東莨菪堿長(zhǎng)期給藥致小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙模型及機(jī)制研究

劉淑青 顧豐華

【摘要】目的：考察東莨菪堿長(zhǎng)期給藥后對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響，探究東莨菪堿長(zhǎng)期給藥致小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙模型的劑量效應(yīng)關(guān)系及對(duì)神經(jīng)再生和氧化損傷的作用。方法：ICR雄性小鼠，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、14天造模組和14天持續(xù)造模組。造模組分別腹腔注射東莨菪堿1 mg/kg、2 mg/kg、4 mg/kg，空白對(duì)照組腹腔注射等體積0.9%氯化鈉溶液。通過(guò)Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)、跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠學(xué)習(xí)記憶能力，BrdU+DCX染色檢測(cè)小鼠腦神經(jīng)元增殖分化情況，考察腦內(nèi)乙酰膽堿酯酶（AChE）、超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量變化。結(jié)果：東莨菪堿長(zhǎng)期給藥后可延長(zhǎng)小鼠找尋水迷宮平臺(tái)潛伏期，減少穿越平臺(tái)次數(shù)，降低目標(biāo)象限停留時(shí)間；減少跳臺(tái)潛伏期，增加錯(cuò)誤次數(shù)；可影響小鼠BrdU+DCX陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)；改變AChE、SOD活性及MDA含量；有劑量-效應(yīng)關(guān)系。結(jié)論：東莨菪堿長(zhǎng)期給藥后可造成一定程度小鼠學(xué)習(xí)記憶功能障礙，且長(zhǎng)期給藥可致神經(jīng)細(xì)胞損傷，其作用機(jī)制可能與神經(jīng)細(xì)胞再生障礙和氧化損傷有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】東莨菪堿；Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)；免疫熒光染色

中圖分類號(hào)：R-332

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：2096-5249（2021）02-0001-06

Model and mechanism of scopolamine induced learning and memory impairment in mice

LIU Shu-qing1，2 GU Feng-hua1，2△

1.State Key Laboratory of &New Drug Pharmaceutical Process， Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry， China State Institute of Pharmaceutical Industry， Shanghai 200437， China

2. Shanghai Professional and Technical Service Center for Biological Material Druggability Evaluation， Shanghai 200437，China

【Abstract】Objective：To investigate the effects of scopolamine on learning and memory function of mice after long-term administration and explore the dose-effect relationship of long-term administration of scopolamine，as well as the effects on nerve regeneration and oxidative damage.Methods：Male ICR mice were randomly divided into a blank control group，a 14-day model group and a 14-day continuous model group. The model group was scopolamine by intraperitoneal injection at the doses of 1，2 and 4 mg/kg，and the blank control group was given the same volume of saline.Learning and memory ability of mice were investigated by Morris water maze experiment and diving platform experiment，and the proliferation and differentiation of brain neurons were detected by BrdU+DCX staining，and cholinesterase（AChE），superoxide dismutase（SOD）activity and malondialdehyde（MDA）content of brain were investigated.Results：Continuous administration of scopolamine could prolong the incubation period of finding the water maze platform，reduce the number of crossing the platform，and reduce the residence time of the target quadrant.And reduce the diving platform incubation period，increase the number of errors.The number of BrdU+DCX positive cells in mice was affected.AChE，SOD activity and MDA content were changed.There is a dose-effect relationship.Conclusion：Scopolamine can cause learning and memory dysfunction and nerve cell damage in mice after long-term，the mechanism of which may be related to nerve cell regeneration disorder and oxidative damage.

