淺析系統(tǒng)性紅斑狼瘡?fù)庵苎逃辛馨图?xì)胞變化與其臨床相關(guān)性

李璐　杜勇　李敬　師曉強(qiáng)　賈艷輝

【摘要】目的：深入探析系統(tǒng)性紅斑狼瘡病患者外周血當(dāng)中固有淋巴細(xì)胞變化及其臨床相關(guān)性。方法：任意篩選從2017年11月到2018年5月治療于我院的風(fēng)濕免疫科病患者，并且符合相應(yīng)年齡段，且規(guī)避免疫有關(guān)病癥及其家族史遺傳的身體健康群體，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血當(dāng)中ILC、B細(xì)胞、CD4+T與CD8+T細(xì)胞百分比值，解析ILC各亞組之間的變動(dòng)偏差，區(qū)別于B細(xì)胞、T細(xì)胞亞群相互間的關(guān)聯(lián)性。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)血漿當(dāng)中包括細(xì)胞介素（IL）-4、-33與干擾素-γ等細(xì)胞因子水準(zhǔn)，并且解析ILC亞群和各因子的關(guān)聯(lián)性。結(jié)果：具體劃分為SLE活動(dòng)組，即P=0.0037;SLE穩(wěn)定組，即P=0.0462，分開(kāi)跟健康對(duì)照組進(jìn)行比較，外周血當(dāng)中ILC百分比完全上升，伴隨著ILC2百分比的提升，而SLE疾病活動(dòng)度評(píng)價(jià)也隨之下降，兩者呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)，SLE病患者當(dāng)中ILC2即r=0.1543，P=0.0288與ILC3百分比即r=0.3136，P=0.0011對(duì)比IL-4水準(zhǔn)呈現(xiàn)正相關(guān)。結(jié)論：SLE病患者ILC細(xì)胞百分比失調(diào)和病癥活動(dòng)有著緊密關(guān)系，細(xì)胞因子出現(xiàn)不尋常表現(xiàn)也摻雜當(dāng)中，需要深入研究功能與作用。

【關(guān)鍵詞】系統(tǒng)性紅斑狼瘡;固有淋巴細(xì)胞;臨床相關(guān)性

【中圖分類號(hào)】R593.241 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【基金項(xiàng)目】保定市科技計(jì)劃項(xiàng)目：艾拉莫德對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者B淋巴細(xì)胞的影響及臨床療效研究;（編號(hào)：2041ZF323）

系統(tǒng)性紅斑狼瘡的簡(jiǎn)稱為SLE，其是一種多系統(tǒng)受累的自身免疫性疾病，在人體內(nèi)形成對(duì)于核蛋白復(fù)合物的致病性身體抗體針對(duì)包含腎臟在內(nèi)絕大多數(shù)器官有極大的損害影響。通過(guò)探究從中找出各種固有免疫細(xì)胞加入到SLE的發(fā)病中，參照ILC細(xì)胞因子譜把其劃分為三大亞群，呈現(xiàn)出分泌干擾素-γ特性，集中分散在黏膜和組織當(dāng)中。接下來(lái)文章主要研究了ILC在SLE中的表現(xiàn)水平，及其跟細(xì)胞因子有慣性，進(jìn)一步深入研究LLC在SLE具體實(shí)踐中的影響。

1 研究對(duì)象

具體探究對(duì)象為任意篩選從2017年到2018年5月在我院診治風(fēng)濕免疫科SLE病患者40名，整體病患者完全符合1997年SLE劃分標(biāo)準(zhǔn)，當(dāng)中男性1名，女性39名，平均歲數(shù)42.0+2.2歲。根據(jù)SLE病癥活動(dòng)度-2K把SLE病患者劃分成為活動(dòng)組與穩(wěn)定組，每組各20名，篩選同期在我院體檢中心體檢歲數(shù)達(dá)標(biāo)的人群，同時(shí)規(guī)避免疫有關(guān)病癥及其家族遺傳病史的健康對(duì)照者15名。按照我院倫理委員會(huì)的相關(guān)制度，已獲得全體研究對(duì)象及其家屬簽字知情同意書(shū)。

2 方法

2.1 實(shí)驗(yàn)室檢查數(shù)據(jù)

