咽拭子新型冠狀病毒核酸檢測結(jié)果分析

陳俏 鄧仙炳 敖志友 敖艷云

【摘要】目的：分析咽拭子新型冠狀病毒（SARS-CoV-2）核酸檢測結(jié)果，評價咽拭子 SARS-CoV-2 核酸檢測的臨床應用價值。方法：回顧性分析2020 年 1 月 23 日至 3 月 15 日經(jīng) SARS-CoV-2 核酸檢測確診為 COVID-19 患者的病歷資料，分析患者病歷資料、SARS-CoV-2 核酸檢測的取樣次數(shù)、方法等信息。結(jié)果：實驗室檢查結(jié)果顯示，白細胞計數(shù)正常（71.43 %），淋巴細胞計數(shù)下降（51.74 %）。14 例確診的病例中，咽拭子采樣 12 例（85.71 %），誘導排痰 2 例（14.29 %），通過咽拭子、痰標本 RTPCR 確診 13 例（92.86 %），痰標本 NGS 確診 1 例（7.14 %），發(fā)病至確診的中位時間為 4.8d。首次采集標本 SARS-CoV-2 檢測陽性者 8 例（57.14 %），首次可疑陽性1例；第二次采集陽性 3 例（21.43 %）；第三次采集陽性 1 例（7.14 %），4 次采集 1 例（7.14 %）陽性，5 次采集 2 例（14.29 %）陽性。結(jié)論：COVID-19 常見癥狀有發(fā)熱、干咳，但其特異性較低，仍需進行 SARSCoV-2 核酸檢測才能確診。咽拭子是門診首選的 SARS-CoV-2 核酸檢測方式存在便捷的優(yōu)點。

【關(guān)鍵詞】咽拭子；新型冠狀病毒；核酸檢測；發(fā)熱；干咳

【中圖分類號】R51 【文獻標識碼】A 【文章編號】2096-5249（2021）06-0177-02

SARS-CoV-2核酸檢測是當前確診COVID-19的金標準，因此病毒的RNA為單鏈結(jié)構(gòu)，存在穩(wěn)定性較差的特點，導致采樣檢測的過程中極易出現(xiàn)假陰性的現(xiàn)象[1]。目前國內(nèi)各醫(yī)院發(fā)熱門診主要采用咽拭子檢測核酸。該方法檢測簡單，取樣流程較少，操作迅速，而此檢測方法的檢測靈敏度高低與否目前還未報道[2-3]。本研究通過對我市14例確診患者的病歷資料、新型冠狀病毒核酸取樣次數(shù)和方法進行了回顧性分析，評估了咽拭子SARS-CoV-2核酸檢測對診斷COVID-19的臨床意義。

1 對象與方法

1.1 研究對象

根據(jù)新型冠狀病毒性肺炎診療方案（試行第七版）對我市14例COVID-19患者進行了確診。入院第一天收集COVID-19確診患者的一般資料信息，其中男10例，女4例，年齡23～77（50.12±10.14）歲，病程為1～3（2.01±0.13）d，根據(jù)國家衛(wèi)健委發(fā)布《新型冠狀病毒感染的肺炎的診療方案（試行第五版）》，CT影像結(jié)果被納入湖北省臨床診斷標準中，“疑似病例具有肺炎影像學特征者”即為臨床診斷病例。

納入標準：（1）確診為COVID-19；（2）知情本次研究并自愿參與；（3）無精神障礙和意識障礙，可配合研究。

排除標準：（1） COVID-19疑似病例。（2）不愿參加本次研究的COVID-19確診患者。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準，所有患者均已知情并簽署了知情同意書。

