ZTC1+1澄清劑在清咽復(fù)方水提液澄清工藝中的應(yīng)用

楚婷花 田密 麻開(kāi)香 李英

摘要 [目的]研究清咽復(fù)方水提液的澄清工藝。[方法]先通過(guò)單因素試驗(yàn)研究澄清劑用量、藥液濃度（生藥量∶藥液量）、絮凝溫度分別對(duì)出膏率、綠原酸和總皂苷含量的影響，再通過(guò)正交試驗(yàn)優(yōu)化最佳工藝條件。[結(jié)果]澄清劑用量對(duì)綜合指標(biāo)的影響最大，藥液濃度次之。最佳澄清工藝：在藥液濃度（生藥量∶藥液量）為1∶6（g∶mL）時(shí)，加入8%B組分和4%A組分，水浴溫度80? ℃。在此工藝條件下，出膏率為19.13%，綠原酸含量為592.81 mg/g，總皂苷含量為473.15 mg/g。[結(jié)論]ZTC1+1天然澄清劑對(duì)清咽復(fù)方水提液的澄清效果良好，且工藝穩(wěn)定可行。

關(guān)鍵詞 清咽復(fù)方水提液;ZTC1+1天然澄清劑;澄清工藝;應(yīng)用

中圖分類(lèi)號(hào) TQ 461? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

文章編號(hào) 0517-6611（2021）18-0172-05

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.18.042

開(kāi)放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Application of ZTC1+1 Clarifier in Water Extract of Qingyan Compound

CHU Ting-hua1，2，TIAN Mi1，2，MA Kai-xiang1，2 et al （1.Shanxi Zhendong Wuhe Health Technology Co.， Ltd.， Changzhi，Shanxi 046000;2.Shanxi Zhendong Pharmaceutical Co.，Ltd.，Changzhi，Shanxi 046000）

Abstract [Objective] To study the optimal clarification technology of water extract of Qingyan compound. [Method]Single factor experiment design was used to research the effect of dosage of ZTC1+1， drug liquid concentration and reaction temperature on extract rate， content of chlorogenic acid and total saponins.The optimal clarification process was determined by orthogonal experiment design.[Result]Comprehensive index was mainly influenced by dosage of ZTC1+1， the following being drug liquid concentration.The optimal clarification process was as follows： the concentration of drug liquid （quality of material ： quality of drug liquid） was 1∶6（g∶mL）， the amount of clarifier was 8% component B and 4% component A， the reaction temperature was at 80? ℃. Under these conditions， the drug liquid concentration was 19.13%， the content of chlorogenic acid and total saponins was 592.81 mg/g and 473.15 mg/g， respectively. [Conclusion] ZTC1+1 natural clarifier has good effect on the clarification of water extract of Qingyan compound with promising feasibility and stability.

Key words Water extract of Qingyan compound;ZTC1+1 natural clarifier;Clarification technology;Application

作者簡(jiǎn)介 楚婷花（1990—），女，山西晉城人，工程師，碩士，從事中藥及保健品方面的研究。

收稿日期 2021-01-22;修回日期 2021-03-01

近年來(lái)由于環(huán)境惡化、空氣污染，生活節(jié)奏加快，工作壓力增大等原因形成的煙酒過(guò)度、長(zhǎng)期生活不規(guī)律、疲勞、精神緊張、經(jīng)常熬夜、身體抵抗力下降、過(guò)多使用空調(diào)等，導(dǎo)致越來(lái)越多的人遇到咽部干、癢、疼、緊、澀等問(wèn)題。咽喉類(lèi)問(wèn)題輕則引起咽干腫痛、聲嘶音啞，影響人們正常的語(yǔ)言交流、飲食和睡眠，造成精神負(fù)擔(dān)和壓抑感;重則可導(dǎo)致咽喉部的急、慢性炎癥。

