• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    青錢柳內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物抗氧化活性研究

    2021-11-17 00:29:04胡世一周雅琴安寧石忠衡趙立春譚小明
    關(guān)鍵詞:內(nèi)生真菌青錢柳抗氧化活性

    胡世一 周雅琴 安寧 石忠衡 趙立春 譚小明

    【摘要】目的:分析廣西產(chǎn)瀕危藥用植物青錢柳內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物的抗氧化活性,篩選具有抗氧化活性較強(qiáng)的內(nèi)生真菌菌株。方法:以課題組前期已分離培養(yǎng)的131株青錢柳內(nèi)生真菌的發(fā)酵粗提取物為研究對象,對發(fā)酵產(chǎn)物的DPPH·、·OH-、O-2·、NO-2能力和Fe2+螯合能力進(jìn)行檢測。結(jié)果:結(jié)果表明,青錢柳內(nèi)生真菌表現(xiàn)出具有一定清除DPPH·、·OH-、O-2·、NO-2能力和Fe2+螯合能力,對DPPH·、·OH-、O-2·、NO-2最大清除率和對Fe2+最大螯合率分別為81.32 %、87.83 %、49.7 %、43.5 %、82.24 %;菌株824F、894F、907F、885F、890F、876F、912F清除·OH-自由基能力較強(qiáng),清除率均大于陽性對照VC。結(jié)論:結(jié)果表明青錢柳內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物具有良好的抗氧化活性,可作為尋找新型天然抗氧化劑的潛在資源。

    【關(guān)鍵詞】青錢柳;內(nèi)生真菌;代謝產(chǎn)物;抗氧化活性

    【中圖分類號】R285.5【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517(2021)18-0016-05

    Study on the Antioxidant Activity of Secondary Metabolites from Endophytic Fungi of Cyclocarya paliurus (Batal.) IljinskHU Shiyi1ZHOU Yaqin1,2*AN Ning1SHI Zhongheng1ZHAO Lichun1TAN Xiaoming1,3*

    1.Guangxi University of Chinese Medicine,Nanning 530200,China;2.Guangxi Botanical Garden of Medicinal Plant,

    Nanning 530023,China;3.Guangxi Engineering Technology Research Center of Advantage Chinese Patent

    Drug and Ethnic Drug Development,Nanning 530200,ChinaAbstract:Objective To analyzethe antioxidant activity of Cyclocarya paliurus(Batal.) Iljinsk,an endangered medicinal plant from Guangxi,the secondary metabolites of endophytic fungi from C.paliurus were screened.Methods The antioxidant activity of the secondary metabolites of 131 endophytic fungi from C.paliurus were detected by analyzing the ability of DPPH ·,·OH-、O-2·、NO-2 and chelating Fe2+.Results The results showed that the extracts from endophytic fungi of C.paliurus had the ability of scavenging DPPH ·,·OH-、O-2·、NO-2 and chelating Fe2+,and their maximum scavenging rates were 81.32%,87.83%,49.7%,43.5% and 82.24%,respectively. The seven isolates including 824F,894F,907F,885F,890F,876F and 912F had stronger scavenging ability of OH radicals,and the scavenging rates were higher than that of the positive control VC.Conclusions The results showed that the metabolites of endophytic fungi of C.paliurus had good antioxidant activity and could be used as a potential resource for new natural antioxidants.

    Keywords:Cyclocarya paliurus; Endophytic Fungi; Metabolites; Antioxidant Activity

    人體在正常生理代謝過程中會產(chǎn)生大量的自由基,如過氧化自由基、超氧陰離子自由基、羥基自由基等,它們是人體疾病、衰老和死亡的直接參與者,一般情況下,當(dāng)體內(nèi)自由基的產(chǎn)生與清除能力處于平衡狀態(tài)時,受控的自由基對人體是有益的,一旦失衡,體內(nèi)就會出現(xiàn)“氧化應(yīng)激”狀態(tài),這時則需要通過補(bǔ)充抗氧化劑來調(diào)整體內(nèi)自由基平衡,以防止疾病的發(fā)生[1]。日常中,被廣泛應(yīng)用于化妝品、保健食品和藥物中的抗氧化劑多為人工化學(xué)合成制品,存在有諸多毒副作用,難以滿足人們的生活需求[2]。

    內(nèi)生真菌是指生活在健康植物組織器官內(nèi)部,但不會引起宿主植物出現(xiàn)明顯病害癥狀的一類真菌,包括一些在其生活史的某一階段表面生的腐生菌、潛伏性病原菌和菌根菌[3]。人們對內(nèi)生真菌的研究始于1993年,美國科學(xué)家Stierle首次從太平洋短葉紅豆杉(Taxus brevifolia)韌皮部中獲得1株能夠生產(chǎn)抗癌物質(zhì)紫杉醇的內(nèi)生真菌Taxomyces andreanae[4]。近年來的研究[5]顯示,內(nèi)生真菌能提高宿主植物對非生物脅迫與生物脅迫的抗逆性,部分內(nèi)生真菌能自身產(chǎn)生與宿主植物相同或相近的活性成分物質(zhì)。因此,從植物中分離和篩選出具有抗氧化活性的內(nèi)生真菌,對食品、醫(yī)藥等工業(yè)具有重要意義。