【Key words】scopolamine；Morris water maze experiment；Immunofluorescence staining

東莨菪堿作為M膽堿受體阻斷藥，與多種亞型M受體有相似的親和力，能阻礙乙酰膽堿與腦內(nèi)M受體的結(jié)合，主要作用于記憶的獲取階段，從而影響信息的傳遞，導(dǎo)致學(xué)習(xí)記憶功能受損[ 1 ]，與部分老年鼠的學(xué)習(xí)記憶損傷存在相同的作用機(jī)制[ 2 ]，可作為老年性癡呆癥造模方法之一。研究證明，東莨菪堿單次給藥作為學(xué)習(xí)記憶損傷模型，可造成功能性改變，此模型損傷可逆[ 1 ]，但對(duì)于長(zhǎng)期給藥所造成的損傷尚不明確。段新等[3]發(fā)現(xiàn)，東莨菪堿2 mg/kg慢性給藥條件下，對(duì)大鼠記憶有一定損害，對(duì)神經(jīng)元突觸可塑性有輕微影響。本研究擬連續(xù)14天給予不同劑量東莨菪堿，通過(guò)Morris水迷宮、跳臺(tái)等行為學(xué)實(shí)驗(yàn)，考察東莨菪堿長(zhǎng)期給藥后能否造成學(xué)習(xí)記憶損傷模型。并通過(guò)BrdU+DCX雙重免疫熒光染色及腦組織AChE、SOD、MDA等生化指標(biāo)，研究東莨菪堿長(zhǎng)期給藥是否影響腦組織神經(jīng)元增殖分化，改變酶活性，造成氧化損傷，從而影響學(xué)習(xí)記憶功能，探索持續(xù)14天給藥條件下不同劑量東莨菪堿對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響及長(zhǎng)期給藥對(duì)腦組織損傷程度，探究其作用機(jī)制，為后續(xù)研究工作提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康ICR雄性小鼠，體重18 g，SPF級(jí)，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供，合格證編號(hào)：20170005025670，許可證號(hào)碼：SCXK（滬）2017-0005。小鼠飼料是標(biāo)準(zhǔn)固體飼料，自由飲水。

1.1.2 試劑

東莨菪堿氫溴酸鹽（Aladdin Industrial Corporation，批號(hào)：H1507073），考馬斯亮藍(lán)蛋白測(cè)定試劑盒 （批號(hào)：20181221）、乙酰膽堿酯酶（acetylcholine esterase，AChE）測(cè)定試劑盒（批號(hào)：20191231）總超氧化物歧化酶（T-SOD）試劑盒（批號(hào)：20200806）、微量丙二醛（MDA）測(cè)試盒（批號(hào)：20200811），均由南京建成生物工程研究所提供。

1.1.3 儀器

Noldus動(dòng)物軌跡識(shí)別系統(tǒng)，吉良軟件避暗記錄儀，YLS-3TB跳臺(tái)記錄儀，TL-2010S型組織勻漿器，F(xiàn)resco21型臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)，GHP-9080型隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱，Thermo全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組及模型建立

ICR小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7天， 隨機(jī)分為空白對(duì)照組、14天造模組（連續(xù)給予東莨菪堿腹腔注射14天，行為學(xué)試驗(yàn)期間給予生理鹽水，腹腔注射30 min后進(jìn)行行為學(xué)試驗(yàn)）和14天持續(xù)造模組（連續(xù)給予東莨菪堿腹腔注射14天，行為學(xué)試驗(yàn)期間給予東莨菪堿，腹腔注射30 min后進(jìn)行行為學(xué)試驗(yàn)[4]），如圖1。 14天造模組包括1 mg/kg組（以下簡(jiǎn)稱14-1組）、2 mg/kg組（簡(jiǎn)稱14-2組）、4 mg/kg組（簡(jiǎn)稱14-4組）。14天持續(xù)造模組包括1 mg/kg組（簡(jiǎn)稱14C-1組）、2 mg/kg組（簡(jiǎn)稱14C-2組）、4 mg/kg組（簡(jiǎn)稱14C-4組）。分為兩批試驗(yàn)。（1）每組6只動(dòng)物，14-1組、14-2組、14-4組、14C-1組、14C-2組、14C-4組分別腹腔注射東莨菪堿1 mg/kg、2 mg/kg、4 mg/kg、1 mg/kg、2 mg/kg、4 mg/kg，空白對(duì)照組腹腔注射等體積0.9%氯化鈉溶液，第11～14天腹腔注射BrdU 50 mg/kg。第15天開(kāi)始Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)束取腦進(jìn)行BrdU+DCX雙重免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)。（2）每組10只動(dòng)物，14-1組、14-2組、14-4組、14C-1組、14C-2組、14C-4組分別腹腔注射東莨菪堿1 mg/kg、2 mg/kg、4 mg/kg、1 mg/kg、2 mg/kg、4 mg/kg，空白對(duì)照組腹腔注射等體積0.9%氯化鈉溶液。第15天開(kāi)始跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)束取腦制備腦組織勻漿，測(cè)定腦組織蛋白含量、AchE、SOD活性和MDA含量。

1.2.2 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)

