• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    小干擾RNA技術(shù)在逆轉(zhuǎn)肝纖維化中應(yīng)用效果的研究進(jìn)展▲

    2021-11-30 06:01:55馮一丹呂蕊花史琳娜張喜榮閆盎然
    廣西醫(yī)學(xué) 2021年24期
    關(guān)鍵詞:生長(zhǎng)因子活化纖維化

    馮一丹 呂蕊花 史琳娜 張喜榮 閆盎然

    (陜西中醫(yī)藥大學(xué)1 第二臨床醫(yī)學(xué)院,2 醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院,咸陽(yáng)市 712046,電子郵箱:1808827370@qq.com)

    【提要】 肝纖維化是多種慢性肝病發(fā)展過(guò)程中的共同病理改變,發(fā)病時(shí)肝細(xì)胞發(fā)生炎癥壞死,肝內(nèi)纖維結(jié)締組織異常增生。目前認(rèn)為肝纖維化發(fā)生的主要機(jī)制是肝星狀細(xì)胞活化、細(xì)胞外基質(zhì)的合成與降解失衡導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)在細(xì)胞間隙過(guò)度積累所致。小干擾RNA技術(shù)通過(guò)合成反義小分子RNA從而特異性抑制靶基因的轉(zhuǎn)錄后表達(dá),在逆轉(zhuǎn)肝纖維化的過(guò)程中應(yīng)用小干擾RNA技術(shù)具有強(qiáng)大的潛力。本文從抑制肝星狀細(xì)胞活化和增殖,促進(jìn)肝星狀細(xì)胞衰老、凋亡與死亡,以及直接調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)的合成與降解3方面對(duì)小干擾RNA技術(shù)在逆轉(zhuǎn)肝纖維化中的應(yīng)用效果進(jìn)行綜述。

    肝纖維化是多種病因?qū)е碌穆愿闻K疾病發(fā)展到肝硬化的中間過(guò)程,是一個(gè)可逆階段[1-3]。但目前還未發(fā)現(xiàn)可以有效逆轉(zhuǎn)肝纖維化的藥物,臨床上主要通過(guò)去除原發(fā)病因或干預(yù)纖維化的進(jìn)程以達(dá)到逆轉(zhuǎn)肝纖維化的目的[4]。

    RNA干擾技術(shù)于1998年首次被發(fā)現(xiàn),是指雙鏈RNA在細(xì)胞內(nèi)特異性誘導(dǎo)與之同源的mRNA降解或抑制其翻譯,使相應(yīng)基因表達(dá)關(guān)閉,從而誘導(dǎo)基因在轉(zhuǎn)錄后水平沉默[5]。之后RNA干擾技術(shù)迅速成為研究基因功能的工具之一,另外,該技術(shù)作為疾病靶向基因治療的新手段,已被用于各種疾病的治療[6]。近年來(lái),有研究發(fā)現(xiàn)RNA干擾可以高效、準(zhǔn)確地沉默肝纖維化過(guò)程中的關(guān)鍵基因,阻止其表達(dá),認(rèn)為RNA干擾對(duì)肝纖維化的逆轉(zhuǎn)有重要作用。本文分別從抑制肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cell,HSC)的活化和增殖,促進(jìn)HSC的衰老、凋亡與死亡,直接調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)的合成與降解3方面來(lái)對(duì)小干擾RNA技術(shù)在逆轉(zhuǎn)肝纖維化中應(yīng)用的相關(guān)研究進(jìn)行綜述。

    1 小干擾RNA技術(shù)抑制HSC的活化與增殖

    HSC可分為靜止表型和激活表型,正常情況下HSC處于靜止?fàn)顟B(tài),當(dāng)肝臟受到外界刺激時(shí)HSC被激活,其表型可由靜止型轉(zhuǎn)變?yōu)榛罨??;罨腍SC最顯著的特征是表達(dá)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA),分泌多種致炎因子和致纖維化因子,并且實(shí)質(zhì)(如肝細(xì)胞)和非實(shí)質(zhì)(如巨噬細(xì)胞)細(xì)胞均可釋放HSC激活因子,使肝肌成纖維樣細(xì)胞分泌多種ECM,與此同時(shí),基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)合成減少,相應(yīng)的組織抑制因子(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP)合成增加,從而導(dǎo)致肝纖維化的發(fā)生。研究表明小干擾RNA可通過(guò)以下5種途徑抑制HSC的活化與增殖[7]。

    1.1 抑制轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1/Smad的表達(dá) 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(transforming growth factor,TGF)-β1被認(rèn)為是促纖維化炎癥因子中最重要的介導(dǎo)因子,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)均顯示沉默TGF-β1具有潛在治療肝纖維化的作用[8-9]。王魯文等[10]構(gòu)建TGF-β1 短發(fā)夾RNA(short hairpin RNA,shRNA)沉默表達(dá)載體,并將其注入肝纖維化小鼠體內(nèi),結(jié)果顯示小鼠肝內(nèi)TGF-β1、Smad3和α-SMA的表達(dá)下降,Smad7表達(dá)升高,抑制HSC的激活信號(hào),細(xì)胞內(nèi)膠原合成減少,有效抑制了肝纖維化的發(fā)展。此外,TGF-β1小干擾RNA還能抑制肝組織中血小板衍生生長(zhǎng)因子(platelet-derived growth factor,PDGF)-BB、PDGF-βR及肝組織中磷酸化細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(phosphorylated extracellular regulatory protein kinase1/2,p-ERK1/2)的表達(dá),從而起到改善肝纖維化的作用[11]。Fu等[12]將TGF-βRⅡshRNA轉(zhuǎn)入大鼠活化的HSC中,隨著TGF-βRⅡ和α-SMA水平的下降,Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型膠原蛋白與透明質(zhì)酸的表達(dá)水平也隨之降低,肝纖維化程度減輕。