清咽復(fù)方水提液是由桔梗、余甘子、金銀花等中藥材組成的清熱解毒、清音利咽、消腫止痛、化痰止咳的純中藥制劑，提取過(guò)程是中藥制劑制備經(jīng)常包括的過(guò)程，得到的中藥提取液是一個(gè)復(fù)雜體系，其中含有大量多糖、蛋白質(zhì)、淀粉、微細(xì)粒子、鞣質(zhì)等物質(zhì)，偶有藥材殘?jiān)?、泥沙等雜質(zhì)，共同形成1～100 knm的膠體分散體系，屬動(dòng)力學(xué)及熱力學(xué)不穩(wěn)定體系[1]，放置一段時(shí)間后沉淀析出，顏色加深。傳統(tǒng)的中藥提取液多以醇沉方式去除雜質(zhì)，但生產(chǎn)成本高、安全性差，且在保留有效成分方面有一定的局限性[2]，對(duì)去除成分選擇性差，成品中殘留的乙醇對(duì)藥效有影響，影響臨床療效。

ZTC1+1天然澄清劑作為一種新型的食品添加劑，是一種天然高分子化合物[3]，采用最新“1+1”澄清技術(shù)，一組分起主絮凝作用，另一組分則起輔助絮凝作用，因而大大加大了澄清過(guò)程，比傳統(tǒng)澄清劑快2～5倍[4]。天然澄清劑是一種以天然多糖為原料制成的高分子物質(zhì)，由A、B 2個(gè)組分組成，先加入的B組分與待測(cè)液中的蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)等雜質(zhì)發(fā)生分子間架橋，使膠體不穩(wěn)定成分的分子增大，從提取液中析出，后加入的A組分通常為B組分的50%，帶有與B組分相反的電荷，具有再架橋作用，使沉淀體積迅速增大，便于沉降及過(guò)濾，可保證B組分充分去除，對(duì)有效成分可保留[5]。ZTC1+1天然澄清劑主要去除鞣質(zhì)、蛋白質(zhì)、蠟質(zhì)等膠體不穩(wěn)定成分，對(duì)中藥有效成分如黃酮、生物堿、皂苷類(lèi)、多糖、維生素、礦物質(zhì)等不影響，熱穩(wěn)定性好，安全無(wú)毒[6-7]。該研究以清咽復(fù)方水提液為研究對(duì)象，通過(guò)單因素和正交試驗(yàn)確定澄清劑用量、藥液濃度（生藥量∶藥液量）、絮凝溫度以得到優(yōu)化的提取工藝，為清咽復(fù)方水提液的工業(yè)化生產(chǎn)提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

桔梗、余甘子、金銀花等中藥材（安國(guó)市健仁藥材有限公司）;綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品327-97-9（中國(guó)食品藥品檢定研究院）;人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)品52286-59-6（中國(guó)食品藥品檢定研究院）;ZTC1+1天然澄清劑（北京正天成澄清技術(shù)有限公司）;醋酸（藥用）;其他試劑均為分析純。

1.2 儀器設(shè)備 電子天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司）;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（鞏義市矛華儀器有限公司）;真空干燥箱（天津市泰斯特儀器有限公司）;恒溫水浴鍋（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）;離心機(jī)（貝克曼庫(kù)爾特有限公司）;高效液相色譜儀e2695（waters美國(guó)沃特斯公司）。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 澄清劑的配制。

1.3.1.1 A黏膠液配制。先用少量水?dāng)嚦珊隣?，然后加入需要量的水，溶?4 h，即得 1%（m/V）A黏膠液。

1.3.1.2 B黏膠液配制。先配制1%醋酸，然后用少量1%醋酸溶解B組分并攪成糊狀，加入足夠量的1%醋酸，溶脹24 h，即得 1%（m/V）B黏膠液。

1.3.2 中藥材水提液的制備。稱(chēng)取處方量的桔梗、余甘子等中藥材，采用經(jīng)正交試驗(yàn)獲得的最佳提取工藝提取，即加入10倍量水，提取2次，每次1 h，過(guò)濾，合并提取液。

