油茶內(nèi)生拮抗細(xì)菌的篩選、鑒定及防效

尚笑男，劉君昂，馮福山，周國(guó)英*

（1.中南林業(yè)科技大學(xué)，長(zhǎng)沙 410004；2.人工林病蟲(chóng)害防控國(guó)家林業(yè)局重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/森林有害生物防控湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/經(jīng)濟(jì)林培育與保護(hù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，長(zhǎng)沙 410004）

油茶Camelliaoleifera屬于山茶科山茶屬植物，與橄欖油、椰子、油棕櫚并稱為世界四大木本食用油料樹(shù)種[1]，在我國(guó)秦嶺、淮河以南地區(qū)有大面積栽培種植產(chǎn)區(qū)[2]。其種子能夠榨油，營(yíng)養(yǎng)豐富，是一種優(yōu)質(zhì)的食用油原料，具有降血壓、降血糖以及軟化血管等多方面的作用[3]。除此之外，茶餅不但能作為農(nóng)藥，還能制成肥料，對(duì)病蟲(chóng)害起到一定的防治作用[4]。然而，隨著油茶病害的發(fā)生和危害逐漸增強(qiáng)，油茶產(chǎn)業(yè)化發(fā)展受到了一定程度的制約[5]，關(guān)于油茶病害的報(bào)道已達(dá)50多種[6-13]，包括油茶炭疽病Collectotrichum gloeosporioides、油茶根腐病Fusariumproliferatum、油茶軟腐病Agaricodochiumcamelliae、油茶葉枯病PestalotiopsesMicrospora等，其中油茶炭疽病最為普遍發(fā)生。因此，深入研究油茶病害的防治措施，對(duì)提高油茶的產(chǎn)量有著重要的意義。

目前，對(duì)于油茶病害的防治仍然以化學(xué)防治手段為主，容易引起一系列的“3R”問(wèn)題，包括抗性、殘留和再猖獗。與此同時(shí)，還會(huì)造成人畜傷害、環(huán)境污染、油茶產(chǎn)量降低等多方面的問(wèn)題。因此，油茶病害的生物防治變得尤為重要。微生物菌劑具有高效、低毒低殘留、對(duì)環(huán)境友好等優(yōu)點(diǎn)，所以利用微生物防治油茶病害是實(shí)現(xiàn)油茶病害綠色可持續(xù)控制的有效手段。近年來(lái)，分離篩選出有益微生物制備微生物菌劑防治油茶病害的研究受到廣泛關(guān)注，從油茶內(nèi)分離出來(lái)的拮抗細(xì)菌以芽胞桿菌屬Bacillus居多，如解淀粉芽胞桿菌Bacillusamyloliquefaciens、枯草芽胞桿菌Bacillussubtilis等[14,15]，芽胞桿菌防治植物病害的機(jī)制主要是誘導(dǎo)植物產(chǎn)生抗病性[16]，而且其可以形成芽胞，抵抗多種不良環(huán)境[17]。

我國(guó)微生物菌劑研究起步雖然相對(duì)較晚，但在微生物菌劑的研究和應(yīng)用上依舊取得了一定的成果。但總體而言，我國(guó)對(duì)微生物菌劑的研究方面，主要集中在高效菌種的選育，在微生物菌劑的研制、開(kāi)發(fā)和推廣應(yīng)用上依然不夠完善。

本研究為油茶炭疽病的生物防治篩選生防菌，從湖南常德、湖北麻城、江西九江、河南信陽(yáng)以及廣東增城等地采集油茶健康葉片并進(jìn)行拮抗菌的分離，選出拮抗菌株 HBMC?B05，結(jié)合菌落形態(tài)觀察、部分生理生化特性觀察以及16S rDNA基因和gyrA基因序列綜合分析進(jìn)行菌種鑒定，明確該菌為貝萊斯芽胞桿菌Bacillusvelezensis，這也是首次從油茶健康葉片中分離出貝萊斯芽胞桿菌HBMC?B05，然后測(cè)定貝萊斯芽胞桿菌對(duì)油茶病菌的抑制作用，最后對(duì)內(nèi)生拮抗菌HBMC?B05和枯草芽胞桿菌Y13復(fù)配形成的復(fù)合菌劑BY10進(jìn)行田間防效試驗(yàn)，以此為防治油茶病害生防菌劑的制備提供一定的理論基礎(chǔ)和數(shù)據(jù)，也為田間油茶綠色防控提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 植物材料

