HPLC 同時測定白芍、炒白芍配方顆粒芍藥苷含量

畢瑩，許兵兵

1.南昌市洪都中醫(yī)院，江西 南昌 330006；2.江西省中醫(yī)藥研究院，江西 南昌 330046

白芍為毛莨科植物芍藥Paeonia lactifloraPall.的干燥根，春、秋二季采挖，除去頭尾及細(xì)根，置沸水煮后除去外皮或去皮后再煮，曬干。白芍主產(chǎn)于安徽、山東、四川等地，具有養(yǎng)血柔肝、緩中止痛、斂陰收汗等功效，常用于胸腹脅肋疼痛、瀉痢腹痛、自汗盜汗、陰虛發(fā)熱、月經(jīng)不調(diào)、崩漏帶下等癥的治療［1］。白芍含有單萜及其苷類、三萜類、黃酮類、鞣質(zhì)及多糖類等多種化學(xué)成分［2］?，F(xiàn)代研究表明，芍藥總苷為白芍的有效部位，主要含芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷等活性成分，具有廣泛的藥理作用，如鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗炎、抗抑郁、保肝等［3-8］。

中藥配方顆粒是以符合炮制規(guī)范的中藥飲片為原料，經(jīng)現(xiàn)代制劑工藝而成，用于代替中藥飲片供臨床配方使用的粉狀或顆粒狀產(chǎn)品［9］。白芍與炒白芍配方顆粒是白芍或炒白芍飲片經(jīng)水提、濃縮、噴霧，加適量糊精制成的顆粒，臨床應(yīng)用普遍。相關(guān)研究表明，白芍配方顆粒能夠顯著改善CCl4誘導(dǎo)的肝損傷，能夠用于肝細(xì)胞損傷性疾病的預(yù)防和治療［10］。目前關(guān)于白芍配方顆粒的研究主要集中在提取工藝優(yōu)化［11］、原藥材質(zhì)量控制［12］等，而相關(guān)質(zhì)量控制研究相對薄弱。本研究以白芍配方顆粒和炒白芍配方顆粒為目標(biāo)，采用高效液相色譜建立質(zhì)量控制方法；在此基礎(chǔ)上，分析比較兩者芍藥苷含量的差異，為白芍配方顆粒和炒白芍配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供依據(jù)，為其實際生產(chǎn)與臨床應(yīng)用提供參考。

1 實驗材料

Agilent 1200 Series 高效液相色譜儀（美國，G1316B DAD 檢測器，G1311A 四元低壓梯度泵，G1322A 在線真空脫氣機(jī)，G1329A 自動進(jìn)樣器，G1316A 柱溫箱）；Agilent Chemstation 色譜工作站；MS105 型1/10 萬電子天平（Mettler Toledo），CP214型萬分之一電子天平［奧豪斯儀器（上海）有限公司］，KQ-250E 型超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）。

配方顆粒樣品選自南昌市洪都中醫(yī)院藥房，白芍配方顆粒（廣東一方制藥有限公司，批號：7055162），炒白芍配方顆粒（廣東一方制藥有限公司，批號：6053682），芍藥苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110736-201741），色譜乙腈（西隴科學(xué)股份有限公司），甲醇（分析純，西隴科學(xué)股份有限公司），乙醇（分析純，西隴科學(xué)股份有限公司），磷酸（分析純，西隴科學(xué)股份有限公司），水為超純水，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液制備

取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每l mL 含60 μg 的溶液，進(jìn)樣前過0.45 μm 微孔濾膜。

2.2 供試品溶液制備

樣品研細(xì)，取約0.1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，稱定重量，超聲處理（功率240 W，頻率45 kHz）30 min，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液3 mL，置10 mL 量瓶中，加稀乙醇至刻度，搖勻，即得。

2.3 色譜條件

Welch C18 色譜柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm），流動相乙腈-0.1%磷酸溶液（14∶86），流速1.0 mL/min，柱溫25 ℃，檢測波長230 nm；進(jìn)樣量10 μL。對照品及樣品溶液HPLC 圖譜見圖1。

