濃香白酒的己酸乙酯測定方法與應(yīng)用分析

◎ 夏 燕

（湖北琪譜檢測技術(shù)有限公司，湖北 武漢 430064）

我國白酒在蒸餾酒當中獨具特色，有著厚重的文化色彩，其味甘、苦、辛，性溫，可暖人的心、肝、肺及胃經(jīng)，能促進血液的流通，兼具抵御寒氣與醒脾溫中的效果[1]。適量飲用白酒能舒筋活血、通風散寒，還能快速消除疲勞，陶冶情操，使人變得更加輕快。此外，白酒在提神方面也有一定的效果，失眠人群在休息前適量飲用白酒，有利于睡眠質(zhì)量的提高，并能夠有效促進胃液及唾液的分泌，從而起到健胃的效果[2-3]?？偟膩碚f，適量地飲用白酒，對于身體健康有著良好的促進作用。近幾年，有關(guān)于其釀造工藝、香味成分分析、香型及應(yīng)用等報道相對較多。白酒的制作原料是糧谷，通過傳統(tǒng)的固態(tài)法發(fā)酵、蒸餾、陳釀及勾調(diào)而成，有著復(fù)雜的制作工藝，濃香型白酒是我國白酒13大香型的主導(dǎo)香型，因其清香純正、醇甜柔和、自然諧調(diào)和余味凈爽等感官特征，備受廣大消費者的青睞[4-5]。其中，己酸乙酯是構(gòu)成濃香型酒典型風格的主體因素，該種成分的含香量比較高，而且香氣極為突出。濃香型白酒主要是以濃香甘爽作為其特征，發(fā)酵的原料有多種類型，并以高粱作為主體，發(fā)酵是應(yīng)用混蒸續(xù)渣的工藝手段。在發(fā)酵的時候，大多使用陳年老窖，也有人工培養(yǎng)的老窖。同時，其還以“無色透明、窖香優(yōu)雅、綿甜爽凈、柔和協(xié)調(diào)、尾凈香長、風格典型”名揚海內(nèi)外。根據(jù)前瞻產(chǎn)業(yè)研究院整理的資料顯示，在2020年中國白酒行業(yè)分銷售收入細分市場份額中，濃香型白酒的占比為51%，由此可知濃香型白酒的受歡迎程度。

1 材料與儀器

1.1 材料與試劑

五糧液、劍南春、瀘州老窖3種常見的濃香型白酒。氯化鈉（AR，上海國藥），乙腈（色譜純，南京化學(xué)試劑股份有限公司），甲醇（色譜純，北京邁瑞達科技有限公司），無水乙醇（沈陽化學(xué)試劑廠），磷酸二氫鉀（AR，天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司）。

1.2 儀器與設(shè)備

氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀GC-MS 6800、ROHS2.0檢測儀，江蘇天瑞儀器股份有限公司；YRE-201C型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，河南鞏義市予華儀器有限責任公司；PHS-3C臺式精密數(shù)顯酸度計，上海滬粵明科學(xué)儀器有限公司；STI-501Plus高效液相色譜儀，上海精密儀器儀表公司；PDMS/DVB固相微萃取頭（65 μm）；Supelco57310-U SPME纖維頭，北京康林科技有限責任公司。

2 3種常見濃香型白酒的香氣成分的分析

2.1 提取香氣的成分

提取5 mL的酒樣在頂空的樣品瓶當中，并將瓶口進行密封，在40 ℃的條件之下，進行15 min的預(yù)熱，在將萃取頭插入到樣品瓶當中，并在40 ℃的恒溫條件下，進行30 min的萃取吸附。然后，將萃取頭插入到GC-MS的進樣口當中，在240 ℃的條件下進行5 min的解吸。

2.2 氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀測定條件

2.2.1 氣相色譜測定條件

HP-FFAP彈性石英毛細管色譜柱（25.0 m×200 μm×0.30 μm）；進樣口的溫度是240 ℃；載氣：He，流速為1 mL·min-1；柱溫為40 ℃，以10 ℃·min-1升溫到220 ℃。

2.2.2 質(zhì)譜測定條件

將EI源作為離子源；離子源的溫度是230 ℃；接口的溫度是230 ℃；四極桿的溫度是150 ℃；發(fā)射電流是34.6 μA；電離電壓是70 eV；倍增電壓是1 988 V；質(zhì)量范圍m/z是20～500。

2.3 實驗流程

應(yīng)用PDMS/DVB 65 μm萃取頭提取1.1中3種酒樣品的香氣成分，由氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀分析鑒定樣品，進而得出以下結(jié)果，即3種常見的濃香白酒主要香氣成分構(gòu)成都含有已酸乙酯，而且相對百分含量均比較高。其中，五糧液含己酸乙酯60.87%、劍南春含己酸乙酯53.98%、瀘州老窖含己酸乙酯70.21%。詳見表1。