來(lái)自湖南常德、湖北麻城、江西九江、河南信陽(yáng)以及廣東增城等地的普通油茶品種的健康葉片。

1.2 供試病原菌

果生炭疽菌C.fructicola、暹羅炭疽菌Colletotrichumsiamense、膠孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides、山茶炭疽菌Colletotrichumcamelliae以及油茶根腐病菌F.proliferatum、油茶軟腐病菌A.camelliae、油茶葉枯病菌P.microspora、彩絨革蓋菌Coriolusversicolor以及枯草芽胞桿菌Y13均中南林業(yè)科技大學(xué)南方人工林病蟲(chóng)害防控國(guó)家林業(yè)局重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室森林微生物菌種保藏中心提供。

1.3 供試培養(yǎng)基

NA（Nutrient Agar）培養(yǎng)基：蛋白胨10 g，牛肉膏5 g，NaCl 1.5 g，瓊脂20 g，蒸餾水1000 mL，pH 7.0～7.2，用于油茶內(nèi)生拮抗菌的分離純化。

種子培養(yǎng)基：胰蛋白胨8 g，酵母粉4 g，葡萄糖4 g，NaCl 6 g，KCl 0.06 g，MgC12·6H2O 0.5 g，蒸餾水1000 mL，pH 7.2～7.4，用于內(nèi)生拮抗菌種子液的培養(yǎng)。

LB（Luria-Bertani）培養(yǎng)基：胰蛋白胨10 g，酵母浸粉5 g，NaCl 5 g，蒸餾水1000 mL，pH 7.2～7.4，用于內(nèi)生拮抗菌發(fā)酵培養(yǎng)。

PDA（Potato-dextrose agar）培養(yǎng)基：葡萄糖20 g，馬鈴薯200 g，瓊脂18 g，蒸餾水1000 mL，pH自然，用于植物病原真菌的培養(yǎng)。

1.4 油茶葉片內(nèi)生細(xì)菌的分離和純化

采用組織塊分離法[18]進(jìn)行分離純化。將葉片沖洗干凈后，在紫外工作臺(tái)上切取4 mm2的葉片組織塊，然后置于75%乙醇中浸泡1 min，0.1%升汞中消毒30 s，75%乙醇中浸泡30 s，并在無(wú)菌水中漂洗4次后，將其與10 mL無(wú)菌水和已滅菌的石英砂一起研磨成勻漿，靜置30 min。將勻漿10倍系列稀釋并涂抹于NA培養(yǎng)基上，28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，觀察菌落進(jìn)行純化。試驗(yàn)共分離5個(gè)批次，以組織消毒后用無(wú)菌水沖洗的第4次沖洗液為CK，涂板3 d后若CK中無(wú)菌落，研磨液中長(zhǎng)出的菌落則可能是內(nèi)生菌，進(jìn)行純化培養(yǎng)。

1.5 拮抗菌株的初篩

采用平板對(duì)峙法[19]進(jìn)行初篩，在PDA培養(yǎng)基的正中心位置處接入油茶炭疽病菌膠孢炭疽菌C.gloeosporioides的新鮮菌餅（直徑d＝6 mm），以病原真菌為中心，以“△”型分布的3個(gè)頂點(diǎn)位置處接入上述分離的細(xì)菌，每個(gè)處理設(shè)置3組平行重復(fù)試驗(yàn)，其中對(duì)照組為只接入病原真菌菌餅的平板，將所有試驗(yàn)的培養(yǎng)皿置于28 ℃下恒溫培養(yǎng)。當(dāng)對(duì)照組病原菌的菌落直徑長(zhǎng)到培養(yǎng)皿直徑的3/4時(shí)，利用十字交叉法測(cè)量病原真菌菌落的直徑大小，運(yùn)用不規(guī)則圖形面積計(jì)算法測(cè)量處理組面積，然后據(jù)此計(jì)算生長(zhǎng)抑制率。抑菌率（%）＝（對(duì)照組菌落面積－處理組菌落面積）/對(duì)照組菌落面積×100。