采集SLE病患者實(shí)驗(yàn)室檢查材料，比如：抗核抗體、血紅細(xì)胞沉降率、C-反應(yīng)蛋白、類風(fēng)濕因子及其免疫球蛋白等，并且綜合病患者臨床病癥實(shí)施SLEDAI詳盡評(píng)估。

2.2 重點(diǎn)試劑和儀器

其中流式熒光抗體為：CD56-PE，CD11b-PE，CD16-PE，CD14-PE，CD19-PE，CD11C-PE，CD20-PE，F(xiàn)eRIa-PE，CD3-PE，CD123-PE，CD127-PerCP/Cy5.5，CD161-AF700，CD336-APC，CD117-BV421，CD45-FITC，CD294-PE/Cy7，CD19-PE/Cy7，CD4-FITC，CD3-PaificBlue，CD8-PerCP/Cy5.5;儀器具體包含：BDFACSCCantoII流式細(xì)胞儀、Biocell2010酶標(biāo)儀。

2.3 外周血單個(gè)核細(xì)胞制備

需要空腹抽取兩組數(shù)據(jù)5ml外周抗凝血，通過(guò)Ficoll密度梯度離心法分離，最終獲得PBMC懸液，且計(jì)算數(shù)值。

2.4 測(cè)定ILC細(xì)胞群測(cè)

獲取200μlPBMC懸液中添加到抗體CD56，CD11b，CD16，CD14，CD19，CD1IC，CD20，F(xiàn)cRlo，CD3，CD123，CD127，CD161，CD336.CD117，CD45，CD294，待避光孵育30分鐘之后，采取磷酸鹽緩沖液沖洗，添加300μulPBS重懸，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)ILC細(xì)胞比例。

2.5 測(cè)定外周免疫細(xì)胞亞群

獲取200μlPBMC懸液添加到抗體CD3，CD4，CD8，CD19;待避光孵育30分鐘后，使用PBS沖洗，添加300μlPBS重懸，流式細(xì)胞術(shù)T、B細(xì)胞群比例。

2.6 ELISA檢測(cè)二組研究對(duì)象血漿中細(xì)胞因子表達(dá)水準(zhǔn)

遵照ELSA試劑盒當(dāng)中說(shuō)明書(shū)檢測(cè)L-4.-33與干擾素-γ具體濃度，試劑盒完全購(gòu)買(mǎi)于外國(guó)公司。

2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處置

采取SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件實(shí)施數(shù)據(jù)解析。全部數(shù)據(jù)完全達(dá)到正態(tài)分布，每組計(jì)量材料使用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)方式，三組及其三組之上材料運(yùn)用方差解析，結(jié)果為P<0.05具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 SLE病患者臨床材料對(duì)比二組病患者的SLEDAI評(píng)分與ESR呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，差異具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;活動(dòng)組C3水準(zhǔn)對(duì)比穩(wěn)定組有所下降，差異具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;然而，RF、CRP、IgG及其C4水準(zhǔn)二組之間差異不具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。詳見(jiàn)表1所示。

3.2 三組對(duì)象ILC百分比對(duì)比

第一，SLE活動(dòng)組和對(duì)照比較，ILC比例呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，即22.33+2.52）%比（14.56+1.28）%，t=2.488，P=0.0181，ILC2比例呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，即（8.67+0.83）%比（42.48+3.46）%，t=10.79，P<0.0001;ILC3百分比在SLE活動(dòng)組中下降（5.72±1.08）%比（14.35+2.40）%，t=3.504，P=0.0013。第二，SLE穩(wěn)定組和對(duì)照組比較，二組之間ILC1與ILC3群百分比之間沒(méi)有顯著差異，ILC2百分比在SLE穩(wěn)定組中對(duì)比健康對(duì)照組顯著下降，第三，SLE兩組病患者對(duì)比，活動(dòng)組對(duì)比穩(wěn)定組的ILC1比例上升，LC2比例顯著下降，ILC3在兩組之間差異化不具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3.3 SLE病患者外周血T、B細(xì)胞百分比與ILC百分比關(guān)聯(lián)性