    Smads蛋白是TGF-β超家族信號(hào)在細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)的一組蛋白,是目前發(fā)現(xiàn)的TGF-β受體的唯一底物。Smad通路在調(diào)控TGF-β1介導(dǎo)的ECM沉積過(guò)程中具有十分重要的作用,沒(méi)有Smads復(fù)合物的參與,TGF-β無(wú)法誘導(dǎo)HSC轉(zhuǎn)化、合成并分泌膠原及其他ECM[13]。轉(zhuǎn)染編碼Smad7基因的腺病毒至HSC可抑制TGF-β1的生物學(xué)活性,從而抑制HSC的活化并阻止肝纖維化的發(fā)生[14]。Liu等[15]采用小干擾RNA Smad7轉(zhuǎn)染LX-2細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)其可阻斷吡喹酮介導(dǎo)的LX-2細(xì)胞活化和TGF-β1介導(dǎo)的Ⅰ型膠原(typeⅠ collagen,Col1)α1的增加,提示Smad7在吡喹酮抗肝纖維化過(guò)程中具有的關(guān)鍵作用。除此之外,HSC中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對(duì)肝纖維化進(jìn)展也具有影響,Koo等[16]研究發(fā)現(xiàn),存在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的患者或小鼠的肝組織中Smad2表達(dá)水平增加,經(jīng)慢病毒載體將Smad2小干擾RNA轉(zhuǎn)入肝組織后,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)HSC激活的作用減弱,這表明HSC中的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激促進(jìn)了肝纖維化的發(fā)生,且該過(guò)程是通過(guò)誘導(dǎo)Smad2的過(guò)度表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)的,而采用小干擾RNA技術(shù)干擾Smad2表達(dá)可以抑制HSC激活從而緩解肝纖維化。

    1.2 抑制高遷移率族蛋白B1的表達(dá) 高遷移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)是非組蛋白核內(nèi)結(jié)構(gòu)蛋白,主要由壞死細(xì)胞被動(dòng)釋放以及單核/巨噬細(xì)胞受脂多糖等刺激后表達(dá)[17]。研究發(fā)現(xiàn),HMGB1不僅在細(xì)胞核內(nèi)發(fā)揮作用,而且被釋放到胞外時(shí)可作為一種有效的炎癥介質(zhì)誘發(fā)嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)[18]。目前研究認(rèn)為,HMGB1有可能成為抗炎和防止組織損傷的重要靶點(diǎn)[19]。葛文松等[20]將HMGB1小干擾RNA用Lipofectamine包裹轉(zhuǎn)染至HSC-T6細(xì)胞后發(fā)現(xiàn),細(xì)胞增殖受到抑制,凋亡加速,Col1、Ⅲ型膠原(typeⅢ collagen,Col3)表達(dá)水平也顯著降低。另有研究發(fā)現(xiàn),HMGB1小干擾RNA可顯著抑制肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌的遷移及侵襲,并降低MMP-14蛋白的表達(dá),這提示HMGB1小干擾RNA可以抑制肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌增殖,減少膠原沉積,具有預(yù)防及治療肝纖維化的潛力[21]。此外,Lan等[22]將HMGB1小干擾RNA導(dǎo)入到小鼠肝細(xì)胞系A(chǔ)ML-12中,發(fā)現(xiàn)其可減少AML-12細(xì)胞HMGB1的釋放以及炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生,減輕酒精誘導(dǎo)的肝損傷,阻斷其進(jìn)一步發(fā)展為脂肪性肝炎、纖維化、肝硬化甚至肝癌。

    1.3 抑制結(jié)締組織生長(zhǎng)因子、血小板衍生生長(zhǎng)因子、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá) 結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(connective tissue growth factor,CTGF)在傷口愈合過(guò)程中呈過(guò)表達(dá),誘導(dǎo)肌成纖維細(xì)胞增殖,導(dǎo)致膠原積累,進(jìn)而加重肝纖維化[23]。Yu等[24]設(shè)計(jì)PEI-Fe3O4NP將CTGF小干擾RNA轉(zhuǎn)入HSC后發(fā)現(xiàn),CTGF小干擾RNA可以降低活化HSC中CTGF的表達(dá)水平和膠原蛋白的產(chǎn)生。另有學(xué)者用CTGFshRNA轉(zhuǎn)染HSC-T6細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)HSC-T6細(xì)胞生長(zhǎng)明顯受到抑制,生長(zhǎng)繁殖被阻滯于S期,TGF-β1、Smad3 mRNA及蛋白的表達(dá)量下降,Smad7 mRNA及蛋白的表達(dá)水平升高,提示CTGF小干擾RNA在逆轉(zhuǎn)肝纖維化進(jìn)程中有重要作用[25]。血小板衍生生長(zhǎng)因子(platelet-derived growth factor,PDGF)在肝損傷時(shí)呈過(guò)表達(dá),因此被認(rèn)為是激活HSC的有效因子,可以顯著促進(jìn)HSC的增殖[4]。用小干擾RNA沉默PDGF受體β,發(fā)現(xiàn)PDGF受體β小干擾RNA能明顯抑制PDGF-BB的促HSC-T6細(xì)胞增殖效應(yīng),降低CTGF、TIMP-1和Col1 mRNA表達(dá)水平[26]。此外,作為血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)家族一員的胎盤(pán)生長(zhǎng)因子(placental growth factor,PlGF)也能介導(dǎo)傷口愈合和炎癥反應(yīng),在肝纖維化的發(fā)展和血管的生成中發(fā)揮重要作用。Li等[27]構(gòu)建PlGF小干擾RNA載體并經(jīng)尾靜脈注入膽管結(jié)扎的小鼠體內(nèi),發(fā)現(xiàn)沉默PlGF可以降低小鼠肝臟的炎癥和纖維化程度,抑制HSC的激活與巨噬細(xì)胞的活化,并大幅降低了肝纖維化中促炎因子和趨化因子的表達(dá)水平,減輕肝纖維化程度。

