• 
    

    
    

      99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

      小干擾RNA技術(shù)在逆轉(zhuǎn)肝纖維化中應(yīng)用效果的研究進(jìn)展▲

      2021-11-30 06:01:55馮一丹呂蕊花史琳娜張喜榮閆盎然
      廣西醫(yī)學(xué) 2021年24期
      關(guān)鍵詞:生長(zhǎng)因子活化纖維化

      馮一丹 呂蕊花 史琳娜 張喜榮 閆盎然

      (陜西中醫(yī)藥大學(xué)1 第二臨床醫(yī)學(xué)院,2 醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院,咸陽(yáng)市 712046,電子郵箱:1808827370@qq.com)

      【提要】 肝纖維化是多種慢性肝病發(fā)展過(guò)程中的共同病理改變,發(fā)病時(shí)肝細(xì)胞發(fā)生炎癥壞死,肝內(nèi)纖維結(jié)締組織異常增生。目前認(rèn)為肝纖維化發(fā)生的主要機(jī)制是肝星狀細(xì)胞活化、細(xì)胞外基質(zhì)的合成與降解失衡導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)在細(xì)胞間隙過(guò)度積累所致。小干擾RNA技術(shù)通過(guò)合成反義小分子RNA從而特異性抑制靶基因的轉(zhuǎn)錄后表達(dá),在逆轉(zhuǎn)肝纖維化的過(guò)程中應(yīng)用小干擾RNA技術(shù)具有強(qiáng)大的潛力。本文從抑制肝星狀細(xì)胞活化和增殖,促進(jìn)肝星狀細(xì)胞衰老、凋亡與死亡,以及直接調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)的合成與降解3方面對(duì)小干擾RNA技術(shù)在逆轉(zhuǎn)肝纖維化中的應(yīng)用效果進(jìn)行綜述。

      肝纖維化是多種病因?qū)е碌穆愿闻K疾病發(fā)展到肝硬化的中間過(guò)程,是一個(gè)可逆階段[1-3]。但目前還未發(fā)現(xiàn)可以有效逆轉(zhuǎn)肝纖維化的藥物,臨床上主要通過(guò)去除原發(fā)病因或干預(yù)纖維化的進(jìn)程以達(dá)到逆轉(zhuǎn)肝纖維化的目的[4]。

      RNA干擾技術(shù)于1998年首次被發(fā)現(xiàn),是指雙鏈RNA在細(xì)胞內(nèi)特異性誘導(dǎo)與之同源的mRNA降解或抑制其翻譯,使相應(yīng)基因表達(dá)關(guān)閉,從而誘導(dǎo)基因在轉(zhuǎn)錄后水平沉默[5]。之后RNA干擾技術(shù)迅速成為研究基因功能的工具之一,另外,該技術(shù)作為疾病靶向基因治療的新手段,已被用于各種疾病的治療[6]。近年來(lái),有研究發(fā)現(xiàn)RNA干擾可以高效、準(zhǔn)確地沉默肝纖維化過(guò)程中的關(guān)鍵基因,阻止其表達(dá),認(rèn)為RNA干擾對(duì)肝纖維化的逆轉(zhuǎn)有重要作用。本文分別從抑制肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cell,HSC)的活化和增殖,促進(jìn)HSC的衰老、凋亡與死亡,直接調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)的合成與降解3方面來(lái)對(duì)小干擾RNA技術(shù)在逆轉(zhuǎn)肝纖維化中應(yīng)用的相關(guān)研究進(jìn)行綜述。

      1 小干擾RNA技術(shù)抑制HSC的活化與增殖

      HSC可分為靜止表型和激活表型,正常情況下HSC處于靜止?fàn)顟B(tài),當(dāng)肝臟受到外界刺激時(shí)HSC被激活,其表型可由靜止型轉(zhuǎn)變?yōu)榛罨??;罨腍SC最顯著的特征是表達(dá)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA),分泌多種致炎因子和致纖維化因子,并且實(shí)質(zhì)(如肝細(xì)胞)和非實(shí)質(zhì)(如巨噬細(xì)胞)細(xì)胞均可釋放HSC激活因子,使肝肌成纖維樣細(xì)胞分泌多種ECM,與此同時(shí),基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)合成減少,相應(yīng)的組織抑制因子(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP)合成增加,從而導(dǎo)致肝纖維化的發(fā)生。研究表明小干擾RNA可通過(guò)以下5種途徑抑制HSC的活化與增殖[7]。

