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    基于科研成果的園藝植物病理學(xué)綜合性創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)教學(xué)探索

    2021-10-14 22:36:46向妙蓮徐昭煥馬建陳明
    課程教育研究 2021年7期
    關(guān)鍵詞:綜合實(shí)驗(yàn)科研成果創(chuàng)新能力

    向妙蓮 徐昭煥 馬建 陳明

    【摘要】為增強(qiáng)大學(xué)生的創(chuàng)新意識(shí)和科研素養(yǎng),探討綜合性創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)教學(xué)在園藝植物病理學(xué)實(shí)驗(yàn)課程中的應(yīng)用,設(shè)計(jì)了“茉莉酸甲酯(MeJA)誘導(dǎo)梨果實(shí)抗青霉病的效應(yīng)與機(jī)理”實(shí)驗(yàn),包括MeJA對(duì)青霉病菌(Penicillium italicum)的抑菌活性、誘導(dǎo)梨果實(shí)抗青霉病效應(yīng)及對(duì)梨果實(shí)病程相關(guān)蛋白幾丁質(zhì)酶(Chitinase,CHI)活性和β-1,3-葡聚糖酶(β-1,3-glucanase,GLU)活性的影響。實(shí)踐表明,基于植物病理學(xué)基礎(chǔ)理論的綜合性創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)有助于學(xué)生掌握寄主-病原互作的基本原理和實(shí)驗(yàn)技能,提高學(xué)生實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)研究組織和實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析的能力,激發(fā)學(xué)生的創(chuàng)新精神和科學(xué)意識(shí)。

    【關(guān)鍵詞】科研成果? 園藝植物病理學(xué)? 綜合實(shí)驗(yàn)? 創(chuàng)新能力

    【基金項(xiàng)目】國(guó)家自然科學(xué)基金(31360466);江西省高校省級(jí)教改立項(xiàng)項(xiàng)目(JXJG-18-3-30); 江西省高校省級(jí)教改立項(xiàng)項(xiàng)目(JXJG-19-3-9)。

    【中圖分類號(hào)】G640 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】2095-3089(2021)07-0189-02

    園藝植物病理學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)是與園藝植物病理學(xué)理論課程緊密相關(guān)的一個(gè)重要教學(xué)環(huán)節(jié),當(dāng)前傳統(tǒng)的驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)教學(xué)模式限制了創(chuàng)新性園藝人才的培養(yǎng)。因此,增加綜合性創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)課程占比,以適應(yīng)新農(nóng)科背景下實(shí)驗(yàn)教學(xué)的需要,是目前實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革創(chuàng)新中值得考慮和重視的問題。高??蒲谐晒瓤纱龠M(jìn)生產(chǎn)發(fā)展,又可豐富教學(xué)資源,有效依托科研優(yōu)勢(shì)提升實(shí)驗(yàn)教學(xué)水平,將科研成果轉(zhuǎn)化為實(shí)驗(yàn)教學(xué)的創(chuàng)新模式??蒲信c教學(xué)相互轉(zhuǎn)化、相互促進(jìn),科研反哺教學(xué),科學(xué)研究思維方法和實(shí)驗(yàn)操作技能融于一體,具有綜合性、前沿性和應(yīng)用性的特點(diǎn),旨在提高學(xué)生的探索精神,鍛煉學(xué)生的創(chuàng)新思維以及運(yùn)用理論知識(shí)和實(shí)驗(yàn)技能解決具體問題的能力,是目前實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革研究的熱點(diǎn)[1-4]。

    果蔬采后病害是制約園藝產(chǎn)業(yè)發(fā)展的瓶頸性障礙,目前主要通過化學(xué)藥劑控制該病害。為了確保果蔬產(chǎn)品生態(tài)、安全,綠色植保防控技術(shù)的應(yīng)用及推廣已迫在眉睫 [5-6]。茉莉酸甲酯(Methyl jasmonate,MeJA)作為植物抗病反應(yīng)的重要信號(hào)分子作用于植物受體細(xì)胞進(jìn)而參與防御信號(hào)的傳導(dǎo),調(diào)控植物免疫系統(tǒng),增強(qiáng)植物抗病性[7-8]。幾丁質(zhì)酶(CHI)和β-1,3-葡聚糖酶(GLU)為兩類重要的病程相關(guān)蛋白,與果蔬采后抗病密切相關(guān)[9-11]。MeJA等外源物質(zhì)處理可誘導(dǎo)果蔬CHI和GLU活性升高,從而減緩果蔬采后病害的發(fā)生[12-13]。

