8種殺菌劑對梅片樹炭疽病菌的室內(nèi)毒力測定

李靜宇，蒲小明，蒲浩杰，孫金鍇，張冬生，王繼華

摘 要：梅片樹作為一種傳統(tǒng)中藥—天然右旋龍腦提取的新資源，目前生產(chǎn)上正遭受炭疽病的嚴(yán)重威脅，為了有效防治梅片樹炭疽病，本研究選擇8種殺菌劑對病原菌進(jìn)行了室內(nèi)毒力測定與篩選。結(jié)果表明：8種殺菌劑對炭疽菌菌絲生長均有一定的抑制作用，其中25%吡唑醚菌酯懸浮劑、80%多菌靈可濕性粉劑和15%咪鮮胺微乳劑抑制效果最好，EC50值分別為0.039 mg/L、0.170 mg/L和0.260mg/L;而10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑、68.8%噁酮錳鋅水分散粒劑、70%甲基硫菌靈可濕性粉劑、80%代森錳鋅可濕性粉劑和75%百菌清可濕性粉劑抑制作用較弱。該研究結(jié)果為田間梅片樹炭疽病防治殺菌劑選擇提供了參考和理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞：梅片樹;炭疽病;殺菌劑;毒力測定

中圖分類號：S482.2+6? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

Determination of Indoor Virulence of Eight Fungicides against Meipian Tree Anthracnose

LI Jingyu1，3，PU Xiaoming2，PU Haojie4，SUN Jinkai1，3，

ZHANG Dongsheng5， WANG Jihua1，3*

（1Guangdong Key Laboratory for Crops Genetic Improvement/Crop Research Institute， Guangdong Academy of Agriculture Sciences， Guangzhou， Guangdong 510640， China; 2Plant Protection Research Institute， Guangdong Academy of Agricultural Sciences / Guangdong Provincial Key Laboratory of High Technology for Plant protection， Guangzhou 510640， China; 3 Yunfu Yuncheng District Agricultural Rural and Water Bureau， Yunfu，Guangdong 527300， China; 4Meizhou Academy of Agricultural and Forestry Sciences， Forestry Research Institute， Meizhou，Guangdong 514014， China）

Abstract： Meipian tree is a new resource for extracting natural D-norneol——a traditional Chinese medicine. It is suffering from anthracnose in production. To control anthracnose， the indoor virulence effects of eight fungicides on the pathogen of anthracnose were determined. The results showed that the eight fungicides all had certain inhibitory effects on the mycelial growth， among them，25% pyraclostrobin SC，80% carbendazim WP and 15% prochloraz ME had the best effects， and their EC50 values were 0.039、0.170 and 0.260 mg/L， respectively;10% difenoconazole WG，68.8% famoxadone mancozeb WG，70% thiophanate-methyl WP， 80% mancozeb WP and 75% chlorothalonil WP had weak effects. This study provides reference and theoretical basis for selecting fungicides to control anthracnose in Meipian tree production.

Key words： Meipian tree; anthracnose; fungicides; virulence determination

梅片樹是陰香（Cinnamomum burmannii）的一種生理變型，是1984年中科院華南植物園在廣東省梅州市內(nèi)發(fā)現(xiàn)的一種天然右旋龍腦新資源[1]。右旋龍腦又稱天然冰片，是一種重要的傳統(tǒng)中藥，用于疾病的預(yù)防和治療有超過2000年的歷史，具有開竅醒神，退熱止痛的功效，也是許多傳統(tǒng)中成藥中的重要組成成分[1]。天然右旋龍腦資源已近枯竭，從而導(dǎo)致國際上天然右旋龍腦奇缺、價格昂貴[1]。并且通過化學(xué)手段得到的合成龍腦，在儲存過程中會逐漸降解產(chǎn)生有毒性的異龍腦[2]。梅片樹葉揮發(fā)油中右旋龍腦含量高達(dá)68%[3]，是生產(chǎn)天然冰片的優(yōu)良原材料。然而，梅片樹正受到炭疽病的嚴(yán)重威脅，主產(chǎn)地廣東省梅州市平遠(yuǎn)縣部分大田發(fā)病率達(dá)到40% ～ 60%，病原菌侵染梅片樹葉片產(chǎn)生灰色圓形壞死斑點，邊緣呈深棕色，每片葉中會出現(xiàn)幾個到十幾個壞死斑點，發(fā)病后期，葉片會大面積變黑脫落，梅片樹葉是主要的藥用部位，梅片樹炭疽病給當(dāng)?shù)貛砹藝?yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。研究梅片樹炭疽病的防治具有重要意義。