      1.1 抑制轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1/Smad的表達(dá) 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(transforming growth factor,TGF)-β1被認(rèn)為是促纖維化炎癥因子中最重要的介導(dǎo)因子,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)均顯示沉默TGF-β1具有潛在治療肝纖維化的作用[8-9]。王魯文等[10]構(gòu)建TGF-β1 短發(fā)夾RNA(short hairpin RNA,shRNA)沉默表達(dá)載體,并將其注入肝纖維化小鼠體內(nèi),結(jié)果顯示小鼠肝內(nèi)TGF-β1、Smad3和α-SMA的表達(dá)下降,Smad7表達(dá)升高,抑制HSC的激活信號(hào),細(xì)胞內(nèi)膠原合成減少,有效抑制了肝纖維化的發(fā)展。此外,TGF-β1小干擾RNA還能抑制肝組織中血小板衍生生長(zhǎng)因子(platelet-derived growth factor,PDGF)-BB、PDGF-βR及肝組織中磷酸化細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(phosphorylated extracellular regulatory protein kinase1/2,p-ERK1/2)的表達(dá),從而起到改善肝纖維化的作用[11]。Fu等[12]將TGF-βRⅡshRNA轉(zhuǎn)入大鼠活化的HSC中,隨著TGF-βRⅡ和α-SMA水平的下降,Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型膠原蛋白與透明質(zhì)酸的表達(dá)水平也隨之降低,肝纖維化程度減輕。

      Smads蛋白是TGF-β超家族信號(hào)在細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)的一組蛋白,是目前發(fā)現(xiàn)的TGF-β受體的唯一底物。Smad通路在調(diào)控TGF-β1介導(dǎo)的ECM沉積過(guò)程中具有十分重要的作用,沒(méi)有Smads復(fù)合物的參與,TGF-β無(wú)法誘導(dǎo)HSC轉(zhuǎn)化、合成并分泌膠原及其他ECM[13]。轉(zhuǎn)染編碼Smad7基因的腺病毒至HSC可抑制TGF-β1的生物學(xué)活性,從而抑制HSC的活化并阻止肝纖維化的發(fā)生[14]。Liu等[15]采用小干擾RNA Smad7轉(zhuǎn)染LX-2細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)其可阻斷吡喹酮介導(dǎo)的LX-2細(xì)胞活化和TGF-β1介導(dǎo)的Ⅰ型膠原(typeⅠ collagen,Col1)α1的增加,提示Smad7在吡喹酮抗肝纖維化過(guò)程中具有的關(guān)鍵作用。除此之外,HSC中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對(duì)肝纖維化進(jìn)展也具有影響,Koo等[16]研究發(fā)現(xiàn),存在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的患者或小鼠的肝組織中Smad2表達(dá)水平增加,經(jīng)慢病毒載體將Smad2小干擾RNA轉(zhuǎn)入肝組織后,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)HSC激活的作用減弱,這表明HSC中的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激促進(jìn)了肝纖維化的發(fā)生,且該過(guò)程是通過(guò)誘導(dǎo)Smad2的過(guò)度表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)的,而采用小干擾RNA技術(shù)干擾Smad2表達(dá)可以抑制HSC激活從而緩解肝纖維化。

      1.2 抑制高遷移率族蛋白B1的表達(dá) 高遷移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)是非組蛋白核內(nèi)結(jié)構(gòu)蛋白,主要由壞死細(xì)胞被動(dòng)釋放以及單核/巨噬細(xì)胞受脂多糖等刺激后表達(dá)[17]。研究發(fā)現(xiàn),HMGB1不僅在細(xì)胞核內(nèi)發(fā)揮作用,而且被釋放到胞外時(shí)可作為一種有效的炎癥介質(zhì)誘發(fā)嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)[18]。目前研究認(rèn)為,HMGB1有可能成為抗炎和防止組織損傷的重要靶點(diǎn)[19]。葛文松等[20]將HMGB1小干擾RNA用Lipofectamine包裹轉(zhuǎn)染至HSC-T6細(xì)胞后發(fā)現(xiàn),細(xì)胞增殖受到抑制,凋亡加速,Col1、Ⅲ型膠原(typeⅢ collagen,Col3)表達(dá)水平也顯著降低。另有研究發(fā)現(xiàn),HMGB1小干擾RNA可顯著抑制肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌的遷移及侵襲,并降低MMP-14蛋白的表達(dá),這提示HMGB1小干擾RNA可以抑制肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌增殖,減少膠原沉積,具有預(yù)防及治療肝纖維化的潛力[21]。此外,Lan等[22]將HMGB1小干擾RNA導(dǎo)入到小鼠肝細(xì)胞系A(chǔ)ML-12中,發(fā)現(xiàn)其可減少AML-12細(xì)胞HMGB1的釋放以及炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生,減輕酒精誘導(dǎo)的肝損傷,阻斷其進(jìn)一步發(fā)展為脂肪性肝炎、纖維化、肝硬化甚至肝癌。

