基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的澤瀉-白術(shù)藥對(duì)治療血脂異常作用機(jī)制研究

趙志濱，李李，陳欣燕，林嬿釗

基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的澤瀉-白術(shù)藥對(duì)治療血脂異常作用機(jī)制研究

趙志濱1，2，李李1，陳欣燕2，林嬿釗2

1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州 510006； 2.省部共建中醫(yī)濕證國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，廣東 廣州 510120

基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究澤瀉-白術(shù)藥對(duì)治療血脂異常的活性成分、靶點(diǎn)及通路機(jī)制。通過中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（TCMSP）和文獻(xiàn)檢索收集澤瀉、白術(shù)的活性成分，基于TCMSP、SwissTargetPrediction數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)相關(guān)成分的作用靶點(diǎn)；通過OMIM、DisGeNET、DrugBank數(shù)據(jù)庫(kù)獲取血脂異常相關(guān)靶點(diǎn)；利用STRING數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建靶點(diǎn)蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)，篩選關(guān)鍵靶點(diǎn)；采用DAVID6.8數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行GO分析和KEGG通路富集分析，Cytoscape3.8.0構(gòu)建活性成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)，篩選核心活性成分；利用SwissDock數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)核心活性成分與關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接。篩選出澤瀉醇A、23-乙酰澤瀉醇A、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ等10個(gè)核心活性成分，VEGFA、IL6、EGFR等11個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)，KEGG分析得到影響基礎(chǔ)代謝率的HIF-1信號(hào)通路，抑制脂肪生成的AMPK信號(hào)通路，影響食欲、脂肪代謝的Toll樣受體信號(hào)通路等103條信號(hào)通路（＜0.05）。分子對(duì)接結(jié)果表明，澤瀉-白術(shù)藥對(duì)核心活性成分與治療血脂異常的關(guān)鍵靶點(diǎn)可緊密結(jié)合。澤瀉-白術(shù)藥對(duì)的澤瀉醇A、23-乙酰澤瀉醇A、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ等活性成分可能通過調(diào)控VEGFA、IL6、EGFR等靶點(diǎn)的表達(dá)，激活或抑制相關(guān)信號(hào)通路，發(fā)揮抑制食欲、抑制膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)及合成、抑制脂肪細(xì)胞生長(zhǎng)等作用，從而治療血脂異常。

澤瀉；白術(shù)；血脂異常；高脂血癥；網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)；分子對(duì)接

血脂異常通常指血清中總膽固醇（TC）和/或三酰甘油（TG）水平升高，是心血管疾病重要的危險(xiǎn)因素[1]。流行病學(xué)調(diào)查顯示，中國(guó)人群血脂水平與血脂異常的患病率逐步升高[2]。防治血脂異常對(duì)我國(guó)心血管疾病的預(yù)防和治療具有重要意義。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療血脂異常以調(diào)脂為主，但大多有肝毒性、肌肉毒性等不良反應(yīng)。中醫(yī)不僅可降低血脂，還可升高血清高密度脂蛋白（HDL）水平，具有療效確切、不良反應(yīng)小等優(yōu)勢(shì)[3-4]。

澤瀉-白術(shù)為澤瀉湯、五苓散等健脾祛濕方劑的核心藥對(duì)，臨床多用含有澤瀉-白術(shù)藥對(duì)的方劑治療血脂異常[5-6]，但其分子機(jī)制尚不明確。為此，本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法研究澤瀉-白術(shù)藥對(duì)治療血脂異常的活性成分、作用靶點(diǎn)及通路等，進(jìn)一步明確其作用機(jī)制，為后續(xù)研究提供參考。

