李佩璇,陳法志,李秀麗,翟敬華,王湛昌
(武漢市農(nóng)業(yè)科學(xué)院,武漢 430075)
牡丹(Paeonia suffruticosa Andr.)為芍藥科(Pae?oniaceae)芍藥屬(Paeonia)落葉灌木,原產(chǎn)中國(guó),素有花中之王,國(guó)色天香美譽(yù),歷來(lái)為世人所喜愛[1]。鳳丹(Paeonia ostii‘fengdan’)由牡丹野生原種楊山牡丹(Paeonia ostii)經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期栽培演化形成的觀賞、食用兼藥用的品種群,是中國(guó)油用牡丹栽培的主要類型,目前在山東、河南、河北、陜西、安徽、湖北、四川、江蘇、湖南等地廣泛栽培。2013年,鳳丹花被原國(guó)家衛(wèi)生部批準(zhǔn)為新資源食品。鳳丹花含有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分,包括蛋白質(zhì)、氨基酸、多糖、維生素A、維生素B3、維生素C、鐵、鎂、銅、鋅、硒等,還含有多酚、黃酮、花青素、芍藥苷等多種生物活性成分[2-7],具有抗氧化、清熱解毒、美容養(yǎng)顏等功效,已開發(fā)成牡丹花茶、鮮花餅、牡丹花酒、護(hù)膚品等系列產(chǎn)品。鳳丹花含水量大、花瓣薄,鮮花不耐貯藏,采收后需及時(shí)干燥處理,但有關(guān)鳳丹花干燥研究尚不夠深入,亟需掌握鳳丹鮮花的適宜干燥方法,為鳳丹花加工利用奠定基礎(chǔ)。
武漢市農(nóng)業(yè)科學(xué)院林果所內(nèi)實(shí)驗(yàn)基地種植的5年生鳳丹植株。
沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品,購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司;二苯代苦味?;杂苫―PPH),購(gòu)自美國(guó)Sigma公司;其他試劑未加說(shuō)明皆為分析純,購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。
ME203E型電子天平,i8型雙光束紫外/可見分光光度計(jì),EMS-50-雙列十孔恒溫水浴鍋,TGL-20M高速離心機(jī),TGCXN-2B超聲循環(huán)提取機(jī),DHG型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱,SCIENTZ-10N-B手動(dòng)壓蓋冷凍干燥機(jī),格蘭仕微波爐。
1.4.1 干燥處理方法
1)熱風(fēng)干燥。取鳳丹鮮花300 g,去掉雜質(zhì),放入烘箱內(nèi),設(shè)置40、60、80℃烘干,定期翻動(dòng),烘干至恒重。
2)微波干燥。取鳳丹鮮花300 g,去掉雜質(zhì),放入微波爐托盤,在中高火、中火、中低火條件下烘干至恒重。
3)真空冷凍干燥。取鳳丹鮮花100 g,放入真空冷凍干燥機(jī)內(nèi),干燥至恒重。
4)自然曬干。取鳳丹鮮花300 g,在太陽(yáng)下曬干至恒重。
1.4.2 主要營(yíng)養(yǎng)與活性成分測(cè)定 對(duì)不同干燥方法制備的樣品,分別測(cè)定蛋白質(zhì)、還原糖、維生素C、多酚、黃酮等含量。
1)還原糖含量的測(cè)定。采用3,5-二硝基水楊酸法[8]測(cè)定還原糖含量,得到標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=0.454 3x-0.007 4,R2=0.999 4,式中,y為吸光度,x為對(duì)照樣品濃度,下同。