      1.3 抑制結(jié)締組織生長(zhǎng)因子、血小板衍生生長(zhǎng)因子、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá) 結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(connective tissue growth factor,CTGF)在傷口愈合過(guò)程中呈過(guò)表達(dá),誘導(dǎo)肌成纖維細(xì)胞增殖,導(dǎo)致膠原積累,進(jìn)而加重肝纖維化[23]。Yu等[24]設(shè)計(jì)PEI-Fe3O4NP將CTGF小干擾RNA轉(zhuǎn)入HSC后發(fā)現(xiàn),CTGF小干擾RNA可以降低活化HSC中CTGF的表達(dá)水平和膠原蛋白的產(chǎn)生。另有學(xué)者用CTGFshRNA轉(zhuǎn)染HSC-T6細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)HSC-T6細(xì)胞生長(zhǎng)明顯受到抑制,生長(zhǎng)繁殖被阻滯于S期,TGF-β1、Smad3 mRNA及蛋白的表達(dá)量下降,Smad7 mRNA及蛋白的表達(dá)水平升高,提示CTGF小干擾RNA在逆轉(zhuǎn)肝纖維化進(jìn)程中有重要作用[25]。血小板衍生生長(zhǎng)因子(platelet-derived growth factor,PDGF)在肝損傷時(shí)呈過(guò)表達(dá),因此被認(rèn)為是激活HSC的有效因子,可以顯著促進(jìn)HSC的增殖[4]。用小干擾RNA沉默PDGF受體β,發(fā)現(xiàn)PDGF受體β小干擾RNA能明顯抑制PDGF-BB的促HSC-T6細(xì)胞增殖效應(yīng),降低CTGF、TIMP-1和Col1 mRNA表達(dá)水平[26]。此外,作為血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)家族一員的胎盤(pán)生長(zhǎng)因子(placental growth factor,PlGF)也能介導(dǎo)傷口愈合和炎癥反應(yīng),在肝纖維化的發(fā)展和血管的生成中發(fā)揮重要作用。Li等[27]構(gòu)建PlGF小干擾RNA載體并經(jīng)尾靜脈注入膽管結(jié)扎的小鼠體內(nèi),發(fā)現(xiàn)沉默PlGF可以降低小鼠肝臟的炎癥和纖維化程度,抑制HSC的激活與巨噬細(xì)胞的活化,并大幅降低了肝纖維化中促炎因子和趨化因子的表達(dá)水平,減輕肝纖維化程度。

      1.4 抑制血管緊張素Ⅱ的表達(dá) 血管緊張素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)通過(guò)誘導(dǎo)NADPH氧化酶(NADPH oxidase,NOX)依賴性氧化應(yīng)激來(lái)加重肝纖維化。AngⅡ的七肽片段Ang-(1-7)可降低AngⅡ的水平,從而預(yù)防肝纖維化。Zhang等[28]給予AngⅡ 刺激肝細(xì)胞之前采用NOX4小干擾RNA預(yù)處理細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)AngⅡ誘導(dǎo)的肝細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化被抑制。另有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)NOX4小干擾RNA可抑制AngⅡ誘導(dǎo)的NLRP3炎癥小體激活和膠原蛋白合成[29]。Alamandine是新發(fā)現(xiàn)的腎素-血管緊張素系統(tǒng)的組成成分,有研究發(fā)現(xiàn),其可通過(guò)MrgD受體對(duì)AngⅡ 發(fā)揮負(fù)調(diào)控作用,研究人員針對(duì)MrgD受體設(shè)計(jì)了MrgD受體小干擾RNA并將其轉(zhuǎn)入HSC中,發(fā)現(xiàn)Alamandine以及MrgD受體激動(dòng)劑β-alanine都不能抑制AngⅡ的誘導(dǎo)作用,提示Alamandine是通過(guò)MrgD受體抑制NOX4介導(dǎo)的活性氧生成來(lái)調(diào)控HSC自噬,阻斷Ang誘導(dǎo)肝纖維化作用[30]。

