原發(fā)性肝癌患者CT表現(xiàn)及其與VEGF及預(yù)后的關(guān)系

寧建東 彭懷斌 張海峰

原發(fā)性肝癌是我國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，發(fā)病率及死亡率較高[1]，目前多采用CT等進(jìn)行診斷，有研究指出，CT征象中腫瘤大小、強(qiáng)化類型等均與腫瘤組織增殖及浸潤(rùn)有關(guān)[2]。新生血管形成是腫瘤組織增殖及浸潤(rùn)的前提，血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是一種重要的促血管生成因子，與血管形成密切相關(guān)[3]。近年來(lái)，較多研究顯示實(shí)體腫瘤組織中多存在VEGF異常表達(dá)的現(xiàn)象[4]，VEGF可在一定程度上反映腫瘤血管的生成速度，但尚無(wú)報(bào)道明確指出，原發(fā)性肝癌患者CT征象中腫瘤大小、強(qiáng)化類型等與VEGF表達(dá)的關(guān)系。故本研究通過(guò)分析不同VEGF表達(dá)及預(yù)后患者的CT表現(xiàn)，旨在探究原發(fā)性肝癌患者CT表現(xiàn)及其與VEGF及預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

經(jīng)我院倫理委員會(huì)審核通過(guò)，以2015年1月至2017年11月收治的86例原發(fā)性肝癌患者為研究對(duì)象，其中男性46例，女性40例；年齡42～69歲，平均(59.25±4.79)歲；TNM分期：Ⅰ期15例、Ⅱ期28例、Ⅲ期30例、Ⅳ期13例；分化程度：低、中分化65例，高分化21例；病理類型：肝細(xì)胞癌54例，膽管細(xì)胞癌32例。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①根據(jù)《原發(fā)性肝癌規(guī)范化病理診斷指南(2015年版)》[5]診斷為原發(fā)性肝癌，并經(jīng)病理學(xué)確診者；②患者均知情本研究的研究目的，且已簽署同意書；③均行手術(shù)治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①嚴(yán)重心腦血管疾病患者；②入組前已接受手術(shù)、放化療治療者；③合并其他惡性腫瘤疾病患者；④臨床資料不完整者。

1.2 方法

CT掃描：應(yīng)用Siemens volum zoom 多層螺旋CT掃描儀進(jìn)行檢查，行肝臟多期連續(xù)容積掃描，層厚8 mm，螺距1.5∶1，應(yīng)用高壓注射器于前壁靜脈處注射80～100 ml歐乃派克，注射速率為2.5 ml/s，于注射開(kāi)始后20～25 s(動(dòng)脈期)、45～60 s(門靜脈期)、180～300 s(延遲期)進(jìn)行掃描，掃描參數(shù)：層厚5～10 mm，螺距5 mm，管電壓120 kv，管電流200～250 mA，矩陣512×512，主要觀察腫瘤大小，包膜完整性等。

VEGF水平測(cè)定：應(yīng)用邁新生物技術(shù)公司的免疫組化試劑盒，采用免疫組化Elivision plus法檢測(cè)肝癌組織VEGF表達(dá)情況，用10%中性福爾馬林固定標(biāo)本，石蠟包埋，連續(xù)切片。常規(guī)脫蠟水化處理，在室溫下用3%H2O2孵育15 min后，將樣本置于檸檬酸緩沖液中，放入高壓鍋內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù)，然后用PBS液沖洗樣本3次，加羊血清后在室溫下孵育30 min，滴加鼠抗人VEGF一抗在4 ℃下孵育8 h。用PBS液沖洗樣本3次，甩去PBS液后滴加聚合增強(qiáng)物，在室溫下孵育20 min，用PBS液再次沖洗樣本3次，滴加酶標(biāo)抗鼠聚合物后在室溫下孵育30 min，DAB顯色，蘇木精復(fù)染30 s。用PBS作陰性對(duì)照。陽(yáng)性判斷[6]：如細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≥30%為陽(yáng)性組，<30%及無(wú)著色組為陰性組。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)比較VEGF陽(yáng)性組及VEGF陰性組的CT表現(xiàn)，并分析影響VEGF表達(dá)的相關(guān)因素。(2)根據(jù)術(shù)后3年生存情況將肝癌患者分為生存組及死亡組，比較2組的CT表現(xiàn)，分析影響患者預(yù)后的相關(guān)因素，并采用ROC曲線分析各危險(xiǎn)因素對(duì)預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值。(3)比較VEGF陽(yáng)性組及VEGF陰性組的3年生存率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 VEGF陽(yáng)性組及VEGF陰性組的CT表現(xiàn)比較