1.6 拮抗菌株的復(fù)篩

對(duì)初篩過(guò)程中抑制率≥50%的菌株采用發(fā)酵法[20]進(jìn)行復(fù)篩。首先將初篩過(guò)程中選定的拮抗菌分別接入種子培養(yǎng)基中，28 ℃、180 r/min振蕩培養(yǎng)18 h，制成拮抗菌種子液；然后按10%的比例將種子液接入到LB液體培養(yǎng)基中，28 ℃、180 r/min振蕩培養(yǎng)2 d后，取適量菌液于離心管中，4 ℃、10000 r/min離心20 min，用0.22 μm的微孔濾器過(guò)濾上清液，得到無(wú)菌發(fā)酵液。取無(wú)菌發(fā)酵液100 μL涂布于PDA 培養(yǎng)基表面，接入膠孢炭疽菌的新鮮菌餅（直徑d＝6 mm）。以只接病原真菌的平板作為對(duì)照，抑菌率的計(jì)算方法同1.5。

1.7 目標(biāo)菌株菌落形態(tài)及生理生化特征鑒定

將菌株HBMC?B05接種到NA平板上，28 ℃條件下恒溫培養(yǎng)48 h后進(jìn)行革蘭氏染色試驗(yàn)，觀察菌落形態(tài)及染色情況。菌種鑒定試驗(yàn)包括運(yùn)動(dòng)性測(cè)試、明膠液化、糖類水解以及鹽類和pH耐受性測(cè)定等。根據(jù)《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)》[21]與《常見(jiàn)細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》[22]，對(duì)篩選出來(lái)的拮抗菌株進(jìn)行初步鑒定。

1.8 目標(biāo)菌株分子鑒定

用TIANamp Bacteria DNA Kit提取目標(biāo)菌株的DNA，參照楊勝清等[23]利用16S rDNA基因的通用引物對(duì)HBMC?B05的基因組進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并且參照喻國(guó)輝等[24]以促旋酶（gyrase）A亞單位基因（gyrA）[25]的引物對(duì)HBMC?B05的基因組進(jìn)行PCR擴(kuò)增（兩組基因片段的PCR反應(yīng)反應(yīng)程序及條件見(jiàn)表1）。PCR產(chǎn)物委托湖南擎科生物技術(shù)有限公司進(jìn)行測(cè)序。根據(jù)基因測(cè)序結(jié)果，在NCBI官方網(wǎng)頁(yè)上通過(guò)Nucleotide Blast程序從GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中調(diào)出同源性高的相關(guān)菌株的基因序列，利用MEGA X軟件進(jìn)行序列多重比對(duì)后，采用N?J法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)，來(lái)確定菌株HBMC?B05的分類地位。

表1 選擇的基因引物和PCR程序Table 1 Sequence of the primers and PCR program used in this study

1.9 HBMC-B05發(fā)酵液的抑菌活性測(cè)定

采用平板對(duì)峙法，測(cè)定HBMC?B05對(duì)8種供試病原真菌的抑制作用，在PDA培養(yǎng)基平板的中心位置分別接入上述生長(zhǎng)旺盛的8種供試病原真菌菌餅（直徑d＝6 mm），以病原真菌為中心，以等邊“△”型的3個(gè)頂點(diǎn)位置處分別接種20 μL HBMC?B05的發(fā)酵液，以不接種HBMC?B05發(fā)酵液為對(duì)照組，每個(gè)處理設(shè)3組平行重復(fù)試驗(yàn)，置于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，抑菌率的計(jì)算方法同1.5。