    青錢柳Cyclocarya paliurus(Batal.) Iljinsk.系胡桃科青錢柳屬植物,又名青錢李、山麻柳、山化樹、一串錢、山麻柳、甜茶樹等,為我國特有的單種屬珍稀植物,有植物界大熊貓和醫(yī)學(xué)界的“第三顆樹”以及“天然胰島素”的美譽(yù),其樹皮、葉具有清熱消腫、止痛功效,可用于頑癬,集綠化、保健、藥用、材用于一體[6]。研究[7]表明,青錢柳組織中含有黃酮類、酚類、萜類等多種化學(xué)成分,具有抗氧化、抗菌及抗腫瘤等活性作用。青錢柳不同溶劑提取物對DPPH、超氧、羥自由基均具有不同強(qiáng)度的清除能力[8],青錢柳葉70 %乙醇提取物具有較好的抗氧化活性,一些成分的體外抗氧化活性強(qiáng)于VC[9]。但是,現(xiàn)階段國內(nèi)外有關(guān)青錢柳內(nèi)生真菌的研究報道尚少。研究以青錢柳內(nèi)生真菌為研究對象,篩選出活性較高的菌株并加以分類鑒定,旨在為尋找新型天然抗氧化劑提供可利用的候選菌株資源。

    1材料與方法

    1.1材料植物材料于2019年4月采自廣西百色市樂業(yè)縣雅長鄉(xiāng)(E 106°20′;N 24°84′),由廣西中醫(yī)藥大學(xué)譚小明研究員鑒定為青錢柳C.paliurus。131株內(nèi)生真菌分別從青錢柳的根、莖皮等組織中分離獲得。以上材料采保藏于廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院。

    1.2方法

    1.2.1內(nèi)生真菌發(fā)酵液制備在無菌超凈工作臺上,采用PDA平板培養(yǎng)基活化真菌7d,然后用接種針挑取3個菌塊(直徑為6mm),接種到含100mL PDA液體培養(yǎng)基錐形瓶(250mL)中,在轉(zhuǎn)速為120r/min的搖床上震蕩暗培養(yǎng)10d(培養(yǎng)溫度為25℃)。發(fā)酵液用4層無菌的干凈紗布過濾。將濾液于10,000r/min條件下離心10min,取上清液于45℃,8×103Pa條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至浸膏狀,稱重,加無菌去離子水配成10mg/mL 的樣品溶液,保存于4℃冰箱備用。

    1.2.2DPPH自由基清除率測定DPPH法快速、簡便、重現(xiàn)性好,自由基DPPH·在有機(jī)溶劑(如甲醇、乙醇)中非常穩(wěn)定,顯紫色,在517nm波長處有強(qiáng)吸收,DPPH溶液與自由基清除劑混合時,顏色由紫色變成淺黃色。參考文獻(xiàn)的方法[12],以Vc作陽性對照,檢測青錢柳內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物對DPPH·自由基清除能力。清除率的計(jì)算公式如:DPPH清除率(%)=[(A0-Ai)/A0]×100,式中:A0為空白對照OD值,Ai為樣品或陽性對照DPPH溶液的OD值。

    1.2.3羥基(·OH-)自由基清除能力測定OH是毒性最大的活性氧自由基,會引起脂質(zhì)過氧化作用及造成人體損傷。利用Fenton反應(yīng)體系法[12],以Vc作陽性對照,在510nm處檢測青錢柳內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物清除·OH-的能力,清除率的計(jì)算公式同1.2.2。

    1.2.4亞鐵離子(Fe2+)螯合能力測定鐵具有高反應(yīng)活性,能促使機(jī)體發(fā)生脂質(zhì)氧化反應(yīng),對亞鐵離子的螯合,可以減少氧化損傷。采用Ferrozine(菲啰嗪)比色法[12],以EDTA-2Na作陽性對照,在562nm處檢測青錢柳內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物對亞鐵離子的螯合能力,對亞鐵的螯合率計(jì)算公式如:Fe2+螯合能力清除率(%)=[(A0-Ai)/A0] × 100,式中:A0為空白對照的OD值,Ai為加有樣品或陽性對照后的OD值。