VEGF陽(yáng)性組在腫瘤形態(tài)不規(guī)整、無(wú)腫瘤包膜、有門靜脈血栓及動(dòng)脈期不均勻強(qiáng)化方面的人數(shù)比例高于VEGF陰性組(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 VEGF陽(yáng)性組及VEGF陰性組的CT表現(xiàn)比較(例，%)

2.2 影響VEGF表達(dá)的相關(guān)因素分析

腫瘤形態(tài)不規(guī)整、無(wú)腫瘤包膜、有門靜脈癌栓、動(dòng)脈期不均勻強(qiáng)化是影響患者肝癌組織VEGF表達(dá)的危險(xiǎn)因素(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 影響VEGF表達(dá)的相關(guān)因素分析

2.3 生存組和死亡組的CT表現(xiàn)比較

死亡組在腫瘤形態(tài)不規(guī)整、無(wú)腫瘤包膜、有門靜脈血栓及動(dòng)脈期不均勻強(qiáng)化方面的人數(shù)比例高于生存組(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 生存組和死亡組的CT表現(xiàn)比較(例，%)

2.4 影響原發(fā)性肝癌患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素分析

腫瘤形態(tài)不規(guī)整、無(wú)腫瘤包膜、動(dòng)脈期不均勻強(qiáng)化是影響患者原發(fā)性肝癌患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素(P<0.05)，見(jiàn)表4。

表4 影響原發(fā)性肝癌患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素分析

2.5 各危險(xiǎn)因素對(duì)預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值

腫瘤形態(tài)不規(guī)整、無(wú)腫瘤包膜、動(dòng)脈期不均勻強(qiáng)化聯(lián)合預(yù)測(cè)患者預(yù)后的AUC大于0.75，見(jiàn)表5、圖1。

表5 各危險(xiǎn)因素對(duì)預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值

圖1 各危險(xiǎn)因素對(duì)預(yù)后預(yù)測(cè)價(jià)值的ROC曲線分析

2.6 VEGF陽(yáng)性組及VEGF陰性組的預(yù)后比較

VEGF陽(yáng)性組、VEGF陽(yáng)性組術(shù)后3年生存率分別為62.75%(32/51)、71.43%(25/35)，2組生存率對(duì)比無(wú)明顯差異(χ2=0.700，P=0.403)。

3 討論

腫瘤新生血管的形成是腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的病理基礎(chǔ)[7]。相關(guān)報(bào)道指出，VEGF表達(dá)水平可反映肝癌血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和血管構(gòu)建水平，與肝癌的生長(zhǎng)速度和轉(zhuǎn)移傾向密切相關(guān)[8-9]。VEGF是腫瘤組織中特異性最高的血管調(diào)控因子，不僅能增加血管通透性，還能促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖[10]。而腫瘤的生長(zhǎng)方式和生長(zhǎng)速度決定腫瘤周邊及內(nèi)部結(jié)構(gòu)的影像學(xué)表現(xiàn)，肝癌的腫瘤大小、包膜、強(qiáng)化類型等CT表現(xiàn)均與癌組織的血供、增殖及浸潤(rùn)有關(guān)[11]。本研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤形態(tài)不規(guī)整、無(wú)腫瘤包膜、有門靜脈癌栓、動(dòng)脈期不均勻強(qiáng)化是影響患者肝癌組織VEGF表達(dá)的危險(xiǎn)因素，表明患者肝癌組織VEGF表達(dá)情況與腫瘤形態(tài)、有無(wú)腫瘤包膜等有關(guān)。其原因在于，VEGF的過(guò)表達(dá)可促進(jìn)血管生成，改善局部血供，使腫瘤細(xì)胞能夠得到充足的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)，讓其向周圍正常組織浸潤(rùn)，進(jìn)而形成不完整的包膜。另外VEGF的異常表達(dá)會(huì)使腫瘤的快速生長(zhǎng)與營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)之間出現(xiàn)異常，腫瘤內(nèi)部液化、壞死，使其向周圍正常肝組織的浸潤(rùn)增加，導(dǎo)致腫瘤邊界不清[12-13]。

