• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    基于科研成果的園藝植物病理學(xué)綜合性創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)教學(xué)探索

    2021-10-14 22:36:46向妙蓮徐昭煥馬建陳明
    課程教育研究 2021年7期
    關(guān)鍵詞:綜合實(shí)驗(yàn)科研成果創(chuàng)新能力

    向妙蓮 徐昭煥 馬建 陳明

    【摘要】為增強(qiáng)大學(xué)生的創(chuàng)新意識(shí)和科研素養(yǎng),探討綜合性創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)教學(xué)在園藝植物病理學(xué)實(shí)驗(yàn)課程中的應(yīng)用,設(shè)計(jì)了“茉莉酸甲酯(MeJA)誘導(dǎo)梨果實(shí)抗青霉病的效應(yīng)與機(jī)理”實(shí)驗(yàn),包括MeJA對(duì)青霉病菌(Penicillium italicum)的抑菌活性、誘導(dǎo)梨果實(shí)抗青霉病效應(yīng)及對(duì)梨果實(shí)病程相關(guān)蛋白幾丁質(zhì)酶(Chitinase,CHI)活性和β-1,3-葡聚糖酶(β-1,3-glucanase,GLU)活性的影響。實(shí)踐表明,基于植物病理學(xué)基礎(chǔ)理論的綜合性創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)有助于學(xué)生掌握寄主-病原互作的基本原理和實(shí)驗(yàn)技能,提高學(xué)生實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)研究組織和實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析的能力,激發(fā)學(xué)生的創(chuàng)新精神和科學(xué)意識(shí)。

    【關(guān)鍵詞】科研成果? 園藝植物病理學(xué)? 綜合實(shí)驗(yàn)? 創(chuàng)新能力

    【基金項(xiàng)目】國(guó)家自然科學(xué)基金(31360466);江西省高校省級(jí)教改立項(xiàng)項(xiàng)目(JXJG-18-3-30); 江西省高校省級(jí)教改立項(xiàng)項(xiàng)目(JXJG-19-3-9)。

    【中圖分類號(hào)】G640 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】2095-3089(2021)07-0189-02

    園藝植物病理學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)是與園藝植物病理學(xué)理論課程緊密相關(guān)的一個(gè)重要教學(xué)環(huán)節(jié),當(dāng)前傳統(tǒng)的驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)教學(xué)模式限制了創(chuàng)新性園藝人才的培養(yǎng)。因此,增加綜合性創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)課程占比,以適應(yīng)新農(nóng)科背景下實(shí)驗(yàn)教學(xué)的需要,是目前實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革創(chuàng)新中值得考慮和重視的問題。高??蒲谐晒瓤纱龠M(jìn)生產(chǎn)發(fā)展,又可豐富教學(xué)資源,有效依托科研優(yōu)勢(shì)提升實(shí)驗(yàn)教學(xué)水平,將科研成果轉(zhuǎn)化為實(shí)驗(yàn)教學(xué)的創(chuàng)新模式??蒲信c教學(xué)相互轉(zhuǎn)化、相互促進(jìn),科研反哺教學(xué),科學(xué)研究思維方法和實(shí)驗(yàn)操作技能融于一體,具有綜合性、前沿性和應(yīng)用性的特點(diǎn),旨在提高學(xué)生的探索精神,鍛煉學(xué)生的創(chuàng)新思維以及運(yùn)用理論知識(shí)和實(shí)驗(yàn)技能解決具體問題的能力,是目前實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革研究的熱點(diǎn)[1-4]。

    果蔬采后病害是制約園藝產(chǎn)業(yè)發(fā)展的瓶頸性障礙,目前主要通過化學(xué)藥劑控制該病害。為了確保果蔬產(chǎn)品生態(tài)、安全,綠色植保防控技術(shù)的應(yīng)用及推廣已迫在眉睫 [5-6]。茉莉酸甲酯(Methyl jasmonate,MeJA)作為植物抗病反應(yīng)的重要信號(hào)分子作用于植物受體細(xì)胞進(jìn)而參與防御信號(hào)的傳導(dǎo),調(diào)控植物免疫系統(tǒng),增強(qiáng)植物抗病性[7-8]。幾丁質(zhì)酶(CHI)和β-1,3-葡聚糖酶(GLU)為兩類重要的病程相關(guān)蛋白,與果蔬采后抗病密切相關(guān)[9-11]。MeJA等外源物質(zhì)處理可誘導(dǎo)果蔬CHI和GLU活性升高,從而減緩果蔬采后病害的發(fā)生[12-13]。

