)毒物分析,發(fā)現(xiàn)該方法可以監(jiān)測到不同濃度的氯化琥珀膽堿,觀測到死者的傷痕,推斷出死者的死亡時間,具有較高的檢測質(zhì)量,值得被廣泛應(yīng)用與推廣。

    參考文獻(xiàn)

    [1]李晨華,王賓,王藝璇.紅外光譜和液質(zhì)聯(lián)用儀檢驗生物檢材中的氯化琥珀膽堿[J].廣東公安科技,2021,29(02):22-24.

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