    通過1.2.1-1.2.4方法,綜合篩選出18株活性較好的菌株,作為深入研究對象,進(jìn)行以下2種抗氧化活性指標(biāo)的實(shí)驗(yàn)。

    1.2.5超氧陰離子(O-2·)清除能力測定O-2·是機(jī)體壽命最長的自由基,除自身能發(fā)生氧化反應(yīng)的外,還能引發(fā)產(chǎn)生其他自由基,繼而對機(jī)體造成更大的危害。參照鄰苯三酚自氧化法[10],以VC作陽性對照,在536nm處檢測青錢柳內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物清除O-2·的能力,清除率的計(jì)算公式如:O-2·清除率(%)=[1-(Ai-A0)/(Ab-A0)]×100,式中:A0為不加 NBT 的OD值;Ab為空白對照的OD值;Ai為樣液的OD值。

    1.2.6NO2-自由基清除能力的測定在酸性條件下,亞硝酸鹽NO-2能和對氨基苯磺酸發(fā)生反應(yīng),再與鹽酸萘乙二胺反應(yīng)生成紫紅色絡(luò)合物,在538nm波長處有最大吸收,因此,可通過檢測其吸光度,間接測定NO-2的量。參照鹽酸萘乙二胺法反應(yīng)原理[11],在538nm處檢測青錢柳內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物清除亞硝酸鹽的能力。清除率的計(jì)算公式如:亞硝酸鹽清除率(%)=[(A0-Ai)/A0]×100,式中:A0為空白對照的OD值,Ai為加有樣品或陽性對照后的OD值。

    1.3統(tǒng)計(jì)分析采用Excel 2019和DPS 7.05 對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,最小顯著差數(shù)法(LSD)進(jìn)行單因素方差分析。不同小寫字母表示差異性顯著(P<0.05),不同大寫字母表示差異性極顯著(P<0.01)。

    2結(jié)果與分析

    2.1青錢柳內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物對DPPH自由基清除作用通過DPPH自由基清除試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),有35株真菌發(fā)酵液清除率高于50%(見表1),占總供試菌株的25%。其中清除率低于60%高于50%的菌株有10株,編號894F和851F的清除能力最低,均為50.12%;清除率低于70%高于60%的菌株有17株,大于70 %共8株,清除率介于70%~80%之間的菌株有7株,編號分別為913J、885J、892J、909F、882F、937F、820F;清除率高于80%菌株僅1株,編號為937J,為81.32%,131株內(nèi)生真菌清除DPPH能力均小于VC的清除率85.90%。

    2.2青錢柳內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物對·OH-自由基清除作用共有103株真菌的·OH-清除能力大于50%,占總供試菌株的77%(見表2)。其中清除率在50%至60%的菌株有17株,編號為903J清除率最低,為50.00%;清除率介于60%~70%、70%~80%之間的菌株分別有25株、29株;清除率高于80%低于90%的菌株有32株,其中,共有7株清除率高于陽性對照VC清除率85.83%,編號為824F、894F、907F、885F、890F、912F、876F;菌株912F和876F的清除能力最強(qiáng),清除率分別為 87.83%、87.74%。

    2.3青錢柳內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物對Fe2+螯合能力共計(jì)88株內(nèi)生真菌的Fe2+螯合能力高于50%,占總供試菌的67%(見表3)。清除率大于50%小于60%的菌株有38株,編號930F清除能力最低,為50.14%;清除率在60%至70%之間的菌株36株,清除率高于70%低于80%的菌株有12株,編號為911F、926F、851F、929F、808F、820F、810F、850F、845F、823F、912F、898F;清除率高于80%共有2株,編號為907F、840F,清除率均為82.24%,均低于陽性對照EDTA-2Na清除率85.07%。

    2.4青錢柳內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物對O-2·自由基清除作用18株內(nèi)生真菌對清除O-2·能力普遍較弱,只有2株真菌發(fā)酵液的清除率接近于50%。菌株886F的清除率為49.70%,而陽性對照VC清除O-2·能力為96.42%,約為菌株886F的1.9倍。菌株909F的清除率為47.92%,遠(yuǎn)低于陽性對照VC的96.42%。

    2.5青錢柳內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物對NO-2自由基清除作用18株內(nèi)生真菌中對NO-2·清除率均低于50%,其中編號863F清除率最好,為43.50%,而陽性對照VC清除率為85.20%,約是菌株863F的1.9倍。

    3討論

    內(nèi)生真菌的生物活性取決于其代謝產(chǎn)物所含的功能性成分。文獻(xiàn)研究表明,目前國內(nèi)外對青錢柳內(nèi)生真菌抗氧化和抗菌活性方面的研究報道較少,僅有寇曉琳等[12]對青錢柳內(nèi)生真菌的抗菌活性進(jìn)行研究,研究結(jié)果從67株內(nèi)生真菌中篩選出7株菌株具有穩(wěn)定產(chǎn)生黃酮類化合物的能力,進(jìn)一步的抗菌實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其中具有較強(qiáng)的抑菌活性作用。相近屬種的其他植物如野核桃[13]和核桃[14]則開展了內(nèi)生真菌的抗菌和抗氧活性的研究??梢?,胡桃科植物內(nèi)生真菌蘊(yùn)藏有抗菌、抗氧化等多種代謝活性物質(zhì),這同植物與宿主的“共生理論”達(dá)成一致,也說明胡桃科植物內(nèi)生真菌是尋找高抗氧化活性物質(zhì)的可選資源。

