Slit2、MAGE-A3在宮頸癌組織中表達及臨床意義

張晶晶 尚瑞彥 王淑麗 田曉娜

臨床宮頸癌具有較高的基礎發(fā)病率，在合并HPV16或者HPV18感染的群體中，宮頸癌的發(fā)病風險更高[1]。宮頸癌的發(fā)生，增加了疾病中晚期病情進展的風險，使患者總體生存時間顯著下降[2]。在宮頸癌發(fā)病的基礎領域，可以發(fā)現(xiàn)腫瘤蛋白的改變，能夠在癌細胞的發(fā)生或者腫瘤中晚期病情進展方面發(fā)揮作用。Slit2能夠通過調控癌基因的激活程度，降低癌基因的轉錄活性，避免癌細胞的過度增殖，進而穩(wěn)定腫瘤細胞的擴增過程[3]；黑色素瘤相關抗原(MAGE-A3)能夠通過提高腫瘤細胞內信號通路的激活程度，增加癌細胞DNA的分裂速度，促進腫瘤細胞的異常分裂。有部分研究者探討了黑色素瘤相關抗原的表達與宮頸癌的關系，認為黑色素瘤相關抗原的異常波動，能夠顯著促進宮頸癌生物學特征的惡化，但對于Slit2的分析不足。為了揭示Slit2、MAGE-A3的表達與宮頸癌患者的病情關系，可以為臨床上宮頸癌的診療提供一定的依據(jù)，本文收集我院2017年2月至2019年2月保存的宮頸癌標本97例作為研究對象，對Slit2、MAGE-A3的表達及其與宮頸癌患者的病情關系進行比較和探討，并將結果進行如下報告。

1 材料與方法

1.1 一般資料

本文收集我院2017年2月至2019年2月保存的宮頸癌標本97例作為研究對象，同時選取正常宮頸組織97例作為對照，納入標準：①均經(jīng)病理組織學確診；②年齡>18歲；③臨床資料保存完整。排除標準：①接受過放療、化療等抗腫瘤治療；②合并有其他惡性腫瘤、免疫系統(tǒng)疾病、肝腎功能障礙。二組的研究者在一般資料比較，無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，見表1。

表1 二組一般資料比較

1.2 檢測方法

采用石蠟切片，脫水操作后采用3%H2O2室溫條件下孵育20 min，磷酸鹽緩沖液清洗3次，每次5 min，磷酸鹽緩沖液稀釋后的山羊血清封閉抗體5 min，倒去血清后不清洗，加入一抗(購自賽默飛世爾中國 濃度：1∶1000)5 ml，37 ℃孵育2 h，或者放置4 ℃冰箱過夜孵育，磷酸鹽緩沖液清洗3次，每次5 min，加入生物素熒光標記的二抗(購自賽默飛世爾中國 濃度：1∶2000)3 ml，37 ℃孵育20～30 min，磷酸鹽緩沖液清洗3次，每次5 min，加入Streptavidin/HRP辣根酶標記鏈霉卵白素，37 ℃孵育20～30 min，磷酸鹽緩沖液清洗3次，每次5 min，增強型HRP-DAB底物顯色試劑盒(PA110)顯色，自來水沖洗，復染，封片。

1.3 結果判斷

隨機選取5個視野，對染色強度和陽性細胞比例進行評價，其中染色強度：0分是無著色，1分是淡黃色，2分是黃色，3分是棕黃色；陽性細胞比例：0分是低于10%，1分是10%～30%，2分是31%～60%，3分是超過60%。陽性表達為兩者比例得分之和≥3分。

1.4 統(tǒng)計學方法

本文得到的所有數(shù)據(jù)應用軟件包SPSS 22.0進行分析，其中計量資料以均數(shù)±標準差來表示，行t檢驗，計數(shù)資料以%表示，行卡方檢驗，相關性采用Spearman秩相關。檢驗水準=0.05。

2 結果

2.1 二組Slit2、MAGE-A3表達比較

宮頸癌組織中Slit2陽性表達率明顯低于正常宮頸組織(P<0.05)，而MAGE-A3陽性表達率明顯高于正常宮頸組織(P<0.05)。見表2。

表2 二組Slit2、MAGE-A3表達情況比較(例，%)

2.2 Slit2、MAGE-A3表達與臨床病理特征關系

TNM分期Ⅱ期、有淋巴結轉移組織Slit2陽性表達率明顯低于Ⅰ期和無淋巴結轉移組織(P<0.05)；TNM分期Ⅱ期、中低分化、有淋巴結轉移組織MAGE-A3陽性表達率明顯高于Ⅰ期、高分化和無淋巴結轉移組織(P<0.05)。見表3。

表3 Slit2、MAGE-A3表達與臨床病理特征的關系(例，%)