第15天開(kāi)始Morris水迷宮訓(xùn)練。訓(xùn)練方式：每次每只小鼠先放在位于第Ⅳ象限的平臺(tái)上熟悉15 s，再將小鼠于第Ⅳ象限面壁投入水中，使其尋找平臺(tái)，小鼠尋找到隱匿平臺(tái)后撈出擦干，此時(shí)間為潛伏期。以60 s為限，如果60 s仍找不到平臺(tái)，可引導(dǎo)其找到平臺(tái)，然后在平臺(tái)滯留20 s。休息10 min后，再依次將小鼠放入第Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ象限游泳以尋找平臺(tái)，其余過(guò)程同上。每天訓(xùn)練1次，連續(xù)5 d。記錄潛伏期，該潛伏期反映動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶能力。

第6天進(jìn)行撤臺(tái)實(shí)驗(yàn)。將位于第Ⅳ象限的平臺(tái)撤除，將小鼠從水池的第Ⅱ象限面向池壁放入水中，游泳尋找平臺(tái)1 min。Morris水迷宮Noldus統(tǒng)計(jì)軟件將記錄每只小鼠穿越平臺(tái)所在位置的次數(shù)，分別在4個(gè)象限的活動(dòng)路程，以及在平臺(tái)中心區(qū)域及外圍區(qū)域的活動(dòng)時(shí)間及路程等，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。

1.2.3 免疫組化染色

麻醉小鼠，經(jīng)多聚甲醛心臟灌流后取腦，放入含適量多聚甲醛溶液的離心管中維持形態(tài)。制備石蠟包埋切片，BrdU+DCX免疫熒光染色，計(jì)數(shù)BrdU、DCX陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。

1.2.4 跳臺(tái)試驗(yàn)

YLS-3TB小鼠跳臺(tái)記錄儀由5室構(gòu)成，每室120 mm×120 mm×180 mm，每室左上角放置一個(gè)3 cm×3 cm×3 cm絕緣跳臺(tái)座，底部有銅柵按0.5 cm間距排列鋪成，可以通36 V直流電。讓小鼠在箱內(nèi)適應(yīng)5 min后通電。24 h后重復(fù)進(jìn)行，測(cè)其記憶保持能力。將上述刺激過(guò)的小鼠置于絕緣平臺(tái)上，隨即通電并開(kāi)始計(jì)時(shí)，動(dòng)物受到電擊后的正常反應(yīng)是跳回平臺(tái)以躲避傷害性刺激，多數(shù)動(dòng)物可能再次或多次跳至銅柵上，受到電擊后又迅速跳回平臺(tái)。從計(jì)時(shí)開(kāi)始到小鼠第一次跳下平臺(tái)的時(shí)間，作為潛伏期，即小鼠的學(xué)習(xí)能力，潛伏期>300 s則按300 s記錄，同時(shí)記錄5 min內(nèi)小鼠跳下平臺(tái)遭受電擊的次數(shù)（即錯(cuò)誤次數(shù)），以此作為記憶能力的成績(jī)。

1.2.5 取材及腦組織勻漿制備

行為學(xué)檢測(cè)結(jié)束后，小鼠斷頭處死，取腦，用冷生理鹽水為勻漿介質(zhì)，置EP管，勻漿器60 Hz 30 s研磨制成腦組織勻漿4 ℃條件下將腦組織勻漿4000 rpm離心5 min，取上清液測(cè)定AchE、SOD活性及MDA含量等生化指標(biāo)。

2 結(jié)果

2.1 水迷宮實(shí)驗(yàn)

（1）訓(xùn)練期間不同組別小鼠尋找平臺(tái)潛伏期、目標(biāo)象限停留時(shí)間、周圍區(qū)域停留時(shí)間結(jié)果見(jiàn)表1～3和圖2。 Control組隨訓(xùn)練天數(shù)的增加，其尋找平臺(tái)潛伏期逐漸縮短，小鼠在目標(biāo)象限的停留時(shí)間延長(zhǎng)。東莨菪堿給藥14天后，其變化趨勢(shì)與Control組相似，隨訓(xùn)練天數(shù)的增加，其尋找平臺(tái)潛伏期逐漸縮短，小鼠在目標(biāo)象限的停留時(shí)間延長(zhǎng)，但期間波動(dòng)較大。

1.2.6 腦組織AChE、SOD活性和MDA含量測(cè)定

按照測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，測(cè)定腦組織AChE、SOD活性和MDA含量。