    本研究首次對我國廣西野生青錢柳植物內(nèi)生真菌的抗氧化活性進(jìn)行篩選研究,發(fā)現(xiàn)了其中蘊(yùn)藏著豐富的抗氧化活性菌株,其中以菌株909F和886F的抗氧化活性較好,對5種檢測指標(biāo)均表現(xiàn)出一定的抗氧化活性。本研究結(jié)果還顯示,青錢柳內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物清除·OH-效果最好,次之為Fe2+螯合能力和清除DPPH·能力,而18株菌株清除O-2·、NO-2能力普遍較弱,清除率均小于50%。由此可見,青錢柳內(nèi)生真菌發(fā)酵液具有良好的清除自由基能力,一些菌株清除自由基能力較突出,這為從青錢柳中尋找新型天然抗氧化劑提供了寶貴的候選菌種資源。但是,有關(guān)于這些活性菌株的分類地位和抗氧化活性成分的提取分離、鑒定,還有待進(jìn)一步的深入研究。參考文獻(xiàn)

    [1]趙保路. 自由基、抗氧化劑、信號和人類健康-第14屆國際自由基大會紀(jì)實(shí)[J]. 生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展,2008,35(12):1461-1464.

    [2]朱臻怡,馮民,熊華萱,等. 食品中抗氧化劑的應(yīng)用及其檢測技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 化學(xué)分析計(jì)量,2013,22(5):104-108.

    [3]郭良棟. 內(nèi)生真菌研究進(jìn)展[J].菌物系統(tǒng),2001(1):148-152.

    [4]STIERLE A,STROBEL G,STIERLE D.Taxol and taxane production by Taxomyces andreanae,an endophytic fungus of Pacific yew[J].Science,1993,260(5105):214-216.

    [5]郭龍妹,高林怡,孫文靜,等. 藥用植物內(nèi)生真菌研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2019,47(9):11-13.

    [6]中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會. 中國植物志[M]. 北京:科學(xué)出版社,1979.

    [7]陳毓,陳巍,李鋒濤,等.青錢柳化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].畜牧與飼料科學(xué),2019,40(12):61-63.

    [8]董彩軍,謝明勇,聶少平,等. 青錢柳提取物體外抗氧化活性研究[J].食品科學(xué),2007(10):31-34.

    [9]肖艷華,徐卓,杜治平. 青錢柳化學(xué)成分及抗氧化活性研究[J].食品科技,2019,44(10):223-228.

    [10]王夢亮,郭婷婷,張娜莎,等. 2株長白紅景天內(nèi)生真菌的鑒定及抗氧化活性條件的優(yōu)化[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2015,27(4):667-673.

    [11]張俊生,陳莉華,朱士龍,等. 節(jié)節(jié)草多糖的體外抗氧化活性[J].食品科學(xué),2013,34(5):86-89.

    [12]寇曉琳,謝楠,吳彩娥,等. 青錢柳內(nèi)生真菌多樣性及其代謝產(chǎn)物的特性[J].福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2019,48(4):493-500.

    [13]讓鳳菊,任艷利,張維,等. 伊犁野核桃內(nèi)抑菌抗氧化內(nèi)生真菌的分離、篩選和鑒定[J].生物技術(shù)通報,2019,35(9):218-223.

    [14]龐俊倩,趙鑫丹,郝苑汝,等. 核桃內(nèi)生真菌抗氧化菌株的篩選及其代謝產(chǎn)物活性研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā):2020,32(1):43-49.? (收稿日期:2021-02-03編輯:劉斌)

    基金項(xiàng)目:國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31860128);中藥學(xué)廣西一流學(xué)科(桂教科研〔2018〕12號);廣西中醫(yī)藥大學(xué)大學(xué)生科研訓(xùn)練課題(2018DXS15);廣西高??萍紕?chuàng)新和服務(wù)能力提升工程項(xiàng)目-“廣西中醫(yī)藥科技成果轉(zhuǎn)化與應(yīng)用協(xié)同創(chuàng)新中心”(05020058);廣西中醫(yī)藥大學(xué)“岐黃工程”高層次人才團(tuán)隊(duì)培育項(xiàng)目(2018002)。

