黃藤素誘導(dǎo)自噬緩解小鼠急性肺損傷的作用研究

皮 娜，王應(yīng)霞，尹健彬，何 琴，鐘 燕，張 旋

(1.昆明醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院暨云南省天然藥物藥理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 昆明 650500；2.昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科，云南 昆明 650032；3.楚雄州人民醫(yī)院，云南 楚雄 675000)

急性肺損傷 (acute lung injury，ALI)是臨床常見急危重癥之一，其發(fā)病機(jī)制錯綜復(fù)雜，有著較高的病死率。常見原因是由革蘭陰性桿菌感染，活化炎癥細(xì)胞，釋放出大量炎癥因子，引起急性肺部炎癥[1]。ALI會引起肺水腫，使炎癥細(xì)胞浸潤，炎性細(xì)胞因子分泌顯著增多，肺泡壁增厚等[2]細(xì)胞組織病理學(xué)改變。ALI是許多疾病共同的病理反應(yīng)，新型冠狀病毒肺炎(COVID-19)的發(fā)病機(jī)制與ALI的發(fā)生發(fā)展息息相關(guān)[3]。臨床上常采用機(jī)械通氣、激素和抗炎藥物治療，存在著明顯缺陷。自噬(autophagy)普遍存在于生物體的發(fā)育和老化過程中，多表現(xiàn)為真核細(xì)胞清除自身多余或受損的細(xì)胞器。生理狀態(tài)下，細(xì)胞可通過自噬實(shí)現(xiàn)物質(zhì)重新利用和自身不斷更新，保證新陳代謝等基本生命活動的正常進(jìn)行，與多器官疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[4]。自噬在ALI的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要的作用，一方面適度的自噬能抑制炎性因子的釋放，另一方面自噬不足或過度自噬能加重細(xì)胞損傷[5]。因此對自噬的調(diào)節(jié)可能成為治療ALI的新策略。

黃藤素是從防己科植物黃藤(Fibraurearecisapierre)的根部以及莖中經(jīng)過工藝提取純化后所得的單一組分生物堿，有著廣泛的藥理作用，包括抗癌、抗氧化、抗炎、神經(jīng)保護(hù)、抗菌、抗病毒、調(diào)節(jié)血脂等多種功效，被稱為“植物抗生素”[6]。前期研究發(fā)現(xiàn),黃藤素對急性肺損傷炎癥具有保護(hù)作用[7]，然而其抗ALI具體的作用機(jī)制及對自噬的影響尚不清楚。目前，越來越多的研究報告了自噬在急性肺損傷的重要性。有報道稱ALI與自噬有關(guān)，自噬會緩解炎性反應(yīng)，從而保護(hù)脂多糖誘導(dǎo)的肺損傷,并且上調(diào)自噬水平會保護(hù)急性肺損傷[8]。因此本研究通過LPS誘導(dǎo)ALI小鼠模型，觀察黃藤素對肺組織病理形態(tài)學(xué)HE染色和NF-κB p65免疫組織化學(xué)染色的影響，計算肺系數(shù)，檢測小鼠BALF中總蛋白濃度和炎癥細(xì)胞因子TNF-α、IL-8和IL-1β含量，檢測肺組織NF-κB p65、Beclin1和LC-3蛋白表達(dá)，觀察黃藤素對急性肺損傷肺泡炎、肺泡毛細(xì)血管通透性、相關(guān)炎癥細(xì)胞因子的分泌情況及自噬蛋白的表達(dá)情況，評價黃藤素對ALI的保護(hù)作用及相關(guān)作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物SPF級昆明小鼠72只(♂，20±2 g)，昆明醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物學(xué)部提供，許可證號：SCSK(滇K2015-0002)。

1.2 試劑黃藤素(鹽酸巴馬汀)(上海金穗生物公司，批號：Z16J10X79792)；地塞米松磷酸鈉注射液(西南藥業(yè)公司，貨號：H50021463)；脂多糖(索萊寶公司，批號：078M4039V)；IL-1β 試劑盒(Invitrogen公司，貨號：BMS6002)、TNF-α試劑盒(Invitrogen公司，貨號：BMS607/3)；IL-8試劑盒(欣博盛公司，貨號：EMC104)；蘇木精-伊紅染色液(邁威生物科技公司，批號：190815)；GAPDH(Proteintech公司，批號：10494-1-AP)；HRP Ig G(H+L)抗體(Proteintech公司，批號：20000243)；NF-κB p65抗體(CST公司，批號：9)；LC-3、Beclin1抗體(CST公司)。