1.10 復(fù)合菌劑的田間防效

挑取貝萊斯芽胞桿菌HBMC?B05和枯草芽胞桿菌Y13的單菌落，置于20 mL各自最優(yōu)培養(yǎng)基中，28 ℃、160 r/min振蕩培養(yǎng)18 h，獲得種子液，取5%種子液置于50 mL發(fā)酵培養(yǎng)基中，28 ℃、160 r/min振蕩培養(yǎng)18 h獲取發(fā)酵液，將HBMC?B05和Y13發(fā)酵液按照體積比1:1混合，加入潤(rùn)濕劑、分散劑、崩解劑、粘結(jié)劑復(fù)配成BY10水分散粒劑。選取海南省澄邁縣國(guó)營(yíng)澄邁林場(chǎng)一年生油茶幼苗為研究對(duì)象，選取面積為2 m2（長(zhǎng)2 m×寬1 m）標(biāo)準(zhǔn)地，共15個(gè)，標(biāo)準(zhǔn)地之間設(shè)置保護(hù)行。將復(fù)合菌劑稀釋為100、300、500倍的稀釋液，稀釋方法分別為1 g BY10 水分散粒劑中加入100、300、500 mL水。9月15日初次噴藥，每隔10 d以噴灑和灌根的方式進(jìn)行藥物施用，共施用4次，由于油茶苗大小存在差異，每次藥液的噴灑量以整株油茶葉片全部潤(rùn)濕為宜。以施用清水為CK，施用1000倍多菌靈稀釋液為對(duì)照。于10月25日在每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)地隨機(jī)選取5株油茶，進(jìn)行葉片病情指數(shù)及發(fā)病率的調(diào)查，油茶葉部病害分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)表見(jiàn)表2，病情指數(shù)＝（∑各級(jí)病葉數(shù)×相對(duì)級(jí)數(shù)值）/（調(diào)查總?cè)~片數(shù)×最高級(jí)數(shù)值）×100，防治效果（%）＝（對(duì)照區(qū)病情指數(shù)－處理區(qū)病情指數(shù)）/對(duì)照區(qū)病情指數(shù)×100。

表2 油茶葉部病害發(fā)病分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)Table 2 Disease classification standard for C.oleifera

2 結(jié)果與分析

2.1 內(nèi)生菌的分離與篩選

分離出具有抑菌效果的內(nèi)生細(xì)菌11株，經(jīng)抑菌活性的初篩、復(fù)篩后，獲得5株對(duì)膠孢炭疽菌具有較好拮抗效果的菌株（表 3）。其中抑菌率最大的是HBMC?B05，其初篩抑菌率達(dá)到 70.80%，復(fù)篩抑菌率達(dá)到49.60%，考慮其可應(yīng)用性，將其選作進(jìn)一步研究的對(duì)象。

表3 拮抗菌對(duì)膠孢炭疽菌的拮抗活性Table 3 Antifungal activity of strains against C.gloeosporioides

2.2 HBMC-B05菌落形態(tài)及生理生化特征鑒定

在NA培養(yǎng)基上28 ℃培養(yǎng)28 h后，HBMC?B05的菌落為乳白色，不透明，邊緣不整齊，表面不光滑，中間有凸起，而且后期表面有褶皺，質(zhì)地黏稠（圖1A）。經(jīng)革蘭氏染色后觀察后發(fā)現(xiàn)該菌株為革蘭氏陽(yáng)性，菌體呈桿狀，長(zhǎng)2.80～6.20 μm，寬約0.80 μm，其芽胞呈圓柱狀（圖1B?a），長(zhǎng) 1.00～2.40 μm，寬約 0.60 μm（圖 1B?b）。

圖1 菌株HBMC-B05的單菌落形態(tài)（A）及其在生物顯微鏡下的形態(tài)（B）Fig.1 The colony morphology of strain HBMC-B05 (A) and under an Biomicroscope (B)

該菌株的部分生理生化特性如表4所示，可液化明膠、水解淀粉、硝酸鹽還原，可利用檸檬酸鹽、葡萄糖、D?海藻糖、D?甘露糖、蔗糖、D?甘露醇和D?山梨醇，且V?P試驗(yàn)呈陽(yáng)性，即可分解葡萄糖，同時(shí)可在高鹽、酸性、堿性條件下生長(zhǎng)，但無(wú)法產(chǎn)生H2S，根據(jù)該菌株的形態(tài)特征和生理生化特性，可以初步鑒定該菌株隸屬于芽胞桿菌屬Bacillus。

表4 菌株HBMC-B05部分生理生化特征Table 4 The physiological and biochemical characteristics of strain HBMC-B05

