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    外周血Cryab聯(lián)合MRI檢測(cè)對(duì)視神經(jīng)脊髓炎的診斷價(jià)值

    2021-10-13 11:38:32黃敏許超黃華云黃華棟李冬輝
    浙江醫(yī)學(xué) 2021年18期
    關(guān)鍵詞:視神經(jīng)靈敏度外周血

    黃敏 許超 黃華云 黃華棟 李冬輝

    視神經(jīng)脊髓炎(neuromyelitis optica,NMO)是一種免疫介導(dǎo)的以視神經(jīng)與脊髓同時(shí)或相繼受累為主的中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性脫髓鞘病變[1]。研究表明,NMO患者體內(nèi)會(huì)伴隨出現(xiàn) αβ-晶狀體蛋白(crystallin-αβ,Cryab)表達(dá)異常[2]。Cryab具有神經(jīng)保護(hù)作用,當(dāng)視神經(jīng)出現(xiàn)病變,外周血中Cryab水平會(huì)發(fā)生明顯改變[3]。同時(shí)NMO患者常合并廣泛的腦部損害與異常,臨床常使用MRI檢測(cè)對(duì)其進(jìn)行診斷評(píng)價(jià)[4]。雖然NMO患者在發(fā)病初期顱腦MRI圖像與正常人群沒(méi)有明顯差異,但隨著疾病發(fā)展可在顱腦部特定區(qū)域產(chǎn)生諸如“云霧樣”“鉛筆芯樣”等特定樣強(qiáng)化病灶,成為臨床鑒別和診斷NMO的重要依據(jù)[5]。而對(duì)于顱腦MRI的判定需要在掃描結(jié)束后由專業(yè)人員完成,以檢測(cè)顱腦病變情況。本研究通過(guò)分析NMO患者的外周血Cryab變化和MRI診斷信息,探討兩者對(duì)NMO的診斷價(jià)值。

    1 對(duì)象和方法

    1.1 對(duì)象 選取2019年1月至2020年2月長(zhǎng)興縣人民醫(yī)院收治的NMO患者53例作為NMO組,所有患者均參照Wingerchuk等[6]發(fā)表的NMO診斷標(biāo)準(zhǔn)予以確診。其中男 18 例,女 35 例;年齡 18~60(45.14±12.71)歲;病程2 d~5年,平均(2.7±0.6)年。選取同期在本院門診進(jìn)行健康體檢的健康志愿者50例作為對(duì)照組,其中男20例,女 30 例;年齡 19~58(44.22±15.42)歲。兩組研究對(duì)象性別和年齡比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批通過(guò)(IV-H3130000-011A),所有患者均知情同意。

    1.2 主要試劑和儀器 總蛋白抽提試劑盒購(gòu)自美國(guó)Hyclone公司;Cryab一抗購(gòu)自美國(guó)BioLegend公司;羊抗兔二抗購(gòu)自美國(guó)CST公司;BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒購(gòu)自美國(guó)Thermo公司;高效顯影膠片、顯影液、定影液購(gòu)自德國(guó)柯達(dá)公司;ECL-Plus試劑及聚乙烯二氟(PVDF)膜購(gòu)自美國(guó)Millipore公司;倒置顯微鏡購(gòu)自德國(guó)Olympus生命科學(xué)公司;-80℃冰箱購(gòu)自美國(guó)Thermo公司;高速離心機(jī)購(gòu)自德國(guó)Eppendorf公司;CO2培養(yǎng)箱購(gòu)自日本SANYO公司。