1.3 儀器Nikon DS-Ri2自動顯微鏡(日本Nikon公司)；Amersham Imager 600超靈敏多功能成像儀(美國GE公司)；Scientific Multiskan GO酶標(biāo)儀(美國Thermo scientific公司)；Bio-rad mini Protein 3電泳儀(Bio-rad公司)；微量進(jìn)樣器(50ul)(上海安亭微量進(jìn)樣器廠)；Count star 自動細(xì)胞計數(shù)儀(上海睿鈺生物科技有限公司)。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1實(shí)驗(yàn)設(shè)計 小鼠正常飼養(yǎng)1周，按體重編號隨機(jī)分組，正常(NS)組、模型(LPS)組、黃藤素低(PaH-L)、中(PaH-M)、高(PaH-H)(5 mg·kg-1、10 mg·kg-1、20 mg·kg-1)劑量組，地塞米松(DXM)組(2.5 mg·kg-1)，每組12只。NS組和LPS 組腹腔注射生理鹽水，黃藤素給藥組腹腔注射不同劑量的黃藤素，DXM組腹腔注射地塞米松磷酸鈉注射液，連續(xù)預(yù)防給藥3 d，最后一天給藥2 h后，腹腔注射水合氯醛麻醉小鼠，切開頸部皮膚，暴露氣管，使用微量進(jìn)樣器對NS組的氣管滴注NS，其余各組氣管滴注 LPS溶液(5 mg·kg-1)，建立小鼠急性肺損傷模型。

1.4.2樣品采集與處理 每組小鼠均分為2批，氣管滴注LPS 24 h后稱質(zhì)量，深度麻醉小鼠。第1批取肺組織，記錄肺質(zhì)量，分取左肺于10%中性福爾馬林溶液中固定，用于病理學(xué)染色觀察；右肺快速凍存液氮，用于Western blot檢測蛋白表達(dá)。第2批小鼠進(jìn)行支氣管肺泡灌洗，每次抽洗勻速進(jìn)行，收集灌洗液，離心，分裝上清，ELISA試劑盒檢測炎癥因子含量，BCA試劑盒檢測總蛋白濃度，細(xì)胞沉淀重懸，進(jìn)行總細(xì)胞計數(shù)和細(xì)胞涂片HE染色。

1.4.3計算肺系數(shù) 取材前稱量小鼠的體質(zhì)量，深度麻醉小鼠，取出全肺，用潮濕棉花吸去殘血，準(zhǔn)確稱量肺重，根據(jù)公式(肺系數(shù)/%=肺濕重/體重×100%)計算肺系數(shù)。

1.4.4BALF總蛋白濃度 取BALF上清，按BCA試劑盒說明書操作，測定吸光度(OD)值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線對總蛋白濃度進(jìn)行定量。

1.4.5ELISA法檢測BALF中TNF-α、IL-8和IL-1β含量 按試劑盒說明書操作對BALF中TNF-α、IL-8和IL-1β的含量進(jìn)行檢測并定量。

1.4.6BALF總細(xì)胞計數(shù)及細(xì)胞涂片HE染色 BALF沉淀加入等體積PBS重懸，取20 μL計數(shù)總細(xì)胞數(shù)，剩余重懸液取75 μL進(jìn)行涂片，晾干，蘇木精-伊紅染色，光學(xué)顯微鏡(200×)觀察細(xì)胞染色情況，采集圖像。

1.4.7HE染色觀察肺組織病理變化 取肺組織于10%中性福爾馬林溶液固定，脫水、包埋、切片，H&E染色，鏡檢并采集圖像。按照文獻(xiàn)Szapiel[9]法對肺泡炎進(jìn)行評分。

1.4.8肺組織NF-κB p65蛋白免疫組化分析 肺組織切片，經(jīng)常規(guī)脫蠟，PBS沖洗，阻斷內(nèi)源性過氧化氫酶，抗原修復(fù)，加一抗NF-κB p65(1 ∶50)，4 ℃孵育過夜，PBS洗滌后滴加二抗，DAB染色，蘇木精染色，返藍(lán)，脫水透明，封片晾干，最后鏡檢并采集圖像。采用IHC評分方法，通過ImageJ軟件在光學(xué)顯微鏡下對組織切片按染色程度和陽性范圍進(jìn)行評分，最終以二者分?jǐn)?shù)相加作為總評分，再進(jìn)行比較。