    作者簡介:胡世一(1998-),男,漢族,本科,研究方向?yàn)樗幱弥参飪?nèi)生真菌抗氧化活性研究。E-mail:2916268176@qq.com

    通信作者:譚小明(1979-),男,漢族,博士,研究員,研究方向?yàn)檎湎∷幱弥参锖退幱谜婢Y源研究。E-mail:txm1978@126.com;周雅琴(1979-),女,漢族,本科,副主任藥師,研究方向?yàn)樗幱弥参飪?nèi)生真菌活性成分研究。E-mail:zhouyaqin2009@126.com

    猜你喜歡
    內(nèi)生真菌青錢柳抗氧化活性
    青錢柳餅干加工工藝參數(shù)優(yōu)化研究
    青錢柳葉對糖尿病大鼠的治療作用
    中成藥(2017年6期)2017-06-13 07:30:35
    青錢柳質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究
    中成藥(2017年4期)2017-05-17 06:09:31
    蛋白酶種類及水解時間對豬血漿蛋白水解物抗氧化性和乳化性的影響
    肉類研究(2016年12期)2017-01-12 17:20:01
    雞骨草葉總生物堿的含量測定及其體外抗氧化活性研究
    黃草烏根部內(nèi)生真菌的分離與鑒定
    麒麟尾總黃酮提取及其抗氧化作用研究
    內(nèi)生真菌在中藥現(xiàn)代化中的作用
    茶樹內(nèi)生真菌研究進(jìn)展
    披針葉黃華中2株蠕形分生孢子內(nèi)生真菌的鑒定
    亚洲av美国av| √禁漫天堂资源中文www| 成人影院久久| 精品福利观看| 在线观看免费视频网站a站| 香蕉丝袜av| 欧美日韩一级在线毛片| 欧美最黄视频在线播放免费 | 国产亚洲av高清不卡| 欧美av亚洲av综合av国产av| 久久中文字幕一级| 女人被狂操c到高潮| 亚洲av片天天在线观看| 亚洲专区中文字幕在线| 午夜福利免费观看在线| 性少妇av在线| 日韩免费高清中文字幕av| 91字幕亚洲| 老汉色av国产亚洲站长工具| 一级片免费观看大全| 男人的好看免费观看在线视频 | 国产一区二区激情短视频| 99re6热这里在线精品视频| 日本黄色日本黄色录像| 黄色视频,在线免费观看| 大香蕉久久网| 黄色视频,在线免费观看| 男女免费视频国产| 桃红色精品国产亚洲av| 美女 人体艺术 gogo| 老司机午夜福利在线观看视频| 高清在线国产一区| 国产激情欧美一区二区| 国产成人精品久久二区二区免费| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 女同久久另类99精品国产91| 中文字幕制服av| 国产真人三级小视频在线观看| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 国产精品av久久久久免费| 视频在线观看一区二区三区| 亚洲精品国产一区二区精华液| www日本在线高清视频| 波多野结衣av一区二区av| 亚洲人成77777在线视频| 国产极品粉嫩免费观看在线| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| av线在线观看网站| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 国产区一区二久久| 成年人午夜在线观看视频| 国产一区有黄有色的免费视频| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 亚洲精品乱久久久久久| 午夜激情av网站| av欧美777| 大型av网站在线播放| 亚洲综合色网址| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 亚洲av日韩在线播放| 久久久久国产一级毛片高清牌| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲美女黄片视频| 国产伦人伦偷精品视频| 国产精品永久免费网站| 999精品在线视频| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 69av精品久久久久久| 视频区图区小说| 黄片播放在线免费| 久久 成人 亚洲| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 亚洲国产中文字幕在线视频| 欧美久久黑人一区二区| 亚洲一区中文字幕在线| 亚洲专区中文字幕在线| 黄色视频不卡| 久久性视频一级片| 亚洲情色 制服丝袜| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 国产又色又爽无遮挡免费看| 精品国产乱码久久久久久男人| 国产国语露脸激情在线看| 久久热在线av| 欧美另类亚洲清纯唯美| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 国产精品98久久久久久宅男小说| 一进一出抽搐gif免费好疼 | 婷婷成人精品国产| 欧美av亚洲av综合av国产av| 亚洲男人天堂网一区| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 久久久久国产精品人妻aⅴ院 | 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 亚洲综合色网址| 精品第一国产精品| 男人舔女人的私密视频| 国产成人精品在线电影| 美女扒开内裤让男人捅视频| 不卡一级毛片| 国产av一区二区精品久久| 精品免费久久久久久久清纯 | 热re99久久国产66热| 男人操女人黄网站| 成年女人毛片免费观看观看9 | 美国免费a级毛片| 久久婷婷成人综合色麻豆| 波多野结衣av一区二区av| 18禁国产床啪视频网站| 大陆偷拍与自拍| 桃红色精品国产亚洲av| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 黄色a级毛片大全视频| 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲全国av大片| 亚洲精品一二三| 