2.3 HBMC-B05的分子鑒定

將擴(kuò)增的16S rDNA基因片段測(cè)序后得到全長(zhǎng)1423 bp的序列，提交到GenBank，登錄號(hào)為MW888339，并將該菌株HBMC?B05的16S rDNA基因序列進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果顯示與該菌株的16S rDNA同源性較高的菌株，均屬于芽胞桿菌屬。根據(jù)16S rDNA基因進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果顯示HBMC?B05與貝萊斯芽胞桿菌B.velezensis（KY962350）和（MH244327）聚在一支，如圖2所示，分支支持率為97.00%。為了進(jìn)一步更加準(zhǔn)確的鑒定，將擴(kuò)增的gyrA基因片段測(cè)序后得到全長(zhǎng) 912 bp的序列，提交到 GenBank，登錄號(hào)為MW980086，與Rooney等[23]公布的741～939 bp長(zhǎng)度范圍結(jié)果相符。并將該菌株HBMC?B05的gyrA基因序列進(jìn)行Nucleotide Blast分析，結(jié)果顯示與該菌株的gyrA基因同源性較高的菌株，均屬于芽胞桿菌屬。根據(jù)gyrA基因進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果顯示HBMC?B05與貝萊斯芽胞桿菌（CP021495），貝萊斯芽胞桿菌（MK805131.1）和貝萊斯芽胞桿菌（CP032506）聚在一支，如圖3所示，且分支支持率為100%。因此，再結(jié)合上述形態(tài)特征與生理生化特性，可以鑒定菌株HBMC?B05為貝萊斯芽胞桿菌。

圖2 基于16S rDNA基因序列構(gòu)建菌株HBMC-B05的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Fig.2 Phylogenetic tree of strain HBMC-B05 based on the sequence of 16S rDNA

圖3 基于gyrA基因序列構(gòu)建菌株HBMC-B05及其他相關(guān)菌株的鄰接法系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Fig.3 Phylogenetic tree of strain HBMC-B05 based on the sequence of gyrA gene

2.4 HBMC-B05對(duì)病原真菌的抑制作用

平板對(duì)峙培養(yǎng)法測(cè)定結(jié)果表明，菌株 HBMC?B05 發(fā)酵液對(duì) 8 種供試植物病原真菌生長(zhǎng)均有一定抑制作用，但抑菌作用存在差異（圖4、5），其中抑菌效果最好的是果生炭疽菌，抑菌率可達(dá)到81.31%，對(duì)另外3種油茶炭疽病病原菌抑菌率可達(dá)到70.00%以上，對(duì)其他致病菌也具有良好的抑菌效果。

圖4 HBMC-B05發(fā)酵液對(duì)多種植物病原真菌的抑制效果圖Fig.4 Impression drawing of fermentative liquid of HBMC-B05 against different fungal phytopathogens

圖5 HBMC-B05發(fā)酵液對(duì)多種植物病原真菌的抑制率Fig.5 Inhibition rate of fermentative liquid of HBMC-B05 against different fungi pathogens

2.5 復(fù)合菌劑BY10的田間防效

田間試驗(yàn)結(jié)果表明，在施藥40 d后，CK組的病情指數(shù)為7.58，而B(niǎo)Y10復(fù)合菌所制成的微生物復(fù)合菌劑和多菌靈處理下的油茶病情指數(shù)明顯降低，同時(shí)復(fù)合菌劑的防治效果隨著稀釋倍數(shù)的增加而下降，其中BY10復(fù)合菌劑稀釋至100倍后施用的防效較好，達(dá)到了59.05%，說(shuō)明田間進(jìn)行該復(fù)合菌劑的施用能夠起到很好的預(yù)防和控制油茶病害發(fā)生的作用

表5 復(fù)合菌BY10水分散粒劑對(duì)油茶病害的防治效果Table 5 Control effect of WDG of compound bacteria BY10 on disease of C.oleifera

3 討論

近年來(lái)，油茶病害的成災(zāi)已經(jīng)成為了油茶產(chǎn)業(yè)化發(fā)展的瓶頸，化學(xué)防治帶來(lái)的一系列問(wèn)題，使得可以誘導(dǎo)油茶產(chǎn)生抗病性的植物內(nèi)生菌的研發(fā)使用受到廣泛的關(guān)注。本試驗(yàn)從不同地區(qū)的健康油茶葉片中分離出具有較強(qiáng)抑菌效果的內(nèi)生細(xì)菌5株，其中抑菌活性最好的是從湖北省麻城市沙河村油茶示范實(shí)驗(yàn)基地的健康植株葉片上分離出來(lái)的HBMC?B05。