    1.4 抑制血管緊張素Ⅱ的表達(dá) 血管緊張素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)通過(guò)誘導(dǎo)NADPH氧化酶(NADPH oxidase,NOX)依賴性氧化應(yīng)激來(lái)加重肝纖維化。AngⅡ的七肽片段Ang-(1-7)可降低AngⅡ的水平,從而預(yù)防肝纖維化。Zhang等[28]給予AngⅡ 刺激肝細(xì)胞之前采用NOX4小干擾RNA預(yù)處理細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)AngⅡ誘導(dǎo)的肝細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化被抑制。另有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)NOX4小干擾RNA可抑制AngⅡ誘導(dǎo)的NLRP3炎癥小體激活和膠原蛋白合成[29]。Alamandine是新發(fā)現(xiàn)的腎素-血管緊張素系統(tǒng)的組成成分,有研究發(fā)現(xiàn),其可通過(guò)MrgD受體對(duì)AngⅡ 發(fā)揮負(fù)調(diào)控作用,研究人員針對(duì)MrgD受體設(shè)計(jì)了MrgD受體小干擾RNA并將其轉(zhuǎn)入HSC中,發(fā)現(xiàn)Alamandine以及MrgD受體激動(dòng)劑β-alanine都不能抑制AngⅡ的誘導(dǎo)作用,提示Alamandine是通過(guò)MrgD受體抑制NOX4介導(dǎo)的活性氧生成來(lái)調(diào)控HSC自噬,阻斷Ang誘導(dǎo)肝纖維化作用[30]。

    1.5 抑制瘦素的表達(dá) 瘦素是由ob基因編碼的分泌型蛋白質(zhì),主要由貯脂細(xì)胞產(chǎn)生。研究表明,活化的HSC中瘦素 mRNA和蛋白質(zhì)合成均增加。薛秀蘭等[31-32]設(shè)計(jì)瘦素小干擾RNA并將其轉(zhuǎn)入HSC中,同時(shí)將其轉(zhuǎn)染后的HSC導(dǎo)入肝纖維化大鼠體內(nèi),結(jié)果發(fā)現(xiàn)瘦素小干擾RNA可以有效地抑制HSC細(xì)胞增殖,促進(jìn)HSC細(xì)胞凋亡,顯著抑制Col1和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)的表達(dá)。此外,還有研究發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)染瘦素shRNA的肝纖維化組織中,Col1及Col3的沉積程度均明顯下降,從而減緩了肝纖維化的發(fā)展程度[33]。

    2 小干擾RNA技術(shù)促進(jìn)HSC的衰老、凋亡與死亡

    各種不良刺激可以激活處于靜止?fàn)顟B(tài)的HSC,使其轉(zhuǎn)化為肝肌成纖維樣細(xì)胞,不斷生成ECM,導(dǎo)致肝纖維化。因此,促進(jìn)HSC的衰老、凋亡與死亡是減輕肝纖維化的有效途徑。

    2.1 抑制半乳糖凝集素3的表達(dá) 半乳糖凝集素3(galectin 3,Gal-3)存在于多種組織和細(xì)胞內(nèi),參與細(xì)胞黏附、增殖、凋亡、炎癥反應(yīng)和免疫反應(yīng)等多種病理生理過(guò)程,還參與腎、肺等纖維化形成過(guò)程[34]。Henderson等[35]研究發(fā)現(xiàn),沉默Gal-3基因后,肌成纖維細(xì)胞活化和Col1的表達(dá)被阻斷,肝纖維化程度明顯減輕。有學(xué)者構(gòu)建Gal-3小干擾RNA并將其轉(zhuǎn)染至大鼠肝星狀細(xì)胞系rHSC-99細(xì)胞,也發(fā)現(xiàn)細(xì)胞增殖明顯受抑制,細(xì)胞凋亡率增高,細(xì)胞死亡率增加了1.7~2.2倍[36-37]。

    2.2 抑制B淋巴細(xì)胞瘤-2家族的表達(dá) B細(xì)胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)基因作為一種抗凋亡蛋白基因,可保護(hù)細(xì)胞免于病毒、氧化劑等刺激而引起的凋亡。研究發(fā)現(xiàn),在人肝纖維化過(guò)程中Bcl-2過(guò)表達(dá),可導(dǎo)致HSC持續(xù)活化,從而使慢性肝病遷延難愈[38]。Tian等[39]采用肝靶向納米顆粒將阿霉素(DOX)和Bcl-2小干擾RNA轉(zhuǎn)入HepG2細(xì)胞內(nèi),結(jié)果顯示,該干預(yù)可以誘導(dǎo)更多的HepG2細(xì)胞凋亡。另有學(xué)者構(gòu)建pGPU6-GFP-shRNA并將其轉(zhuǎn)染至HSC-T6細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)HSC-T6的Bcl-2基因表達(dá)抑制率達(dá)80%,HSC-T6細(xì)胞生長(zhǎng)明顯受抑,這表明沉默Bcl-2能有效抑制HSC中Bcl-2的表達(dá)及HSC-T6細(xì)胞生長(zhǎng),促進(jìn)HSC-T6細(xì)胞凋亡[40]。