亚洲七黄色美女视频| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产精品一区二区在线不卡| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 91字幕亚洲| 91精品三级在线观看| 久久久久国内视频| 久久久久久久久免费视频了| 三上悠亚av全集在线观看| 国产男女超爽视频在线观看| 久久久久精品国产欧美久久久| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 国产精品九九99| 国产成人免费观看mmmm| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 欧美激情 高清一区二区三区| 在线播放国产精品三级| 999久久久精品免费观看国产| 成人免费观看视频高清| 午夜成年电影在线免费观看| 好男人电影高清在线观看| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 夫妻午夜视频| 韩国精品一区二区三区| 久久精品成人免费网站| 黑人操中国人逼视频| 国产真人三级小视频在线观看| 丝袜人妻中文字幕| 日韩免费高清中文字幕av| 久久久久久人人人人人| 一区二区日韩欧美中文字幕| 精品免费久久久久久久清纯 | 99久久人妻综合| 男女免费视频国产| 精品久久久久久久久久免费视频 | 黄色a级毛片大全视频| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 亚洲精品国产一区二区精华液| 后天国语完整版免费观看| 国产精品欧美亚洲77777| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 午夜影院日韩av| 国产精品av久久久久免费| 免费观看a级毛片全部| 高潮久久久久久久久久久不卡| 久久香蕉精品热| 亚洲国产看品久久| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 久99久视频精品免费| 国产人伦9x9x在线观看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 麻豆乱淫一区二区| 免费黄频网站在线观看国产| 国产一区二区三区综合在线观看| 女人被狂操c到高潮| 一级黄色大片毛片| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 高清av免费在线| 中文亚洲av片在线观看爽 | 欧美久久黑人一区二区| av线在线观看网站| 久久精品亚洲av国产电影网| 欧美人与性动交α欧美软件| 免费在线观看完整版高清| 午夜老司机福利片| 亚洲三区欧美一区| 99国产精品一区二区蜜桃av | 国产精品av久久久久免费| svipshipincom国产片| 飞空精品影院首页| 亚洲av熟女| 精品久久久久久久久久免费视频 | 他把我摸到了高潮在线观看| 久久久国产成人精品二区 | 人妻一区二区av| 很黄的视频免费| 欧美精品亚洲一区二区| 国产精品av久久久久免费| 正在播放国产对白刺激| 亚洲欧美色中文字幕在线| 十八禁人妻一区二区| 精品卡一卡二卡四卡免费| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| av福利片在线| 国产亚洲av高清不卡| 老司机影院毛片| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| a在线观看视频网站| 咕卡用的链子| 岛国毛片在线播放| 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产精品影院久久| 一区在线观看完整版| 超碰成人久久| 免费高清在线观看日韩| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 老司机午夜十八禁免费视频| 老司机靠b影院| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 黄色怎么调成土黄色| 亚洲第一av免费看| 亚洲欧美激情综合另类| 一进一出抽搐gif免费好疼 | 黄片播放在线免费| 久久久精品免费免费高清| x7x7x7水蜜桃| 国产高清视频在线播放一区| 18在线观看网站| 咕卡用的链子| 成人免费观看视频高清| 精品国产乱子伦一区二区三区| 日本欧美视频一区| 亚洲人成伊人成综合网2020| av免费在线观看网站| 日韩视频一区二区在线观看| 日日爽夜夜爽网站| 日韩欧美三级三区| 国产精品永久免费网站| 精品国产一区二区三区四区第35| 国产亚洲欧美98| 高清欧美精品videossex| 在线观看一区二区三区激情| 一进一出好大好爽视频| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 亚洲精品一二三| 两性夫妻黄色片| av国产精品久久久久影院| av线在线观看网站| 91av网站免费观看| 欧美成人免费av一区二区三区 | 99国产精品一区二区三区| 天天影视国产精品| bbb黄色大片| 欧美成人午夜精品| a级毛片在线看网站| 亚洲一区二区三区不卡视频| 成人亚洲精品一区在线观看| 免费观看精品视频网站| 亚洲av美国av| 中文字幕最新亚洲高清| 久久久精品免费免费高清| 亚洲免费av在线视频| 欧美亚洲日本最大视频资源| a在线观看视频网站| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 黑丝袜美女国产一区| 成人影院久久| av视频免费观看在线观看| 亚洲一区高清亚洲精品| 欧美+亚洲+日韩+国产| 一区二区三区精品91| 老司机亚洲免费影院| 五月开心婷婷网| 91大片在线观看| 欧美在线黄色| 精品久久蜜臀av无| 久久久国产欧美日韩av| 99热网站在线观看| 成人av一区二区三区在线看| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 真人做人爱边吃奶动态| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 夫妻午夜视频| 精品一品国产午夜福利视频| 国产单亲对白刺激| 