1 資料與方法

1.1 澤瀉-白術(shù)藥對(duì)活性成分及靶點(diǎn)篩選

通過中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（TCMSP，https://tcmspw.com/tcmsp.php）[7]檢索“澤瀉”“白術(shù)”，收集活性成分，以口服生物利用度（oral bioavailability，OB）≥30%和類藥性（drug-likeness，DL）≥0.18為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行篩選，并結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)納入活性成分，校正成分名稱。利用PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)（https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）獲取活性成分的分子結(jié)構(gòu)，通過TCMSP、SwissTargetPrediction數(shù)據(jù)庫(kù)（http://www.swisstargetprediction.ch/）預(yù)測(cè)活性成分的潛在靶點(diǎn)。

1.2 血脂異常疾病靶點(diǎn)檢索

以“Hyperlipidemias”“Hypercholesterolemia”“Hypertriglyceridemias”“Heterozygous Familial Hypercholesterolemia”“Homozygous Familial Hypercholesterolemia”“Primary Hyperlipidemia”“Non-familial Hypercholesterolemia”為檢索詞，通過OMIM（https://omim.org/）、DisGeNET（https://www. disgenet.org/）、DrugBank（https://www.drugbank.ca/）數(shù)據(jù)庫(kù)獲取血脂異常的相關(guān)靶點(diǎn)。

1.3 蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析

利用UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)（https://www.uniprot.org/）校正基因靶點(diǎn)名稱，將澤瀉-白術(shù)藥對(duì)活性成分靶點(diǎn)與血脂異常相關(guān)靶點(diǎn)取交集。利用STRING11.0數(shù)據(jù)庫(kù)（https://string-db.org/cgi/input.pl）[8]構(gòu)建蛋白相互作用（protein-protein interaction，PPI）網(wǎng)絡(luò)，物種選擇“Homo sapiens”，最低相互作用閾值選擇“high confidence（0.7）”，并隱藏網(wǎng)絡(luò)中無(wú)聯(lián)系的節(jié)點(diǎn)，導(dǎo)出結(jié)果通過Cytoscape3.8.0進(jìn)行可視化處理。根據(jù)連接度篩選關(guān)鍵靶點(diǎn)。

1.4 GO分析和KEGG通路富集分析

利用DAVID6.8數(shù)據(jù)庫(kù)（https://david.ncifcrf. gov/）[9]，對(duì)澤瀉-白術(shù)藥對(duì)靶點(diǎn)與血脂異常靶點(diǎn)的交集靶點(diǎn)進(jìn)行GO和KEGG富集分析，設(shè)定閾值為＜0.05。將富集結(jié)果按值升序排序，并對(duì)GO分析排名前10位的條目及KEGG分析排名前20位的條目進(jìn)行可視化展示。根據(jù)KEGG分析前20位條目包含的靶點(diǎn)及其對(duì)應(yīng)的活性成分，利用Cytoscape3.8.0構(gòu)建活性成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)，進(jìn)一步篩選核心活性成分。

1.5 分子對(duì)接驗(yàn)證

從RSCB PDB數(shù)據(jù)庫(kù)（http://www.rcsb.org/）下載關(guān)鍵靶點(diǎn)的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，利用SwissDock服務(wù)器（http://www.swissdock.ch/）對(duì)核心活性成分的分子結(jié)構(gòu)和關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接，根據(jù)結(jié)合能評(píng)價(jià)活性成分與靶點(diǎn)的結(jié)合強(qiáng)度與活性。

2 結(jié)果

2.1 藥物活性成分、靶點(diǎn)及疾病靶點(diǎn)

通過TCMSP檢索并篩選澤瀉、白術(shù)活性成分，另基于文獻(xiàn)[10-13]納入澤瀉醇A、23-乙酰澤瀉醇A、24-乙酰澤瀉醇A、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、蒼術(shù)酮、雙白術(shù)內(nèi)酯，最終獲得澤瀉活性成分10個(gè)、白術(shù)活性成分12個(gè)，見表1。基于TCMSP、SwissTargetPrediction數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)澤瀉活性成分靶點(diǎn)271個(gè)、白術(shù)活性成分靶點(diǎn)248個(gè)，去除重復(fù)值，共得到潛在靶點(diǎn)405個(gè)。檢索OMIM、DisGeNET、DrugBank數(shù)據(jù)庫(kù)得到血脂異常相關(guān)靶點(diǎn)1 767個(gè)。