1.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)均以（x±s）表示，顯著性分析采用One way ANOVA檢驗(yàn)樣本總體是否有差異，若有差異，則再以t檢驗(yàn)檢驗(yàn)各組與空白對(duì)照組之間的差異，以P<0.05或?yàn)榫哂薪y(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（2）撤臺(tái)測(cè)試結(jié)果見(jiàn)表4和圖3。測(cè)試當(dāng)天，給藥14天后，模型小鼠找尋目標(biāo)平臺(tái)潛伏期較Control組有所升高，但無(wú)顯著性差異（P>0.05）；1 mg/kg組和2 mg/kg組穿越平臺(tái)次數(shù)接近，較Control組次數(shù)減少，無(wú)顯著性差異（P>0.05），4 mg/kg組穿越平臺(tái)次數(shù)顯著少于Control組（P<0.05）。

2.2 免疫組化染色結(jié)果

BrdU+/DCX+雙重免疫熒光染色結(jié)果顯示見(jiàn)表5和圖4、5。結(jié)果顯示，14天持續(xù)造模組BrdU+細(xì)胞數(shù)與對(duì)照組相比減少，有極顯著差異（P<0.01），1 mg/kg組和2 mg/kg組BrdU+細(xì)胞數(shù)接近，高于4 mg/kg組，隨東莨菪堿劑量增加，BrdU+細(xì)胞數(shù)減少；DCX+細(xì)胞數(shù)隨東莨菪堿劑量增加而減少，1 mg/kg組與對(duì)照組相比DCX+細(xì)胞數(shù)有所降低，但沒(méi)有顯著性差異（P>0.05），2 mg/kg組和4 mg/kg組與對(duì)照組相比減少，有顯著差異（P<0.05）；4 mg/kg組BrdU+/ DCX+與對(duì)照組相比降低，有極顯著差異（P<0.01）。14天造模組BrdU+細(xì)胞數(shù)與對(duì)照組相比減少，有極顯著差異（P<0.01），1 mg/kg組和2 mg/kg組BrdU+細(xì)胞數(shù)接近，高于4 mg/kg組，隨東莨菪堿劑量增加，BrdU+細(xì)胞數(shù)減少；DCX+細(xì)胞數(shù)隨東莨菪堿劑量增加而減少，與空白對(duì)照組相比有所降低，但沒(méi)有顯著差異（P>0.05）；4 mg/kg組BrdU+/DCX+與對(duì)照組相比降低，有顯著差異（P<0.05）。

隨東莨菪堿劑量增加，錯(cuò)誤次數(shù)依次增加，與空白對(duì)照組相比，沒(méi)有顯著差異（P>0.05）。

2.3 跳臺(tái)試驗(yàn)

不同組別小鼠跳臺(tái)試驗(yàn)潛伏期和錯(cuò)誤次數(shù)見(jiàn)表6和圖6。給藥14天后，1模型小鼠跳下站臺(tái)的潛伏期，隨東莨菪堿劑量增加，其潛伏期依次縮短，但與空白對(duì)照組相比，沒(méi)有顯著性差異（P>0.05）；跳臺(tái)錯(cuò)誤次數(shù)隨莨菪堿劑量增加，錯(cuò)誤次數(shù)依次增加，與空白對(duì)照組相比，沒(méi)有顯著差異（P>0.05）。

2.4 小鼠腦組織蛋白含量與乙酰膽堿酯酶活性

各組腦組織勻漿中總蛋白含量無(wú)顯著性差異（P>0.05）。14天持續(xù)造模組中，1 mg/kg組膽堿酯酶活性與照組相比有所上升，但沒(méi)有顯著性差異（P>0.05）；

2 mg/kg組和4 mg/kg組膽堿酯酶活性均值接近，顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。14天造模組中，1 mg/kg組膽堿酯酶活性與對(duì)照組相比有所上升，但沒(méi)有顯著性差異（P>0.05）；2 mg/kg組和4 mg/kg組膽堿酯酶活性顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。