    1.3 方法

    1.3.1 外周血Cryab表達(dá)水平檢測(cè) 采用Western blot法。主要步驟如下:空腹?fàn)顟B(tài)下,收集研究對(duì)象外周血作為樣本,采用總蛋白抽提試劑盒提取全血的蛋白質(zhì),并采用BCA定量法測(cè)定蛋白濃度。蛋白定量后,配置為1 μg/μl的蛋白溶液。配置濃縮膠、分離膠和緩沖液,以10 μl/孔的用量將蛋白溶液上樣于濃縮膠,運(yùn)用濕轉(zhuǎn)法,90 V恒壓電泳80 min,電泳后,不同分子量的蛋白被分開(kāi)。麗春紅染液確認(rèn)分離效率,并將分離后的蛋白印跡電轉(zhuǎn)印至0.22 μm孔徑的PVDF膜,轉(zhuǎn)印條件為80 V×60 min。電轉(zhuǎn)印結(jié)束,5%的脫脂牛奶封閉非特異性抗體,加入一抗(3%的脫脂牛奶配置,濃度1∶2 000),4℃孵育過(guò)夜,次日,TBST 洗膜后加入二抗(濃度 1∶2 500),室溫孵育90 min??贵w孵育后采用ECL發(fā)光試劑盒顯色,初步觀察目的條帶,目的條帶清晰者轉(zhuǎn)入暗室進(jìn)行膠片顯影,所得膠片掃描為灰度圖,并用圖像分析軟件Image J 6.0對(duì)圖像進(jìn)行灰度分析。外周血Cryab的表達(dá)檢測(cè)委托杭州歐蒙未一醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室完成。

    1.3.2 MRI檢查方法 采用1.5T MR掃描儀(荷蘭飛利浦公司)對(duì)患者顱腦進(jìn)行MRI掃描分析。8通道頭顱正交線圈,橫斷面雙回波T2WI掃描。參數(shù)設(shè)置:TR:3 000 ms,TE:25/29 ms,ETL:8,NEX:2,矩陣:256×256。橫斷面、矢狀位、冠狀位液體衰減反轉(zhuǎn)恢復(fù)序列(FLAIR)T2WI掃描,參數(shù)設(shè)置:TR:9 600/1 718 ms,TE:100 ms,TI:2 400 ms,NEX:1,矩陣:256×192。橫斷面 FLAIR T1WI掃描,參數(shù)設(shè)置:TR:2 000 ms,TE:6.9 ms。將顱腦 MRI影像出現(xiàn)特定樣強(qiáng)化病灶判定為NMO陽(yáng)性,然后計(jì)算MRI檢查對(duì)NMO診斷的靈敏度和特異度。

    2 結(jié)果

    2.1 外周血Cryab表達(dá)對(duì)NMO的診斷效能 NMO組患者外周血Cryab表達(dá)水平為0.825±0.251,高于對(duì)照組的 0.305±0.077,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。典型樣品Western blot顯影見(jiàn)圖1。外周血Cryab表達(dá)對(duì)NMO的診斷價(jià)值相對(duì)較高,AUC=0.840,P<0.01,最佳截點(diǎn)值為0.594,靈敏度為0.774,特異度為0.860,見(jiàn)圖2。

    圖1 兩組研究對(duì)象外周血αβ-晶狀體蛋白(Cryab)表達(dá)的電泳圖[對(duì)照組1和對(duì)照組2為對(duì)照組的兩個(gè)典型樣品,視神經(jīng)脊髓炎(NMO)組1和NMO組2為NMO組的兩個(gè)典型樣品]

    圖2 外周血αβ-晶狀體蛋白(Cryab)表達(dá)診斷視神經(jīng)脊髓炎(NMO)的ROC曲線

    2.2 MRI檢測(cè)情況分析 MRI檢查顯示,NMO陽(yáng)性36例,陰性67例;MRI檢查對(duì)NMO診斷的靈敏度、特異度分別為 0.679(36/53)、1.000(50/50),見(jiàn)表 1。圖 3 為 MRI檢查中典型的陽(yáng)性結(jié)果,相比于正常的顱腦MRI,陽(yáng)性結(jié)果會(huì)在顱腦特定區(qū)域出現(xiàn)“云霧樣”“鉛筆芯樣”強(qiáng)化病灶。

    圖3 MRI檢查中典型的陽(yáng)性結(jié)果圖(a:“云霧樣”強(qiáng)化病灶;b:“鉛筆芯樣”強(qiáng)化病灶)

    表1 MRI檢測(cè)情況分析(例)