    1.綜合性創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)特色

    園藝植物病理學(xué)綜合性創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)基于果蔬采后貯藏保鮮領(lǐng)域研究熱點(diǎn),依托江西省果蔬采后處理關(guān)鍵技術(shù)及質(zhì)量安全協(xié)同創(chuàng)新中心和江西農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院等最新研究成果,將茉莉酸甲酯(MeJA)等外源物質(zhì)誘導(dǎo)果實(shí)抗采后病害研究中取得的部分成果轉(zhuǎn)化為園藝植物病理學(xué)實(shí)驗(yàn)的一個(gè)教學(xué)內(nèi)容,構(gòu)建具有綜合植物病理學(xué)知識(shí)、強(qiáng)化實(shí)驗(yàn)技能訓(xùn)練和將基礎(chǔ)知識(shí)運(yùn)用于科技前沿研究特點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)教學(xué)模式[14-15]。綜合性創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)通過強(qiáng)調(diào)科學(xué)問題熱點(diǎn)引領(lǐng)和學(xué)生自主設(shè)計(jì),學(xué)生通過比較MeJA誘導(dǎo)梨果實(shí)抗青霉病的效應(yīng)及對(duì)青霉病菌(Penicillium expansum)的抑菌作用差異,逐步將科研成果引入到實(shí)驗(yàn)教學(xué)中,激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)專業(yè)知識(shí)興趣,培養(yǎng)創(chuàng)新思維和創(chuàng)新能力,為學(xué)生科研實(shí)驗(yàn)和畢業(yè)設(shè)計(jì)奠定基礎(chǔ)。

    2.綜合性創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)教學(xué)設(shè)計(jì)

    2.1實(shí)驗(yàn)材料

    試驗(yàn)用果:“翠冠”梨果實(shí)采自江西省峽江縣金坪鄉(xiāng)果園,于當(dāng)日采摘后放置于實(shí)驗(yàn)室,挑選無(wú)病蟲害、大小統(tǒng)一的果實(shí),放置24h充分散去田間熱后用0.1%次氯酸鈉溶液浸泡果實(shí)1~2min消毒后用自來(lái)水沖洗干凈,室溫下晾干后保鮮袋單果套袋,入庫(kù)備用(冷庫(kù)溫度4~5℃)。

    供試菌株:擴(kuò)展青霉(P.expansum),由江西農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病理實(shí)驗(yàn)室提供,-80℃保存,試驗(yàn)前培養(yǎng)5~7d,用無(wú)菌水洗脫孢子,經(jīng)無(wú)菌脫脂棉過濾后用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),配置濃度為1.0×106 spores /mL孢子懸浮液,備用。

    供試試劑:茉莉酸甲酯(Methyl jasmonate,MeJA),購(gòu)自美國(guó)Sigma公司,先使用微量0.1% Tween80和少許乙醇混合均勻,后加無(wú)菌水配置為濃度1000 μL/L的MeJA溶液;異羥肟酸(Salicyhydroxamic acid,SHAM,茉莉酸生物合成合成抑制劑),購(gòu)自美國(guó)Sigma公司,先溶于95%乙醇,再用含0.1% Tween 80的無(wú)菌水配置成1000 μL/LSHAM備用;CHI活性和GLU活性測(cè)定采用試劑盒(Solarbio,北京,中國(guó)),乙酸-乙酸鈉緩沖液(含EDTA、β-巰基乙醇)。

    2.2 實(shí)驗(yàn)方法

    2.2.1 MeJA對(duì)P. expansum的抑菌活性

    采用牛津杯法測(cè)定MeJA對(duì)P.expansum的抑制作用。取6 mL供試菌株孢子懸浮液加入54mL溫度約45℃左右PDA培養(yǎng)基中,搖勻,倒入無(wú)菌培養(yǎng)皿制成含青霉菌平板。待平板凝固后,在培養(yǎng)皿中心放置無(wú)菌牛津杯(直徑為7mm),取100μL濃度為10μmol/L、經(jīng)0.22μm細(xì)菌微孔濾膜過濾的MeJA溶液注入牛津杯中,每個(gè)處理重復(fù)3次,置25±1℃恒溫培養(yǎng)箱逐日觀察記錄抑菌圈大小。對(duì)照組用等量含0.1% Tween80無(wú)菌水。