      1.5 抑制瘦素的表達(dá) 瘦素是由ob基因編碼的分泌型蛋白質(zhì),主要由貯脂細(xì)胞產(chǎn)生。研究表明,活化的HSC中瘦素 mRNA和蛋白質(zhì)合成均增加。薛秀蘭等[31-32]設(shè)計(jì)瘦素小干擾RNA并將其轉(zhuǎn)入HSC中,同時(shí)將其轉(zhuǎn)染后的HSC導(dǎo)入肝纖維化大鼠體內(nèi),結(jié)果發(fā)現(xiàn)瘦素小干擾RNA可以有效地抑制HSC細(xì)胞增殖,促進(jìn)HSC細(xì)胞凋亡,顯著抑制Col1和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)的表達(dá)。此外,還有研究發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)染瘦素shRNA的肝纖維化組織中,Col1及Col3的沉積程度均明顯下降,從而減緩了肝纖維化的發(fā)展程度[33]。

      2 小干擾RNA技術(shù)促進(jìn)HSC的衰老、凋亡與死亡

      各種不良刺激可以激活處于靜止?fàn)顟B(tài)的HSC,使其轉(zhuǎn)化為肝肌成纖維樣細(xì)胞,不斷生成ECM,導(dǎo)致肝纖維化。因此,促進(jìn)HSC的衰老、凋亡與死亡是減輕肝纖維化的有效途徑。

      2.1 抑制半乳糖凝集素3的表達(dá) 半乳糖凝集素3(galectin 3,Gal-3)存在于多種組織和細(xì)胞內(nèi),參與細(xì)胞黏附、增殖、凋亡、炎癥反應(yīng)和免疫反應(yīng)等多種病理生理過(guò)程,還參與腎、肺等纖維化形成過(guò)程[34]。Henderson等[35]研究發(fā)現(xiàn),沉默Gal-3基因后,肌成纖維細(xì)胞活化和Col1的表達(dá)被阻斷,肝纖維化程度明顯減輕。有學(xué)者構(gòu)建Gal-3小干擾RNA并將其轉(zhuǎn)染至大鼠肝星狀細(xì)胞系rHSC-99細(xì)胞,也發(fā)現(xiàn)細(xì)胞增殖明顯受抑制,細(xì)胞凋亡率增高,細(xì)胞死亡率增加了1.7~2.2倍[36-37]。

      2.2 抑制B淋巴細(xì)胞瘤-2家族的表達(dá) B細(xì)胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)基因作為一種抗凋亡蛋白基因,可保護(hù)細(xì)胞免于病毒、氧化劑等刺激而引起的凋亡。研究發(fā)現(xiàn),在人肝纖維化過(guò)程中Bcl-2過(guò)表達(dá),可導(dǎo)致HSC持續(xù)活化,從而使慢性肝病遷延難愈[38]。Tian等[39]采用肝靶向納米顆粒將阿霉素(DOX)和Bcl-2小干擾RNA轉(zhuǎn)入HepG2細(xì)胞內(nèi),結(jié)果顯示,該干預(yù)可以誘導(dǎo)更多的HepG2細(xì)胞凋亡。另有學(xué)者構(gòu)建pGPU6-GFP-shRNA并將其轉(zhuǎn)染至HSC-T6細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)HSC-T6的Bcl-2基因表達(dá)抑制率達(dá)80%,HSC-T6細(xì)胞生長(zhǎng)明顯受抑,這表明沉默Bcl-2能有效抑制HSC中Bcl-2的表達(dá)及HSC-T6細(xì)胞生長(zhǎng),促進(jìn)HSC-T6細(xì)胞凋亡[40]。