取相應(yīng)質(zhì)量的備用藥液，加熱至試驗(yàn)溫度，先加入B組分，在恒溫條件下，每30 min攪拌一次，再加入A組分，在恒溫條件下，每30 min攪拌一次，分別離心，分離沉淀，濃縮至浸膏，干燥（55～60? ℃），以出膏率、綠原酸及總皂苷含量為指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定。

1.3.3 出膏率的測(cè)定。分別精取供試液5 mL置于干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，殘?jiān)湃牒嫦渲?05? ℃干燥至恒重，稱(chēng)重，計(jì)算出膏率。

P=M 1×N/M 2×100%

式中，P代表出膏率;M 1代表干膏重量;N代表倍數(shù);M 2代表藥材質(zhì)量。

1.3.4 綠原酸含量測(cè)定[8]。

1.3.4.1 對(duì)照品溶液的制備。精密稱(chēng)量綠原酸對(duì)照品0.4 mg，置于10 mL容量瓶中，用50%的甲醇溶液加至刻度，搖勻，備用。

1.3.4.2 供試品溶液的制備。精密稱(chēng)定本品粉末0.5 g，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，稱(chēng)定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱(chēng)定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

1.3.4.3 樣品含量測(cè)定。建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，分別取10 μL的供試品及對(duì)照品溶液注入液相色譜測(cè)定綠原酸含量。

1.3.5 總皂苷含量測(cè)定[8]。

1.3.5.1 試樣處理。取本品粉末1.0 g，置于100 mL容量瓶中，加少量水，超聲30 min，再用水定容至100 mL，搖勻，靜置，吸取上清液作為柱層析液。

1.3.5.2 柱層析。取層析柱（直徑1 cm），填高度為3 cm的大孔樹(shù)脂，再填充1 cm的重型氧化鋁，用25 mL 70%的乙醇洗柱，棄去洗脫液，用25 mL水洗柱，棄去洗脫液，加入1.0 mL柱層析液，再用25 mL水洗柱，棄去洗脫液，再用25 mL 70%的乙醇洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置于60 ℃水浴揮干。

1.3.5.3 顯色。在已揮干的蒸發(fā)皿中準(zhǔn)確加入0.2 mL 5%香草醛冰乙酸溶液，轉(zhuǎn)動(dòng)蒸發(fā)皿，使殘?jiān)既芙?，再加?.8 mL高氯酸，混勻后移入5 mL帶塞刻度離心管中，60 ℃水浴上加熱10 min，取出，冰浴冷卻后，準(zhǔn)確加入冰乙酸5.0 mL，搖勻后，以1 cm比色池于560 nm波長(zhǎng)處與標(biāo)準(zhǔn)管一起進(jìn)行比色測(cè)定。

1.3.5.4 樣品含量測(cè)定。 取100 μL人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)溶液（2.0 mg/mL）于蒸發(fā)皿中，放在水浴揮干（低于60 ℃），或熱風(fēng)吹干（勿使過(guò)熱），以下操作從“1.3.5.3”起，與試樣相同在560 nm處測(cè)定吸光度。計(jì)算總皂苷含量（以人參皂苷Re計(jì)）。

1.3.6 綜合指標(biāo)評(píng)價(jià)。將上述3個(gè)檢測(cè)指標(biāo)出膏率、綠原酸含量及總皂苷含量分別賦予權(quán)重為0.2、0.4、0.4，即綜合指標(biāo)Y=0.2×出膏率+0.4×綠原酸含量+0.4×總皂苷含量。

1.3.7 單因素試驗(yàn)。以澄清劑用量6%∶3%（B組分∶A組分）、藥液濃度1∶6（生藥量∶藥液量，g∶mL）、絮凝溫度70 ℃為基礎(chǔ)工藝條件，在其他條件不變的情況下，單獨(dú)調(diào)整各因素水平進(jìn)行單因素試驗(yàn)（表1），分別考察各因素對(duì)出膏率、綠原酸含量和總皂苷含量的影響。