    2.3 抑制核因子κB家族的表達(dá) 核因子κB(nuclear factor kappaB,NF-κB)參與細(xì)胞對(duì)外部刺激的反應(yīng),由p50和p65組成的異源二聚體是NF-κB家族成員最常見(jiàn)的形式。NF-κB的激活在細(xì)胞黏附、生長(zhǎng)和分化中起關(guān)鍵作用,且活化的NF-κB信號(hào)通路通過(guò)上調(diào)其下游的靶基因如環(huán)氧合酶2(cyclooxygenase 2,COX2)、細(xì)胞周期蛋白D1(cyclinD1)、Bcl-2等,抑制細(xì)胞凋亡。Cui等[41]采用NF-κBp65小干擾RNA轉(zhuǎn)染HSC-T6細(xì)胞72 h后,再用脂多糖刺激細(xì)胞1h,結(jié)果發(fā)現(xiàn)NF-κBp65小干擾RNA可有效降低HSC-T6細(xì)胞中Bcl-2、Col1、α-SMA、TGFβ1、抗凋亡蛋白A1和基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑1(tissue inhibitor of metalloproteinase 1,TIMP-1)的mRNA表達(dá)水平,MMP-2活性增高,促進(jìn)HSC凋亡。有學(xué)者發(fā)現(xiàn),增高半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase3)活性可明顯促進(jìn)HSC凋亡,這表明p65小干擾RNA可以特異性地阻斷NF-κB基因表達(dá),促進(jìn)HSC的凋亡[42]。此外,張彥亮等[43]發(fā)現(xiàn)核因子κB激酶抑制劑(inhibitor of nuclear factor kappaB kinase,IKKβ)小干擾RNA可使HSC的凋亡率顯著增加,Caspase3和Bcl-2相關(guān)x蛋白表達(dá)水平均明顯升高,而NF-κBp65和Bcl-2蛋白的表達(dá)水平明顯下降,HSC凋亡增加,肝纖維化被抑制。

    另外,NF-κB還可以直接促進(jìn)HSC的衰老和死亡。賈巖[44]研究發(fā)現(xiàn),莪術(shù)醇誘導(dǎo)的程序性壞死信號(hào)可以競(jìng)爭(zhēng)性抑制促細(xì)胞生長(zhǎng)的NF-κB的mRNA和蛋白表達(dá),進(jìn)一步抑制骨膜蛋白介導(dǎo)的活化型HSC的遷移、黏附,進(jìn)而發(fā)揮抗肝纖維化作用。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)經(jīng)尾靜脈將COX2 shRNA慢病毒載體注入肝纖維化大鼠體內(nèi)后,肝纖維化組織細(xì)胞衰老指數(shù)明顯增加,α-SMA mRNA、COX-2 mRNA表達(dá)水平顯著下調(diào),p53 mRNA表達(dá)水平顯著上調(diào),表明COX2 shRNA可促進(jìn)肝纖維化組織細(xì)胞衰老[45]。

    3 小干擾RNA技術(shù)直接調(diào)節(jié)ECM的合成與降解

    多種病因可導(dǎo)致肝臟炎癥,使ECM沉積導(dǎo)致肝纖維化,而在這個(gè)過(guò)程中,這些病因可能均通過(guò)誘導(dǎo)相似的下游通路導(dǎo)致肝纖維化的發(fā)生,因此,調(diào)控這個(gè)相似的下游通路或許可以阻斷ECM沉積,從而實(shí)現(xiàn)抗纖維化治療[46]。研究發(fā)現(xiàn),核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體家族端酶募集結(jié)構(gòu)域5(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor family caspase recruitment domain containing 5,NLRC5)在肝纖維化中的過(guò)表達(dá)導(dǎo)致HSC中Col1和α-SMA的表達(dá)水平上調(diào),而NLRC5小干擾RNA可降低Col1和α-SMA的表達(dá)水平[47]。另有學(xué)者發(fā)現(xiàn)阻斷NLRC5表達(dá)可降低α-SMA、Col1α1 mRNA及蛋白的表達(dá)水平,表明NLRC5可以通過(guò)干預(yù)HSC活化和ECM合成來(lái)調(diào)節(jié)或抑制與肝纖維化相關(guān)的關(guān)鍵基因[48]。

    3.1 調(diào)節(jié)纖溶酶原激活物抑制劑1/尿激酶型纖溶酶原激活劑的平衡 由尿激酶型纖溶酶原激活劑(urokinase-type plasminogen activator,uPA)、纖溶酶、纖溶酶原激活物抑制劑1(plasminogen activator inhibitor type 1,PAI-1)和MMP構(gòu)成的反應(yīng)體系是調(diào)節(jié)ECM降解的主要途徑,在肝纖維化形成和發(fā)展中起重要作用[49]。纖溶酶原激活物/纖溶酶系統(tǒng)位于纖維溶解系統(tǒng)的上游,能夠直接降解基質(zhì)成分,并通過(guò)激活MMP間接抑制ECM的沉積[49]。越來(lái)越多的研究表明纖溶酶原激活物/纖溶酶系統(tǒng)在調(diào)節(jié)ECM降解和沉積之間的平衡中發(fā)揮關(guān)鍵作用[49-51]。Hu等[49]研究發(fā)現(xiàn),下調(diào)PAI-1表達(dá)水平后肝纖維化得到明顯改善,原因可能是下調(diào)PAI-1表達(dá)水平后,MMP-9及MMP-13表達(dá)水平上調(diào),TIMP-1的表達(dá)水平下調(diào),從而促進(jìn)ECM降解。還有學(xué)者將重組腺病毒質(zhì)粒pAdshPAI感染HSC-T6細(xì)胞后發(fā)現(xiàn),Col1、Col3、α-SMA、TGF-β1和TIMP-1 mRNA表達(dá)水平明顯降低,MMP-9和MMP-13 mRNA表達(dá)水平明顯上調(diào),肝細(xì)胞增殖加快,凋亡減少,HSC增殖減慢,G0/G1期時(shí)相HSC-T6細(xì)胞數(shù)目明顯增高,S期細(xì)胞數(shù)百分比明顯降低,提示沉默PAI-1可誘導(dǎo)HSC-T6細(xì)胞周期靜止,抑制其增殖,減緩肝纖維化進(jìn)程[51]。