      2.3 抑制核因子κB家族的表達(dá) 核因子κB(nuclear factor kappaB,NF-κB)參與細(xì)胞對(duì)外部刺激的反應(yīng),由p50和p65組成的異源二聚體是NF-κB家族成員最常見(jiàn)的形式。NF-κB的激活在細(xì)胞黏附、生長(zhǎng)和分化中起關(guān)鍵作用,且活化的NF-κB信號(hào)通路通過(guò)上調(diào)其下游的靶基因如環(huán)氧合酶2(cyclooxygenase 2,COX2)、細(xì)胞周期蛋白D1(cyclinD1)、Bcl-2等,抑制細(xì)胞凋亡。Cui等[41]采用NF-κBp65小干擾RNA轉(zhuǎn)染HSC-T6細(xì)胞72 h后,再用脂多糖刺激細(xì)胞1h,結(jié)果發(fā)現(xiàn)NF-κBp65小干擾RNA可有效降低HSC-T6細(xì)胞中Bcl-2、Col1、α-SMA、TGFβ1、抗凋亡蛋白A1和基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑1(tissue inhibitor of metalloproteinase 1,TIMP-1)的mRNA表達(dá)水平,MMP-2活性增高,促進(jìn)HSC凋亡。有學(xué)者發(fā)現(xiàn),增高半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase3)活性可明顯促進(jìn)HSC凋亡,這表明p65小干擾RNA可以特異性地阻斷NF-κB基因表達(dá),促進(jìn)HSC的凋亡[42]。此外,張彥亮等[43]發(fā)現(xiàn)核因子κB激酶抑制劑(inhibitor of nuclear factor kappaB kinase,IKKβ)小干擾RNA可使HSC的凋亡率顯著增加,Caspase3和Bcl-2相關(guān)x蛋白表達(dá)水平均明顯升高,而NF-κBp65和Bcl-2蛋白的表達(dá)水平明顯下降,HSC凋亡增加,肝纖維化被抑制。

      另外,NF-κB還可以直接促進(jìn)HSC的衰老和死亡。賈巖[44]研究發(fā)現(xiàn),莪術(shù)醇誘導(dǎo)的程序性壞死信號(hào)可以競(jìng)爭(zhēng)性抑制促細(xì)胞生長(zhǎng)的NF-κB的mRNA和蛋白表達(dá),進(jìn)一步抑制骨膜蛋白介導(dǎo)的活化型HSC的遷移、黏附,進(jìn)而發(fā)揮抗肝纖維化作用。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)經(jīng)尾靜脈將COX2 shRNA慢病毒載體注入肝纖維化大鼠體內(nèi)后,肝纖維化組織細(xì)胞衰老指數(shù)明顯增加,α-SMA mRNA、COX-2 mRNA表達(dá)水平顯著下調(diào),p53 mRNA表達(dá)水平顯著上調(diào),表明COX2 shRNA可促進(jìn)肝纖維化組織細(xì)胞衰老[45]。

      3 小干擾RNA技術(shù)直接調(diào)節(jié)ECM的合成與降解

      多種病因可導(dǎo)致肝臟炎癥,使ECM沉積導(dǎo)致肝纖維化,而在這個(gè)過(guò)程中,這些病因可能均通過(guò)誘導(dǎo)相似的下游通路導(dǎo)致肝纖維化的發(fā)生,因此,調(diào)控這個(gè)相似的下游通路或許可以阻斷ECM沉積,從而實(shí)現(xiàn)抗纖維化治療[46]。研究發(fā)現(xiàn),核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體家族端酶募集結(jié)構(gòu)域5(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor family caspase recruitment domain containing 5,NLRC5)在肝纖維化中的過(guò)表達(dá)導(dǎo)致HSC中Col1和α-SMA的表達(dá)水平上調(diào),而NLRC5小干擾RNA可降低Col1和α-SMA的表達(dá)水平[47]。另有學(xué)者發(fā)現(xiàn)阻斷NLRC5表達(dá)可降低α-SMA、Col1α1 mRNA及蛋白的表達(dá)水平,表明NLRC5可以通過(guò)干預(yù)HSC活化和ECM合成來(lái)調(diào)節(jié)或抑制與肝纖維化相關(guān)的關(guān)鍵基因[48]。