    1.綜合性創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)特色

    園藝植物病理學(xué)綜合性創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)基于果蔬采后貯藏保鮮領(lǐng)域研究熱點(diǎn),依托江西省果蔬采后處理關(guān)鍵技術(shù)及質(zhì)量安全協(xié)同創(chuàng)新中心和江西農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院等最新研究成果,將茉莉酸甲酯(MeJA)等外源物質(zhì)誘導(dǎo)果實(shí)抗采后病害研究中取得的部分成果轉(zhuǎn)化為園藝植物病理學(xué)實(shí)驗(yàn)的一個(gè)教學(xué)內(nèi)容,構(gòu)建具有綜合植物病理學(xué)知識(shí)、強(qiáng)化實(shí)驗(yàn)技能訓(xùn)練和將基礎(chǔ)知識(shí)運(yùn)用于科技前沿研究特點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)教學(xué)模式[14-15]。綜合性創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)通過強(qiáng)調(diào)科學(xué)問題熱點(diǎn)引領(lǐng)和學(xué)生自主設(shè)計(jì),學(xué)生通過比較MeJA誘導(dǎo)梨果實(shí)抗青霉病的效應(yīng)及對(duì)青霉病菌(Penicillium expansum)的抑菌作用差異,逐步將科研成果引入到實(shí)驗(yàn)教學(xué)中,激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)專業(yè)知識(shí)興趣,培養(yǎng)創(chuàng)新思維和創(chuàng)新能力,為學(xué)生科研實(shí)驗(yàn)和畢業(yè)設(shè)計(jì)奠定基礎(chǔ)。

    2.綜合性創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)教學(xué)設(shè)計(jì)

    2.1實(shí)驗(yàn)材料

    試驗(yàn)用果:“翠冠”梨果實(shí)采自江西省峽江縣金坪鄉(xiāng)果園,于當(dāng)日采摘后放置于實(shí)驗(yàn)室,挑選無(wú)病蟲害、大小統(tǒng)一的果實(shí),放置24h充分散去田間熱后用0.1%次氯酸鈉溶液浸泡果實(shí)1~2min消毒后用自來(lái)水沖洗干凈,室溫下晾干后保鮮袋單果套袋,入庫(kù)備用(冷庫(kù)溫度4~5℃)。

    供試菌株:擴(kuò)展青霉(P.expansum),由江西農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病理實(shí)驗(yàn)室提供,-80℃保存,試驗(yàn)前培養(yǎng)5~7d,用無(wú)菌水洗脫孢子,經(jīng)無(wú)菌脫脂棉過濾后用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),配置濃度為1.0×106 spores /mL孢子懸浮液,備用。

    供試試劑:茉莉酸甲酯(Methyl jasmonate,MeJA),購(gòu)自美國(guó)Sigma公司,先使用微量0.1% Tween80和少許乙醇混合均勻,后加無(wú)菌水配置為濃度1000 μL/L的MeJA溶液;異羥肟酸(Salicyhydroxamic acid,SHAM,茉莉酸生物合成合成抑制劑),購(gòu)自美國(guó)Sigma公司,先溶于95%乙醇,再用含0.1% Tween 80的無(wú)菌水配置成1000 μL/LSHAM備用;CHI活性和GLU活性測(cè)定采用試劑盒(Solarbio,北京,中國(guó)),乙酸-乙酸鈉緩沖液(含EDTA、β-巰基乙醇)。

    2.2 實(shí)驗(yàn)方法

    2.2.1 MeJA對(duì)P. expansum的抑菌活性

    采用牛津杯法測(cè)定MeJA對(duì)P.expansum的抑制作用。取6 mL供試菌株孢子懸浮液加入54mL溫度約45℃左右PDA培養(yǎng)基中,搖勻,倒入無(wú)菌培養(yǎng)皿制成含青霉菌平板。待平板凝固后,在培養(yǎng)皿中心放置無(wú)菌牛津杯(直徑為7mm),取100μL濃度為10μmol/L、經(jīng)0.22μm細(xì)菌微孔濾膜過濾的MeJA溶液注入牛津杯中,每個(gè)處理重復(fù)3次,置25±1℃恒溫培養(yǎng)箱逐日觀察記錄抑菌圈大小。對(duì)照組用等量含0.1% Tween80無(wú)菌水。