    3.2 調(diào)節(jié)基質(zhì)金屬蛋白酶/基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑的平衡 肝纖維化的特征是ECM過(guò)度積累,主要病因是ECM生成的增加和ECM降解的減少。ECM降解減少是由于MMP和TIMP之間的不平衡,MMP幾乎能降解ECM中的各種蛋白成分,從而調(diào)節(jié)ECM降解過(guò)程。肝損傷后,TIMP-1過(guò)表達(dá)導(dǎo)致ECM降解減少[4]。Li等[52]研究發(fā)現(xiàn),沉默MMP-2可導(dǎo)致HSC存活率降低,纖維形成標(biāo)志物減少。TIMP-1在活化的HSC中呈高表達(dá),并通過(guò)抑制基質(zhì)降解和細(xì)胞凋亡促進(jìn)肝纖維化,采用小干擾RNA沉默TIMP-1后可以減少HSC的增殖和纖維形成[52]。另有學(xué)者靶向沉默大鼠體內(nèi)TIMP-1和TIMP-2的表達(dá)后發(fā)現(xiàn),其上游細(xì)胞因子PDGF及其受體的表達(dá)下調(diào),進(jìn)而導(dǎo)致p-ERK1/2蛋白的表達(dá)水平降低,最終抑制HSCs活化增殖、減輕肝纖維化[53]。

    4 小干擾RNA技術(shù)調(diào)控其他作用因子

    核因子E2相關(guān)因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)是調(diào)節(jié)機(jī)體氧化還原反應(yīng)的重要轉(zhuǎn)錄因子,能調(diào)節(jié)多種抗氧化基因的表達(dá),研究發(fā)現(xiàn),Nrf2信號(hào)通路通過(guò)調(diào)控肝臟的氧化損傷在肝纖維化的防治中發(fā)揮重要作用[54]。Prestigiacomo等[55]采用小干擾RNA技術(shù)敲除HSC細(xì)胞的Nrf2后發(fā)現(xiàn),HSC被激活,HSC遷移及增殖增加,α-SMA和ECM表達(dá)水平升高。另有學(xué)者發(fā)現(xiàn)Nrf2小干擾RNA可使TGF-β1誘導(dǎo)的活性氧物質(zhì)增多,促進(jìn)PAI-1表達(dá)水平及Smad3的磷酸化水平增高,促進(jìn)肝纖維化,提示Nrf2在肝纖維化形成與發(fā)展過(guò)程中有重要作用[56]。

    自噬可以促進(jìn)HSC活化,腫瘤相關(guān)基因H19參與了自噬的調(diào)控,其過(guò)表達(dá)可促進(jìn)HSC的活化,而長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long noncoding RNA,LncRNA)-H19已經(jīng)被證實(shí)是調(diào)控肝纖維化發(fā)生發(fā)展的重要分子[57]。有研究顯示,胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白1(insulin-like growth factor binding protein-related protein 1,IGFBPrP1)是一種新發(fā)現(xiàn)的致肝纖維化因子,將小干擾RNA-H19轉(zhuǎn)入IGFBPrP1過(guò)表達(dá)的小鼠的肝星狀細(xì)胞株16 h后,IGFBPrP1 mRNA、LC3B mRNA、α-SMA mRNA的表達(dá)水平受到抑制,肝纖維化減輕[58]。此外,HSC的活化往往伴隨著脂滴的消失,LncRNA-H19與脂肪酸、膽汁酸和葡萄糖等多種代謝方式有關(guān),將小干擾RNA LncRNA-H19轉(zhuǎn)入HSC后,HSC的活化被抑制,HSC中的脂滴含量增加,這提示降低LncRNA-H19的水平,可以恢復(fù)HSC脂滴含量,抑制HSC活化,改善肝纖維化[57]。

    近年來(lái),很多學(xué)者應(yīng)用小干擾RNA技術(shù)減輕肝纖維化程度,如設(shè)計(jì)了人骨形成蛋白9小干擾RNA、生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白2小干擾RNA、上皮細(xì)胞黏附分子小干擾RNA、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體小干擾RNA、腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白8樣分子2小干擾RNA,在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中均發(fā)現(xiàn)上述小干擾RNA技術(shù)具有很好地減輕肝纖維化的效果[59-63]。

    5 小 結(jié)

    肝纖維化是多種病因?qū)е碌母螕p傷之后的修復(fù)代償過(guò)程,是疾病進(jìn)展到肝硬化甚至肝癌的可逆階段。應(yīng)用小干擾RNA技術(shù)沉默肝纖維化過(guò)程中的關(guān)鍵基因,可以抑制HSC活化及增殖,促進(jìn)HSC凋亡,減少ECM沉積,從而逆轉(zhuǎn)肝纖維化。但現(xiàn)階段小干擾RNA技術(shù)的應(yīng)用大多限于細(xì)胞與動(dòng)物實(shí)驗(yàn),尚未進(jìn)行臨床試驗(yàn),其在臨床上的應(yīng)用效果如何還有待進(jìn)一步深入研究。