表1 澤瀉-白術(shù)藥對(duì)活性成分

藥物序號(hào)MOL ID活性成分OB/%DLPubChem CID靶點(diǎn)數(shù) 白術(shù)BZ1MOL00002012-千里光?；?8-反式白術(shù)三醇62.400.22 0 BZ2MOL00002114-乙?；骼锕怩；?8-反式白術(shù)三醇60.310.31 0 BZ3MOL00002214-乙酰基-12-千里光?；?8-順式折術(shù)三醇63.370.301329410861 BZ4MOL000028α-香樹脂醇39.510.767317058 BZ5MOL000033(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-[(2R,5S)-5-丙烷-2-yloctan-2-yl]- 2,3,4,7,8,9,11,12,14, 15,16,17-十二水-1H-環(huán)戊二烯[a]菲酚-3-ol36.230.781597610143 BZ6MOL0000493β-乙酰氧基蒼術(shù)酮54.070.22 16 BZ7MOL0000728β-乙氧基蒼術(shù)內(nèi)酯-Ⅲ35.950.211444807541 BZ8MOL000043白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ37.370.15532101838 BZ9MOL000044白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ47.500.151444807053 BZ10MOL000045白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ68.110.1715594838 BZ11MOL000046蒼術(shù)酮41.100.13308063518 BZ12MOL000062雙白術(shù)內(nèi)酯17.450.8110813930101 澤瀉ZX1MOL000359谷甾醇36.910.751230364549 ZX2MOL000830澤瀉醇B34.470.8215558620100 ZX3MOL00083223-乙酰澤瀉醇B32.520.821403681150 ZX4MOL00084916β-甲氧基澤瀉醇B乙酸酯32.430.77 1 ZX5MOL000854澤瀉醇C32.700.8246173914100 ZX6MOL00085623-乙酰澤瀉醇C33.060.831403681378 ZX7MOL002464單亞油酸甘油酯37.180.30643663059 ZX8MOL000828澤瀉醇A18.280.8115558616100 ZX9MOL00082923-乙酰澤瀉醇A24.210.8070690607100 ZX10MOL00085124-乙酰澤瀉醇A24.210.8076336194100

2.2 交集靶點(diǎn)蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)

將澤瀉-白術(shù)藥對(duì)潛在靶點(diǎn)與血脂異常相關(guān)靶點(diǎn)取交集，獲得交集靶點(diǎn)102個(gè)。將交集靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING11.0數(shù)據(jù)庫(kù)，并利用Cytoscape3.8.0進(jìn)行可視化處理，結(jié)果見圖1。該網(wǎng)絡(luò)包含88個(gè)節(jié)點(diǎn)和264條邊，平均連接度為6。節(jié)點(diǎn)連接度越大表明其在PPI網(wǎng)絡(luò)中越重要，按連接度降序排序，二次取平均值，連接度≥13的靶點(diǎn)見表2。這些靶點(diǎn)可能是澤瀉-白術(shù)藥對(duì)治療血脂異常的關(guān)鍵靶點(diǎn)。

2.3 GO分析和KEGG通路富集分析結(jié)果

對(duì)澤瀉-白術(shù)藥對(duì)潛在靶點(diǎn)與血脂異常相關(guān)靶點(diǎn)的交集靶點(diǎn)進(jìn)行GO及KEGG富集分析，以＜0.05為條件篩選。GO分析得到227條生物過程（BP）、35條細(xì)胞組分（CC）、64條分子功能（MF）條目，各選取前10條進(jìn)行可視化展示，見圖2?？梢钥闯?，澤瀉-白術(shù)藥對(duì)治療血脂異常的生物過程主要富集在ERK1和ERK2級(jí)聯(lián)的正調(diào)控（positive regulation of ERK1 and ERK2 cascade）、MAPK活性的激活（activation of MAPK activity）、磷脂酰肌醇3-激酶信號(hào)的調(diào)節(jié)（regulation of phosphatidylinositol 3-kinase signaling）、MAPK級(jí)聯(lián)的正調(diào)控（positive regulation of MAPK cascade）、類固醇激素介導(dǎo)的信號(hào)通路（steroid hormone mediated signaling pathway）等。

