酶聯(lián)免疫吸附法與RT-PCR法對血液標本內(nèi)乙肝病毒的檢驗價值比較

張 剛

（商城縣人民醫(yī)院 檢驗科，河南 信陽 465350）

乙型肝炎屬于常見傳染病，其主要由乙肝病毒（HBV） 感染所致，臨床表現(xiàn)為上腹部不適、肝區(qū)疼痛、乏力等，長期攜帶HBV 還可誘發(fā)肝硬化、肝衰竭等嚴重并發(fā)癥，甚至進展為肝癌，威脅患者生命[1]。目前，臨床對于該病多以早確診早治療為主，因而尋找高效準確的檢測方法尤為重要。但隨著臨床抗病毒藥物濫用等情況，使得HBV 出現(xiàn)變異，影響傳統(tǒng)血清學(xué)檢測準確性、敏感性[2]。而隨著生物技術(shù)發(fā)展，實時熒光定量PCR法（RT-PCR） 逐漸用于臨床檢測，克服傳統(tǒng)PCR定量缺陷，對于病毒DNA 定量更為精準[3]。鑒于此，本研究旨在分析酶聯(lián)免疫吸附法與RT-PCR法應(yīng)用于HBV 檢測中的臨床價值，現(xiàn)報告如下。

資料與方法一、一般資料 選取2017年12月-2019年12月我院收治的乙型肝炎患者78 例，其中男41 例，女37 例；年齡27～59 歲，平均年齡（37.55±4.83） 歲。納入標準：均確診為乙型肝炎；尚未進行抗病毒治療；患者及家屬知情同意。排除標準：甲型等其他類型肝炎；伴隨肝部惡性腫瘤；存在心腦血管嚴重病變。

二、檢測方法 所有患者均于清晨抽取靜脈血5mL，置于4℃冰箱2h，離心取得血清后待檢。通過酶聯(lián)免疫吸附法定性檢測乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝e 抗原（HbeAg）、乙肝表面抗體（HbsAb）、乙肝核心抗體（HbcAb） 及乙肝E 抗體（HbeAb），嚴格按操作標準執(zhí)行。RT-PCR 法定量檢測：儀器選用達安DA7600，將450μL 的DNA提取液與200μL 血清樣本混合，以100℃預(yù)熱10min，冰凍離心機內(nèi)離心5min，于PCR 管內(nèi)置入20μL 上清液，嚴格按操作程序檢測，之后設(shè)立陰性、弱陽性、陽性等對照組，反應(yīng)結(jié)束后取Ct 值制作熒光曲線，依據(jù)Ct 值計算DNA 值。

三、觀察指標 2 種方法檢測結(jié)果：記錄2種方法檢測乙肝五項結(jié)果，對比HBV-DNA、大三陽、小三陽陽性率。大三陽：HBsAg、HbeAg 與HbcAb 三者檢測均為陽性；小三陽：HBsAg、HbeAb 與HbcAb 三者均為陽性。HBV-DNA ＞103copies/mL 為陽性。

四、統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 22.0 分析數(shù)據(jù)，計數(shù)資料以百分數(shù)表示，用χ2檢驗；計量資料以（±s） 表示，用t檢驗；P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果酶聯(lián)免疫吸附法檢測：HbeAg 陽性33 例，陽性率42.31% （33/78）；HBsAg 陽性48例，陽性率61.54% （48/78）；HbcAb 陽性41 例，陽性率52.56% （41/78）；HbeAb 陽性陽性45 例，陽性率57.69%（45/78）；HbsAb 陽性50 例，陽性率64.10% （50/78）。大三陽例數(shù)33 例，陽性率42.31%，小三陽例數(shù)41 例，陽性率52.56%；RT-PCR 檢測：HBV-DNA 陽性62 例，陽性率79.49%（62/78）。大三陽陽性率低于HBV-DNA 陽性率，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=22.640，P＝0.000）。小三陽陽性率低于HBV-DNA 陽性率，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=12.603，P＝0.000）。

討 論乙肝傳染性較強，HBV 侵入肝臟后可持續(xù)大量復(fù)制，促使機體出現(xiàn)抗原性物質(zhì)，進而對免疫系統(tǒng)造成刺激，致使免疫損傷。若不及時控制病毒，可進一步惡化，導(dǎo)致機體內(nèi)出現(xiàn)持續(xù)炎癥反應(yīng)，最終誘發(fā)肝硬化等疾病[4]。同時，隨著乙肝進展，其體內(nèi)乙肝病毒標志物可呈不同狀況，如大三陽表示患者體內(nèi)HBV DNA 處于高復(fù)制率、高傳染性狀態(tài)，而小三陽則代表機體處于恢復(fù)期，但仍存在HBV DNA 復(fù)制。而隨著HBV 逐漸變異，傳統(tǒng)血清檢測準確性已無法滿足臨床診療需求。酶聯(lián)免疫吸附法屬于臨床常用血清檢測方式，可通過檢測特異性抗體、抗原，判斷是否存在HBV 感染，并直觀反映HBV 侵入后機體免疫應(yīng)答水平，從而為臨床診療提供參考依據(jù)[5]。但該方法無法對HBV 傳播程度、復(fù)制情況進行準確分析。本研究結(jié)果顯示，HBV-DNA 陽性率高于大三陽、小三陽陽性率，表明RT-PCR 用于乙肝檢測中臨床價值優(yōu)于酶聯(lián)免疫吸附法，可準確反映HBV 復(fù)制情況，便于臨床加強治療。RT-PCR 屬于病原學(xué)檢測，其靈敏性、特異性較高，通過每毫升拷貝數(shù)定量發(fā)出檢測報告，可更真實、準確、直接反映患者體內(nèi)HBV DNA 狀況，便于臨床醫(yī)師判斷HBV 復(fù)制及傳染狀態(tài)[6]。同時，部分患者痊愈后，其體內(nèi)仍可能存在少量HBV DNA 復(fù)制現(xiàn)象，但血清學(xué)檢測已無法準確判斷是否完全清除，而RT-PCR 則可通過定量檢測，及時發(fā)現(xiàn)并予以干預(yù)，以免病情發(fā)展。

綜上所述，RT-PCR 檢測HBV 可準確反映其傳染性及復(fù)制狀況，利于臨床早期診斷，監(jiān)測療效，及時采取防治措施，控制病情。