第一，SLE穩(wěn)定組當(dāng)中ILC各亞群和CD4+T、CD8+T與CD19+B細(xì)胞沒(méi)有明顯關(guān)聯(lián)性，全部P>0.05;第二，SLE活動(dòng)組病患者外周血中，伴隨著外周ILC2百分比例上升，而CD4+T細(xì)胞比例有所降低，兩者有互相關(guān)聯(lián)性，ILC1與ILC3細(xì)胞和CD4+T、CD8+T及其CD19+B細(xì)胞百分比完全沒(méi)有明顯關(guān)聯(lián)性。

3.4 SLE病患者外周血LC細(xì)胞比例和臨床血清學(xué)標(biāo)準(zhǔn)關(guān)聯(lián)性解析

SLE病患者外周ILC百分比和ESR、RF及其CRP等不具備明顯關(guān)聯(lián)性，全部P>0.05。隨著SLE病患者外周ILC2百分比上升，血清當(dāng)中的IgG含量下降，二者體現(xiàn)出負(fù)相關(guān)。

3.5 SLE病患者外周血PBMC當(dāng)中ILC占比及其疾病活動(dòng)度相關(guān)性

ILC2百分比上升時(shí)，而SLEDAI評(píng)分卻漸漸下降，二者體現(xiàn)出負(fù)相關(guān)，然而，在ILC1和ILC3群中沒(méi)有相關(guān)性，差異化不具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。不一樣活動(dòng)度的SLE病患者外周ILC表達(dá)水平不一樣，跟對(duì)照組進(jìn)行比較，SLE穩(wěn)定組當(dāng)中ILC百分比上升，即（3.79+0.39）%比（6.59+1.19）%，t=2.077，P=0.0462;SLE活動(dòng)組中ILC百分比明顯上升，即（3.79+0.39）%比（12.58+2.40）%，t=3.129，P=0.0037;SLE兩組對(duì)比，活動(dòng)組即（6.59+1.19）%比（12.58+2.40）%，t=2.155，P=0.0379，病患者外周血中ILC百分比先祖上升，活動(dòng)組LEDAI評(píng)分對(duì)比穩(wěn)定組呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。

3.6 三組對(duì)象干擾素-γ、IL4和IL-33表現(xiàn)水準(zhǔn)對(duì)比

SLE活動(dòng)組當(dāng)中干擾素γ水準(zhǔn)對(duì)比SLE穩(wěn)定組與健康對(duì)照組有所上升，SLE二組病患者差異不具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。SLE兩組患者血漿IL4水平完全比健康對(duì)照組上升;然而，SLE活動(dòng)組對(duì)比穩(wěn)定組IL4水平略微上升，但是無(wú)差異化統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。IL-33表達(dá)水平，SLE活動(dòng)組分開(kāi)跟與健康對(duì)照組及其SLE穩(wěn)定組對(duì)比全部呈現(xiàn)下降，SLE穩(wěn)定組與健康對(duì)照組差異不具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3.7 SLE病患者外周血ILC亞群比例和細(xì)胞因子相關(guān)性分析

SLE病患者外周LC2與ILC3百分比跟血清當(dāng)中IL-4水平呈現(xiàn)相關(guān)性，ILCI與血清IL-4水平?jīng)]有顯著相關(guān)性，其他亞群和IL-33和干擾素-γ也沒(méi)有顯著相關(guān)性，P>0.05。

4 討論

SLE其實(shí)為免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)錯(cuò)亂的自身免疫性并贈(zèng)，呈現(xiàn)的特性為形成很多自身抗體與多系統(tǒng)受累，且病患者身體內(nèi)T、B細(xì)胞異常活化，同時(shí)跟細(xì)胞因子的變化有關(guān)聯(lián)。通過(guò)探究表明，先天細(xì)胞與淋巴細(xì)胞相互間放大的互相影響促使耐受性欠缺，造成本身反應(yīng)性B細(xì)胞激活與連續(xù)產(chǎn)生。此次探究得出結(jié)論：ILC各亞群在SLE病患者外周血中的比例跟健康對(duì)照組對(duì)比差異具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