1.2 方法

咽拭子取樣均為丙綸頭一次性無菌塑料拭子。采樣方法：（1）咽拭子：患者用生理鹽水沖洗口腔，拭子用無菌生理鹽水浸泡，患者頭部稍微仰起，將嘴張開，發(fā)出“啊”音，將咽扁桃體暴露，拭子跨過舌根，稍用力在患者兩側(cè)的咽扁桃體反復擦拭不少于3次，然后在咽后壁反復擦拭3次以上；（2）鼻咽拭子：采樣者一只手輕扶患者頭部，一只手拿拭子，貼于鼻孔放入，沿下鼻道底向后緩慢進入。待拭子頂部至咽后壁時，輕柔地旋轉(zhuǎn)一圈，如果出現(xiàn)反射性咳嗽，中止一段時間，之后再緩慢將拭子取出。取樣后，迅速折斷拭子頭，浸入盛有2 ml等滲鹽溶液（無核酶污染）的1.5 ml離心管（EP離心管）中，蓋上蓋子并單獨包裝在塑料袋中密封儲存，于15 min～2 h內(nèi)送檢。上述操作由經(jīng)培訓并考核通過的主治醫(yī)師操作。咽拭子病毒核酸檢測由我市疾控中心檢驗科執(zhí)行，采用RT-PCR技術(shù)對樣本RNA進行檢測。

1.3 觀察指標

觀察患者的病理檢查結(jié)果、臨床癥狀表現(xiàn)、新型冠狀病毒核酸檢測確診方式及發(fā)病至確診時間、發(fā)病至確診核酸檢測次數(shù)。（1）通過血常規(guī)檢查所有患者的白細胞計數(shù)、淋巴細胞值，采用免疫比濁法對患者的C反應蛋白（CRP）進行檢測：空腹8 h以上，清晨采集受檢者靜脈血3 mL，置于真空干燥管中，室溫下靜置0.5 h，3000 r/min，離心6 min，采用免疫比濁法對CRP進行檢測。采用可見分光光度法對乳酸脫氫酶（LDH）進行檢測：取試管加入0.5 mol/L乳酸鈉溶液0.5 ml，酶液0.1 ml，空白管加蒸餾水，37℃水浴保溫3 min。然后測試管中加入NADH1 mmol/l0.1 ml，37℃水浴保溫15 min。加入2，4-二硝基苯肼，37℃水浴保溫15 min，加入氫氧化鈉溶液終止反應，靜置顯色而后處比色，通過標準曲線計算酶活。酶活單位規(guī)定：1min催化乳酸生成丙酮酸的酶量為個酶活力單位（U）。（2）心肌酶學檢查：采用全自動生化分析儀，檢測試劑為配套的生化檢測試劑。（3）肝腎功能檢查：采用比色法，嚴格按肝腎功能十一項檢測試劑盒的使用說明書對肝腎功能指標進行檢查。

1.4 統(tǒng)計學方法

將數(shù)據(jù)納入SPSS 22.0軟件中分析，計量資料比較采用t檢驗，并以（x±s）表示，計數(shù)資料采用χ2檢驗，并以率（%）表示，當P<0.05時差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 病理檢查結(jié)果

71.43 %（10/14）的患者白細胞計數(shù)正常，而淋巴細胞下降（8例，57.14 %）、CRP升高[9例，（35.16±8.92）mg/L]、LDH上升[10例，（265.54±10.65）U/L]。收集所有患者的心肌酶學、肝腎功能檢查結(jié)果：肌酸磷酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌紅蛋白（Mb）上升各1例，分別為（309.62±100.32）U/L、（36.95±3.18）U/L、（159.64±50.23）U/L；總膽紅素（TBil）上升1例，天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）和谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、尿素氮（BUN）和肌酐（CRE）分別升高2例和1例。收集所有患者的降鈣素原（PCT）檢查結(jié)果，其中6例<0.05 ng/mL，1例輕微上升（0.65 ng/mL）。

2.2 臨床癥狀表現(xiàn)

COVID-19患者最常見的臨床癥狀為發(fā)熱78.57 %（11/14），咳嗽57.14 %（8/14），咳嗽以干咳為主，少數(shù)患者為咳痰，一部分患者存在流感樣癥狀。見表1。

