外周血CD3+CD4-CD8+T細(xì)胞與T1期高級別尿路上皮癌預(yù)后的關(guān)系

蔣立人 高峰 陳思騰 潘麒

膀胱癌是男性最常見的惡性腫瘤之一，位于我國所有男性惡性腫瘤的第7位，約50%的患者會復(fù)發(fā)，另外約15%的患者會發(fā)生進展[1-2]。因此有必要尋找簡便的預(yù)后標(biāo)志物。腫瘤、免疫細(xì)胞、炎癥因子和間質(zhì)細(xì)胞構(gòu)成腫瘤免疫微環(huán)境，影響腫瘤生長和增殖[3-4]。T細(xì)胞主要分為兩類，并可以被CD3標(biāo)記[5]。CD8+T細(xì)胞可以殺傷腫瘤細(xì)胞，但外周血CD8+T細(xì)胞對腫瘤的預(yù)后價值尚未明確[6-9]。本研究回顧性分析了168例T1期高級別尿路上皮癌患者，研究外周血CD8+T細(xì)胞數(shù)量與腫瘤預(yù)后的關(guān)系。

對象與方法

一、研究對象

收集2012年1月至2016年12月上海市第一人民醫(yī)院診治為T1期高級別尿路上皮癌患者168例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者均為初次行經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切術(shù)(transurethral resection of bladder tumor, TURBT)治療的尿路上皮癌；②術(shù)后經(jīng)病理診斷為T1期高級別尿路上皮癌(按《第四版世界衛(wèi)生組織泌尿系統(tǒng)及男性生殖器官腫瘤分類》[10]的標(biāo)準(zhǔn)診斷)；③后續(xù)接受膀胱內(nèi)灌注化療，藥物為吡柔比星50 mg，每周1次，共2個月，隨后改為每月1次，持續(xù)到術(shù)后2年或復(fù)發(fā)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有原發(fā)性心、肺、腎等器官疾病者；②圍手術(shù)期前有感染性疾病、自身免疫性疾病、服用免疫抑制劑病史；③在圍手術(shù)期出現(xiàn)嚴(yán)重并發(fā)癥者；④有其他腫瘤?；颊咴谑中g(shù)2年內(nèi)每3個月隨訪1次，2年后每6個月隨訪1次,隨訪時間至術(shù)后5年，記錄患者隨訪時間內(nèi)腫瘤復(fù)發(fā)與腫瘤進展情況。每個研究對象在手術(shù)前已在我院檢驗科進行外周血免疫細(xì)胞分群檢測。根據(jù)研究目的，將外周血CD8+T細(xì)胞數(shù)量少于320個/μl的患者納入CD3+CD4-CD8+數(shù)量低組，其余納入CD3+CD4-CD8+正常組。

二、分析指標(biāo)

本研究主要評估的臨床及病理因素包括患者年齡、性別、術(shù)前外周血CD3+CD4-CD8+T細(xì)胞數(shù)量高低、腫瘤大小(≥3 cm)、單多發(fā)性、腫瘤術(shù)后復(fù)發(fā)和進展的情況。無復(fù)發(fā)生存(recurrence free survival, RFS)被定義為首次行TURBT到首次復(fù)發(fā)的這段時間，無進展生存(progression free survival, PFS)被定義為首次行TURBT到腫瘤進展(任意腫瘤分級、分期的提高)的這段時間。

三、統(tǒng)計學(xué)方法

研究使用SPSS 21.0軟件。CD3+CD4-CD8+正常組和CD3+CD4-CD8+數(shù)量低組之間的臨床病理因素比較使用t檢驗和卡方檢驗。采用Kaplan Meier分析各臨床病理因素對RFS和PFS的影響，生存曲線的顯著性差異檢驗用log-rank檢驗。多因素Cox回歸生存分析包括下列因素：年齡、腫瘤大小(≥3 cm)、單多發(fā)、外周血CD8+T細(xì)胞數(shù)量高低。用Cox回歸模型(逐步向前)進行多因素回歸分析，計算出調(diào)整過的HR，評估影響RFS和PFS的預(yù)后因素。雙側(cè)P<0.05作為顯著性檢驗水準(zhǔn)。

結(jié) 果

一、CD3+CD4-CD8+正常組和數(shù)量低組間的各項臨床病理因素的分析

168例T1期高級別尿路上皮癌患者中，男女比例131∶37，年齡28～93歲，平均(66.26±16.28)歲。其中復(fù)發(fā)91例(54.2%)，進展37例(22.0%)，平均RFS(37.30±23.15)個月，PFS(52.12±16.08)個月。CD3+CD4-CD8+正常組和CD3+CD4-CD8+數(shù)量低組在性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤單多發(fā)、術(shù)后復(fù)發(fā)和進展方面的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(表1)。