      3.1 調(diào)節(jié)纖溶酶原激活物抑制劑1/尿激酶型纖溶酶原激活劑的平衡 由尿激酶型纖溶酶原激活劑(urokinase-type plasminogen activator,uPA)、纖溶酶、纖溶酶原激活物抑制劑1(plasminogen activator inhibitor type 1,PAI-1)和MMP構(gòu)成的反應(yīng)體系是調(diào)節(jié)ECM降解的主要途徑,在肝纖維化形成和發(fā)展中起重要作用[49]。纖溶酶原激活物/纖溶酶系統(tǒng)位于纖維溶解系統(tǒng)的上游,能夠直接降解基質(zhì)成分,并通過(guò)激活MMP間接抑制ECM的沉積[49]。越來(lái)越多的研究表明纖溶酶原激活物/纖溶酶系統(tǒng)在調(diào)節(jié)ECM降解和沉積之間的平衡中發(fā)揮關(guān)鍵作用[49-51]。Hu等[49]研究發(fā)現(xiàn),下調(diào)PAI-1表達(dá)水平后肝纖維化得到明顯改善,原因可能是下調(diào)PAI-1表達(dá)水平后,MMP-9及MMP-13表達(dá)水平上調(diào),TIMP-1的表達(dá)水平下調(diào),從而促進(jìn)ECM降解。還有學(xué)者將重組腺病毒質(zhì)粒pAdshPAI感染HSC-T6細(xì)胞后發(fā)現(xiàn),Col1、Col3、α-SMA、TGF-β1和TIMP-1 mRNA表達(dá)水平明顯降低,MMP-9和MMP-13 mRNA表達(dá)水平明顯上調(diào),肝細(xì)胞增殖加快,凋亡減少,HSC增殖減慢,G0/G1期時(shí)相HSC-T6細(xì)胞數(shù)目明顯增高,S期細(xì)胞數(shù)百分比明顯降低,提示沉默PAI-1可誘導(dǎo)HSC-T6細(xì)胞周期靜止,抑制其增殖,減緩肝纖維化進(jìn)程[51]。

      3.2 調(diào)節(jié)基質(zhì)金屬蛋白酶/基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑的平衡 肝纖維化的特征是ECM過(guò)度積累,主要病因是ECM生成的增加和ECM降解的減少。ECM降解減少是由于MMP和TIMP之間的不平衡,MMP幾乎能降解ECM中的各種蛋白成分,從而調(diào)節(jié)ECM降解過(guò)程。肝損傷后,TIMP-1過(guò)表達(dá)導(dǎo)致ECM降解減少[4]。Li等[52]研究發(fā)現(xiàn),沉默MMP-2可導(dǎo)致HSC存活率降低,纖維形成標(biāo)志物減少。TIMP-1在活化的HSC中呈高表達(dá),并通過(guò)抑制基質(zhì)降解和細(xì)胞凋亡促進(jìn)肝纖維化,采用小干擾RNA沉默TIMP-1后可以減少HSC的增殖和纖維形成[52]。另有學(xué)者靶向沉默大鼠體內(nèi)TIMP-1和TIMP-2的表達(dá)后發(fā)現(xiàn),其上游細(xì)胞因子PDGF及其受體的表達(dá)下調(diào),進(jìn)而導(dǎo)致p-ERK1/2蛋白的表達(dá)水平降低,最終抑制HSCs活化增殖、減輕肝纖維化[53]。

      4 小干擾RNA技術(shù)調(diào)控其他作用因子

      核因子E2相關(guān)因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)是調(diào)節(jié)機(jī)體氧化還原反應(yīng)的重要轉(zhuǎn)錄因子,能調(diào)節(jié)多種抗氧化基因的表達(dá),研究發(fā)現(xiàn),Nrf2信號(hào)通路通過(guò)調(diào)控肝臟的氧化損傷在肝纖維化的防治中發(fā)揮重要作用[54]。Prestigiacomo等[55]采用小干擾RNA技術(shù)敲除HSC細(xì)胞的Nrf2后發(fā)現(xiàn),HSC被激活,HSC遷移及增殖增加,α-SMA和ECM表達(dá)水平升高。另有學(xué)者發(fā)現(xiàn)Nrf2小干擾RNA可使TGF-β1誘導(dǎo)的活性氧物質(zhì)增多,促進(jìn)PAI-1表達(dá)水平及Smad3的磷酸化水平增高,促進(jìn)肝纖維化,提示Nrf2在肝纖維化形成與發(fā)展過(guò)程中有重要作用[56]。