1.4.9Western blot檢測肺組織NF-κB p65、Beclin1和LC-3蛋白表達(dá) 取肺組織加入裂解液和蛋白酶抑制劑制備組織勻漿，提取的肺組織總蛋白用BCA試劑盒進(jìn)行蛋白定量，經(jīng)過高溫使蛋白變性備用。制膠，上樣，進(jìn)行電泳分離，蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜，脫脂牛奶封閉，孵育一抗NF-κB p65、Beclin1、LC-3、GAPDH抗體，4 ℃冰箱過夜，洗滌，室溫孵育二抗，顯影，拍照。使用Image J軟件分析，以目的蛋白與GAPDH的比值作為蛋白相對表達(dá)量。

2 結(jié)果

2.1 肺系數(shù)肺系數(shù)結(jié)果顯示，與NS組比較，LPS組小鼠肺系數(shù)明顯升高(P<0.001)，其它藥物組也有不同程度的升高(P<0.01)；與LPS組比較，各給藥組肺系數(shù)均有不同程度的降低(P<0.05)，PaH-M組肺系數(shù)明顯降低(P<0.01)。結(jié)果顯示黃藤素能降低小鼠肺系數(shù)，其作用與DXM相當(dāng)。見Fig1。

Fig 1 Lung coefficient and contents of proteins in BALF (n=6)NS-normal group，LPS-lipopolysaccharide model group，PaH-L-Low doses of palmatine hydrochloride group，PaH-M-Midle doses of palmatine hydrochloride group，PaH-H-High doses of palmatine hydrochloride group，DXM-Dexamethasone positive drug group.**P<0.01，*P<0.05 vs normal group;##P<0.01，#P<0.05 vs LPS group.

2.2 BALF總蛋白濃度總蛋白濃度結(jié)果顯示，LPS組總蛋白濃度明顯升高，與NS組比較差異存在顯著性(P<0.001)；與LPS組比較，各給藥組的總蛋白濃度均明顯降低(P<0.01)，其中PaH+H組與DXM組效果相當(dāng)。結(jié)果顯示，黃藤素能明顯降低LPS誘導(dǎo)急性肺損傷小鼠中BALF總蛋白濃度。

2.3 BALF總細(xì)胞數(shù)和細(xì)胞HE染色總細(xì)胞數(shù)結(jié)果顯示，NS組總細(xì)胞數(shù)較少，與NS組比較，經(jīng)LPS處理后，LPS組總細(xì)胞數(shù)明顯增加(P<0.001)，與LPS組比較，PaH+M組與PaH+H組總細(xì)胞數(shù)明顯減少(P<0.001)；與PaH+L組比較，PaH+M組與PaH+H組總細(xì)胞數(shù)減少(P<0.05)。細(xì)胞HE染色顯示，細(xì)胞總數(shù)以LPS組最多，各治療組細(xì)胞數(shù)均較LPS組減少。結(jié)果顯示，黃藤素能降低BALF中總細(xì)胞數(shù)目的升高，有一定劑量依賴關(guān)系，PaH-H組治療效果和DXM組相當(dāng),見Fig2,3。

Fig 2 HE staining of cells (200×)(n=6)NS-normal group，LPS-lipopolysaccharide model group，PaH-L-Low doses of palmatine hydrochloride group，PaH-M-Midle doses of palmatine hydrochloride group，PaH-H-High doses of palmatine hydrochloride group，DXM-Dexamethasone positive drug group.

Fig 3 Cell counts in BALF(n=6)NS-normal group，LPS-lipopolysaccharide model group，PaH-L-Low doses of palmatine hydrochloride group，PaH-M-Midle doses of palmatine hydrochloride group，PaH-H-High doses of palmatine hydrochloride group，DXM-Dexamethasone positive drug group.**P<0.01 vs normal group；##P<0.01 vs LPS group；△P<0.05 vs PaH-L group.