2)可溶性蛋白質(zhì)含量的測(cè)定。采用考馬斯亮藍(lán)-G250法[9]測(cè)定可溶性蛋白質(zhì)含量,得到標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=0.010 1x+0.007 6,R2=0.998 4。
3)維生素C含量的測(cè)定。參照劉紹俊等[10]的方法測(cè)定維生素C的含量,得到標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=0.420 3x+0.001 9,R2=0.998 7。
4)多酚含量的測(cè)定。采用Folin-酚法[11]測(cè)定多酚含量,得到回歸方程為y=7.64x+0.254,R2=0.991 3。
5)黃酮含量的測(cè)定。采用亞硝酸鈉-硝酸鋁法[12]測(cè)定黃酮含量,得到曲線方程為y=0.005 7x-0.009 5,R2=0.995 9。
1.4.3 抗氧化活性檢測(cè) 取10 g處理后的鳳丹花粉末,溶于80 mL 80%甲醇中,在70℃水浴中浸提2 h,離心過(guò)濾,定容至100 mL,作為提取液。置于-20℃的冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>
1)DPPH自由基清除率的測(cè)定。參照趙鑫等[13]的方法測(cè)定DPPH自由基清除率。
2)羥基自由基清除率的測(cè)定。參照陳佳齡等[14]的方法測(cè)定羥基自由基清除率。
3)亞硝酸鹽清除率的測(cè)定。參照李佩艷等[15]的方法,并稍加改動(dòng)。將原液配置為濃度分別為0.004、0.006、0.008、0.010 mg/mL的樣品液,取1 mL樣品液于10 mL容量瓶中,加入0.005 mg/mL亞硝酸鈉(NaNO2)標(biāo)準(zhǔn)溶液1.5 mL,加入pH 3.0的磷酸檸檬酸緩沖溶液2.5 mL,37℃下反應(yīng)30 min,立即加入1 mL質(zhì)量濃度為0.4%的對(duì)氨基苯磺酸溶液,混勻,靜置3~5 min后,加入0.5 mL質(zhì)量濃度為0.2%的鹽酸萘已二胺溶液,加去離子水至刻度,混勻,靜置15 min,以樣品液為空白組,在544 nm處,測(cè)定吸光度為A,測(cè)定NaNO2標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度為A0,按以下公式計(jì)算樣品液對(duì)NO2-的清除率。
清除率=(A0-A)/A0×100%
4)還原能力的測(cè)定。參照程源斌[16]的方法測(cè)定還原能力。
2.1.1 還原糖含量 由圖1可知,不同干燥方式處理的鳳丹花還原糖含量存在差異,其中60℃烘干處理和凍干處理的鳳丹花還原糖含量最高,二者之間差異不顯著。微波中高火處理的還原糖含量最低,為13.91%。熱風(fēng)干燥處理,隨烘干溫度的升高,還原糖含量先升高后降低,60℃烘干處理還原糖含量達(dá)到最大,為23.82%;微波干燥處理,隨著微波強(qiáng)度的提高,還原糖含量逐步降低,表明微波的強(qiáng)度過(guò)大會(huì)對(duì)還原糖造成破壞。
2.1.2 蛋白質(zhì)含量 由圖2可知,不同干燥方式之間的蛋白質(zhì)含量存在差異,曬干處理的蛋白質(zhì)含量最高,為75.09 mg/g;其次為凍干處理,含量為63.87 mg/g;40℃熱風(fēng)烘干的蛋白質(zhì)含量最低,僅為30.64 mg/g。熱風(fēng)干燥處理,隨著溫度升高,蛋白質(zhì)含量呈現(xiàn)增加趨勢(shì)。微波干燥處理,隨著微波強(qiáng)度的增加,蛋白質(zhì)含量先降低后升高,在中火時(shí)最低,微波強(qiáng)度中低火與中高火干燥的蛋白質(zhì)含量差異不顯著。