    2.2.2 MeJA誘導(dǎo)梨果實(shí)抗青霉病效應(yīng)

    將待處理果實(shí)置于熏蒸盒(體積6L)內(nèi),中央放置滅菌濾紙,將適量 MeJA滴在滅菌濾紙上使盒內(nèi)MeJA濃度達(dá)到10μmol/L,迅速密封塑料盒,對(duì)照組用含0.1%Tween80無(wú)菌水,另用100μmol/L的SHAM溶液噴施在果實(shí)表面,于25℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)36h,在果實(shí)孔內(nèi)注入20μL1.0×106 spores/mL青霉孢子懸浮液。每處理10個(gè)果,3次重復(fù)。以上處理后逐日觀察梨果實(shí)發(fā)病情況,采用十字交叉法測(cè)量病斑直徑,按以下公式計(jì)算誘導(dǎo)效果:誘導(dǎo)效果=(對(duì)照病斑直徑-處理組病斑直徑)/對(duì)照病斑直徑×100%。

    2.2.3 MeJ處理對(duì)梨果實(shí)CHI和GLU活性的影響

    試驗(yàn)設(shè)5組處理:CK處理組;10、100和1000 μmol/L MeJA處理組;100 μmol/L SHAM處理組。其他方法同2.2.2,每組處理10個(gè)果,每組3次重復(fù)。接種后第96 h取病健交界處果肉,液氮迅速冷凍置于-80℃超低溫箱保存,待用。根據(jù)曹建康等方法稍微改進(jìn),提取CHI和GLU粗酶液,采用試劑盒(Solarbio,北京,中國(guó))測(cè)定其活性。

    2.2.4 數(shù)據(jù)分析

    試驗(yàn)數(shù)據(jù)利用Excel2003和SPSS16.0 統(tǒng)計(jì)分析,用單因素方差比較統(tǒng)計(jì)各處理平均值的差異,Duncan 氏新復(fù)極差法(Duncans new multiple range test)分析各處理間的差異顯著性。

    3.綜合性創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

    3.1 MeJA對(duì)P. expansum的抑菌活性

    培養(yǎng)5 d后MeJA對(duì)青霉病菌的抑制作用,與對(duì)照相比,濃度為10 μmol/L MeJA的牛津杯周圍無(wú)抑菌圈。通過抑菌活性實(shí)驗(yàn),學(xué)生掌握了PDA培養(yǎng)基的配制和牛津杯法測(cè)定MeJA對(duì)P. expansum的抑菌方法,逐步熟悉園藝植物病理學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)技能。

    3.2 MeJA誘導(dǎo)梨果實(shí)抗青霉病的效應(yīng)

    不同濃度MeJA處理對(duì)梨果實(shí)抗青霉病誘導(dǎo)效應(yīng)因濃度不同而各異。10和100μmol/L MeJA處理后誘導(dǎo)效應(yīng)分別為3.45%和14.59%(P <0.05)。

    3.3 MeJA處理對(duì)梨果實(shí)病程相關(guān)蛋白活性的影響

    10和100 μmol/L濃度MeJA處理組均顯著提高了梨果實(shí)CHI活性,分別比對(duì)照處理提高了11.02%和45.24%。1000 μmol/L MeJA處理組則抑制了CHI活性,為對(duì)照組的85.17%(P <0.05)。100 μmol/L MeJA處理組GLU活性最高,為對(duì)照組的1.46倍,而10和100 μmol/L處理之間無(wú)顯著性差異(P <0.05)。

    4 .綜合性創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)教學(xué)設(shè)計(jì)

    依托外源物質(zhì)誘導(dǎo)果實(shí)抗病的研究熱點(diǎn)問題,構(gòu)建MeJA誘導(dǎo)梨果實(shí)抗青霉病的綜合性創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)課,主要教學(xué)設(shè)計(jì)如下:第一,課前準(zhǔn)備——指導(dǎo)教師引導(dǎo)學(xué)生逐步熟悉實(shí)驗(yàn)課程的教學(xué)目標(biāo)和主要內(nèi)容后,每組4~5人查找果實(shí)采后誘導(dǎo)抗病相關(guān)文獻(xiàn),以組為單位撰寫可行性實(shí)驗(yàn)計(jì)劃,初擬創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和方案,指導(dǎo)教師提出修改意見和建議;第二,課中實(shí)施——課時(shí)總計(jì)8學(xué)時(shí),其中2學(xué)時(shí)準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)材料(PDA、病原菌、果實(shí)預(yù)處理),3學(xué)時(shí)完成MeJA-病原菌-果實(shí)三者互作處理(接種、取樣),3學(xué)時(shí)(病情統(tǒng)計(jì)、GLU和CHI測(cè)定,結(jié)果分析),各組同學(xué)在實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)老師協(xié)助下不斷完善實(shí)驗(yàn)方案,學(xué)習(xí)使用儀器設(shè)備和統(tǒng)計(jì)軟件;第三,課后討論:各組分析討論后小結(jié)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,分析實(shí)驗(yàn)成功和失敗原因,如病原菌污染、接種不發(fā)病以及酶活性單位差異等問題,最后指導(dǎo)教師總結(jié)分析各組實(shí)驗(yàn)結(jié)果,學(xué)生結(jié)合資料查閱,比較MeJA誘導(dǎo)梨果實(shí)抗青霉病的效應(yīng)和病程相關(guān)蛋白活性差異,分析MeJA誘導(dǎo)抗病的可能途徑,撰寫實(shí)驗(yàn)研究報(bào)告。