炭疽病是由致病真菌刺盤孢屬（Colletotrichum spp.）引起的植物病害，宿主非常廣泛，包括各種豆類、蔬菜、水果和多年生作物，可以侵染宿主的葉片、莖稈和果實。病原菌通常通過產(chǎn)生分生孢子附著在植株幼嫩或受傷的部位，形成附著器，產(chǎn)生侵入釘侵入組織細(xì)胞，引起病害，造成植物組織壞死。炭疽病發(fā)病的典型癥狀包括產(chǎn)生呈同心圓狀的凹陷壞死病斑，或產(chǎn)生粘性、粉色的小點狀物。造成的癥狀包括葉斑、梢枯、枝枯、潰瘍和果腐等。炭疽病給茶樹[4]、桃[5]、葡萄[6]、蘋果[7]、芒果[8， 9]等經(jīng)濟(jì)作物帶來了嚴(yán)重的損失，目前對炭疽病的化學(xué)防治研究發(fā)現(xiàn)肟菌·戊唑醇和嘧菌酯對鉤藤炭疽病博寧炭疽菌（Colletotrichum boninense）毒力較強(qiáng)[10];75%百菌清對甜柿炭疽病果生刺盤孢（C. fructicola）防治效果較好[11];400 g/L氟硅唑乳油、10%苯醚甲環(huán)唑微乳劑、80%戊唑醇可濕性粉劑、30%肟菌·戊唑醇懸浮劑和43%氟菌·肟菌酯懸浮劑對油茶炭疽病菌膠孢炭疽菌（C. gloeosporioides）的抑制效果較好[12]。吡唑醚菌酯、咪鮮胺、苯醚甲環(huán)唑和甲基硫靈對核桃炭疽病膠孢炭疽菌（C. gloeosporioides）的菌絲生長抑制效果較好[13， 14]。不同作物炭疽病防治效果好的藥劑有所差別，炭疽病致病菌株不同和物種之間的差異可能是造成這種現(xiàn)象的原因之一。對梅片樹進(jìn)行炭疽病的殺菌劑篩選具有重要意義。

為了在田間更好的防治梅片樹炭疽病，對殺菌劑進(jìn)行室內(nèi)篩選具有重要意義。本研究選擇了8種殺菌劑進(jìn)行室內(nèi)篩選試驗，以期為田間梅片樹炭疽病用藥提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 梅片樹炭疽病菌

本實驗所用梅片樹炭疽病菌株MPS-2，為炭疽菌（Colletotrichum sp.）屬于膠孢炭疽菌復(fù)合種，分離自廣東省梅州市梅片樹病葉，經(jīng)過分子鑒定回接等實驗鑒定為梅片樹炭疽病原菌，保存于廣東省農(nóng)業(yè)作物與遺傳重點實驗室。

