氯蟲苯甲酰胺·噻蟲胺顆粒劑高效液相色譜分析

王廣成，許艷秋，陳丙坤，謝樹林，高立明

(四川省農(nóng)藥檢定所，四川 成都 610041)

1 前言

氯蟲苯甲酰胺是一種高效廣譜的殺蟲劑，對鱗翅目的夜蛾科、螟蛾科、蛀果蛾科、卷葉蛾科、粉蛾科、菜蛾科、麥蛾科、細(xì)蛾科等均有很好的控制效果[1-2]。噻蟲胺是一類高效安全、高選擇性的新型煙堿類殺蟲劑，主要用于防治水稻、蔬菜、果樹及其他作物上的蚜蟲、葉蟬、薊馬、飛虱等半翅目、鞘翅目、雙翅目和某些鱗翅目類害蟲[3-4]。氯蟲苯甲酰胺與噻蟲胺的殺蟲組合物具有擴(kuò)大防治譜和增效的作用，并可以降低用藥成本，用于防治鱗翅目、半翅目、膜翅目、鞘翅目等多種害蟲。

有關(guān)氯蟲苯甲酰胺的分析方法[5-7]和噻蟲胺的分析方法[8-9]已有相關(guān)報道，但兩者混配顆粒劑的分析方法目前還未見公開報道，本文采用高效液相色譜法對試樣中的氯蟲苯甲酰胺和噻蟲胺同時進(jìn)行分離和測定，該方法操作快速、簡便，精密度和準(zhǔn)確度均能滿足定量分析要求，能適用于生產(chǎn)質(zhì)量控制和相關(guān)分析的研究。

2 實驗部分

2.1 試劑與溶液 甲醇：色譜純；水：一級水；磷酸：分析純；氯蟲苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品：(≥99.0%)；噻蟲胺標(biāo)準(zhǔn)品：(≥99.0%)；1.5%氯蟲苯甲酰胺·噻蟲胺顆粒劑(其中氯蟲苯甲酰胺含量0.3%、噻蟲胺含1.2%)。

2.2 儀器 高效液相色譜儀：Agilent 1260，具有DAD檢測器和自動進(jìn)樣器；色譜柱：250mm×4.6mm(i.d.)不銹鋼柱，內(nèi)填ZORBAX SB-C18，5μm填充物；過濾器：濾膜孔徑0.45μm。

2.3 液相色譜操作條件 流動相：Ψ(甲醇+0.1%磷酸水溶液)梯度淋洗(表1)；流量1.0mL/min;柱溫：(30±2)℃；檢測波長：240nm；進(jìn)樣體積：5μL；保留時間：噻蟲胺約為5.09min，氯蟲苯甲酰胺約為10.95min。氯蟲苯甲酰胺和噻蟲胺的高效液相典型色譜圖(圖1～2)。

表1 梯度淋洗程序(VA+VB)

圖1 氯蟲苯甲酰胺·噻蟲胺標(biāo)樣高效液相色譜圖

圖2 1.5%氯蟲苯甲酰胺·噻蟲胺顆粒劑高效液相色譜圖

2.4 測定步驟

2.4.1 標(biāo)樣溶液的配制 稱取氯蟲苯甲酰胺胺標(biāo)樣0.05g(精確至0.000 2g)和噻蟲胺標(biāo)樣0.2g(精確至0.000 2g)于50.00mL容量瓶中，加入適量甲醇溶解，超聲5min，恢復(fù)至室溫后用甲醇稀釋定容，搖勻，準(zhǔn)確移取5.0mL于50.00mL容量瓶中，加入甲醇稀釋定容，搖勻備用。

2.4.2 試樣溶液的配制 稱取已研磨粉碎的試樣2.0g(精確至0.000 2g)置于100mL具塞錐形瓶中，用移液管準(zhǔn)確加入甲醇50.0mL，超聲5min，恢復(fù)至室溫后，用0.45μm濾膜過濾，濾液備用。

2.4.3 測定 在上述操作條件下，待儀器穩(wěn)定，基線平穩(wěn)后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，至相鄰2針標(biāo)樣溶液的響應(yīng)值相對變化<1.5%后，按照標(biāo)樣、試樣、試樣、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測定。

2.4.4 計算 將測得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中氯蟲苯甲酰胺(噻蟲胺)的峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中氯蟲苯甲酰胺(噻蟲胺)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω按下式計算：

式中：A1—標(biāo)樣溶液中氯蟲苯甲酰胺(噻蟲胺)峰面積的平均值；

A2—試樣溶液中氯蟲苯甲酰胺(噻蟲胺)峰面積的平均值；

m1—氯蟲苯甲酰胺(噻蟲胺)標(biāo)樣的質(zhì)量，g；

m2—氯蟲苯甲酰胺(噻蟲胺)試樣的質(zhì)量，g；

ωs—標(biāo)樣中氯蟲苯甲酰胺(噻蟲胺)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，% ;