    參考文獻(xiàn):

    [1]賈永霞.創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)教學(xué)的探究與實(shí)踐[J].實(shí)驗(yàn)室研究與探索,2018,37(12):206-208.

    [2]賈智偉,賀科學(xué),黃亞飛.大學(xué)生創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)計(jì)劃的實(shí)施實(shí)踐與思考[J].教育現(xiàn)代化,2019(63):65-68.

    [3]蔣敏,李會(huì),史勁松.基于科研成果的藥理學(xué)教學(xué)實(shí)驗(yàn)探索[J].實(shí)驗(yàn)室研究與探索,2020,39(1):217-220.

    [4]王益林,文輝忠,舒馨,等.鐵含量測(cè)定的研究型教學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與實(shí)踐[J].實(shí)驗(yàn)室研究與探索,2020,39(3):194-197.

    [5]張維一,畢陽(yáng).果蔬采后病害與控制[M].農(nóng)業(yè)出版社, 1996.

    [6]田世平,產(chǎn)祝龍.誘導(dǎo)抗性在果蔬采后病害防治中的研究與應(yīng)用[J].植物病理學(xué)報(bào),2004,34(5):385-394.

    [7]薛仁鎬, 金圣愛. 茉莉酸甲酯:一種重要的植物信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子[J].生物技術(shù)通訊,2006,17(6):985-988.

    [8]崔席席,李富軍,張新華,等.茉莉酸甲酯調(diào)控果蔬采后品質(zhì)的機(jī)制及應(yīng)用研究進(jìn)展[J].食品科學(xué),2019,40(13):304-311.

    [9]陳三鳳,李季倫.幾丁質(zhì)酶研究歷史和發(fā)展前景[J]. 微生物學(xué)通報(bào),1993,20(3):156-160.

    [10]邢全華,王斌.植物葡聚糖酶基因抗病作用的研究進(jìn)展[J].遺傳,2002,24(6):715-720.

    [11]李春娟,單世華,許婷婷,等.幾丁質(zhì)酶和β-1,3-葡聚糖酶基因研究進(jìn)展[J]. 生物技術(shù)通訊, 2004,15(5):502-505.

    [12]王雷.不同激發(fā)子處理對(duì)甜櫻桃果實(shí)采后青霉病的抑制作用及其機(jī)理研究[D].南京農(nóng)業(yè)大學(xué),2015.

    [13]王英珍,程瑞,張紹鈴,等.采前茉莉酸甲酯(MeJA)處理對(duì)梨果實(shí)抗病性的影響[J].果樹學(xué)報(bào),2016,33(6):694-700.

    [14]徐小彪, 曲雪艷, 鄒菊花,等. 高等農(nóng)業(yè)院校植物生產(chǎn)類本科專業(yè)實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革的探討[J].高等農(nóng)業(yè)教育,2010(7):67-69.

    [15]朱昌蘭, 李保同, 徐小彪,等. 植物生產(chǎn)類專業(yè)創(chuàng)新型人才培養(yǎng)模式探索——基于江西農(nóng)業(yè)大學(xué)國(guó)家級(jí)實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心的改革實(shí)踐[J]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)教育, 2012(3):71-74.

    作者簡(jiǎn)介:

    向妙蓮(1977年10月-),女,苗族,湖南綏寧人,博士,副教授,研究方向:植物寄主與病原物互作。

    陳明(1979年8月-),男,漢族,江西武寧人,博士,副教授,研究方向:果實(shí)采后生物學(xué)。

    猜你喜歡
    綜合實(shí)驗(yàn)科研成果創(chuàng)新能力
    科研成果轉(zhuǎn)化
    高中數(shù)學(xué)課堂教學(xué)中創(chuàng)新能力的培養(yǎng)
    創(chuàng)新能力培養(yǎng)視角下的無(wú)機(jī)化學(xué)教學(xué)研究
    化工管理(2021年7期)2021-05-13 00:44:44
    中國(guó)科研成果震撼全球
    推進(jìn)軟件產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新能力提升
    加強(qiáng)醫(yī)療科技自主創(chuàng)新和科研成果轉(zhuǎn)化
    基于創(chuàng)新能力培養(yǎng)的高職音樂教育改革探討
    北方音樂(2017年4期)2017-05-04 03:40:28
    本科生《醫(yī)學(xué)免疫學(xué)》研討型教學(xué)方法的探索
    審批復(fù)雜 科研成果落地難
    數(shù)字化語(yǔ)音存儲(chǔ)于回放綜合實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)設(shè)計(jì)
    欧美日本中文国产一区发布| 久久性视频一级片| 久热爱精品视频在线9| 香蕉久久夜色| 日本三级黄在线观看| 国产成人av教育| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 操美女的视频在线观看| 日本vs欧美在线观看视频| 亚洲成a人片在线一区二区| 国产区一区二久久| 十分钟在线观看高清视频www| 高清av免费在线| 级片在线观看| 中文字幕最新亚洲高清| 制服人妻中文乱码| 校园春色视频在线观看| 亚洲成国产人片在线观看| 免费人成视频x8x8入口观看| 老司机午夜福利在线观看视频| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 制服诱惑二区| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 久久人妻熟女aⅴ| 国产精品九九99| 国产精品免费一区二区三区在线| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 久久精品国产清高在天天线| 99热只有精品国产| 精品一区二区三卡| 天堂影院成人在线观看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 精品国产一区二区久久| 亚洲专区字幕在线| 成人国语在线视频| 亚洲人成电影免费在线| 午夜精品久久久久久毛片777| 成人黄色视频免费在线看| 久久久久国内视频| 最近最新免费中文字幕在线| 亚洲五月天丁香| 满18在线观看网站| 天堂中文最新版在线下载| 欧美日韩乱码在线| 大陆偷拍与自拍| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 免费在线观看亚洲国产| 色播在线永久视频| 午夜免费成人在线视频| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 老司机在亚洲福利影院| av天堂在线播放| 天堂√8在线中文| 一边摸一边抽搐一进一小说| 高清在线国产一区| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 国产精品九九99| 男人的好看免费观看在线视频 | 国产精品国产av在线观看| 欧美激情高清一区二区三区| 国产97色在线日韩免费| 老司机深夜福利视频在线观看| 三上悠亚av全集在线观看| 18禁国产床啪视频网站| 久久久久久久久久久久大奶| 婷婷丁香在线五月| 色老头精品视频在线观看| 乱人伦中国视频| 老汉色av国产亚洲站长工具| 99精品久久久久人妻精品| 欧美久久黑人一区二区| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 亚洲国产精品999在线| videosex国产| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 亚洲一区中文字幕在线| 9191精品国产免费久久| 亚洲视频免费观看视频| 99国产极品粉嫩在线观看| 亚洲少妇的诱惑av| 国产一区在线观看成人免费| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 免费在线观看完整版高清| 亚洲男人天堂网一区| 欧美日本中文国产一区发布| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 国产精品日韩av在线免费观看 | 99国产极品粉嫩在线观看| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 亚洲精品一二三| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 精品国产一区二区久久| 精品无人区乱码1区二区| 日本vs欧美在线观看视频| 校园春色视频在线观看| 淫妇啪啪啪对白视频| 亚洲国产欧美网| 亚洲av五月六月丁香网| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 99riav亚洲国产免费| 国产精华一区二区三区| 一边摸一边抽搐一进一小说| 波多野结衣一区麻豆| 热99re8久久精品国产| 亚洲一区高清亚洲精品| 老司机福利观看| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 日韩国内少妇激情av| 超碰97精品在线观看| 