1.1.2 試驗殺菌劑

實驗藥劑主要有10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑（先正達(dá)南通作物保護(hù)有限公司）、25%吡唑醚菌酯懸浮劑（浙江世佳科技股份有限公司）、80%多菌靈可濕性粉劑（一帆生物科技集團(tuán)有限公司）、68.8%噁酮錳鋅水分散粒劑（美國杜邦公司）、70%甲基硫菌靈可濕性粉劑（允發(fā)化工（上海）有限公司）、80%代森錳鋅可濕性粉劑（陶氏益農(nóng)農(nóng)業(yè)科技（中國）有限公司）、75%百菌清可濕性粉劑（先正達(dá)（蘇州）作物保護(hù)有限公司）和15%咪鮮胺微乳劑（海南博士威農(nóng)用化學(xué)有限公司）。

1.2 實驗方法

1.2.1 室內(nèi)毒力測定

采用菌絲生長速率法[21]。配制合適濃度的母液，吸取適量母液加入滅菌的PDA培養(yǎng)基中混勻，制備PDA含藥平板，每藥劑對半稀釋成5～7個濃度系列。將實驗室保存的MPS-2菌株活化，接種于PDA平板上，用5mm的打孔器取菌絲邊緣菌餅轉(zhuǎn)接于含藥劑PDA平板中央，并同時設(shè)置空白對照，將菌餅轉(zhuǎn)接在不含藥劑PDA平板上，每個濃度梯度做三次重復(fù)。待對照長滿平皿后，十字交叉法測定其他濃度的菌落直徑，計算每種藥劑不同濃度的抑制率。

菌絲生長抑制率（%）=（對照菌落直徑-處理菌落直徑）/（對照菌落直徑-菌餅直徑）×100

1.2.2 數(shù)據(jù)分析

通過Microsoft Excel 2019、SPSS數(shù)據(jù)處理平臺計算菌絲生長抑制率機(jī)率值與藥劑濃度對數(shù)值之間的線性回歸方程、各藥劑對梅片樹炭疽菌的有效抑制中濃度（EC50），比較該病原菌對各藥劑的敏感性。

2 結(jié)果與分析

2.1 田間發(fā)病情況

梅片樹葉片中炭疽病發(fā)病時會產(chǎn)生灰色圓形壞死斑點，邊緣呈深棕色，每片葉中會出現(xiàn)幾個到十幾個壞死斑點，發(fā)病后期，葉片會大面積變黑（如下圖1）。

2.2 8種殺菌劑對梅片樹炭疽病菌菌絲生長的抑制效果

本研究選取8種常用化學(xué)殺菌劑對梅片樹炭疽病菌MPS-2進(jìn)行室內(nèi)毒力測定。經(jīng)過預(yù)實驗對所選殺菌劑的濃度進(jìn)行初步篩選后，分別選取適宜濃度進(jìn)行毒力測定。如下表1和圖2所示，8種殺菌劑均對MPS-2菌絲生長產(chǎn)生抑制作用，并且隨著PDA平板中藥劑濃度的增加，對mps-2菌絲生長抑制率越大。其中25%吡唑醚菌酯抑制效果最好，在藥劑質(zhì)量濃度為0.49 ～ 250.00 mg/L范圍內(nèi)，其抑制率為58.68% ～ 93.92%;在80%多菌靈的質(zhì)量濃度為0.49 ～ 2000.00mg/L時，其抑制率為57.21% ～ 89.46%;在15%咪鮮胺在藥劑質(zhì)量濃度為0.08 ～ 25 mg/L范圍內(nèi)，其抑制率為20.34% ～ 97.89%;在70%甲基硫菌靈質(zhì)量濃度為0.98 ～ 125.00mg/L時，其抑制率為0.74% ～ 89.31%;在10%苯醚甲環(huán)唑質(zhì)量濃度為3.13 ～ 800.00mg/L時，其抑制率為5.10% ～ 93.92%;在68.8%噁酮錳鋅質(zhì)量濃度為15.60 ～ 250mg/L時，其抑制率為34.41% ～ 70.29%;在80%代森錳鋅質(zhì)量濃度為15.60 ～ 250mg/L時，其抑制率為7.84% ～ 79.90%;其中75%百菌清對梅片樹炭疽病菌mps-2的抑制作用最弱，在質(zhì)量濃度為125.00 ～ 16000.00mg/L時，其抑制率為19.90% ～ 90.54%。