表1 3種常見的濃香白酒的已酸乙酯相對百分含量表

3 基于高效液相色譜3種常見濃香型白酒的香氣成分的定量分析

3.1 制備標準溶液與樣品溶液

3.1.1 標準溶液

把甲醇、乙腈分別通過0.45 μm的微孔濾膜進行過濾、脫氣的操作，同時配制0.1 mol·L-1的KH2PO4溶液當作流動相，基于上述操作，精準的稱取0.352 2 g己酸乙酯在10 mL的容量瓶當中，使用60%的乙醇水溶液進行定容，進而得到濃度為35.22 mg·mL-1的己酸乙酯的標準儲備液，然后再從中選取2 mL放入25 mL的容量瓶當中，使用濃度為60%的乙醇水溶液進行定容。

3.1.2 樣品溶液

分別選取適量的五糧液、劍南春、瀘州老窖酒樣，通過0.45 μm微孔濾膜的過濾之后，等待檢測。

3.2 測定條件

色 譜 柱：Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈與純凈水的體積比是7∶13；流動速度是1 mL·min-1；柱溫為35 ℃；掃描的波長是190.0～400.0 nm；進樣量是10.0 μL。

3.3 確定檢測的波長

選取適量的標準溶液，根據(jù)色譜測定的條件，在190～400 nm的波長范圍進行掃描，在210 nm處產(chǎn)生最的大吸收峰。同時選取適量的樣品溶液，按照色譜測量的條件，同樣是在190～400 nm的波長范圍進行掃描，在相同的區(qū)域產(chǎn)生最大的吸收峰。所以，檢測的波長選為210 nm。

3.4 測定樣品

精確的稱取通過處理后的3種白酒的樣品，對每個樣品進行3次測定，從而計算出3種樣品的己酸乙酯的含量，詳見表2。

表2 含量測定結(jié)果表（單位：mg·mL-1）

3.5 回收率的實驗

選取適量的白酒樣品，同時加入體積不同的標準溶液，流動相定容到10 mL，在進行高效液相色譜分析，該方法的回收率計算如表3所示。

表3 回收率的實驗表

4 結(jié)果與討論

己酸乙酯含量是國家控制濃香型白酒標準的一項重要指標，種類、酒度不同的白酒，對于已酸乙酯同樣有著不同的要求，而且其含量的高低會對白酒的香型、風格及口感產(chǎn)生最為直接的影響。因此，己酸乙酯含量的多少是對白酒質(zhì)量進行檢測的關(guān)鍵性指標之一?，F(xiàn)階段，國家所推薦性的檢驗標準（GB/T 10345—2007）當中，要求使用氣相色譜內(nèi)標法對己酸乙酯的含量進行分析，各個酒廠普遍選擇使用的是以乙酸正丁酯作為內(nèi)標物的內(nèi)標法，該方法能夠?qū)Π拙飘斨械?5種醇、酯類物質(zhì)進行精確檢測，而且這一方法對于進樣量要求并不嚴格，進而能夠有效地避免進樣量變化帶來的分析誤差，但是該方法要求對同一樣品的已酸乙酯2次測定值之差低于5%。在實際的分析過程當中，需要最大限度地減少各類分析誤差。與此同時，為保證研究的準確性，本次應(yīng)用固相萃取-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用與高效液相色譜法，對3種常見白酒的己酸乙酯進行分析，從而構(gòu)建出快速精準的分析方式，并為白酒的開發(fā)利用提供一定的參考。通過固相萃取法對3種常見的濃香白酒的香氣成分進行提取，同時使用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用對相對百分含量進行分析。最終得出的結(jié)果顯示，在白酒的香氣成分當中，主要含有兩種化合物，即酯、酸類化合物。其中，3種濃香的白酒當中都含有酯、酸類化合物己酸乙酯，其相對百分含量分別為五糧液含己酸乙酯60.87%、劍南春含己酸乙酯53.98%、瀘州老窖含己酸乙酯70.21%。3種濃香白酒的香氣成分當中己酸乙酯的含量從高到分別是瀘州老窖、五糧液、劍南春。同時應(yīng)用高效液相色譜法進行定量分析，得到的結(jié)果顯示，五糧液含量0.457 4 mg·mL-1、劍南春含量0.367 0 mg·mL-1、瀘州老窖含量0.364 9 mg·mL-1。含量從高至低的順序分別是五糧液、劍南春、瀘州老窖。通過對比使用固相萃取提取、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法對3種常見的濃香白酒香氣成分進行測定，結(jié)果顯示己酸乙酯的相對百分含量和使用高效液相色譜法定量分析獲得的己酸乙酯含量均較高，雖然兩種方法下3種白酒含有己酸乙酯的含量不同，但相同的是3種白酒中都含有己酸乙酯，而且其含量的高低對于白酒的風味特點具有決定性的作用。濃香型白酒有著清香純正、醇甜柔和、自然諧調(diào)、余味凈爽等諸多特征，通過研究表明固相萃取-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用與高效液相色譜法在測定濃香白酒的己酸乙酯中，具有一定的應(yīng)用價值。