ILC有不一樣活動(dòng)度SLE病患者外周血比例區(qū)別性非常顯著，干擾素-γ為介導(dǎo)細(xì)胞之間互相影響的關(guān)鍵因子，經(jīng)過(guò)調(diào)整TLR，抗原呈遞與淋巴細(xì)胞募集到生發(fā)中心，推動(dòng)身體內(nèi)部抗體形成?；诖耍蓴_素-γ為驅(qū)動(dòng)消耗性病癥與整體身體炎癥的關(guān)鍵原因，此次探究結(jié)果也證實(shí)了干擾素-γ在SLE病發(fā)中的影響。

ILC2分泌IL-4、-5和-9等2型細(xì)胞因子，部分炎性細(xì)胞因子介導(dǎo)各種炎性反應(yīng)，可影響到T、B與DC等細(xì)胞。其DC細(xì)胞與單核細(xì)胞分解的IL-I2影響下，增強(qiáng)分解干擾素-γ的功能。其他探究得出結(jié)論，可塑性ILC2s能夠下調(diào)CATA3的表達(dá)，致使細(xì)胞走向類ILCI樣的狀態(tài)。不僅如此，SLE病患者血清中IgG水準(zhǔn)隨著ILC百分比例上升而提升，同時(shí)SLE活動(dòng)組外周血C3補(bǔ)體水準(zhǔn)對(duì)比SLE穩(wěn)定組顯著下降，致使保護(hù)性免疫轉(zhuǎn)向病理狀態(tài)。

ILC3亞群具備非常強(qiáng)的可塑性與異質(zhì)性，其在特定環(huán)境中轉(zhuǎn)向ILC1群，具體探究表明，NKp46+T-be+ex-ILC3針對(duì)促炎細(xì)胞因子刺激的應(yīng)答中失去了RORyt表達(dá)，且在功能與表型跟ILC105很相似。除了1L-17與-22，NCR+IILC3與ex1LC3也可分泌干擾素-γ與-ɑ加入到保護(hù)性免疫，隨之慢性活化的ILC3引導(dǎo)爆發(fā)性炎性反應(yīng)造成病癥產(chǎn)生。ILC3活化后的分解IL-2、-6、-17、-10，有助于T與B細(xì)胞應(yīng)答的啟動(dòng)或調(diào)整。

通過(guò)此次探究得出結(jié)論，ILC細(xì)胞百分比與疾病活動(dòng)度有一定相關(guān)性，ILC百分比提升并無(wú)法控制自身炎性反應(yīng)，同時(shí)不一樣病癥活動(dòng)度情況下，各亞群差異化完全不同。ILC不但呈現(xiàn)出百分比提升，同時(shí)跟適應(yīng)性免疫反應(yīng)細(xì)胞相互間的影響逐漸增強(qiáng)，由此得出結(jié)論，ILC細(xì)胞具備“雙刃”功能，其在SLE發(fā)病機(jī)制中影響需要深入探究。

5 總結(jié)

總而言之，SLE病患者尤其在病癥發(fā)病期內(nèi)，身體內(nèi)總T細(xì)胞及其亞群數(shù)量分配出現(xiàn)了異動(dòng)情況，T細(xì)胞亞群、B細(xì)胞及其NK細(xì)胞的變動(dòng)在病患者發(fā)病當(dāng)中產(chǎn)生了巨大影響。當(dāng)檢測(cè)病患者外周血淋巴細(xì)胞亞群，有針對(duì)性地全方位掌握機(jī)體免疫情況，才能精準(zhǔn)地推斷出病情與指導(dǎo)臨床診治起到了積極的作用。

參考文獻(xiàn)：

[1]陳燕文，王超，王旭光，等.系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血T、B細(xì)胞自噬水平及其臨床意義[J].中國(guó)免疫學(xué)雜志，2015，（10）.

[2]湯杰印，張祥貴.系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血淋巴細(xì)胞凋亡的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)信息（上旬刊），2011，24（11）.

[3]周紅霞.系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血B淋巴細(xì)胞中TLR9的表達(dá)及其臨床意義[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，18（11）.

作者簡(jiǎn)介：

李璐，女，漢族，河北省保定市人，碩士研究生，主治醫(yī)師，研究方向：狼瘡腎炎治療。

杜勇，男，漢族，河北省保定市人，碩士研究生，講師，主治醫(yī)師，研究方向：狼瘡腎炎治療。