2.3 室內(nèi)毒力測定結(jié)果

利用SPSS軟件對藥劑質(zhì)量濃度的對數(shù)值（x）和抑制率（y）數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，分別得出8種殺菌劑的毒力回歸方程、相關(guān)系數(shù)R2和EC50值。由表2可知，8種殺菌劑的EC50值差異比較顯著，25%吡唑醚菌酯的EC50值最小，75%百菌清的EC50值最大。8種殺菌劑的EC50值由小到大依次為25%吡唑醚菌酯、80%多菌靈、15%咪鮮胺、70%甲基硫菌靈、10%苯醚甲環(huán)唑、68.8%噁酮錳鋅、80%代森錳鋅和75%百菌清，其EC50值分別為0.039、0.170、0.260、12.117、48.150、62.144、107.597和898.049 mg/L。

3 討論

本實驗中使用的8種殺菌劑對梅片樹炭疽病的防治效果差別較大，其中25%吡唑醚菌酯、80%多菌靈和15%咪鮮胺抑制效果最好，EC50值分別為0.039、0.170和0.260mg/L;70%甲基硫菌靈、10%苯醚甲環(huán)唑、68.8%噁酮錳鋅、80%代森錳鋅和75%百菌清對梅片樹炭疽病的室內(nèi)防治效果較差。研究發(fā)現(xiàn)，吡唑醚菌酯和咪鮮胺在核桃炭疽病膠孢炭疽菌（C. gloeosporioides）防治中也具有很好的效果[13， 14]，而吡唑醚菌酯和咪鮮對胺鉤藤炭疽病博寧炭疽菌（C. boninense）的防治效果一般[10]，推測可能是梅片樹炭疽菌和核桃炭疽菌都屬于膠孢炭疽菌復(fù)合種，所以在殺菌菌防治效果有相似性。75%百菌清對甜柿炭疽病果生刺盤孢（C. fructicola）防治效果較好[11]，但在梅片樹炭疽病防治中效果較差，可見殺菌劑效果在不同作物炭疽病之間有所差異。苯醚甲環(huán)唑?qū)儆阽薮?4α脫甲基抑制類三唑類殺菌劑，其殺菌機(jī)理是通過破壞病原菌細(xì)胞膜功能從而導(dǎo)致細(xì)胞死亡[15]。苯醚甲環(huán)唑?qū)γ⒐烤也?fù)合種中的C. cordylinicola也具有很好的防治效果[16]。吡唑醚菌酯是一種廣譜、高效、毒性低的甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，是一種較為安全的殺菌劑[17]。吡唑醚菌酯對蘋果葉片和果實上炭疽菌防效達(dá)到97%以上[18]。咪鮮胺在茶葉炭疽病[19]、菩提樹炭疽病[20]和碭山酥梨炭疽病[21]等多種其他植物炭疽病室內(nèi)毒力測定中均具有較好的效果。咪鮮胺能通過抑制麥角甾醇的生物合成，使菌體細(xì)胞膜功能受破壞而起到殺菌作用，在植物體內(nèi)有一定的內(nèi)吸傳導(dǎo)作用，是咪唑類廣譜低毒殺菌劑。

4 結(jié)論

本研究利用含藥平皿法測定8種殺菌劑對梅片樹炭疽病的室內(nèi)毒力，發(fā)現(xiàn)25%吡唑醚菌酯、80%多菌靈和15%咪鮮胺對梅片樹病原菌菌絲生長具有較好的抑制效果。本文的研究結(jié)果為梅片樹炭疽病的田間防治的藥劑選擇提供了理論依據(jù)，以期能有效解決梅片樹炭疽病帶來的經(jīng)濟(jì)損失。

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