表1 CD3+CD4-CD8+正常組和CD3+CD4-CD8+數(shù)量低組間各因素的比較

二、外周血CD3+CD4-CD8+細(xì)胞數(shù)量與RFS和PFS的關(guān)系

Kaplan-Meier生存分析顯示CD3+CD4-CD8+正常組和CD3+CD4-CD8+數(shù)量低組的PFS均值分別為54.97個月(95%CI：52.23～57.70個月)和49.07個月(95%CI：45.09～53.05個月)，兩組的RFS均值分別為37.36個月(95%CI：32.45～42.27個月)和37.26個月(95%CI：32.30～42.22個月)。外周血CD3+CD4-CD8+細(xì)胞數(shù)量低與T1期尿路上皮癌患者更短的PFS相關(guān)(P=0.029)(圖1)，而與RFS無關(guān)(P>0.05)(圖2)。多因素生存分析顯示腫瘤≥3 cm(P<0.001，HR=3.05)、腫瘤多發(fā)(P<0.001，HR=2.64)是T1期尿路上皮癌復(fù)發(fā)的獨立危險因素，而年齡≥70歲(P=0.022，HR=2.17)、腫瘤≥3 cm(P=0.003，HR=2.83)、外周血CD3+CD4-CD8+T細(xì)胞數(shù)量低(P=0.017，HR=2.31)是腫瘤進展的獨立危險因素(表2)。

圖1 Kaplan-Meier生存分析比較兩組間的PFS

圖2 Kaplan-Meier生存分析比較兩組間的RFS

表2 多因素Cox生存分析各因素對T1期高級別尿路上皮癌患者RFS和PFS的影響

討 論

目前研究認(rèn)為腫瘤中T細(xì)胞的功能紊亂與T細(xì)胞功能的改變有關(guān)，處于腫瘤免疫抑制微環(huán)境中的CD8+T細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷力減弱[5,8]。腫瘤微環(huán)境中的抗原識別是T細(xì)胞功能失調(diào)的重要驅(qū)動因素[6,11]。通過激活CD8+T細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的識別和殺傷作用可以起到抑制腫瘤細(xì)胞的作用[5,8,12]。

有研究提示CD8+T細(xì)胞與膀胱癌患者的預(yù)后密切相關(guān)[7-8]。CD8+T細(xì)胞浸潤的增加會隨著腫瘤分期和/或分級而升高，特別是CD8+T細(xì)胞出現(xiàn)在不同的位置會對預(yù)后產(chǎn)生截然不同的影響[7-8,13]。當(dāng)CD8+T細(xì)胞大量浸潤腫瘤組織或腫瘤邊緣時，患者的總生存期和無病生存期顯著提高[8,14]。而當(dāng)CD8+T細(xì)胞在腫瘤間質(zhì)大量浸潤時，患者的預(yù)后反而更差[15-16]。此外，在不同病理分級的膀胱癌患者中，CD8+T細(xì)胞對患者預(yù)后的影響也不盡相同。有研究認(rèn)為在低級別非肌層潤性膀胱癌患者中，CD8+T細(xì)胞的浸潤與不良預(yù)后有關(guān)[16]。而在高級別尿路上皮癌中，CD8+T細(xì)胞的低表達和快速復(fù)發(fā)緊密相關(guān)[17]。我們基于對168例T1期高級別尿路上皮癌的分析發(fā)現(xiàn)，術(shù)前外周血CD8+T細(xì)胞數(shù)量低和腫瘤進展相關(guān)，提示外周血CD8+T細(xì)胞的數(shù)量可能反映了機體腫瘤免疫的狀態(tài)。

本研究也有不足之處，首先本研究是回顧性研究，明確外周血CD8+T細(xì)胞和T1期高級別尿路上皮癌的預(yù)后關(guān)系仍需要前瞻性的隊列研究。其次，由于患者術(shù)后外周血免疫全套的檢測缺失，我們無法比較術(shù)前術(shù)后CD3+CD4-CD8+值變化的情況。另外，外周血CD8+T細(xì)胞的水平受到多種因素的影響，需進一步研究來排除其他的混雜因素。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)術(shù)前外周血CD3+CD4-CD8+細(xì)胞數(shù)量可以作為判斷T1期高級別尿路上皮癌患者預(yù)后情況的標(biāo)志物，為臨床醫(yī)師診治提供了一定的參考價值。