精品亚洲成a人片在线观看| 国产欧美日韩一区二区精品| 欧美成人午夜精品| 久久精品成人免费网站| 国产乱人伦免费视频| 日韩欧美免费精品| 国产亚洲精品一区二区www | 曰老女人黄片| 男女免费视频国产| 欧美性长视频在线观看| 精品国产乱码久久久久久男人| 国产成人免费无遮挡视频| 18禁国产床啪视频网站| 成人影院久久| av视频免费观看在线观看| 久久草成人影院| 久久婷婷成人综合色麻豆| 又大又爽又粗| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 国产精品久久视频播放| 亚洲专区国产一区二区| 精品福利永久在线观看| 欧美乱色亚洲激情| www.999成人在线观看| 国产亚洲欧美98| av免费在线观看网站| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 99热网站在线观看| 嫩草影视91久久| 欧美精品一区二区免费开放| 亚洲精品在线美女| 国产精品成人在线| 不卡一级毛片| 欧美日韩视频精品一区| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | www.999成人在线观看| 国产片内射在线| 成年动漫av网址| 狂野欧美激情性xxxx| av天堂在线播放| 视频区图区小说| 欧美 日韩 精品 国产| 久久性视频一级片| 不卡一级毛片| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 国产亚洲精品久久久久久毛片 | 飞空精品影院首页| 在线观看免费午夜福利视频| 亚洲专区中文字幕在线| 黄色片一级片一级黄色片| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 69精品国产乱码久久久| 午夜视频精品福利| 99久久国产精品久久久| 老熟女久久久| 国产区一区二久久| 亚洲少妇的诱惑av| 久久久国产成人精品二区 | 精品免费久久久久久久清纯 | 欧美精品人与动牲交sv欧美| 亚洲 欧美一区二区三区| tube8黄色片| av超薄肉色丝袜交足视频| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 免费少妇av软件| 久久性视频一级片| 高清欧美精品videossex| 人妻一区二区av| 首页视频小说图片口味搜索| 中文亚洲av片在线观看爽 | 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 亚洲第一青青草原| 99久久精品国产亚洲精品| 在线观看免费视频日本深夜| 国产精品一区二区在线观看99| 中文字幕最新亚洲高清| 亚洲美女黄片视频| 麻豆国产av国片精品| www日本在线高清视频| 欧美激情高清一区二区三区| 男男h啪啪无遮挡| 日韩欧美三级三区| 人妻久久中文字幕网| 国产精品久久久久久精品古装| 免费观看人在逋| 制服人妻中文乱码| 亚洲少妇的诱惑av| 99riav亚洲国产免费| 亚洲专区字幕在线| 老汉色av国产亚洲站长工具| 亚洲精品国产一区二区精华液| 一进一出抽搐gif免费好疼 | 亚洲黑人精品在线| 美女福利国产在线| 国产av精品麻豆| 亚洲专区字幕在线| 最近最新中文字幕大全免费视频| 97人妻天天添夜夜摸| a级毛片在线看网站| 国产精品免费视频内射| 久久精品亚洲av国产电影网| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 亚洲人成伊人成综合网2020| 亚洲欧美色中文字幕在线| 91麻豆av在线| 亚洲片人在线观看| 中文字幕最新亚洲高清| 国产欧美日韩精品亚洲av| 窝窝影院91人妻| 大香蕉久久网| 香蕉久久夜色| 人成视频在线观看免费观看| 麻豆乱淫一区二区| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 国产高清视频在线播放一区| 亚洲欧美激情综合另类| 日本欧美视频一区| 国产片内射在线| 国产精品免费一区二区三区在线 | 黄色女人牲交| 制服人妻中文乱码| 久久久精品免费免费高清| 亚洲一区高清亚洲精品| 身体一侧抽搐| 亚洲一码二码三码区别大吗| 99精品在免费线老司机午夜| 精品一品国产午夜福利视频| 极品人妻少妇av视频| 欧美日韩黄片免| 一级,二级,三级黄色视频| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 夜夜夜夜夜久久久久| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 丝袜美腿诱惑在线| 人人澡人人妻人| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 午夜成年电影在线免费观看| 日本欧美视频一区| www.精华液| 在线永久观看黄色视频| 亚洲avbb在线观看| 日本欧美视频一区| 伦理电影免费视频| 国产一区二区三区综合在线观看| 咕卡用的链子| 老鸭窝网址在线观看| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 久9热在线精品视频| 老熟女久久久| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 久久中文字幕人妻熟女| 国产精品国产高清国产av | 久久久久久久国产电影| 首页视频小说图片口味搜索| 黄色女人牲交| 色尼玛亚洲综合影院| 色在线成人网| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 久久久精品区二区三区| 亚洲一区二区三区欧美精品| 91九色精品人成在线观看| 天堂动漫精品| 精品少妇久久久久久888优播| 美女高潮到喷水免费观看| 国产亚洲精品一区二区www | 精品人妻在线不人妻| 大片电影免费在线观看免费| 1024香蕉在线观看| 中文字幕av电影在线播放| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 亚洲五月婷婷丁香| 老熟女久久久| www.