注：圓形大小和顏色深淺代表連接度（degree），連線粗細(xì)代表結(jié)合度（combined score）

表2 澤瀉-白術(shù)藥對(duì)治療血脂異常PPI網(wǎng)絡(luò)核心靶點(diǎn)拓?fù)鋮?shù)

基因名靶點(diǎn)名連接度介度緊密度 VEGFA血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A（vascular endothelial growth factor A）230.108 404 3520.476 470 588 IL6白細(xì)胞介素-6（interleukin-6）220.110 960 5120.485 029 940 PIK3CA磷脂酰肌醇4,5-二磷酸3-激酶催化亞基α亞型 （phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit alpha isoform）210.082 576 1820.437 837 838 MAPK1絲裂原活化蛋白激酶1（mitogen-activated protein kinase 1）200.077 801 8520.457 627 119 EGFR表皮生長(zhǎng)因子受體（epidermal growth factor receptor）200.208 817 7410.490 909 091 TNF腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor）190.077 354 0780.465 517 241 APP淀粉樣β蛋白A4蛋白（amyloid-beta A4 protein）170.169 028 3950.433 155 080 CXCL8白細(xì)胞介素-8（interleukin-8）150.028 436 0010.415 384 615 MAPK3絲裂原活化蛋白激酶3（mitogen-activated protein kinase 3）150.059 477 6450.442 622 951 IL1B白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1 beta）130.047 961 5570.413 265 306 MTOR雷帕霉素靶蛋白（serine/threonine-protein kinase mTOR）130.064 728 1410.428 571 429

KEGG通路富集分析共得到103條通路，對(duì)前20條通路進(jìn)行可視化展示，結(jié)果見圖3。可以看出，澤瀉-白術(shù)藥對(duì)治療血脂異常的通路主要包括HIF-1信號(hào)通路（HIF-1 signaling pathway）、胰島素抵抗（Insulin resistance）、AMPK信號(hào)通路（AMPK signaling pathway）、VEGF信號(hào)通路（VEGF signaling pathway）、Toll樣受體信號(hào)通路（Toll-like receptor signaling pathway）等。

圖3 澤瀉-白術(shù)藥對(duì)與血脂異常交集靶點(diǎn)KEGG分析

2.4 活性成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)

將前20條KEGG通路包含的靶點(diǎn)及其對(duì)應(yīng)活性成分利用Cytoscape3.8.0構(gòu)建活性成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)，結(jié)果見圖4。該網(wǎng)絡(luò)有78個(gè)節(jié)點(diǎn)、418條邊，其中澤瀉、白術(shù)活性成分各9個(gè)。將關(guān)聯(lián)的活性成分按連接度排序，前10位活性成分見表3。

表3 澤瀉-白術(shù)藥對(duì)核心活性成分拓?fù)鋮?shù)（前10位）

序號(hào)核心活性成分連接度介度緊密度 ZX923-乙酰澤瀉醇A170.033 714 6600.475 308 642 ZX8澤瀉醇A160.039 329 9940.469 512 195 ZX1024-乙酰澤瀉醇A150.033 578 3900.463 855 422 ZX2澤瀉醇B140.025 371 2110.458 333 333 ZX5澤瀉醇C130.023 029 9780.452 941 176 ZX623-乙酰澤瀉醇C100.017 827 2130.437 500 000 BZ4α-香樹脂醇100.023 726 1730.437 500 000 ZX7單亞油酸甘油酯 90.007 748 3660.432 584 270 ZX1谷甾醇 80.006 836 1760.377 450 980 BZ10白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ 80.019 289 7120.423 076 923