2.3 相關分析

將宮頸癌組織Slit2、MAGE-A3表達進行相關分析，顯示Slit2與MAGE-A3表達呈負相關(γs=-0.430，P<0.05)，見表4。

表4 相關分析

3 討論

宮頸癌是臨床上已知的發(fā)病病因較為清晰的惡性腫瘤，高危HPV病毒的感染，能夠持續(xù)誘導柱狀上皮細胞的病變，最終促進宮頸癌細胞的早期發(fā)生。HPV病毒顆粒感染后通過E6/E7蛋白的擴增和整合作用，提高了柱狀上皮細胞癌基因的激活程度，增加了細胞周期的調控紊亂風險[4]。臨床觀察發(fā)現(xiàn)，宮頸癌患者的生存預后的惡化較為明顯，其中晚期病情進展速度較快[5]。而通過對于宮頸癌臨床病理特征的評估，能夠為臨床上宮頸癌診療提供依據(jù)。雖然宮頸鱗狀上皮細胞抗原能夠在宮頸癌的診療過程中發(fā)揮作用，但鱗狀上皮細胞抗原評估宮頸癌臨床病理特征的符合率較低，其對于宮頸癌病情評估的一致性仍然存在一定的不足[6-7]。本次研究通過對于宮頸癌病灶組織中Slit2、MAGE-A3的表達分析，能夠具有下列幾個方面的作用：①能夠為臨床上宮頸癌的生物學治療提供免疫靶點；②能夠為臨床宮頸癌的病情的評估提供依據(jù)。

Slit2是癌細胞增殖調控因子，具有調控癌細胞周期的作用，可以抑制癌細胞的增殖速度，降低癌細胞G1/S期的細胞比例。基礎分子領域的研究還認為，Slit2還能夠提高癌基因錯配的風險，抑制癌基因的激活程度[8]；MAGE-A3是黑色素瘤相關癌基因，其不僅能夠影響到惡性黑色素瘤的發(fā)病過程，同時還能夠提高癌細胞內MAPK信號通路的激活程度，促進癌細胞浸潤和粘附能力的增強?，F(xiàn)階段臨床上已有的相關研究，主要探討了黑色素瘤基因在宮頸癌病灶組織中的表達情況，認為黑色素瘤相關基因與宮頸癌的發(fā)生或者放化療敏感性有關[9-13]，但對于Slit2的表達與宮頸癌臨床病理特征的關系研究不足。

免疫組化分析了Slit2、MAGE-A3在宮頸癌患者中的表達情況中發(fā)現(xiàn)，Slit2蛋白的表達陽性率在宮頸癌病灶組織中明顯下降，而MAGE-A3的表達陽性率明顯上升，相比于正常宮頸組織，均具有統(tǒng)計學差異，表明Slit2、MAGE-A3的異常表達可能影響到了宮頸癌的發(fā)病過程。Slit2的表達缺失，主要在于其表達缺失，失去了對于癌基因的錯配修復作用，導致癌細胞內癌基因異常蓄積，增加了癌細胞周期紊亂的風險；MAGE-A3對于宮頸癌發(fā)生的影響，在于其能夠提高HPV病毒整合E6/E7蛋白的能力，促進了宮頸癌細胞持續(xù)異常轉錄的風險。有其他研究者也認為，在宮頸癌患者病灶組織中，MAGE-A3蛋白的表達陽性率可隨著宮頸癌患者病情進展速度的惡化而顯著上升，在放化療效果較差或者短期內復發(fā)的患者中，MAGE-A3蛋白的表達水平或者陽性率可翻倍上升[14]。在研究Slit2、MAGE-A3的表達與宮頸癌患者臨床病理特征的關系中發(fā)現(xiàn)，Slit2蛋白的表達陽性率在臨床分期較晚或者淋巴結轉移較為明顯的宮頸癌患者中下降更為顯著，Slit2的表達對于宮頸癌臨床病理特征的影響，主要在于能夠影響到宮頸柱狀上皮細胞浸潤突破宮頸基底膜組織的能力，增加了癌細胞粘附盆腔淋巴結組織的能力[15]；TNM分期Ⅱ期、中低分化、有淋巴結轉移組織MAGE-A3陽性表達率明顯高于Ⅰ期、高分化和無淋巴結轉移組織，MAGE-A3的高表達對于宮頸癌病情的影響，在于其能夠提高癌細胞偽足的形成能力，促進癌細胞分化誘導因子cyc的表達缺失，最終影響到癌細胞分化程度及淋巴結轉移風險。相關關系分析可見，Slit2、MAGE-A3呈負相關關系，提示二者在宮頸癌的發(fā)病過程中可能發(fā)揮了一定的協(xié)調作用，Slit2、MAGE-A3可能在癌基因的調控和癌細胞生物學行為的修飾等方面有著相互拮抗的作用。

綜上所述，宮頸癌組織Slit2表達下調，而MAGE-A3表達上調，兩者在疾病發(fā)生發(fā)展中可能有重要作用，且兩者間存在負相關關系。對于Slit2、MAGE-A3與宮頸癌臨床預后的關系研究，以期為臨床上宮頸癌的診療提供幫助。