      自噬可以促進(jìn)HSC活化,腫瘤相關(guān)基因H19參與了自噬的調(diào)控,其過(guò)表達(dá)可促進(jìn)HSC的活化,而長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long noncoding RNA,LncRNA)-H19已經(jīng)被證實(shí)是調(diào)控肝纖維化發(fā)生發(fā)展的重要分子[57]。有研究顯示,胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白1(insulin-like growth factor binding protein-related protein 1,IGFBPrP1)是一種新發(fā)現(xiàn)的致肝纖維化因子,將小干擾RNA-H19轉(zhuǎn)入IGFBPrP1過(guò)表達(dá)的小鼠的肝星狀細(xì)胞株16 h后,IGFBPrP1 mRNA、LC3B mRNA、α-SMA mRNA的表達(dá)水平受到抑制,肝纖維化減輕[58]。此外,HSC的活化往往伴隨著脂滴的消失,LncRNA-H19與脂肪酸、膽汁酸和葡萄糖等多種代謝方式有關(guān),將小干擾RNA LncRNA-H19轉(zhuǎn)入HSC后,HSC的活化被抑制,HSC中的脂滴含量增加,這提示降低LncRNA-H19的水平,可以恢復(fù)HSC脂滴含量,抑制HSC活化,改善肝纖維化[57]。

      近年來(lái),很多學(xué)者應(yīng)用小干擾RNA技術(shù)減輕肝纖維化程度,如設(shè)計(jì)了人骨形成蛋白9小干擾RNA、生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白2小干擾RNA、上皮細(xì)胞黏附分子小干擾RNA、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體小干擾RNA、腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白8樣分子2小干擾RNA,在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中均發(fā)現(xiàn)上述小干擾RNA技術(shù)具有很好地減輕肝纖維化的效果[59-63]。

      5 小 結(jié)

      肝纖維化是多種病因?qū)е碌母螕p傷之后的修復(fù)代償過(guò)程,是疾病進(jìn)展到肝硬化甚至肝癌的可逆階段。應(yīng)用小干擾RNA技術(shù)沉默肝纖維化過(guò)程中的關(guān)鍵基因,可以抑制HSC活化及增殖,促進(jìn)HSC凋亡,減少ECM沉積,從而逆轉(zhuǎn)肝纖維化。但現(xiàn)階段小干擾RNA技術(shù)的應(yīng)用大多限于細(xì)胞與動(dòng)物實(shí)驗(yàn),尚未進(jìn)行臨床試驗(yàn),其在臨床上的應(yīng)用效果如何還有待進(jìn)一步深入研究。

      猜你喜歡
      生長(zhǎng)因子活化纖維化
      無(wú)Sn-Pd活化法制備PANI/Cu導(dǎo)電織物
      肝纖維化無(wú)創(chuàng)診斷研究進(jìn)展
      傳染病信息(2022年3期)2022-07-15 08:24:28
      肝纖維化的中醫(yī)藥治療
      肝博士(2021年1期)2021-03-29 02:32:16
      小學(xué)生活化寫(xiě)作教學(xué)思考
      鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)2型糖尿病相關(guān)阿爾茨海默病的治療探索
      胃癌組織中成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子19和成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體4的表達(dá)及臨床意義
      腎纖維化的研究進(jìn)展
      鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子修復(fù)周?chē)窠?jīng)損傷對(duì)斷掌再植術(shù)的影響
      轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β激活激酶-1在乳腺癌組織中的表達(dá)及臨床意義
      中西醫(yī)結(jié)合治療慢性乙型肝炎肝纖維化66例
      甘孜县| 石渠县| 任丘市| 兖州市| 贵州省| 南京市| 伊川县| 澄江县| 曲麻莱县| 宜阳县| 门头沟区| 秀山| 成安县| 西青区| 万安县| 十堰市| 宁陵县| 马鞍山市| 嘉兴市| 古田县| 桓台县| 建阳市| 巴彦县| 南投市| 南木林县| 镇远县| 南郑县| 醴陵市| 黄冈市| 黄浦区| 德令哈市| 上栗县| 无极县| 遵义县| 五家渠市| 安泽县| 房产| 临海市| 石城县| 孟村| 阳信县|