2.4 ELISA檢測BALF中TNF-α、IL-Iβ與IL-8含量TNF-α、IL-1β與IL-8結(jié)果顯示，與NS組比較，LPS組TNF-α、IL-8、IL-Iβ明顯升高(P<0.001)，其它各藥物組TNF-α、IL-8和IL-1β也有不同程度的升高(P<0.05)，與LPS組比較，PaH+M組、PaH+H組與DXM組均可降低TNF-α、IL-8和IL-1β含量(P<0.05)；與PaH+L組比較，PaH+M組與PaH+H組TNF-α、IL-Iβ與IL-8含量降低(P<0.05)，PaH+H組治療效果與DXM組相當(dāng)。結(jié)果顯示，LPS可刺激TNF-α、IL-8和IL-1β因子的分泌，黃藤素治療可減少小鼠BALF中TNF-α、IL-8和IL-1β因子含量，見Fig4。

Fig 4 Contents of TNF-α,IL-1β and IL-8 in BALF (n=6)*P<0.05,**P<0.01 vs normal group；#P<0.05,##P<0.01 vs LPS group；△P<0.05,△△P<0.01 vs PaH-L group.NS-normal group，LPS-lipopolysaccharide model group，PaH-L-Low doses of palmatine hydrochloride group，PaH-M-Midle doses of palmatine hydrochloride group，PaH-H-High doses of palmatine hydrochloride group，DXM-Dexamethasone positive drug group.

2.5 肺泡炎評分HE染色結(jié)果顯示，與NS組比較，LPS組肺泡結(jié)構(gòu)破壞明顯，肺泡壁水腫、肺間質(zhì)明顯增厚(P<0.001)；與LPS組比較，PaH-L組肺泡炎程度明顯減輕(P<0.01)，PaH-M和PaH-H組肺泡結(jié)構(gòu)較為完整，肺間質(zhì)滲出減少，療效與DXM相當(dāng)(P<0.001)。結(jié)果顯示，黃藤素對LPS誘導(dǎo)的炎癥程度具有一定的改善作用。見Fig5,6。

Fig 5 HE staining of lung tissues (200×)(n=6)NS-normal group，LPS-lipopolysaccharide model group，PaH-L-Low doses of palmatine hydrochloride group，PaH-M-Midle doses of palmatine hydrochloride group，PaH-H-High doses of palmatine hydrochloride group，DXM-Dexamethasone positive drug group.

2.6 NF-κB p65免疫組織化學(xué)(IHC)染色免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，NF-κB p65陽性染色為細(xì)胞核呈棕褐色，因而當(dāng)其被活化時，其陽性表達(dá)定位在細(xì)胞核。在本研究中，IHC染色顯示，NS組肺組織NF-κB p65蛋白棕色著色淺，胞核為藍(lán)色，未見細(xì)胞核出現(xiàn)棕褐色。與NS組比較，LPS組有部分胞核被染為棕褐色且染色程度較深，陽性表達(dá)明顯，且肺泡結(jié)構(gòu)破壞明顯，肺泡塌陷，肺泡間隔增厚，炎癥細(xì)胞浸潤，可見肺內(nèi)出現(xiàn)明顯炎癥反應(yīng)，評分差異有顯著性(P<0.05)。與LPS組比較，DXM組、PaH-M組和PaH-H組棕色著色較淺，細(xì)胞核染色淺且數(shù)量明顯減少，評分差異有顯著性(P<0.05)。結(jié)果顯示黃藤素能夠抑制LPS誘導(dǎo)ALI小鼠肺組織NF-κB p65蛋白活化。見Fig7,8。

Fig 6 Histopathological score (n=6)NS-normal group，LPS-lipopolysaccharide model group，PaH-L-Low doses of palmatine hydrochloride group，PaH-M-Middle doses of palmatine hydrochloride group，PaH-H-High doses of palmatine hydrochloride group，DXM-Dexamethasone positive drug group.*P<0.05,**P<0.01 vs normal group；#P<0.05,##P<0.01 vs LPS group.