日本五十路高清| 国产又色又爽无遮挡免费看| 热re99久久精品国产66热6| 久久久久国内视频| 视频区欧美日本亚洲| 成年女人毛片免费观看观看9| 午夜久久久在线观看| 亚洲av电影在线进入| 国产精品综合久久久久久久免费 | 日韩av在线大香蕉| 日韩国内少妇激情av| 热re99久久国产66热| 免费日韩欧美在线观看| 欧美一区二区精品小视频在线| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 国产一区二区激情短视频| 丝袜人妻中文字幕| 久久九九热精品免费| 国产成人欧美在线观看| 欧美日韩福利视频一区二区| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 久久这里只有精品19| 日本vs欧美在线观看视频| 国产成人啪精品午夜网站| 亚洲av成人一区二区三| 成人特级黄色片久久久久久久| 国产亚洲精品第一综合不卡| 少妇被粗大的猛进出69影院| 他把我摸到了高潮在线观看| 国产精品免费一区二区三区在线| 十八禁网站免费在线| 免费高清在线观看日韩| 亚洲精华国产精华精| 久9热在线精品视频| 欧美一级毛片孕妇| 怎么达到女性高潮| 一本大道久久a久久精品| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| av天堂在线播放| 亚洲激情在线av| 久久久精品欧美日韩精品| 日韩高清综合在线| 午夜成年电影在线免费观看| 国产一区二区三区视频了| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 久久九九热精品免费| 亚洲精品久久午夜乱码| 亚洲自拍偷在线| 国产成人精品久久二区二区91| 亚洲男人的天堂狠狠| 国产精品1区2区在线观看.| 他把我摸到了高潮在线观看| 日本一区二区免费在线视频| 757午夜福利合集在线观看| 男人舔女人下体高潮全视频| 中文欧美无线码| 日韩大尺度精品在线看网址 | 在线视频色国产色| 大香蕉久久成人网| 亚洲欧美一区二区三区久久| 婷婷六月久久综合丁香| 成年人黄色毛片网站| 99精品在免费线老司机午夜| 在线观看一区二区三区激情| 高清毛片免费观看视频网站 | 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 18美女黄网站色大片免费观看| 久久热在线av| 亚洲少妇的诱惑av| 69av精品久久久久久| 伦理电影免费视频| 好男人电影高清在线观看| 欧美激情高清一区二区三区| 精品第一国产精品| 男女午夜视频在线观看| 国产精品 国内视频| 久久午夜综合久久蜜桃| 新久久久久国产一级毛片| 狠狠狠狠99中文字幕| svipshipincom国产片| 亚洲欧美激情在线| 亚洲av电影在线进入| 99久久综合精品五月天人人| 又紧又爽又黄一区二区| 亚洲av电影在线进入| 精品午夜福利视频在线观看一区| 久热爱精品视频在线9| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 精品国产一区二区久久| 亚洲av五月六月丁香网| 成人免费观看视频高清| 国产成人啪精品午夜网站| 精品国产亚洲在线| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 天堂影院成人在线观看| 免费看a级黄色片| 免费人成视频x8x8入口观看| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 国产精品久久久av美女十八| tocl精华| 国产精品国产高清国产av| 欧美激情 高清一区二区三区| 免费在线观看黄色视频的| 精品久久久精品久久久| 亚洲成人国产一区在线观看| 国产区一区二久久| 丰满饥渴人妻一区二区三| av有码第一页| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 免费日韩欧美在线观看| 日本黄色视频三级网站网址| 最新在线观看一区二区三区| av天堂久久9| 亚洲在线自拍视频| 在线国产一区二区在线| 波多野结衣高清无吗| 黄色视频,在线免费观看| 成人国语在线视频| 亚洲av五月六月丁香网| 在线永久观看黄色视频| 夜夜爽天天搞| 国产精品永久免费网站| 国产精品1区2区在线观看.| av欧美777| 大型av网站在线播放| 老司机午夜福利在线观看视频| 激情在线观看视频在线高清| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲一区二区三区欧美精品| 性欧美人与动物交配| 久久青草综合色| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 国产精品国产av在线观看| 亚洲精华国产精华精| www.精华液| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 午夜福利在线观看吧| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 又黄又爽又免费观看的视频| 婷婷六月久久综合丁香| 国产黄色免费在线视频| 高清在线国产一区| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 1024香蕉在线观看| 18美女黄网站色大片免费观看| av天堂久久9| 精品国产亚洲在线| 十八禁网站免费在线| 日韩有码中文字幕| 日日爽夜夜爽网站| 久久久久久人人人人人| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 极品人妻少妇av视频| 一本大道久久a久久精品| 欧美黑人精品巨大| av超薄肉色丝袜交足视频| 亚洲avbb在线观看| 九色亚洲精品在线播放| 日韩欧美三级三区| 欧美日韩福利视频一区二区| 香蕉久久夜色| 免费av毛片视频| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 国产精品一区二区免费欧美| 欧美成人午夜精品| 