1.3.8 正交試驗(yàn)優(yōu)化澄清條件。測(cè)得藥液的pH約為4.2，根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果及相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，確定先加入B組分后加入A組分，澄清劑用量、藥液濃度（生藥量∶藥液量）、絮凝溫度為3個(gè)影響因素，采用L 9（34）正交表（表2）進(jìn)行試驗(yàn)。出膏率越低說(shuō)明澄清效果越好，為了方便統(tǒng)計(jì)結(jié)果，出膏率結(jié)果用20%-P表示，將提取液濃縮至所需濃度，以綜合指標(biāo)Y為評(píng)價(jià)指標(biāo)。

1.4 數(shù)據(jù)分析與處理

所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)均為3次重復(fù)試驗(yàn)結(jié)果的平均值，數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用Excel 進(jìn)行圖表處理，采用DPS 6.55 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素試驗(yàn)

2.1.1 澄清劑用量對(duì)工藝的影響。從澄清劑用量對(duì)出膏率的影響（圖1）可以看出，在一定范圍內(nèi)，隨著澄清劑用量增加出膏率先降低后升高，澄清效果與出膏率呈反相關(guān)。澄清劑用量為4% B組分、2% A組分時(shí)出膏率顯著下降，6% B組分、3% A組分時(shí)出膏率最低，加入10% B組分、5% A組分澄清劑時(shí)出膏率升高，說(shuō)明隨著澄清劑用量的增加，澄清劑與膠體粒子接觸的概率也增加，架橋作用更充分[9]，澄清劑加入過(guò)量，澄清劑與溶液中雜質(zhì)作用的同時(shí)，2種成分也相互作用導(dǎo)致澄清效果下降。添加過(guò)量引起“二次渾濁”[10-11]。

由澄清劑對(duì)綠原酸含量和總皂苷含量（圖1）的影響可知，在一定范圍內(nèi)，隨著澄清劑用量的增加，綠原酸含量和總皂苷含量逐漸增加。澄清劑用量為4% B組分、2%A組分時(shí)綠原酸含量和總皂苷含量顯著增加，10% B組分、5%A組分時(shí)，綠原酸含量和總皂苷含量增加不顯著，反而會(huì)增加后續(xù)濃縮的難度和成本。

因此選擇澄清劑用量為4% B組分、2%A， 6% B組分、3%A以及8% B組分、4%A為正交試驗(yàn)優(yōu)化的3個(gè)水平因素。

2.1.2 藥液濃度對(duì)工藝的影響。由藥液濃度對(duì)出膏率的影響（圖2）可見(jiàn)，一定范圍內(nèi)，隨著藥液濃度的降低，出膏率隨之降低，說(shuō)明藥液越稀，澄清劑分散越好，澄清效果越好[9]，當(dāng)生藥量︰藥液量為1∶4 時(shí)顯著降低，1∶10時(shí)降低程度不明顯。

由藥液濃度對(duì)綠原酸含量和總皂苷含量的影響（圖2）可知，在一定范圍內(nèi)，隨著藥液濃度的降低，綠原酸含量和總皂苷含量逐漸增加，當(dāng)生藥量︰藥液量為1∶10時(shí)增加程度趨緩。

考慮到溶液太稀，造成后續(xù)過(guò)濾、濃縮過(guò)程困難，故選擇藥液濃度（生藥量︰藥液量）為1∶4、1∶6、1∶8為正交試驗(yàn)優(yōu)化的3個(gè)水平因素。

2.1.3 絮凝溫度對(duì)工藝的影響。從圖3可以看出，出膏率隨絮凝溫度的升高先降低后升高，并且絮凝溫度為80 ℃時(shí)出膏率最低，綠原酸含量和總皂苷含量隨絮凝溫度的升高先增加后降低。絮凝溫度越高，澄清劑分散越快，溫度較高，可以促進(jìn)絮凝反應(yīng)，澄清效果越好，絮狀沉淀越多，出膏率越低，絮凝溫度太高，澄清劑的交替作用強(qiáng)于架橋作用[12]，也會(huì)使澄清劑老化，降低澄清效果，還會(huì)破壞藥液中部分成分的穩(wěn)定性[9]，同時(shí)也會(huì)增加成本。因此選擇60、70、80 ℃為正交試驗(yàn)優(yōu)化的3個(gè)水平因素。