2.5 分子對(duì)接結(jié)果

將核心活性成分與關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接驗(yàn)證。結(jié)合能越小代表蛋白質(zhì)與分子結(jié)合越緊密，結(jié)合能＜0表示分子與蛋白存在結(jié)合能力，結(jié)合能≤-7 kcal/mol表示分子與蛋白的結(jié)合活性較緊密。分子對(duì)接顯示，結(jié)合能＜0的有116種（100%），結(jié)合能≤-7 kcal/mol的有102種（87.9%），表明澤瀉-白術(shù)藥對(duì)核心活性成分與關(guān)鍵靶點(diǎn)結(jié)合較為緊密。其中澤瀉醇A、24-乙酰澤瀉醇A等三萜類成分及單亞油酸甘油酯、α-香樹脂醇、谷甾醇與關(guān)鍵靶點(diǎn)的結(jié)合活性較為顯著（結(jié)合能≤-9 kcal/mol），見圖5。

圖5 澤瀉-白術(shù)藥對(duì)核心活性成分與靶點(diǎn)分子對(duì)接結(jié)果

3 討論

血脂異常最常見的臨床證候?yàn)樘禎嶙铚14]，屬于濕證范疇。澤瀉-白術(shù)藥對(duì)可健脾祛濕，是臨床治療血脂異常的常用藥對(duì)。澤瀉味甘性寒，《神農(nóng)本草經(jīng)》載其“養(yǎng)五臟，益氣力……不饑，延年輕身”；白術(shù)性味苦溫，《名醫(yī)別錄》載其“消痰水，逐皮間風(fēng)水結(jié)腫……暖胃，消谷嗜食”。實(shí)驗(yàn)研究表明，澤瀉-白術(shù)藥對(duì)具有明確的降血脂作用[15]。

本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法篩選出澤瀉-白術(shù)藥對(duì)治療血脂異常的核心活性成分為澤瀉醇A、24-乙酰澤瀉醇A、澤瀉醇B、α-香樹脂醇、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ等。澤瀉醇A、23-乙酰澤瀉醇A、澤瀉醇B、23-乙酰澤瀉醇C等三萜類成分有良好的降血脂作用[16]，且在澤瀉中含量豐富，是定性鑒別澤瀉的標(biāo)志性成分[10]。谷甾醇在澤瀉醇提取物中含量較高（85 mg/100 g）[17]。白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ等倍半萜類化合物在白術(shù)中含量較高，且藥效、藥性等與白術(shù)相符，為其質(zhì)量標(biāo)志物[12]。

研究顯示，澤瀉醇A可降低小鼠小腸TC吸收率，并抑制小腸酯化TC的能力，從而發(fā)揮降脂作用[18]。23-乙酰澤瀉醇A具有劑量依賴性的激活法尼醇X受體（FXR）作用，可促進(jìn)磷脂向HDL轉(zhuǎn)運(yùn)，進(jìn)而降低體內(nèi)TC水平[19]。施鳳飛等[20]研究表明，24-乙酰澤瀉醇A可通過調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞脂代謝因子ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1（ABCA1）、B族清道夫受體，促進(jìn)TC從細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)至肝臟分解。Prabhakar等[21]研究顯示，高果糖飲食小鼠的血漿葡萄糖、TC和TG水平明顯升高，HDL水平下降，并出現(xiàn)肝氧化應(yīng)激損傷，而α-香樹脂醇可抑制以上變化，并保護(hù)過氧化物酶體增殖劑激活受體α亞型（PPAR-α）蛋白水平。PPAR-α具有降低TG、升高HDL、抗炎等作用[22]，這可能是α-香樹脂醇降脂的作用機(jī)制。單亞油酸甘油酯不僅可抑制載脂蛋白CⅢ（apo CⅢ）表達(dá)以抑制機(jī)體對(duì)膽固醇的轉(zhuǎn)運(yùn)、吸收，還可抑制脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2（Lp-PLA2）的表達(dá)[23]，從而減少游離脂肪酸的生成。谷甾醇可在腸腔內(nèi)通過競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合降低腸道對(duì)TC的攝入，并降低血漿低密度脂蛋白（LDL）濃度，從而發(fā)揮降血脂作用[24]。白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ可上調(diào)過氧化物酶體增殖劑激活受體共激活因子-1α（PGC-1α）及線粒體相關(guān)受體的表達(dá)，增強(qiáng)小鼠骨骼肌細(xì)胞的AMPK磷酸化，提高骨骼肌代謝，達(dá)到降脂、降糖的作用[25]。