2.7 Western blot檢測肺組織NF-κB p65 、Beclin1與LC-3蛋白表達(dá)Western blot結(jié)果顯示，與NS組比較，LPS組NF-κB p65蛋白、Beclin1和 LC-3蛋白表達(dá)明顯增加(P<0.05)；與LPS組比較，PaH-H組和DXM組NF-κB p65蛋白表達(dá)明顯減少(P<0.01)，黃藤素中劑量組Beclin1和 LC-3蛋白表達(dá)明顯增加(P<0.05)；與DXM組比較，黃藤素中劑量組Beclin1和 LC-3蛋白表達(dá)增加(P<0.05)。結(jié)果顯示黃藤素對LPS誘導(dǎo)的小鼠ALI與抑制NF-κB p65，增加Beclin1 和LC-3蛋白表達(dá)有關(guān)。見Fig9。

Fig 7 NF-κB p65 protein immunohistochemical staining (200×)(n=6)NS-normal group，LPS-lipopolysaccharide model group，PaH-L-Low doses of palmatine hydrochloride group，PaH-M-Midle doses of palmatine hydrochloride group，PaH-H-High doses of palmatine hydrochloride group，DXM-Dexamethasone positive drug group.

Fig 8 Immunohistochemical score (n=6)NS-normal group，LPS-lipopolysaccharide model group，PaH-L-Low doses of palmatine hydrochloride group，PaH-M-Midle doses of palmatine hydrochloride group，PaH-H-High doses of palmatine hydrochloride group，DXM-Dexamethasone positive drug group.**P<0.01，*P<0.05 vs normal group；##P<0.01 vs LPS group.

Fig 9 Expression of NF-κBp65,Beclin 1 and LC-3 protein (n=6)NS-normal group，LPS-lipopolysaccharide model group，PaH-L-Low doses of palmatine hydrochloride group，PaH-M-Midle doses of palmatine hydrochloride group，PaH-H-High doses of palmatine hydrochloride group，DXM-Dexamethasone positive drug group.*P<0.05，**P<0.01 vs normal group；#P<0.05,##P<0.01 vs LPS group；★P<0.05,★★P<0.01 vs DXM group;△P<0.05 vs PaH-L group.

3 討論

ALI是由于肺內(nèi)外的多種因素如感染、創(chuàng)傷、休克及手術(shù)等引起的肺毛細(xì)血管炎癥損傷，通透性增加，并導(dǎo)致肺水腫和肺不張為病理特性的疾病，進(jìn)一步發(fā)展可以形成急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)。ARDS在臨床中是急性呼吸衰竭的主要因素，它的主要特點(diǎn)是爆發(fā)性的肺部炎癥，ALI屬于ARDS的早期階段[10]。LPS是革蘭陰性菌細(xì)胞壁的一種主要致病成分，LPS進(jìn)入肺組織后可以誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)，引起大量的免疫細(xì)胞聚集，分泌多種細(xì)胞因子，引起肺組織的損傷。因而治療ALI中的炎癥至關(guān)重要。本研究采用氣管滴注LPS制作急性肺損傷小鼠模型，由病理結(jié)果可知模型組有大量炎癥細(xì)胞浸潤，部分肺泡塌陷，肺泡間隔增厚，可見模型制備成功，黃藤素預(yù)防治療可明顯減輕急性肺損傷小鼠肺組織炎癥性病理改變，作用有一定劑量依賴關(guān)系。

當(dāng)肺部受到致病因素刺激發(fā)生炎癥反應(yīng)時，引起肺泡上皮及毛細(xì)血管內(nèi)皮損傷，毛細(xì)血管通透性增強(qiáng)，血漿中的白蛋白、中性粒細(xì)胞、血小板等滲入肺間質(zhì)和肺泡腔，導(dǎo)致肺水腫。肺系數(shù)以及BALF中總蛋白含量和總細(xì)胞可分別反映肺水腫程度與肺泡毛細(xì)血管通透性大小。本研究顯示，黃藤素能降低急性肺損傷小鼠肺系數(shù)、BALF中總蛋白含量和總細(xì)胞數(shù)來延緩疾病進(jìn)程，作用有一定劑量依賴關(guān)系，黃藤素能夠改善急性肺損傷時肺泡上皮和損傷和肺泡毛細(xì)血管內(nèi)皮損傷，減輕炎癥反應(yīng)。