精华液| 亚洲久久久国产精品| 亚洲中文日韩欧美视频| 天天操日日干夜夜撸| 国产精品亚洲一级av第二区| 一级作爱视频免费观看| 国产野战对白在线观看| 亚洲国产中文字幕在线视频| 老汉色av国产亚洲站长工具| 91九色精品人成在线观看| 免费人成视频x8x8入口观看| 欧美亚洲日本最大视频资源| 欧美丝袜亚洲另类 | 国产亚洲精品久久久久5区| 精品国内亚洲2022精品成人 | 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 精品福利观看| 男女免费视频国产| 国产成+人综合+亚洲专区| 午夜福利在线免费观看网站| 人妻丰满熟妇av一区二区三区 | 欧美精品一区二区免费开放| 成人国产一区最新在线观看| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 他把我摸到了高潮在线观看| 美女福利国产在线| 交换朋友夫妻互换小说| 欧美日韩黄片免| 两人在一起打扑克的视频| 国产主播在线观看一区二区| 窝窝影院91人妻| 男女之事视频高清在线观看| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 精品视频人人做人人爽| 亚洲 欧美一区二区三区| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 韩国精品一区二区三区| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 欧美日本中文国产一区发布| 欧美人与性动交α欧美软件| 国产精品偷伦视频观看了| av天堂在线播放| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 久久香蕉国产精品| 欧美不卡视频在线免费观看 | 国产1区2区3区精品| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 激情视频va一区二区三区| 99热网站在线观看| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 精品亚洲成a人片在线观看| svipshipincom国产片| 岛国毛片在线播放| 美女国产高潮福利片在线看| 欧美日韩一级在线毛片| 亚洲国产看品久久| 国精品久久久久久国模美| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 久久精品亚洲av国产电影网| 精品亚洲成国产av| 欧美大码av| 大陆偷拍与自拍| 国产亚洲av高清不卡| 亚洲人成伊人成综合网2020| 热99久久久久精品小说推荐| netflix在线观看网站| 久久精品成人免费网站| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 高清在线国产一区| 日韩视频一区二区在线观看| 欧美日韩精品网址| 国产成人av教育| 国产av一区二区精品久久| 99国产精品99久久久久| 大型av网站在线播放| 婷婷成人精品国产| 人妻久久中文字幕网| 天堂动漫精品| 欧美性长视频在线观看| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 欧美在线黄色| 啦啦啦视频在线资源免费观看| av网站免费在线观看视频| ponron亚洲| 日韩欧美在线二视频 | 日韩免费高清中文字幕av| 超色免费av| 午夜福利视频在线观看免费| 我的亚洲天堂| 18禁美女被吸乳视频| 久久婷婷成人综合色麻豆| 老司机福利观看| 国产精品九九99| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 免费在线观看亚洲国产| 欧美午夜高清在线| 搡老熟女国产l中国老女人| 最新的欧美精品一区二区| 十八禁高潮呻吟视频| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 国产伦人伦偷精品视频| 超碰97精品在线观看| 成熟少妇高潮喷水视频| 99在线人妻在线中文字幕 | 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 日韩成人在线观看一区二区三区| 一级毛片女人18水好多| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 国产一区二区三区视频了| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 在线天堂中文资源库| 国产精品99久久99久久久不卡| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 在线永久观看黄色视频| 精品高清国产在线一区| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 精品亚洲成国产av| 国产成人av激情在线播放| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 亚洲av成人av| 国产精品国产高清国产av | 精品一区二区三卡| 一级毛片高清免费大全| 免费看十八禁软件| 亚洲国产毛片av蜜桃av| xxxhd国产人妻xxx| 一级片免费观看大全| 国产日韩欧美亚洲二区| 国产成人av激情在线播放| 亚洲av第一区精品v没综合| ponron亚洲| 国产精品 欧美亚洲| 99精国产麻豆久久婷婷| 日本黄色视频三级网站网址 | 亚洲视频免费观看视频| 午夜91福利影院| 大香蕉久久成人网| 国产精品久久久av美女十八| 高潮久久久久久久久久久不卡| 啪啪无遮挡十八禁网站| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产片内射在线| 天堂中文最新版在线下载| 婷婷成人精品国产| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 丝袜美腿诱惑在线| 国产一区二区三区视频了| 国产成人啪精品午夜网站| 精品久久久久久久毛片微露脸| 亚洲成人免费电影在线观看| 久久久久视频综合| 久久精品人人爽人人爽视色| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 99久久综合精品五月天人人| 亚洲精品粉嫩美女一区|