    2.3 外周血Cryab聯(lián)合MRI檢測(cè)對(duì)NMO診斷的一致性評(píng)價(jià) 外周血Cryab聯(lián)合MRI檢查對(duì)NMO診斷的靈敏度、特異度分別為 0.755(40/53)、1.000(50/50),見(jiàn)表2。相比于單獨(dú)檢測(cè),兩者聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度與特異度均得到較大提高,且與臨床確診結(jié)果的一致性處于良好水平(Kappa=0.749)。

    表2 外周血Cryab聯(lián)合MRI檢測(cè)情況分析(例)

    3 討論

    NMO又被稱為Devic綜合征,是由一組體液免疫參與的抗原-抗體介導(dǎo)的嚴(yán)重中樞神經(jīng)系統(tǒng)特發(fā)性炎性脫髓鞘性疾病,發(fā)病過(guò)程中患者常常伴隨視神經(jīng)炎和脊髓炎反復(fù)發(fā)作,由于臨床研究對(duì)NMO的認(rèn)識(shí)不足,缺乏良好診斷的依據(jù),導(dǎo)致患者臨床診斷與治療效果較差[7-8]。研究表明,早期有效診斷可以明顯降低NMO復(fù)發(fā)率和致殘率,對(duì)于治療NMO具有極大的意義[9]。

    NMO發(fā)病過(guò)程中主要損傷中樞神經(jīng)系統(tǒng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞[10],對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞起保護(hù)作用的Cryab就成為一個(gè)研究熱點(diǎn)。Cryab是晶狀體中的主要蛋白成分之一,屬于小分子熱休克蛋白家族[11],與多種眼科疾病如白內(nèi)障[12]、NMO[13]等的發(fā)生與發(fā)展密切相關(guān)。研究Cryab在不同疾病中的表達(dá)狀態(tài)能為疾病預(yù)防和治療提供一定的理論依據(jù)[14],相關(guān)研究顯示,視神經(jīng)病變患者Cryab呈現(xiàn)出異常升高的狀態(tài)[15-16],與本研究結(jié)果基本一致。此外,本研究結(jié)果顯示Cryab表達(dá)診斷NMO的靈敏度和特異度分別為0.774和0.860,進(jìn)一步證實(shí)了其診斷學(xué)價(jià)值。由于NMO的發(fā)病過(guò)程中會(huì)伴隨感覺(jué)減退甚至消失、四肢乏力、行走困難等中樞神性系統(tǒng)病變的特征,顱腦局部病變也是NMO的一個(gè)重要發(fā)病征象,既往研究指出,NMO患者的神經(jīng)病變主要集中在大腦皮質(zhì)下及深部腦白質(zhì)、脊髓束、胼胝體等與視神經(jīng)相關(guān)的神經(jīng)區(qū)域,病變形態(tài)大多數(shù)也呈現(xiàn)為斑片樣、點(diǎn)狀或類圓狀[17-18]。本研究結(jié)果也顯示NMO患者在MRI掃描中出現(xiàn)顱內(nèi)、視神經(jīng)內(nèi)病灶的部分強(qiáng)化,因此需要對(duì)NMO患者進(jìn)行MRI檢查輔助診斷[19]。本研究顯示MRI檢查對(duì)NMO診斷的靈敏度、特異度分別為0.679和1.000;根據(jù)特異度的表現(xiàn),證實(shí)對(duì)于NMO的診斷,MRI檢查必不可少,能夠與其他疾病較好地區(qū)分開(kāi);但同時(shí)根據(jù)MRI檢查在靈敏度上的表現(xiàn),說(shuō)明對(duì)于NMO的診斷,單一的MRI檢查尚不足以滿足臨床診斷所需。因此本研究集兩者之優(yōu)勢(shì),考察了Cryab表達(dá)聯(lián)合MRI檢測(cè)對(duì)NMO的診斷效能,發(fā)現(xiàn)兩者聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度和特異度分別為0.775和1.000。

    綜上所述,外周血Cryab聯(lián)合MRI檢測(cè)能夠更加有效診斷NMO,對(duì)于早期有效診斷NMO具有極其重要的價(jià)值。同時(shí)兩者聯(lián)合檢測(cè)還能夠及時(shí)反映疾病發(fā)展情況,利于為疾病的治療提供更為科學(xué)的診斷依據(jù),提升NMO患者的臨床診治水平。

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