    2.2.2 MeJA誘導(dǎo)梨果實(shí)抗青霉病效應(yīng)

    將待處理果實(shí)置于熏蒸盒(體積6L)內(nèi),中央放置滅菌濾紙,將適量 MeJA滴在滅菌濾紙上使盒內(nèi)MeJA濃度達(dá)到10μmol/L,迅速密封塑料盒,對(duì)照組用含0.1%Tween80無(wú)菌水,另用100μmol/L的SHAM溶液噴施在果實(shí)表面,于25℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)36h,在果實(shí)孔內(nèi)注入20μL1.0×106 spores/mL青霉孢子懸浮液。每處理10個(gè)果,3次重復(fù)。以上處理后逐日觀察梨果實(shí)發(fā)病情況,采用十字交叉法測(cè)量病斑直徑,按以下公式計(jì)算誘導(dǎo)效果:誘導(dǎo)效果=(對(duì)照病斑直徑-處理組病斑直徑)/對(duì)照病斑直徑×100%。

    2.2.3 MeJ處理對(duì)梨果實(shí)CHI和GLU活性的影響

    試驗(yàn)設(shè)5組處理:CK處理組;10、100和1000 μmol/L MeJA處理組;100 μmol/L SHAM處理組。其他方法同2.2.2,每組處理10個(gè)果,每組3次重復(fù)。接種后第96 h取病健交界處果肉,液氮迅速冷凍置于-80℃超低溫箱保存,待用。根據(jù)曹建康等方法稍微改進(jìn),提取CHI和GLU粗酶液,采用試劑盒(Solarbio,北京,中國(guó))測(cè)定其活性。

    2.2.4 數(shù)據(jù)分析

    試驗(yàn)數(shù)據(jù)利用Excel2003和SPSS16.0 統(tǒng)計(jì)分析,用單因素方差比較統(tǒng)計(jì)各處理平均值的差異,Duncan 氏新復(fù)極差法(Duncans new multiple range test)分析各處理間的差異顯著性。

    3.綜合性創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

    3.1 MeJA對(duì)P. expansum的抑菌活性

    培養(yǎng)5 d后MeJA對(duì)青霉病菌的抑制作用,與對(duì)照相比,濃度為10 μmol/L MeJA的牛津杯周圍無(wú)抑菌圈。通過抑菌活性實(shí)驗(yàn),學(xué)生掌握了PDA培養(yǎng)基的配制和牛津杯法測(cè)定MeJA對(duì)P. expansum的抑菌方法,逐步熟悉園藝植物病理學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)技能。

    3.2 MeJA誘導(dǎo)梨果實(shí)抗青霉病的效應(yīng)

    不同濃度MeJA處理對(duì)梨果實(shí)抗青霉病誘導(dǎo)效應(yīng)因濃度不同而各異。10和100μmol/L MeJA處理后誘導(dǎo)效應(yīng)分別為3.45%和14.59%(P <0.05)。

    3.3 MeJA處理對(duì)梨果實(shí)病程相關(guān)蛋白活性的影響

    10和100 μmol/L濃度MeJA處理組均顯著提高了梨果實(shí)CHI活性,分別比對(duì)照處理提高了11.02%和45.24%。1000 μmol/L MeJA處理組則抑制了CHI活性,為對(duì)照組的85.17%(P <0.05)。100 μmol/L MeJA處理組GLU活性最高,為對(duì)照組的1.46倍,而10和100 μmol/L處理之間無(wú)顯著性差異(P <0.05)。

    4 .綜合性創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)教學(xué)設(shè)計(jì)

    依托外源物質(zhì)誘導(dǎo)果實(shí)抗病的研究熱點(diǎn)問題,構(gòu)建MeJA誘導(dǎo)梨果實(shí)抗青霉病的綜合性創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)課,主要教學(xué)設(shè)計(jì)如下:第一,課前準(zhǔn)備——指導(dǎo)教師引導(dǎo)學(xué)生逐步熟悉實(shí)驗(yàn)課程的教學(xué)目標(biāo)和主要內(nèi)容后,每組4~5人查找果實(shí)采后誘導(dǎo)抗病相關(guān)文獻(xiàn),以組為單位撰寫可行性實(shí)驗(yàn)計(jì)劃,初擬創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和方案,指導(dǎo)教師提出修改意見和建議;第二,課中實(shí)施——課時(shí)總計(jì)8學(xué)時(shí),其中2學(xué)時(shí)準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)材料(PDA、病原菌、果實(shí)預(yù)處理),3學(xué)時(shí)完成MeJA-病原菌-果實(shí)三者互作處理(接種、取樣),3學(xué)時(shí)(病情統(tǒng)計(jì)、GLU和CHI測(cè)定,結(jié)果分析),各組同學(xué)在實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)老師協(xié)助下不斷完善實(shí)驗(yàn)方案,學(xué)習(xí)使用儀器設(shè)備和統(tǒng)計(jì)軟件;第三,課后討論:各組分析討論后小結(jié)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,分析實(shí)驗(yàn)成功和失敗原因,如病原菌污染、接種不發(fā)病以及酶活性單位差異等問題,最后指導(dǎo)教師總結(jié)分析各組實(shí)驗(yàn)結(jié)果,學(xué)生結(jié)合資料查閱,比較MeJA誘導(dǎo)梨果實(shí)抗青霉病的效應(yīng)和病程相關(guān)蛋白活性差異,分析MeJA誘導(dǎo)抗病的可能途徑,撰寫實(shí)驗(yàn)研究報(bào)告。