PPI網(wǎng)絡(luò)分析顯示，澤瀉-白術(shù)藥對(duì)治療血脂異常的關(guān)鍵靶點(diǎn)為VEGFA、IL6、EGFR、TNF、IL1B、MAPK1、MAPK3等。白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ可下調(diào)細(xì)胞血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）表達(dá)[26]，VEGFA作為其亞型之一，表達(dá)下調(diào)可以抑制脂肪組織的血管生成[27]，從而減少脂肪組織生成。EGFR參與調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝，對(duì)脂肪再生和膽固醇合成起重要作用[28]，并可加劇血管組織氧化應(yīng)激反應(yīng)、巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)等，導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化[29]。IL6、TNF、IL1B、CXCL8等靶點(diǎn)與炎癥反應(yīng)相關(guān)。炎癥反應(yīng)可刺激脂肪細(xì)胞的氧化應(yīng)激反應(yīng)，影響其增殖分化、細(xì)胞因子分泌及對(duì)胰島素敏感性等生物學(xué)過程，進(jìn)而導(dǎo)致血脂異常和脂肪進(jìn)一步蓄積[30]。實(shí)驗(yàn)研究表明，澤瀉提取物及白術(shù)內(nèi)酯均能顯著下調(diào)白細(xì)胞介素（IL）-1β、IL-6、腫瘤壞死因子-α等炎癥因子表達(dá)，具有良好抗炎活性[31-32]。MAPK1、MAPK3是MAPK信號(hào)通路的重要組成部分，MAPK信號(hào)通路與調(diào)控血脂相關(guān)[33]。研究發(fā)現(xiàn)，以澤瀉、白術(shù)為君藥的茵陳五苓散可激活MAPK，通過MAPK相關(guān)級(jí)聯(lián)反應(yīng)抑制LDL受體的表達(dá)，進(jìn)而降低血脂水平[34]。分子對(duì)接結(jié)果顯示，澤瀉醇A、24-乙酰澤瀉醇A等三萜類成分及單亞油酸甘油酯、α-香樹脂醇、谷甾醇與關(guān)鍵靶點(diǎn)的結(jié)合活性較佳。因此，澤瀉-白術(shù)藥對(duì)通過調(diào)節(jié)以上關(guān)鍵靶點(diǎn)發(fā)揮降脂、抑制脂肪細(xì)胞生長(zhǎng)、防治動(dòng)脈粥樣硬化的作用可能性較大。

GO分析結(jié)果顯示，澤瀉-白術(shù)藥對(duì)治療血脂異常的生物過程主要富集在ERK1和ERK2級(jí)聯(lián)的正調(diào)控、MAPK級(jí)聯(lián)的正調(diào)控、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）信號(hào)的調(diào)節(jié)、類固醇激素介導(dǎo)的信號(hào)通路等。ERK1/2級(jí)聯(lián)的正調(diào)控能夠增加ABCA1表達(dá)[35]，進(jìn)而增強(qiáng)機(jī)體對(duì)TC的排泄能力。白術(shù)提取物可以上調(diào)細(xì)胞對(duì)ERK1/2的表達(dá)[36]，24-乙酰澤瀉醇A可激活ERK通路，下調(diào)其下游過氧化物酶體增殖劑激活受體γ亞型（PPAR-γ）、脂滴包被蛋白（perilipin A）的表達(dá)，誘導(dǎo)脂肪酶分解脂肪[37]。PI3K信號(hào)通路參與下丘腦瘦素信號(hào)的調(diào)節(jié)[38]，可調(diào)節(jié)食欲與脂質(zhì)代謝過程。類固醇激素包括性激素和皮質(zhì)激素，其介導(dǎo)的信號(hào)通路在生命活動(dòng)中起到廣泛且重要的作用。其中雄激素能顯著上調(diào)血清瘦素和血清脂聯(lián)素水平，進(jìn)而減少皮下和內(nèi)臟脂肪量。雌激素對(duì)女性體內(nèi)的能量代謝起到重要作用，缺乏雌激素的圍絕經(jīng)期女性易出現(xiàn)血脂異常及肥胖。有報(bào)道，23-乙酰澤瀉醇B可通過上調(diào)雌激素受體α的表達(dá)，降低血清TC、TG水平[39]；白術(shù)揮發(fā)油可上調(diào)雌二醇表達(dá)，有類激素作用[40]。由此可以推測(cè)，澤瀉-白術(shù)藥對(duì)通過多個(gè)信號(hào)通路參與以上生物學(xué)過程，從而發(fā)揮調(diào)控血脂的作用。