2.5 小鼠腦組織SOD活性和MDA含量

結(jié)果顯示，14天持續(xù)造模組中，1 mg/kg組和2 mg/kg組小鼠的單位蛋白SOD活性較對(duì)照組降低，但沒(méi)有低于對(duì)照組（P<0.05）；1 mg/kg組和2 mg/kg組MDA含量與對(duì)照組相比增加，但沒(méi)有顯著差異（P>0.05），4 mg/kg組MDA含量明顯高于對(duì)照組（P<0.05）。14天造模組顯著差異（P>0.05），4 mg/kg組單位蛋白SOD活性明顯小鼠的單位蛋白SOD活性與對(duì)照組相比降低，但沒(méi)有顯著差異（P>0.05），且隨東莨菪堿劑量增加，其活性依次降低；MDA含量較空白對(duì)照組有所增加，但沒(méi)有顯著差異（P>0.05），且隨東莨菪堿劑量增加，其含量依次升高。

3 討論

Morris水迷宮試驗(yàn)結(jié)果表明，腹腔注射東莨菪堿可影響模型組小鼠逃避潛伏期、目標(biāo)象限停留時(shí)間等，期間訓(xùn)練結(jié)果有較大波動(dòng)。測(cè)試當(dāng)天，14天造模組小鼠找尋平臺(tái)潛伏期增加，穿越平臺(tái)次數(shù)減少，與東莨菪堿劑量存在相關(guān)性，4 mg/kg組穿越平臺(tái)次數(shù)與空白對(duì)照組有顯著性差異，表明東莨菪堿長(zhǎng)期給藥后可一定程度影響小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，其影響強(qiáng)度與劑量有關(guān)。訓(xùn)練期間，14天造模組與空白對(duì)照組變化趨勢(shì)相近，基本無(wú)顯著性差異，14天持續(xù)造模組則有顯著性差異，推測(cè)長(zhǎng)期給與東莨菪堿后，小鼠有一定學(xué)習(xí)記憶損傷，但最終通過(guò)訓(xùn)練形成的記憶與正常小鼠幾乎無(wú)差異，與東莨菪堿重復(fù)5天[5]和21天[3]給藥造成的學(xué)習(xí)記憶行為改變相似，驗(yàn)證了Duka[6]文獻(xiàn)中東莨菪堿干擾信息的獲取，但不影響空間參照記憶的保持。

同時(shí)跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，隨劑量增加，給予東莨菪堿14天后可縮短造模小鼠跳下平臺(tái)的潛伏期，增加錯(cuò)誤次數(shù)，即東莨菪堿對(duì)模型小鼠學(xué)習(xí)記憶能力損傷有劑量關(guān)系，與高莉等[ 1 ]對(duì)東莨菪堿單次給藥研究結(jié)果相符，但跳臺(tái)結(jié)果未顯示出顯著性差異，表明這三種劑量下東莨菪給藥14天后對(duì)小鼠學(xué)習(xí)和被動(dòng)回避記憶能力有一定損傷作用，但不能作為理想的學(xué)習(xí)記憶損傷模型。

基底前腦復(fù)合體膽堿能神經(jīng)元丟失是老年性癡呆癥的病理改變特征之一，因而可影響腦內(nèi)乙酰膽堿的合成、貯存、釋放、滅活及與受體相互作用等。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)測(cè)定腦內(nèi)蛋白含量，AchE活性，發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)期給予東莨菪堿后，模型組小鼠的AChE活性升高。乙酰膽堿作為神經(jīng)元中的主要的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，對(duì)于記憶的保留至關(guān)重要。本研究中AChE活性升高，推測(cè)可使乙酰膽堿降解增加，降低乙酰膽堿含量，影響小鼠記憶功能，且東莨菪堿2 mg/kg、4 mg/kg組活性相似，均高于1 mg/kg組，進(jìn)一步證實(shí)東莨菪堿對(duì)小鼠記憶損傷存在劑量-效應(yīng)關(guān)系。

研究發(fā)現(xiàn)，在老年癡呆癥患者腦內(nèi)大量神經(jīng)元持續(xù)性受損，主要發(fā)生在海馬CA1 區(qū)。同時(shí)神經(jīng)元損傷與海馬神經(jīng)再生不足加速了AD病程的發(fā)展[7-8]。BrdU標(biāo)記新生神經(jīng)元有絲分裂過(guò)程，DCX標(biāo)記未成熟神經(jīng)元，因此BrdU+/DCX+雙標(biāo)能夠特異性顯示新生神經(jīng)元的增殖過(guò)程[9-10]。結(jié)果顯示，長(zhǎng)期給予東莨菪堿后，BrdU+細(xì)胞數(shù)顯著降低，對(duì)阻礙神經(jīng)細(xì)胞增殖作用顯著，同時(shí)BrdU+/DCX+有所降低，尤其4 mg/kg組BrdU+/DCX+顯著降低，表明長(zhǎng)期給予東莨菪堿可能阻礙神經(jīng)再生過(guò)程，且有劑量-效應(yīng)關(guān)系。