    參考文獻(xiàn):

    [1]賈永霞.創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)教學(xué)的探究與實(shí)踐[J].實(shí)驗(yàn)室研究與探索,2018,37(12):206-208.

    [2]賈智偉,賀科學(xué),黃亞飛.大學(xué)生創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)計(jì)劃的實(shí)施實(shí)踐與思考[J].教育現(xiàn)代化,2019(63):65-68.

    [3]蔣敏,李會(huì),史勁松.基于科研成果的藥理學(xué)教學(xué)實(shí)驗(yàn)探索[J].實(shí)驗(yàn)室研究與探索,2020,39(1):217-220.

    [4]王益林,文輝忠,舒馨,等.鐵含量測(cè)定的研究型教學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與實(shí)踐[J].實(shí)驗(yàn)室研究與探索,2020,39(3):194-197.

    [5]張維一,畢陽(yáng).果蔬采后病害與控制[M].農(nóng)業(yè)出版社, 1996.

    [6]田世平,產(chǎn)祝龍.誘導(dǎo)抗性在果蔬采后病害防治中的研究與應(yīng)用[J].植物病理學(xué)報(bào),2004,34(5):385-394.

    [7]薛仁鎬, 金圣愛. 茉莉酸甲酯:一種重要的植物信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子[J].生物技術(shù)通訊,2006,17(6):985-988.

    [8]崔席席,李富軍,張新華,等.茉莉酸甲酯調(diào)控果蔬采后品質(zhì)的機(jī)制及應(yīng)用研究進(jìn)展[J].食品科學(xué),2019,40(13):304-311.

    [9]陳三鳳,李季倫.幾丁質(zhì)酶研究歷史和發(fā)展前景[J]. 微生物學(xué)通報(bào),1993,20(3):156-160.

    [10]邢全華,王斌.植物葡聚糖酶基因抗病作用的研究進(jìn)展[J].遺傳,2002,24(6):715-720.

    [11]李春娟,單世華,許婷婷,等.幾丁質(zhì)酶和β-1,3-葡聚糖酶基因研究進(jìn)展[J]. 生物技術(shù)通訊, 2004,15(5):502-505.

    [12]王雷.不同激發(fā)子處理對(duì)甜櫻桃果實(shí)采后青霉病的抑制作用及其機(jī)理研究[D].南京農(nóng)業(yè)大學(xué),2015.

    [13]王英珍,程瑞,張紹鈴,等.采前茉莉酸甲酯(MeJA)處理對(duì)梨果實(shí)抗病性的影響[J].果樹學(xué)報(bào),2016,33(6):694-700.

    [14]徐小彪, 曲雪艷, 鄒菊花,等. 高等農(nóng)業(yè)院校植物生產(chǎn)類本科專業(yè)實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革的探討[J].高等農(nóng)業(yè)教育,2010(7):67-69.

    [15]朱昌蘭, 李保同, 徐小彪,等. 植物生產(chǎn)類專業(yè)創(chuàng)新型人才培養(yǎng)模式探索——基于江西農(nóng)業(yè)大學(xué)國(guó)家級(jí)實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心的改革實(shí)踐[J]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)教育, 2012(3):71-74.

    作者簡(jiǎn)介:

    向妙蓮(1977年10月-),女,苗族,湖南綏寧人,博士,副教授,研究方向:植物寄主與病原物互作。

    陳明(1979年8月-),男,漢族,江西武寧人,博士,副教授,研究方向:果實(shí)采后生物學(xué)。

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