KEGG分析結(jié)果顯示，澤瀉-白術(shù)藥對(duì)治療血脂異常的主要通路有HIF-1信號(hào)通路、AMPK信號(hào)通路、VEGF信號(hào)通路、Toll樣受體（TLR）信號(hào)通路等。Gaspar等[41]研究發(fā)現(xiàn)，高脂飲食會(huì)激活HIF-1信號(hào)通路，促進(jìn)下丘腦缺氧誘導(dǎo)因子-1的表達(dá)以增加基礎(chǔ)代謝率，控制體質(zhì)量，并改善高脂帶來(lái)的炎癥反應(yīng)、糖耐量受損等負(fù)面影響。AMP活化蛋白激酶（AMPK）是調(diào)節(jié)人體組織能量代謝的重要因子。研究發(fā)現(xiàn)，脂肪組織中的AMPK具有調(diào)節(jié)脂肪細(xì)胞褐變和維持能量穩(wěn)態(tài)的重要作用，能夠緩解高脂飲食引起的糖耐量受損、體質(zhì)量增加，并抑制白色脂肪細(xì)胞生長(zhǎng)[42]。實(shí)驗(yàn)研究顯示，24-乙酰澤瀉醇A可上調(diào)3T3-L1脂肪細(xì)胞內(nèi)PPARα、PGC-1α的表達(dá)，激活A(yù)MPK通路，抑制Perilipin的磷酸化，進(jìn)而降低游離脂肪酸水平和脂肪細(xì)胞的脂質(zhì)積累[37]。澤瀉醇A可激活A(yù)MPK/ACC信號(hào)通路，改善血脂異常，并促進(jìn)肝臟的脂肪代謝[43]。白術(shù)內(nèi)酯可激活A(yù)MPK通路，對(duì)血脂異常的治療產(chǎn)生積極作用[25，44]。TLR信號(hào)通路參與多種生物學(xué)過程，包括食欲、炎癥反應(yīng)等。研究顯示，TLR4基因敲除小鼠對(duì)高脂、高糖飲食偏好降低[45]，表明TLR4可通過增加對(duì)高脂高糖飲食的食欲促進(jìn)脂肪和糖的攝入。脂肪組織增生常伴隨著促炎巨噬細(xì)胞的作用，TLR4是其中重要的炎癥因子，可以抑制脂肪褐變、分解[46]，從而加劇脂肪積累。實(shí)驗(yàn)研究表明，白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ能有效拮抗TLR4，抑制TLR4/NF-κB信號(hào)通路[47]。以澤瀉-白術(shù)藥對(duì)為主組方的加味澤瀉湯能下調(diào)TLR4等TLR4/NF-κB信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)，改善肝臟的炎癥反應(yīng)[48]。血脂異常與胰島素抵抗有密切關(guān)系，若機(jī)體出現(xiàn)胰島素抵抗，將抑制脂肪組織的代謝，導(dǎo)致脂肪蓄積，加劇血脂異常。本研究發(fā)現(xiàn)澤瀉-白術(shù)藥對(duì)可通過胰島素抵抗通路治療血脂異常，提示澤瀉-白術(shù)藥對(duì)具有治療糖尿病的潛在價(jià)值。