圖1 芍藥苷對照品（A）及白芍配方顆粒（B）HPLC圖

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性方程 取芍藥苷對照品適量，加甲醇分別制成每1 mL 含芍藥苷5.92、11.84、29.60、59.20、88.80、118.40 μg 的對照品溶液，分別進(jìn)樣10 μL。以芍藥苷峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，濃度（X）為橫坐標(biāo)繪制芍藥苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到芍藥苷的線性回歸方程：Y=10.065X-2.429 9，r=0.999 8，線性范圍：0.059 2 μg～1.184 μg。

2.4.2 精密度 取“2.1”項下混合對照品溶液進(jìn)樣，每次10 μL，重復(fù)進(jìn)樣6 次，按照“2.3”項下色譜條件測定峰面積，芍藥苷峰面積RSD 分別為0.75%，表明儀器精密度良好。

2.4.3 重復(fù)性 分別精密稱取6 份白芍配方顆粒樣品，按照“2.2”項下供試品制備方法制備6 份供試品溶液，按照“2.3”項下色譜條件測定，測得6 份白芍配方顆粒中芍藥苷含量分別為：64.16、63.72、63.88、64.15、64.91、64.07 mg/g。白芍配方顆粒中芍藥苷含量RSD 值分別為0.64%，表明樣品制樣重復(fù)性良好。

2.4.4 穩(wěn)定性 取同1 份白芍配方顆粒供試品溶液，按照“2.3”項下色譜條件測定分別測定0、2、4、8、12、18、24 h 芍藥苷峰面積，白芍配方顆粒中芍藥苷峰面積RSD 值為0.88%，表明樣品在24 h 內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.4.5 加樣回收率 精密稱取已知含量的白芍配方顆粒樣品6 份，準(zhǔn)確加入一定量的芍藥苷對照品，按照“2.2”項下供試品制備方法制備供試品溶液，按照“2.3”項下色譜條件測定，進(jìn)樣10 μL。計算得白芍配方顆粒中芍藥苷加樣平均回收率為100.19%，RSD 值為1.91%。見表1。

表1 白芍配方顆粒中芍藥苷加樣回收實驗（n=6）

2.5 樣品測定

取白芍配方顆粒及炒白芍配方顆粒樣品，按照“2.2”項下方法制備供試品溶液。按照“2.3”項下色譜條件測定，進(jìn)樣10 μL，重復(fù)3 次，以芍藥苷對照品為參照，白芍配方顆粒中芍藥苷含量為63.11 mg/g、炒白芍配方顆粒中芍藥苷含量為46.82 mg/g。

3 討論

采用全波長對芍藥苷UV 吸收波長進(jìn)行掃描，芍藥苷在230 nm 波長處有最大吸收，因此選擇230 nm 作為測定波長。另外，由于芍藥苷易水解，因此在流動相中加入0.1%的磷酸抑制其水解，提高穩(wěn)定性。在相同色譜條件下，分別采用Welch C18色譜柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm）、Diamonsil C18色譜柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm）、Agela C18 色譜柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm）3種不同廠家色譜柱對樣品進(jìn)行分析，所獲得色譜圖中芍藥苷均具有較好分離度，表明該方法重現(xiàn)性及耐受性良好。

相關(guān)文獻(xiàn)表明，白芍原藥材不同炮制品芍藥苷含量為白芍>炒白芍［13］。本實驗中，白芍配方顆粒中芍藥苷含量高于炒白芍配方顆粒，實驗結(jié)果與文獻(xiàn)相符。芍藥苷具有一定的水溶性，（炒）白芍藥材經(jīng)水提后制成的配方顆粒能夠保留其成分。因此，以芍藥苷作為（炒）白芍配方顆粒質(zhì)控指標(biāo)具有一定的合理性。本文所建立的（炒）白芍配方顆粒HPLC 含量測定方法重復(fù)性好、準(zhǔn)確度高，能夠用于（炒）白芍配方顆粒中芍藥苷含量分析與質(zhì)量控制，同時，可為（炒）白芍配方顆粒的實際生產(chǎn)與臨床應(yīng)用提供參考。