2.2 正交試驗(yàn) 從表3～4可以看出，澄清劑用量因素對(duì)綜合指標(biāo)Y有顯著性影響，影響權(quán)重從大到小依次是A﹥B﹥C，即澄清劑用量>藥液濃度>絮凝溫度且最佳工藝組合條件是A 3B 2C 3，由于最優(yōu)結(jié)果未出現(xiàn)在正交序列表中，因此需對(duì)其進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。

2.3 驗(yàn)證試驗(yàn) 按上述篩選出來(lái)的提取液濃度生藥量∶藥液量=1∶6，或藥液密度為（1.015±0.005） g/mL（60 ℃），澄清劑用量為8%B組分、4%A組分，80 ℃保溫進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，測(cè)定出膏率、綠原酸含量、總皂苷含量，結(jié)果見(jiàn)表5。

通過(guò)3次平行試驗(yàn)，由表5可得，出膏率、綠原酸含量和總皂苷含量最高，且RSD均小于5%，表明該澄清劑純化工藝條件基本穩(wěn)定、可行。

3 討論與結(jié)論

清咽復(fù)方水提液是由桔梗、余甘子、金銀花等中藥材組成，以具有宣肺化痰、利咽排膿[13-14]之功效的桔梗作為君藥，以具有清熱解毒、宣散風(fēng)熱[15]之功效的金銀花作為臣藥，以具有清熱涼血、生津止咳之功效的余甘子作為佐藥。桔梗的主要成分是桔梗皂苷[16]，同時(shí)該類(lèi)成分也是清咽功能的功效成分。金銀花的主要化學(xué)成分為綠原酸，并且綠原酸在抗菌[17]、抗病毒[18]等方面功效顯著、明確。因此確定總皂苷和綠原酸作為本品的評(píng)價(jià)指標(biāo)。

試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，在提取清咽相關(guān)原料的有效成分后，不能達(dá)到澄清的狀態(tài)，在除去某些影響藥液澄清的元素蛋白質(zhì)類(lèi)所用的傳統(tǒng)澄清劑多為有毒的有機(jī)試劑，不但增加了成本，且操作復(fù)雜煩瑣[19]。天然澄清劑的加入能顯著改善溶液的澄清度，ZTC1+1天然澄清劑屬于食品添加劑，安全無(wú)毒，是人工合成絮凝劑的理想代用品，且澄清速度快，保留成分更多，在降低成本、縮短工期及增強(qiáng)制劑的穩(wěn)定性方面優(yōu)于水提醇沉法[20]，ZTC1+1-Ⅱ型澄清劑作用原理為利用電荷及“架橋”作用[21]。

該試驗(yàn)以出膏率、綠原酸和總皂苷含量指標(biāo)評(píng)價(jià)，考察澄清劑加入量、藥液濃度、絮凝溫度3因素對(duì)澄清工藝的影響，通過(guò)單因素試驗(yàn)確定正交試驗(yàn)因素水平，正交試驗(yàn)優(yōu)化澄清工藝。結(jié)果表明，各工藝條件對(duì)澄清效果的影響程度從大到小依次為澄清劑用量、藥液濃度、絮凝溫度，且澄清劑用量具有顯著差異（P<0.05），藥液濃度對(duì)綠原酸含量有顯著差異，對(duì)出膏率和總皂苷含量無(wú)顯著差異，絮凝溫度無(wú)顯著差異，結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)條件，最佳工藝組合條件為A 3B 2C 3，即在藥液濃度為1∶6，此時(shí)藥液密度為（1.015±0.005）g/mL（60 ℃），先加入8%B組分，再加入4%A組分，在80 ℃條件下進(jìn)行澄清工藝。驗(yàn)證結(jié)果表明工藝穩(wěn)定可行，能最大可能保證出膏率、綠原酸含量和總皂苷含量，為其他中藥制劑澄清工藝提供了試驗(yàn)依據(jù)，也為其廣泛推廣奠定了基礎(chǔ)。

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