原發(fā)性肝癌患者的死亡率居于我國(guó)腫瘤死亡率的第二位，其死亡率在近些年來(lái)有不斷增高的趨勢(shì)，該病易侵犯門靜脈分支，并侵犯周圍組織器官，影響患者預(yù)后[14]。經(jīng)CT診斷可觀察患者肝臟病理性特征，或有助于醫(yī)師對(duì)患者預(yù)后進(jìn)行初步判斷。本研究結(jié)果顯示，腫瘤形態(tài)不規(guī)整、無(wú)腫瘤包膜、動(dòng)脈期不均勻強(qiáng)化是影響患者原發(fā)性肝癌患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素，說(shuō)明腫瘤形態(tài)不規(guī)整等可能會(huì)影響患者術(shù)后生存，這主要是因?yàn)閺?qiáng)化不均勻的腫瘤內(nèi)部結(jié)構(gòu)異常，新生血管較多，出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的可能性也較大，故而導(dǎo)致其預(yù)后變差；而腫瘤形態(tài)不規(guī)整、包膜不完整的肝癌呈現(xiàn)快速侵襲性生長(zhǎng)時(shí)，癌細(xì)胞向周圍組織浸潤(rùn)，進(jìn)而導(dǎo)致不良預(yù)后的發(fā)生[15]。提示或可通過(guò)觀察各CT征象來(lái)判斷患者預(yù)后。但本研究結(jié)果顯示，各CT征象單獨(dú)檢測(cè)對(duì)患者預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值較低，而聯(lián)合預(yù)測(cè)患者預(yù)后的AUC大于0.75，表明可通過(guò)CT征象聯(lián)合檢測(cè)的方式來(lái)預(yù)測(cè)患者術(shù)后3年生存情況。VEGF表達(dá)水平可反映腫瘤血管的形成速度、腫瘤生長(zhǎng)速度及轉(zhuǎn)移傾向，隨著腫瘤體積增大，所需血供增加，腫瘤組織中VEGF水平升高，腫瘤快速增長(zhǎng)導(dǎo)致內(nèi)部缺血缺氧，組織壞死，進(jìn)而影響患者預(yù)后[16]，提示其或與患者預(yù)后存在某種關(guān)聯(lián)。本研究結(jié)果顯示，VEGF陽(yáng)性組、VEGF陽(yáng)性組術(shù)后3年生存率對(duì)比無(wú)明顯差異，與既往研究結(jié)果存在差異[17]，這主要與樣本量少，且2組患者人數(shù)比例不均有關(guān)。

綜上所述，原發(fā)性肝癌患者的VEGF表達(dá)及預(yù)后與腫瘤形態(tài)不規(guī)整、無(wú)腫瘤包膜、動(dòng)脈期不均勻等CT征象有關(guān)，并可通過(guò)觀察腫瘤形態(tài)不規(guī)整、無(wú)腫瘤包膜、動(dòng)脈期不均勻等CT征象來(lái)判斷患者預(yù)后，但患者癌組織VEGF表達(dá)情況與預(yù)后無(wú)關(guān)。