老汉色av国产亚洲站长工具| 日本一区二区免费在线视频| 一级毛片女人18水好多| 成人国产一区最新在线观看| 亚洲九九香蕉| 欧美丝袜亚洲另类 | 欧美日本亚洲视频在线播放| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 亚洲欧美精品综合久久99| 久久青草综合色| av国产精品久久久久影院| 黄色a级毛片大全视频| 91大片在线观看| 高清在线国产一区| 国产片内射在线| 91在线观看av| 99re在线观看精品视频| 嫁个100分男人电影在线观看| 亚洲成国产人片在线观看| 国产熟女xx| 一区福利在线观看| 视频在线观看一区二区三区| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 老熟妇仑乱视频hdxx| av欧美777| a在线观看视频网站| 国产成人免费无遮挡视频| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 丰满的人妻完整版| 俄罗斯特黄特色一大片| 亚洲五月婷婷丁香| 中出人妻视频一区二区| 一级黄色大片毛片| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 很黄的视频免费| 色婷婷久久久亚洲欧美| 99热只有精品国产| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 亚洲中文字幕日韩| 国产一区二区在线av高清观看| 制服诱惑二区| www国产在线视频色| 国产精品一区二区精品视频观看| 亚洲全国av大片| 亚洲成人免费电影在线观看| 国产视频一区二区在线看| 亚洲精品成人av观看孕妇| 一级黄色大片毛片| 可以在线观看毛片的网站| 人人澡人人妻人| 亚洲情色 制服丝袜| 最新美女视频免费是黄的| 成人影院久久| 最近最新中文字幕大全电影3 | 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 国产片内射在线| 最近最新中文字幕大全电影3 | 免费观看精品视频网站| 国产成人av激情在线播放| 人人澡人人妻人| 脱女人内裤的视频| 亚洲色图综合在线观看| 黄色毛片三级朝国网站| 热re99久久国产66热| 久久精品国产综合久久久| 午夜福利影视在线免费观看| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国产免费男女视频| 曰老女人黄片| 黄色视频,在线免费观看| 国产亚洲欧美在线一区二区| 90打野战视频偷拍视频| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 中文字幕人妻丝袜制服| 午夜亚洲福利在线播放| 欧美成人性av电影在线观看| 夜夜爽天天搞| 青草久久国产| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 色婷婷av一区二区三区视频| www国产在线视频色| 国产亚洲欧美精品永久| 国产av一区在线观看免费| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 中文字幕最新亚洲高清| 亚洲一区高清亚洲精品| 在线播放国产精品三级| 黄片播放在线免费| www国产在线视频色| 色婷婷av一区二区三区视频| 久久精品91无色码中文字幕| a级毛片在线看网站| 欧美乱妇无乱码| 在线观看免费午夜福利视频| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 成人三级做爰电影| 最近最新中文字幕大全电影3 | 一级毛片精品| 午夜福利影视在线免费观看| 欧美日韩av久久| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 亚洲国产精品合色在线| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲精品在线观看二区| 精品国产一区二区三区四区第35| 日韩欧美三级三区| 大陆偷拍与自拍| 免费搜索国产男女视频| 国产av又大| www国产在线视频色| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 成人精品一区二区免费| 色婷婷久久久亚洲欧美| 久久久久久免费高清国产稀缺| 午夜免费成人在线视频| av视频免费观看在线观看| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 欧美激情高清一区二区三区| a在线观看视频网站| 很黄的视频免费| 久久久久精品国产欧美久久久| 99国产精品99久久久久| 欧美日韩av久久| 大型黄色视频在线免费观看| 亚洲片人在线观看| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 亚洲一码二码三码区别大吗| 欧美日韩视频精品一区| 老司机午夜福利在线观看视频| 国产精品一区二区免费欧美| 午夜福利影视在线免费观看| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 欧美av亚洲av综合av国产av| 国产精品二区激情视频| 一进一出抽搐动态| 精品国产乱子伦一区二区三区| 9191精品国产免费久久| 女同久久另类99精品国产91| 久久人人97超碰香蕉20202| 日本精品一区二区三区蜜桃| 精品熟女少妇八av免费久了| 91九色精品人成在线观看| 1024香蕉在线观看| x7x7x7水蜜桃| 国产精品免费视频内射| 成人亚洲精品一区在线观看| 我的亚洲天堂| 国产不卡一卡二| 老司机午夜十八禁免费视频| 黄色成人免费大全| 国产av精品麻豆| 亚洲人成77777在线视频| 91麻豆av在线| 成人国产一区最新在线观看| 老鸭窝网址在线观看| 国产在线精品亚洲第一网站| 最好的美女福利视频网| 男人的好看免费观看在线视频 | 亚洲专区国产一区二区| av有码第一页| 在线播放国产精品三级| 三级毛片av免费| 老司机亚洲免费影院| 