HBMC?B05經(jīng)過(guò)菌落形態(tài)和部分生理生化觀測(cè)以及16S rDNA基因和gyrA基因序列綜合分析被鑒定為貝萊斯芽胞桿菌B.velezensis，其分布廣，適應(yīng)力強(qiáng)，對(duì)環(huán)境要求簡(jiǎn)單，繁殖迅速。前人研究表明，貝萊斯芽胞桿菌具有一定的生防作用和良好的應(yīng)用前景，貝萊斯芽胞桿菌SZAD1及其發(fā)酵液粗提物能顯著抑制大麗輪枝菌菌絲的生長(zhǎng)和孢子的萌發(fā)，對(duì)棉花黃萎病有很好的生物防治效果[26]；貝萊斯芽胞桿菌NSZ?YBGJ001對(duì)草莓白粉病防效較好，葉部的防效超過(guò)85%，果實(shí)的防效超過(guò)70%[27]；貝萊斯芽胞桿菌FZB42通過(guò)菌體接觸對(duì)松材線蟲(chóng)亦有明顯抑殺效果[28]，但關(guān)于貝萊斯芽胞桿菌對(duì)油茶病害的生防研究還鮮有報(bào)道。同時(shí)貝萊斯芽胞桿菌還對(duì)白菜黑斑病致病菌蕓薹鏈格孢Alternariabrassicae[29]、番茄灰霉病致病菌灰葡萄孢BotrytiscinereaPers.[30]等多種植物病害均有一定的抑制活性，說(shuō)明貝萊斯芽胞桿菌具有廣譜的抑菌活性，可以用作微生物菌劑的制備。

單一生防菌株抗菌譜窄、作用機(jī)理單一、競(jìng)爭(zhēng)性弱，且對(duì)環(huán)境依賴性強(qiáng)，而復(fù)合微生物制劑因同時(shí)存在兩種或兩種以上有益菌，可有效擴(kuò)寬抗菌譜并且提高生防菌的生態(tài)競(jìng)爭(zhēng)性及防治效果[31]。生防菌有多種復(fù)配方式，國(guó)內(nèi)研究者根據(jù)不同作用目的、不同環(huán)境要求、不同作用方式及不同類型生防菌相結(jié)合的方式對(duì)生防菌進(jìn)行復(fù)配研究。例如可以拓寬抑菌譜的細(xì)菌組合，葛紅蓮[32]從辣椒、番茄和黃瓜根際土壤中篩選出5株對(duì)辣椒青枯病和黃瓜疫病有較好拮抗效果的細(xì)菌，將這5株菌進(jìn)行復(fù)配制成復(fù)合菌劑AR98，其對(duì)黃瓜疫病和辣椒青枯病的防效均大于單一菌株的防效，且對(duì)辣椒種子的萌發(fā)和植株生長(zhǎng)有一定的促進(jìn)作用。因此，面對(duì)能夠引起油茶炭疽病的多種致病菌問(wèn)題，在生物防治的過(guò)程中更應(yīng)該考慮到拮抗菌的復(fù)配問(wèn)題

內(nèi)生細(xì)菌普遍存在于植物體內(nèi), 與寄主植物在長(zhǎng)期進(jìn)化過(guò)程中建立了和諧聯(lián)合關(guān)系, 是植物微生態(tài)系統(tǒng)中巨大而寶貴的資源庫(kù)，而其對(duì)病害起到生防作用的關(guān)鍵在于其在植物體內(nèi)的定殖效率[33]，因此可以繼續(xù)探討相關(guān)影響因素，確保貝萊斯芽胞桿菌可以充分發(fā)揮其抑菌作用。本試驗(yàn)篩選出來(lái)的貝萊斯芽胞桿菌HBMC?B05對(duì)油茶多種病害有不同程度的抑制作用，為開(kāi)發(fā)微生物農(nóng)藥提供新的拮抗菌生物資源，為油茶病害的生物防治擴(kuò)充菌種資源，也為后期復(fù)合型菌劑的研發(fā)提供依據(jù)，但該菌株中起抑菌活性的物質(zhì)及抑菌機(jī)理尚未明確，還需進(jìn)一步的深入研究。