眾多對(duì)于東莨菪堿造模的AD藥物研究文獻(xiàn)中均考察了藥物對(duì)SOD和MDA的影響[ 1 1 ]。SOD是抗氧化酶，可清除腦內(nèi)過(guò)量氧自由基，MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化降解產(chǎn)物，其含量與細(xì)胞損傷呈正相關(guān)。單次給與東莨菪堿，可使SOD活性降低，MDA含量增加。本研究發(fā)現(xiàn)，東莨菪堿長(zhǎng)期給藥對(duì)SOD和 MDA影響較小，但仍存在SOD活性降低和MDA含量增加趨勢(shì)，且呈劑量關(guān)系。4 mg/kg持續(xù)造?？娠@著降低SOD活性，增加MDA含量，影響脂質(zhì)過(guò)氧化，造成神經(jīng)細(xì)胞損傷，從而引起記憶障礙。

4 結(jié)論

東莨菪堿長(zhǎng)期給藥后可造成小鼠學(xué)習(xí)記憶行為損傷和神經(jīng)細(xì)胞損傷，其作用機(jī)制可能與神經(jīng)細(xì)胞再生障礙和氧化損傷有關(guān)。

參考文獻(xiàn)

[1] 高莉，彭曉明，張富春，霍仕霞，林娟，閆明.不同劑量東茛菪堿對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2013，32（5）：573-576.

[2] Markowska AL.Cholinergic manipulations in the medial septal area：age-related effects on working memory and hippocampal electrophysiology[J].Journal of Neuroence the Official Journal of the Society for Neuroence，1995，15（3）：2063-2073.

[3] 段新，馬光瑜，張艷美.東莨菪堿慢性給藥大鼠作為老齡相關(guān)記憶損害模型的探索[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào)，2005，13（2）：97-100.

[4] Park HR，Lee H，Park H，et al.Fermented sipjeondaebo-tang alleviates memory deficits and loss of hippocampal neurogenesis in scopolamine-induced amnesia in mice[J]. entific Reports，2016，6（1）：22405.

[5] Zhiling Y，Masakatsu T，Hiroshi K.Effects of acute and chronic scopolamine and morphine on memory in mice using a Y-maze spontaneous alternation task[J].Journal of China Pharmaceutical University，1996，27（11）：680-686.

[6] Duka T，Ott H，Rohloff A，et al.The effects of a benzodiazepine receptor antagonist beta-carboline ZK-93426 on scopolamine-induced impairment on attention，memory and psychomotor skills[J]. Psychopharmacology，1996，123（4）：361-373.

[7] 葉小連，張晉萍，郭蕊.神經(jīng)再生與阿爾茨海默病的研究進(jìn)展[J].神經(jīng)疾病與精神衛(wèi)生，2018，18（3）：205-210.

[8] Lee SH，Kim KR，Ryu SY，et al.Impaired short-term plasticity in mossy fiber synapses caused by mitochondrial dysfunction of dentate granule cells is the earliest synaptic deficit in a mouse model of Alzheimers disease[J].Journal of Neuroence the Official Journal of the Society for Neuroence，2012，32（17）：5953-5963.

[9] 劉明菲，李娟，顧晶晶，崔夢(mèng)卿，李良平，張璐.可卡因戒斷對(duì)小鼠焦慮樣行為以及海馬神經(jīng)再生的影響[J].中國(guó)臨床解剖學(xué)雜志，2013，31（5）：551-554.

[10] 湯薈冬，Mao Xiaoou，Jin Kunlin.三重轉(zhuǎn)基因阿爾茨海默病動(dòng)物模型的神經(jīng)再生研究[J].神經(jīng)病學(xué)與神經(jīng)康復(fù)學(xué)雜志，2008， 5（2）：102-105.

[11] 楊久山，孫秀萍，王憶杭，王立為，劉新民.連翹酯苷對(duì)東莨菪堿模型小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響及其機(jī)制研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2016，22（8）：177-181.