    猜你喜歡
    生長(zhǎng)因子活化纖維化
    無(wú)Sn-Pd活化法制備PANI/Cu導(dǎo)電織物
    肝纖維化無(wú)創(chuàng)診斷研究進(jìn)展
    傳染病信息(2022年3期)2022-07-15 08:24:28
    肝纖維化的中醫(yī)藥治療
    肝博士(2021年1期)2021-03-29 02:32:16
    小學(xué)生活化寫(xiě)作教學(xué)思考
    鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)2型糖尿病相關(guān)阿爾茨海默病的治療探索
    胃癌組織中成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子19和成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體4的表達(dá)及臨床意義
    腎纖維化的研究進(jìn)展
    鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子修復(fù)周?chē)窠?jīng)損傷對(duì)斷掌再植術(shù)的影響
    轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β激活激酶-1在乳腺癌組織中的表達(dá)及臨床意義
    中西醫(yī)結(jié)合治療慢性乙型肝炎肝纖維化66例
    久久精品国产亚洲av香蕉五月| 两个人看的免费小视频| or卡值多少钱| 长腿黑丝高跟| 色综合亚洲欧美另类图片| 51午夜福利影视在线观看| tocl精华| 国产精品一区二区免费欧美| 网址你懂的国产日韩在线| 久久人人精品亚洲av| 亚洲无线在线观看| 国产97色在线日韩免费| 国产亚洲精品一区二区www| 不卡一级毛片| 麻豆国产97在线/欧美| 丝袜人妻中文字幕| 久久热在线av| 日本黄色视频三级网站网址| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 毛片女人毛片| 可以在线观看毛片的网站| 日韩中文字幕欧美一区二区| 欧美黄色片欧美黄色片| 亚洲国产色片| 中文字幕av在线有码专区| 悠悠久久av| 99热只有精品国产| 久久久色成人| 日韩大尺度精品在线看网址| 久久久久久九九精品二区国产| 十八禁网站免费在线| 黄片大片在线免费观看| 怎么达到女性高潮| www国产在线视频色| 脱女人内裤的视频| 日韩人妻高清精品专区| 国产精品爽爽va在线观看网站| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| av黄色大香蕉| 国产亚洲av高清不卡| 男女下面进入的视频免费午夜| 露出奶头的视频| 亚洲九九香蕉| 99久久综合精品五月天人人| 淫妇啪啪啪对白视频| 亚洲av五月六月丁香网| 啦啦啦免费观看视频1| 午夜亚洲福利在线播放| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 99国产精品一区二区三区| 亚洲成人精品中文字幕电影| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 老司机午夜福利在线观看视频| 久久久久免费精品人妻一区二区| 午夜福利欧美成人| www.www免费av| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 国产精品一区二区精品视频观看| 岛国视频午夜一区免费看| 日本一二三区视频观看| 淫妇啪啪啪对白视频| 国内精品美女久久久久久| 国产成年人精品一区二区| 男人的好看免费观看在线视频| 中文在线观看免费www的网站| 久久国产精品影院| 亚洲av成人av| 无人区码免费观看不卡| 搞女人的毛片| 色吧在线观看| 熟女人妻精品中文字幕| 国产免费男女视频| 国产精品久久久人人做人人爽| 嫩草影院入口| 级片在线观看| 欧美+亚洲+日韩+国产| 久久久久久大精品| 又爽又黄无遮挡网站| 国内精品一区二区在线观看| 色吧在线观看| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 丁香六月欧美| 少妇人妻一区二区三区视频| 免费看十八禁软件| 丁香六月欧美| 国产真人三级小视频在线观看| 亚洲av熟女| 午夜成年电影在线免费观看| 在线观看66精品国产| 国产欧美日韩一区二区三| 桃红色精品国产亚洲av| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 国产又色又爽无遮挡免费看| 国产亚洲av嫩草精品影院| 午夜精品一区二区三区免费看| 黄色 视频免费看| 床上黄色一级片| 亚洲人与动物交配视频| www日本在线高清视频| 男人舔女人下体高潮全视频| 久久午夜亚洲精品久久| 波多野结衣巨乳人妻| 日本五十路高清| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 久久草成人影院| 曰老女人黄片| 老汉色av国产亚洲站长工具| 国产精品亚洲av一区麻豆| 亚洲国产精品合色在线| 丰满人妻一区二区三区视频av | 一个人免费在线观看的高清视频| 免费看日本二区| 欧美不卡视频在线免费观看| 国产精品一区二区三区四区久久| 国产亚洲欧美98| 757午夜福利合集在线观看| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 一本久久中文字幕| 国产激情偷乱视频一区二区| 免费看a级黄色片| 久久久久久久精品吃奶| 国产高清videossex| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 人人妻人人看人人澡| 亚洲美女黄片视频| 性色avwww在线观看| 高潮久久久久久久久久久不卡| 日韩免费av在线播放| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 国产激情久久老熟女| 日韩中文字幕欧美一区二区| 久久中文字幕人妻熟女| 午夜久久久久精精品| 国产一级毛片七仙女欲春2| 成年女人永久免费观看视频| 色av中文字幕| 中文亚洲av片在线观看爽| 亚洲熟妇熟女久久| 亚洲欧美精品综合久久99| 在线观看66精品国产| 国产欧美日韩精品亚洲av| 欧美色欧美亚洲另类二区| 欧美激情久久久久久爽电影| 亚洲精品色激情综合| 女警被强在线播放| 一个人看的www免费观看视频| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产成人欧美在线观看| 日韩中文字幕欧美一区二区| 观看美女的网站| 高清在线国产一区| 国产精品综合久久久久久久免费| 欧美zozozo另类| 国产综合懂色| 波多野结衣高清无吗| 舔av片在线| 色av中文字幕| 好男人电影高清在线观看| 观看美女的网站| 国产综合懂色| 午夜福利在线在线| 午夜免费激情av| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 亚洲美女视频黄频| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 99国产精品一区二区三区| 国产精品免费一区二区三区在线| 99久久精品国产亚洲精品| 白带黄色成豆腐渣| 亚洲国产欧美人成| 精品午夜福利视频在线观看一区| 999精品在线视频| 国产精品一及| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 国产精品1区2区在线观看.