2.1.3 維生素C含量 由圖3可知,不同干燥方式之間的維生素C含量存在差異。微波中高火處理的維生素C含量最高,達(dá)到0.77%,凍干處理的維生素C含量最低,僅為0.32%。40℃熱風(fēng)干燥與60℃熱風(fēng)干燥處理的維生素C含量差異不顯著,80℃熱風(fēng)干燥維生素C含量增加;微波干燥處理,隨著微波強(qiáng)度的提高,維生素C含量逐漸升高,微波中高火處理達(dá)到最大值。曬干和凍干的維生素C含量分別為0.52%和0.32%,均顯著低于微波中高火處理,曬干和凍干耗時(shí)長(zhǎng),影響了維生素C含量。
2.1.4 多酚含量 由圖4可知,不同干燥方式之間的多酚含量存在差異,凍干處理的多酚含量最高,達(dá)到11.71 mg/g,而曬干處理和80℃烘干處理的多酚含量最低,均為7.29 mg/g,比凍干處理低37.75%。熱風(fēng)干燥處理,隨著烘干溫度升高,多酚含量降低,40℃烘干處理最高。微波干燥處理,隨著微波強(qiáng)度的提高,多酚含量先升高后降低。
2.1.5 黃酮含量 由圖5可知,不同干燥方式之間的黃酮含量存在差異。凍干處理的黃酮含量最高,達(dá)11.85 mg/g,微波中低火處理的黃酮含量最低,為7.98 mg/g。40℃熱風(fēng)干燥與60℃熱風(fēng)干燥處理的黃酮含量差異不顯著,80℃烘干黃酮含量降低;微波干燥處理,隨著微波強(qiáng)度的提高,黃酮含量先升高后降低,微波中低火和中高火的黃酮含量差異顯著。
2.2.1 DPPH自由基清除率 由圖6可知,同一干燥方法處理的鳳丹花提取物對(duì)DPPH自由基的清除率隨濃度的增加而增加,呈明顯的量效關(guān)系。由表1可見,在提取物濃度為0.5 mg/mL時(shí),真空冷凍干燥的鳳丹花提取物DPPH自由基清除率最高,達(dá)到(76.10±1.06)%,顯著高于其他處理,其次為微波中低火,再次為60℃熱風(fēng)干燥,曬干的DPPH自由基清除率最低,為(56.20±1.00)%,表明真空冷凍干燥具有較強(qiáng)的清除DPPH自由基能力。隨著熱風(fēng)干燥溫度升高和微波干燥強(qiáng)度的提高,DPPH自由基清除率降低,說(shuō)明高溫和較高的微波強(qiáng)度都會(huì)破壞提取物的抗氧化性。
表1 各指標(biāo)最高濃度抗氧化活性
2.2.2 羥基自由基清除率 由圖7可知,提取物對(duì)羥基自由基的清除率隨濃度的增加而增大,呈現(xiàn)明顯量效關(guān)系。最高濃度下,真空冷凍干燥處理的羥基自由基清除率最高。由表1可見,當(dāng)樣品液濃度達(dá)到0.36 mg/mL時(shí),真空冷凍干燥的清除率為(95.76±1.08)%,以下依次為微波中火、微波中低火、40℃熱風(fēng)干燥、60℃熱風(fēng)干燥、微波中高火、80℃熱風(fēng)干燥,曬干的清除率最低,僅為(48.84±0.47)%。由此看出,真空冷凍干燥具有較強(qiáng)的清除羥基自由基能力。隨著烘干溫度和微波干燥強(qiáng)度的提高,羥基自由基清除率降低,這一點(diǎn)與DPPH自由基清除率類似,說(shuō)明高溫和較高的微波強(qiáng)度都會(huì)破壞提取物的抗氧化性。