自噬可由多種刺激引起，例如營養(yǎng)缺乏和病原體感染等，在已鑒定的眾多自噬相關(guān)基因中，Beclin-1在自噬途徑的啟動中起著關(guān)鍵的調(diào)節(jié)功能[11]。在自噬過程中，胞質(zhì)微管相關(guān)蛋白-1輕鏈3(LC-3)從(LC-3Ⅰ)裂解為LC-3Ⅱ亞型，LC-3Ⅱ 聚集到成熟的自噬小體膜上被認(rèn)為是自噬體形成的重要步驟[12]。自噬在脂多糖誘導(dǎo)的急性肺損傷中起著至關(guān)重要的作用，但其具體機(jī)制尚不清楚，自噬過程涉及許多與自噬相關(guān)的蛋白質(zhì)，它們可以吞噬和殺死病原體以保護(hù)細(xì)胞免受病原體的侵害，并抑制炎癥體和炎癥因子的分泌[13]。研究表明，自噬促進(jìn)細(xì)胞的存活或死亡取決于多種因素，如細(xì)胞類型、環(huán)境條件和特定刺激[14]。在LPS引起ALI的發(fā)病機(jī)制中，適度自噬是機(jī)體應(yīng)對損傷因素的一種適應(yīng)性反應(yīng)，有利于維持肺微血管內(nèi)皮屏障的完整性，減少肺水腫，對抗ALI，延長存活時間[15]。因此，適當(dāng)增加細(xì)胞自噬可減輕ALI。本研究發(fā)現(xiàn)，LPS組小鼠肺組織Beclin1和LC-3的表達(dá)水平明顯升高，與文獻(xiàn)報道相符[16]，黃藤素預(yù)防給藥會進(jìn)一步升高ALI小鼠肺組織Beclin1和LC-3的表達(dá)水平，增強(qiáng)自噬作用。結(jié)果表明，LPS誘導(dǎo)小鼠ALI過程中，機(jī)體為了應(yīng)對損傷因素刺激而啟動了自噬性保護(hù)機(jī)制，引起自噬水平升高，而黃藤素能夠進(jìn)一步增強(qiáng)機(jī)體的自噬性保護(hù)機(jī)制，進(jìn)一步增強(qiáng)自噬而減輕急性肺損傷炎癥反應(yīng)，其具體作用機(jī)制需要進(jìn)一步研究。

NF-κB是調(diào)節(jié)炎癥途徑的最重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，激活的NF-κB可轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核并與促炎基因的啟動子結(jié)合，導(dǎo)致基因表達(dá)增強(qiáng)和炎癥反應(yīng)擴(kuò)增，最終導(dǎo)致組織炎癥損傷。有研究發(fā)現(xiàn)，LPS可以激活NF-κB信號通路，促進(jìn)下游炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生[17]。ALI的本質(zhì)是肺內(nèi)失控性炎癥反應(yīng)，其炎癥反應(yīng)與NF-κB蛋白表達(dá)、激活以及NF-κB信號通路下游炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)水平呈正相關(guān)。有研究表明，抑制NF-κB蛋白以及相關(guān)炎癥因子表達(dá)可以減輕ALI的嚴(yán)重程度[18]。NF-κB可被TNF-α、IL-1β等炎癥因子刺激激活，激活后的NF-κB又可誘導(dǎo)TNF-α、IL-1β產(chǎn)生。本研究采用免疫組織化學(xué)染色方法，對NF-κB p65蛋白進(jìn)行染色，NF-κB p65陽性染色為細(xì)胞核呈棕褐色，因而當(dāng)其被活化時，其陽性表達(dá)定位在細(xì)胞核。染色結(jié)果可見，模型組和藥物治療組部分細(xì)胞核被染成棕褐色，陽性表達(dá)明顯，可表明NF-κB p65蛋白被激活。黃藤素能明顯抑制ALI小鼠NF-κB p65蛋白的激活并降低該蛋白表達(dá)，下調(diào)BALF中TNF-α、IL-8和IL-1β含量來減輕ALI肺部炎癥反應(yīng)。

綜上所述，黃藤素對LPS誘導(dǎo)ALI小鼠具有保護(hù)作用，可能通過NF-κB信號通路和自噬通路，干預(yù)NF-κB p65、LC-3Ⅱ和Beclin1蛋白表達(dá)，通過誘導(dǎo)自噬來抑制炎癥因子TNF-α、IL-8和IL-1β的釋放從而緩解肺部炎癥。本研究可為黃藤素治療炎癥性肺疾病提供一定的參考依據(jù)，為急性肺損傷的防治提供奠定一定的基礎(chǔ)。