| 亚洲精品粉嫩美女一区| 老司机午夜福利在线观看视频| 午夜两性在线视频| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 欧美大码av| 国产一级毛片七仙女欲春2| 免费看美女性在线毛片视频| 怎么达到女性高潮| 国产精品av视频在线免费观看| 男人和女人高潮做爰伦理| 国产亚洲精品av在线| 久久这里只有精品中国| 在线看三级毛片| 免费av不卡在线播放| 欧美一区二区国产精品久久精品| 黄色丝袜av网址大全| 久久精品人妻少妇| 午夜免费激情av| 91九色精品人成在线观看| 草草在线视频免费看| 真人一进一出gif抽搐免费| 搞女人的毛片| 视频区欧美日本亚洲| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 国产高清视频在线播放一区| 两个人视频免费观看高清| 怎么达到女性高潮| 他把我摸到了高潮在线观看| 中出人妻视频一区二区| 国产精品综合久久久久久久免费| 又大又爽又粗| 国产精品乱码一区二三区的特点| 久久久国产精品麻豆| 日本在线视频免费播放| 亚洲美女黄片视频| 国产麻豆成人av免费视频| 国产免费男女视频| 综合色av麻豆| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国产主播在线观看一区二区| 99热6这里只有精品| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 国产高清三级在线| 男人舔女人下体高潮全视频| 日本黄色片子视频| 欧美一区二区精品小视频在线| 久久亚洲真实| 搡老熟女国产l中国老女人| 精品乱码久久久久久99久播| 美女扒开内裤让男人捅视频| 伊人久久大香线蕉亚洲五| a级毛片在线看网站| 久久久久久久久中文| 亚洲激情在线av| 欧美色欧美亚洲另类二区| 亚洲成人免费电影在线观看| 岛国在线免费视频观看| 国产欧美日韩精品一区二区| 国产精品一及| 国产久久久一区二区三区| 嫩草影视91久久| 在线观看午夜福利视频| 搞女人的毛片| 国产精品精品国产色婷婷| 亚洲av成人精品一区久久| 精华霜和精华液先用哪个| 成人av在线播放网站| 一个人看的www免费观看视频| 精品久久久久久久毛片微露脸| 国产高清videossex| 久久久国产欧美日韩av| 精品一区二区三区视频在线 | 男人舔女人下体高潮全视频| 国内精品久久久久久久电影| 久久精品91蜜桃| 国产黄色小视频在线观看| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 桃色一区二区三区在线观看| 91字幕亚洲| 国模一区二区三区四区视频 | 成人无遮挡网站| 欧美乱码精品一区二区三区| 久久久久久大精品| 精品久久久久久久久久免费视频| 国产精品久久久久久精品电影| 最新在线观看一区二区三区| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 午夜免费激情av| 岛国在线观看网站| a级毛片a级免费在线| 99热这里只有是精品50| 色综合亚洲欧美另类图片| 少妇的丰满在线观看| 欧美一区二区精品小视频在线| 亚洲精品久久国产高清桃花| 国产精品99久久久久久久久| av在线天堂中文字幕| 怎么达到女性高潮| 日本精品一区二区三区蜜桃| 日韩欧美国产在线观看| 国产免费av片在线观看野外av| 国产69精品久久久久777片 | 国产久久久一区二区三区| 久久人人精品亚洲av| 可以在线观看的亚洲视频| 精品福利观看| 亚洲黑人精品在线| 婷婷亚洲欧美| 久久久久久久精品吃奶| 亚洲国产精品合色在线| 欧美成人性av电影在线观看| 特级一级黄色大片| 久久久国产精品麻豆| 久久久精品大字幕| 久久久成人免费电影| 欧美一级毛片孕妇| 久久久国产欧美日韩av| 欧美丝袜亚洲另类 | 免费看日本二区| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 国产精华一区二区三区| 国产黄片美女视频| 欧美日韩乱码在线| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 极品教师在线免费播放| 啦啦啦韩国在线观看视频| 国产私拍福利视频在线观看| 精品日产1卡2卡| 午夜福利在线在线| aaaaa片日本免费| 国产高潮美女av| 禁无遮挡网站| 国产一级毛片七仙女欲春2| 免费看十八禁软件| 网址你懂的国产日韩在线| 51午夜福利影视在线观看| 亚洲午夜理论影院| 听说在线观看完整版免费高清| 欧美最黄视频在线播放免费| 久久久久久久久久黄片| 日本一本二区三区精品| 黄片小视频在线播放| 欧美一级毛片孕妇| 亚洲成人精品中文字幕电影| 国内精品久久久久久久电影| av中文乱码字幕在线| 可以在线观看的亚洲视频| 日本黄大片高清| 国产成人影院久久av| 婷婷精品国产亚洲av| 最近最新中文字幕大全免费视频| 国产精品国产高清国产av| 免费观看人在逋| 中文资源天堂在线| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 少妇的逼水好多| 长腿黑丝高跟| 国产激情偷乱视频一区二区| 视频区欧美日本亚洲| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲18禁久久av| 男女那种视频在线观看| 一二三四社区在线视频社区8| 九色国产91popny在线| 亚洲激情在线av| 久久久久精品国产欧美久久久| 国产高清激情床上av| 成人18禁在线播放| 日本 av在线| 91麻豆av在线| 国产真人三级小视频在线观看| 少妇的丰满在线观看| 久久国产乱子伦精品免费另类| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 久久久久亚洲av毛片大全| 国产成人av教育| 日本黄色视频三级网站网址| 欧美色视频一区免费| 999精品在线视频| 男人和女人高潮做爰伦理| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 宅男免费午夜| 亚洲在线观看片| 五月玫瑰六月丁香| 免费观看精品视频网站| 国产一区二区激情短视频| 看免费av毛片| 欧美一区二区国产精品久久精品| 久久精品国产综合久久久| 嫩草影院精品99| 91在线观看av| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 一个人看视频在线观看www免费 | 在线播放国产精品三级| 免费电影在线观看免费观看| 怎么达到女性高潮| 欧美性猛交黑人性爽| 人人妻人人看人人澡| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 国产伦精品一区二区三区四那| 亚洲熟妇熟女久久| 色综合婷婷激情| 中文字幕熟女人妻在线| 亚洲一区二区三区不卡视频| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产精品国产高清国产av| 免费搜索国产男女视频| 中文亚洲av片在线观看爽| 免费观看的影片在线观看| 99视频精品全部免费 在线 | 丁香欧美五月| 国产激情久久老熟女| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 亚洲国产欧美网| 舔av片在线| 欧美乱色亚洲激情| 欧美zozozo另类| 国产精品98久久久久久宅男小说| 嫁个100分男人电影在线观看| 99视频精品全部免费 在线 | 一级a爱片免费观看的视频| 亚洲成a人片在线一区二区| 一级黄色大片毛片| 90打野战视频偷拍视频| svipshipincom国产片| 人妻夜夜爽99麻豆av| 日本一二三区视频观看| 午夜福利高清视频| 美女高潮的动态| 