10—標(biāo)樣溶液稀釋倍數(shù)。

3 結(jié)果與討論

3.1 溶劑的選擇 根據(jù)2種待測物質(zhì)的溶解度性質(zhì)，選擇甲醇作為溶劑。色譜柱使用常規(guī)的反相柱(ZORBAX SB-C18)。

3.2 檢測波長的選擇 通過二極管陣列檢測器，對氯蟲苯甲酰胺標(biāo)樣和噻蟲胺標(biāo)樣進(jìn)行200～400nm范圍內(nèi)的吸收光譜掃描(圖3)。由光譜信息可以得到，噻蟲胺在270nm附近有最大吸收，氯蟲苯甲酰胺在200nm以下有最大吸收，二者吸收光譜交叉點(diǎn)在240nm附近，為了減少干擾，同時結(jié)合噻蟲胺與氯蟲苯甲酰胺的含量差異，平衡二者峰型大小，故選擇240nm作為本方法的檢測波長。

圖3 噻蟲胺+氯蟲苯甲酰胺紫外吸收曲線

3.3 流動相的選擇 在選擇流動相時，先后選用甲醇與水系列，甲醇與磷酸水溶液系列作為流動相，對比純水和0.1%磷酸水溶液作水相的峰形，最后選用甲醇與磷酸水溶液作為流動相系列；結(jié)合待測物質(zhì)含量的差異及出峰時間的差距，通過調(diào)節(jié)流動相中有機(jī)相和水相的比例，選用梯度淋洗作為流動相分離條件，流速1.0mL/min時，氯蟲苯甲酰胺和噻蟲胺能得到有效分離，出峰時間適宜，峰形尖銳且對稱。

3.4 分析方法的線性相關(guān)實驗 準(zhǔn)確稱取5份氯蟲苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品(噻蟲胺標(biāo)準(zhǔn)品)于5個50.00mL容量瓶中，加入適量甲醇溶解，超聲5min，恢復(fù)至室溫后用甲醇稀釋定容，搖勻，分別準(zhǔn)確移取5.00mL于50mL容量瓶中，甲醇定容，配制成5個不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。按上述色譜操作條件進(jìn)行分析，分別對氯蟲苯甲酰胺(噻蟲胺)的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸分析，得到氯蟲苯甲酰胺線性方程為Y=9 130.9X-5.955 9，線性相關(guān)系數(shù)R2為0.999 6；噻蟲胺線性方程為Y=9 960.9X+275.67，線性相關(guān)系數(shù)R2為0.993 2(表2，圖4～5)。

表2 分析方法的線性實驗結(jié)果

圖4 氯蟲苯甲酰胺線性關(guān)系圖

圖5 噻蟲胺線性關(guān)系圖

3.5 分析方法精密度實驗 對同一樣品中的氯蟲苯甲酰胺和噻蟲胺的質(zhì)量分?jǐn)?shù)進(jìn)行6次平行測定，并進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)偏差及變異系數(shù)的統(tǒng)計運(yùn)算，同時運(yùn)用Horwitz公式計算值作為精密度是否合格的判定依據(jù)(表3)。氯蟲苯甲酰胺和噻蟲胺標(biāo)準(zhǔn)偏差均分別為0.002和0.006，變異系數(shù)分別為0.53%和0.49%，本分析方法的變異系數(shù)小于Horwitz公式計算值，精密度符合要求。

表3 分析方法精密度實驗結(jié)果

3.6 方法準(zhǔn)確度實驗 按照配方比例，將除原藥以外的所有助劑混勻，制成空白樣品。準(zhǔn)確稱取6個一定量的空白試樣，分別準(zhǔn)確加入5.00mL氯蟲苯甲酰胺標(biāo)樣溶液(1.129mg/mL、1.355mg/mL)和噻蟲胺標(biāo)樣溶液(4.479mg/mL、3.583mg/mL)合成6個制劑樣品溶液，按上述操作條件分別測定氯蟲苯甲酰胺和噻蟲胺的回收率(表4)。氯蟲苯甲酰胺的平均回收率為99.69%，噻蟲胺的平均回收率為100.08%。

表4 分析方法的準(zhǔn)確度實驗結(jié)果

4 結(jié)論

本文建立的高效液相色譜法對氯蟲苯甲酰胺·噻蟲胺顆粒劑中有效成分進(jìn)行分離測定，其方法線性關(guān)系較好，精密度和準(zhǔn)確度較高，操作簡便，可以作為氯蟲苯甲酰胺和噻蟲胺混配制劑的分析方法。