2.2.3 亞硝酸鹽清除率 由圖8可知,提取物對(duì)亞硝酸鹽自由基的清除率隨濃度的增加而增大,呈現(xiàn)一定量效關(guān)系。比較同一濃度水平下各處理對(duì)亞硝酸鹽清除率,均以真空冷凍干燥處理的亞硝酸鹽清除率最高。由表1可見,當(dāng)樣品液濃度達(dá)到0.010 mg/mL時(shí),清除率趨于穩(wěn)定,此時(shí)真空冷凍干燥的亞硝酸鹽清除率為(95.26±1.06)%,以下依次為40℃熱風(fēng)干燥、微波中低火、微波中火、曬干、60℃熱風(fēng)干燥,微波中高火和80℃烘干亞硝酸鹽清除率較低,清除率分別為(78.00±1.10)%、(76.54±1.14)%。隨著烘干溫度和微波干燥強(qiáng)度的提高,亞硝酸鹽清除率降低,說(shuō)明高溫和較高的微波強(qiáng)度都會(huì)破壞提取物的抗氧化性,而自然晾干表現(xiàn)出中等強(qiáng)度的抗氧化性。
2.2.4 鐵氰化鉀還原力 由圖9可知,提取物的鐵氰化鉀還原力隨濃度的增加而增大,呈現(xiàn)一定量效關(guān)系。比較同一濃度水平不同干燥方式處理下鐵氰化鉀還原力,均以真空冷凍干燥最高。由表1可見,當(dāng)提取物的濃度達(dá)到10 mg/mL時(shí),吸光度趨于穩(wěn)定。此時(shí)真空冷凍干燥的吸光度最大,達(dá)到(4.29±0.08),以下依次為微波中火、微波中低火、60℃烘干、微波中高火、40℃烘干,曬干和80℃烘干吸光度較低,分別為(2.60±0.05)、(2.51±0.03)。
牡丹花采收后,干燥處理能顯著降低水分含量,有利于保存及運(yùn)輸。食用花卉常見的干燥方式主要有自然風(fēng)干法、熱風(fēng)干燥法、微波干燥法及真空冷凍干燥法。自然風(fēng)干法優(yōu)勢(shì)在于操作簡(jiǎn)單,成本低,但干燥耗時(shí)長(zhǎng),且易受外界環(huán)境條件影響[17-19]。熱風(fēng)干燥是生產(chǎn)中最常用的干燥方法,相比自然風(fēng)干法而言效率更高,但是有些植物材料不耐高溫,在高溫下易變色,不適合用熱風(fēng)干燥法。適當(dāng)?shù)奶岣邷囟瓤梢蕴岣吒稍镄?,但過(guò)高的溫度會(huì)使黃酮、多酚含量降低[20]。微波干燥能殺菌、消毒,且耗時(shí)短,成本較低,較易操作。冷凍干燥法所得干燥物質(zhì)呈干海綿多孔狀,最大程度保持物料的顏色、形狀、營(yíng)養(yǎng)成分及活性成分,可獲得高品質(zhì)的干制品,適合較長(zhǎng)期保存,方便長(zhǎng)途運(yùn)輸,能快速?gòu)?fù)活利用,在蔬菜、水果、茶葉等均有研究應(yīng)用[21-24]。本研究通過(guò)比較不同干燥方式處理的鳳丹花營(yíng)養(yǎng)與活性成分的含量,發(fā)現(xiàn)真空冷凍干燥處理的還原糖、多酚、黃酮含量均顯著高于其他干燥處理,蛋白質(zhì)含量也較高,僅次于曬干處理,可見真空冷凍干燥有利于保留鳳丹花的營(yíng)養(yǎng)與活性成分,是鳳丹花較優(yōu)的干燥方法。
牡丹花具有較高的抗氧化能力,熊麗娜[25]研究表明,牡丹花在12種食用花卉中多酚含量最高,抗氧化能力最強(qiáng)。不同品種的牡丹花瓣抗氧化能力顯著不同,且與多酚含量呈現(xiàn)顯著一致性,多酚類化合物是牡丹花具有抗氧化能力的物質(zhì)基礎(chǔ)[12]。本研究對(duì)不同干燥處理的鳳丹花抗氧化活性進(jìn)行比較,選取DPPH自由基清除率、羥基清除率、亞硝酸鹽清除率和鐵氰化鉀還原力4個(gè)指標(biāo)評(píng)價(jià)抗氧化活性,結(jié)果表明,真空冷凍干燥的DPPH自由基清除率、羥基清除率、亞硝酸鹽清除率均最高,鐵氰化鉀還原力也最強(qiáng)。
采用曬干、熱風(fēng)干燥、微波干燥及真空冷凍干燥處理鳳丹花,真空冷凍干燥較好地保留了鳳丹花營(yíng)養(yǎng)與活性成分,且抗氧化活性最強(qiáng),是鳳丹花較優(yōu)的干燥方法。本研究為鳳丹花干燥與加工利用奠定了技術(shù)基礎(chǔ)。