国产成年人精品一区二区 | 99国产极品粉嫩在线观看| www.www免费av| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 天堂俺去俺来也www色官网| 在线观看免费高清a一片| 日韩精品免费视频一区二区三区| 久久久久国内视频| 欧美国产精品va在线观看不卡| 十八禁网站免费在线| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 一边摸一边做爽爽视频免费| 国产精品av久久久久免费| 级片在线观看| 波多野结衣av一区二区av| 男人操女人黄网站| 欧美精品亚洲一区二区| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 91老司机精品| 男人舔女人下体高潮全视频| 精品一区二区三区四区五区乱码| 久久精品91蜜桃| 亚洲av熟女| 91在线观看av| 长腿黑丝高跟| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 91字幕亚洲| 91国产中文字幕| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 90打野战视频偷拍视频| 国产在线精品亚洲第一网站| 日本五十路高清| 女警被强在线播放| 欧美日本亚洲视频在线播放| 美女扒开内裤让男人捅视频| 宅男免费午夜| 国产精品电影一区二区三区| 黑丝袜美女国产一区| 成人永久免费在线观看视频| 免费搜索国产男女视频| 天堂俺去俺来也www色官网| 男人操女人黄网站| 亚洲精品在线观看二区| 精品欧美一区二区三区在线| 在线永久观看黄色视频| xxxhd国产人妻xxx| 99精国产麻豆久久婷婷| 欧美不卡视频在线免费观看 | 制服人妻中文乱码| 亚洲成人免费av在线播放| 久99久视频精品免费| 亚洲国产精品合色在线| 国产黄a三级三级三级人| 中文字幕色久视频| 12—13女人毛片做爰片一| 日韩视频一区二区在线观看| 高清av免费在线| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 91国产中文字幕| a级毛片黄视频| 精品国产乱码久久久久久男人| 啦啦啦在线免费观看视频4| 午夜免费观看网址| 91麻豆av在线| 久久人人精品亚洲av| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 不卡一级毛片| 丝袜人妻中文字幕| 欧美精品亚洲一区二区| 久久精品国产亚洲av高清一级| 美女福利国产在线| 中文字幕人妻丝袜一区二区| www.熟女人妻精品国产| 亚洲国产精品999在线| av福利片在线| 12—13女人毛片做爰片一| 中文欧美无线码| 国产精品亚洲一级av第二区| 国产av精品麻豆| 男男h啪啪无遮挡| www.999成人在线观看| 校园春色视频在线观看| 国产一区在线观看成人免费| 成年女人毛片免费观看观看9| 村上凉子中文字幕在线| 视频区图区小说| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 十分钟在线观看高清视频www| 欧美黑人精品巨大| 一级毛片女人18水好多| 精品国产乱码久久久久久男人| 九色亚洲精品在线播放| 99精品久久久久人妻精品| 久久国产乱子伦精品免费另类| 午夜成年电影在线免费观看| 久久精品影院6| 精品国产国语对白av| 交换朋友夫妻互换小说| 亚洲一区二区三区色噜噜 | 亚洲熟女毛片儿| 国产成人av教育| 美女午夜性视频免费| 国产av一区在线观看免费| 精品人妻在线不人妻| 国产亚洲欧美精品永久| 欧美在线黄色| 成人亚洲精品av一区二区 | 老司机午夜福利在线观看视频| 国产亚洲精品第一综合不卡| 国产区一区二久久| 色在线成人网| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | www国产在线视频色| 亚洲美女黄片视频| 操美女的视频在线观看| 免费看a级黄色片| 99香蕉大伊视频| 老司机在亚洲福利影院| 国产一区二区在线av高清观看| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 亚洲欧美激情在线| 丝袜美腿诱惑在线| 大码成人一级视频| 欧美日韩黄片免| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | √禁漫天堂资源中文www| 欧美乱色亚洲激情| 99久久人妻综合| 美女 人体艺术 gogo| 嫩草影视91久久| 视频区图区小说| 精品电影一区二区在线| bbb黄色大片| 亚洲专区中文字幕在线| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 中文字幕人妻丝袜制服| 国产精品久久久久成人av| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 欧美性长视频在线观看| 久久精品国产亚洲av高清一级| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 亚洲七黄色美女视频| 欧美日韩av久久| 这个男人来自地球电影免费观看| 妹子高潮喷水视频| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 久久人人97超碰香蕉20202| 亚洲欧美激情综合另类| 国产成人系列免费观看| 日本三级黄在线观看| 国产精品免费一区二区三区在线| 久久久久久久久免费视频了| 老汉色av国产亚洲站长工具| 一级毛片高清免费大全| 久久久精品欧美日韩精品| 热99国产精品久久久久久7| 91av网站免费观看| 精品福利观看| 久久这里只有精品19| 亚洲精品一二三| 亚洲专区字幕在线| 真人一进一出gif抽搐免费| 在线观看一区二区三区激情| 国产在线精品亚洲第一网站| 性色av乱码一区二区三区2| 九色亚洲精品在线播放| 操出白浆在线播放| 国产免费av片在线观看野外av| netflix在线观看网站| a在线观看视频网站|