綜上所述，澤瀉-白術(shù)藥對(duì)通過多靶點(diǎn)、多通路起到調(diào)節(jié)血脂異常的作用。本研究可為臨床使用澤瀉-白術(shù)藥對(duì)治療血脂異常提供一定依據(jù)，但仍有以下不足：①由于數(shù)據(jù)庫(kù)的局限性，本研究未能納入澤瀉-白術(shù)藥對(duì)所有的活性成分；②未能考慮活性成分在人體的藥代動(dòng)力學(xué)及代謝前后的化學(xué)變化；③中藥具有雙向性，如澤瀉醇、白術(shù)內(nèi)酯可通過抑制ERK1/2通路起到抗炎作用，這與相關(guān)成分激活ERK1/2通路調(diào)控血脂不同，澤瀉-白術(shù)藥對(duì)在ERK1/2級(jí)聯(lián)中的具體作用有待進(jìn)一步研究。

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Study on Mechanism of Medicinal Pair of Alismatis Rhizoma-Atractylodis Macrocephalae Rhizoma in Treatment of Dyslipidemia Based on Network Pharmacology

ZHAO Zhibin1,2, LI Li1, CHEN Xinyan2, LIN Yanzhao2

To analyze the active components, targets and pathway mechanism of medicinal pair of Alismatis Rhizoma-Atractylodis Macrocephalae Rhizoma in the treatment of dyslipidemia based on network pharmacology.TCMSP and literature were used to retrieve the active components of Alismatis Rhizoma and Atractylodis Macrocephalae Rhizoma; TCMSP and SwissTargetPrediction databases were used to predict the targets. OMIM, DisGeNET, and DrugBank databases were used to obtain dyslipidemia-related targets. STRING database was used to construct target PPI network and screen key targets. DAVID 6.8 database was used for GO analysis and KEGG analysis, and Cytoscape 3.8.0 was used to construct an active component-target-pathway network to screen core active components. The SwissDock database was used for molecular docking of core active components and key targets.Totally 10 core active components, such as alisol A, alisol A 23-acetate, atractylenolide Ⅲ were screened out. 11 key targets, such as VEGFA, IL6 and EGFR were screened out. KEGG analysis obtained 103 signal pathways including the HIF-1 signaling pathway that affects the basal metabolic rate, the AMPK signaling pathway that inhibits adipogenesis, and the Toll-like receptor signaling pathway that affects appetite and fat metabolism (<0.05). The molecular docking results showed that the core active components of the medicinal pair of Alisma Rhizoma-Atractylodis Macrocephalae Rhizoma could be closely combined with the key target for the treatment of dyslipidemia.The active components in the medicinal pair of Alismatis Rhizoma-Atractylodis Macrocephalae Rhizoma, such as alisol A, alisol A 23-acetate, atractylenolide Ⅲ may through regulating the expression of the protein targets to treat dyslipidemia, like VEGFA, IL6, EGFR, TNF, IL1B, and MAPK1, to activate or inhibit the relevant signaling pathways, so as to play the role of inhibiting appetite, inhibiting cholesterol transport and synthesis, inhibiting the growth of adipocytes and other functions to treat dyslipidemia.

Alismatis Rhizoma; Atractylodis Macrocephalae Rhizoma; dyslipidemia; hyperlipidemia; network pharmacology; molecular docking

R259.892；R285

A

1005-5304(2021)10-0037-08

10.19879/j.cnki.1005-5304.202101456

省部共建中醫(yī)濕證國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室專項(xiàng)（SZ2020ZZ11）

陳欣燕，E-mail：chenxinyancxy@163.com

（收稿日期：2021-01-25）

（修回日期：2021-02-08；編輯：陳靜）