精华霜和精华液先用哪个| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 国产精品av久久久久免费| 日韩国内少妇激情av| 久久久久久久精品吃奶| 全区人妻精品视频| 99精品久久久久人妻精品| 精品电影一区二区在线| 性欧美人与动物交配| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 精品久久久久久成人av| 岛国视频午夜一区免费看| 啦啦啦韩国在线观看视频| 久久久久久大精品| www日本在线高清视频| 男女视频在线观看网站免费| 亚洲精品在线美女| 一进一出抽搐动态| 日韩成人在线观看一区二区三区| 欧美国产日韩亚洲一区| 亚洲精品色激情综合| 一级毛片精品| 国产精品女同一区二区软件 | 真人一进一出gif抽搐免费| 国产乱人视频| 老司机午夜福利在线观看视频| 最新中文字幕久久久久 | 国产一区在线观看成人免费| 在线播放国产精品三级| 九色成人免费人妻av| 9191精品国产免费久久| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 国产精品98久久久久久宅男小说| 后天国语完整版免费观看| 黄色 视频免费看| 午夜免费激情av| 免费无遮挡裸体视频| 俄罗斯特黄特色一大片| 美女被艹到高潮喷水动态| 国产精品免费一区二区三区在线| 美女扒开内裤让男人捅视频| 欧美又色又爽又黄视频| 在线免费观看不下载黄p国产 | 伦理电影免费视频| 九色成人免费人妻av| 在线观看舔阴道视频| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 午夜福利免费观看在线| 99国产精品一区二区三区| 国产精品久久视频播放| 一进一出抽搐gif免费好疼| av片东京热男人的天堂| 国产主播在线观看一区二区| 免费在线观看日本一区| 久久中文字幕一级| 在线a可以看的网站| 真人一进一出gif抽搐免费| av天堂在线播放| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 丰满人妻一区二区三区视频av | 日韩精品中文字幕看吧| 午夜福利视频1000在线观看| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 亚洲avbb在线观看| 国产成年人精品一区二区| 亚洲av片天天在线观看| 亚洲黑人精品在线| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 日本黄色片子视频| 香蕉av资源在线| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 性色av乱码一区二区三区2| 黄色成人免费大全| 一级作爱视频免费观看| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 久久热在线av| 国产精品av久久久久免费| 黄色日韩在线| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 成人三级黄色视频| 久久久久久久久免费视频了| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 婷婷精品国产亚洲av| 国产真实乱freesex| 美女大奶头视频| 真实男女啪啪啪动态图| 亚洲性夜色夜夜综合| 激情在线观看视频在线高清| av女优亚洲男人天堂 | 午夜久久久久精精品| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 欧美精品啪啪一区二区三区| tocl精华| 国产精品久久久av美女十八| 国产在线精品亚洲第一网站| 日韩欧美免费精品| 成年女人看的毛片在线观看| 首页视频小说图片口味搜索| 97超视频在线观看视频| 国产精品亚洲美女久久久| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 一进一出抽搐gif免费好疼| 国产v大片淫在线免费观看| 88av欧美| 不卡av一区二区三区| 亚洲成av人片免费观看| 少妇人妻一区二区三区视频| 淫妇啪啪啪对白视频| 制服丝袜大香蕉在线| 成人特级黄色片久久久久久久| 欧美色欧美亚洲另类二区| 他把我摸到了高潮在线观看| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 久久精品91无色码中文字幕| 欧美+亚洲+日韩+国产| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 成年版毛片免费区| 99久久国产精品久久久| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 99国产精品99久久久久| 欧美黑人巨大hd| 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲av电影不卡..在线观看| 国产一区二区在线av高清观看| 亚洲欧美日韩东京热| 亚洲av免费在线观看| 欧美日本视频| 中国美女看黄片| 亚洲专区中文字幕在线| 日韩欧美在线二视频| 久久久久久国产a免费观看| 老司机在亚洲福利影院| 热99re8久久精品国产| 国产免费av片在线观看野外av| 久久久久久久久中文| 成人无遮挡网站| av中文乱码字幕在线| 国产成人啪精品午夜网站| 天堂√8在线中文| 又黄又粗又硬又大视频| 青草久久国产| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 欧美最黄视频在线播放免费| 99久久无色码亚洲精品果冻| 成人国产一区最新在线观看| 级片在线观看| 制服丝袜大香蕉在线| 999精品在线视频| 午夜福利成人在线免费观看| 国产精品九九99| 一二三四在线观看免费中文在| 久久久久性生活片| 色吧在线观看| 不卡av一区二区三区| 成人性生交大片免费视频hd| 99久久精品热视频| 香蕉久久夜色| 国产欧美日韩一区二区精品| 国内揄拍国产精品人妻在线| 99久久99久久久精品蜜桃| 老鸭窝网址在线观看| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 久久午夜综合久久蜜桃| 一夜夜www| 悠悠久久av| 日本在线视频免费播放| 国产精品av久久久久免费| 色哟哟哟哟哟哟| 国产成人啪精品午夜网站| 天天添夜夜摸| 身体一侧抽搐| 亚洲男人的天堂狠狠| 一个人免费在线观看的高清视频| 日本黄色视频三级网站网址| 成熟少妇高潮喷水视频| 露出奶头的视频| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 最新在线观看一区二区三区| 国产av不卡久久| 黄色成人免费大全| 成人鲁丝片一二三区免费| 床上黄色一级片| 女同久久另类99精品国产91| 欧美中文日本在线观看视频| 变态另类丝袜制服| 日本成人三级电影网站| 成人鲁丝片一二三区免费| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 小说图片视频综合网站| 久久草成人影院| 成人特级av手机在线观看| 中文亚洲av片在线观看爽| 色综合欧美亚洲国产小说| 色综合站精品国产| 国产精品亚洲一级av第二区| 99久久综合精品五月天人人| 久久久国产精品麻豆| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 国产精品久久久久久人妻精品电影| 午夜福利在线在线| 精品国产乱子伦一区二区三区| 色精品久久人妻99蜜桃| 成人av一区二区三区在线看| 久久久国产成人精品二区| 他把我摸到了高潮在线观看| 亚洲av中文字字幕乱码综合|