2.3 新型冠狀病毒核酸檢測確診方式及發(fā)病至確診時間

所有病例中，咽拭子采樣12例（85.71 %），誘導排痰2例（14.29 %），通過咽拭子、痰標本RT-PCR確診13例（92.86 %），痰標本NGS確診1例（7.14 %）。發(fā)病至確診的中位時間為4.8天。

2.4 發(fā)病至確診核酸檢測次數(shù)

首次采集標本SARS-CoV-2檢測陽性者8例（57.14 %），首次可疑陽性1例；第二次采集陽性者3例（21.43 %）；第三次采集陽性1例（7.14 %），4次采集1例（7.14 %）陽性，5次采集2例（14.29 %）陽性。

3 討論

當前，COVID-19疫情獲得了政府的有效防控，目前治愈例數(shù)大于確診例數(shù)，然而一些患者治愈后，復診時發(fā)現(xiàn)SARS-CoV2-核酸檢測再次陽性的情況。隨著各個行業(yè)開始復工，加之海外輸入的病例數(shù)增多，疫情的防控仍然需要謹慎對之[4-6]。我市14例COVID-19確診的病例中主要臨床癥狀表現(xiàn)為重癥的3人，其中年齡最大者77歲，最小者23歲，60歲以上者5人；男性9人，女性5人；8例為武漢來我市旅游的人員，其余6例中有1例為湖北孝感在我市工作的人員，5例為本市本地人，均有湖北旅游居史或接觸史，主要癥狀為發(fā)熱、干咳。病理檢查顯示，白細胞計數(shù)正常者較多，淋巴細胞計數(shù)下降，CRP升高，LDH升高者較多。然而，僅根據(jù)臨床癥狀和病理檢查結(jié)果來辨別于其他病毒感染并不容易。核酸檢測是COVID-19診斷的有效方法，我市14例確診的患者中，咽拭子首次確診的病例數(shù)并不多。臨床上對存在顯著暴露既往史的患者保持高度的警覺性。故怎樣提升COVID-19的診斷準確度是一個迫切需要解決的問題。造成核酸檢測假陰性的原因有：（1）SARS-CoV-2為RNA單鏈結(jié)構(gòu)，與雙鏈結(jié)構(gòu)比較其穩(wěn)定性較差。（2）病毒受體主要存在于呼吸道，較少存在于咽部，多數(shù)患者僅出現(xiàn)干咳癥狀。在臨床工作中，從手術(shù)方便的角度出發(fā)，結(jié)合患者的耐受性，門診對疑似患者首選咽拭子核酸檢測。本文所有確診患者中，71.43 %的標本是用咽拭子采集的。這種采樣方法要求咽拭子在采樣點旋轉(zhuǎn)360°并停留15～30 s，但由于部分患者在臨床采樣時耐受性差，導致咽拭子不能在采集點停留充足的時間；另外，部分患者在采樣過程中出現(xiàn)干嘔，使得拭子接觸其他含唾液的口腔部位，唾液RNA酶含量較高，這導致病毒被酶降解。（3）疾病嚴重程度和病程對病毒的分布產(chǎn)生了一定的影響[7-11]。目前，雖然SARS-CoV-2抗體檢測在我國應用較少，但隨著檢測技術(shù)水平的提升，血清學檢測也將成為病毒感染診斷的重要手段。本研究對我市14例COVID-19確診患者的臨床癥狀表現(xiàn)及SARS-CoV-2核酸檢測的取樣方法和次數(shù)進行了回顧性分析，評估了咽拭子核酸檢測對診斷COVID-19的臨床意義，核酸檢測陰性并不能排除病毒感染；并分析了引發(fā)檢測假陰性的原因，總結(jié)了提高診斷正確率的方法。

綜上，咽拭子是SARS-CoV-2核酸檢測的簡便方法。但是，不能排除假陰性結(jié)果。

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