藥食同源食品對(duì)大鼠酒精性胃黏膜損傷的影響

潘 猛，徐德昌，孫永敢，胡婕倫，聶少平，鐘虹光，堯梅香，謝明勇*

（1南昌大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 中加食品科學(xué)技術(shù)聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室（南昌） 南昌 330047 2江西江中食療科技有限公司 江西九江 330000）

全球胃、腸病患者從1985年的1.5 億人增至2011年的5 億人，預(yù)計(jì)到2025年將達(dá)7 億人。我國13 億人口中，胃、腸病患者約有1.2 億，屬全球“胃病大國”，胃、腸病已嚴(yán)重危機(jī)國民健康。胃腸道疾病涵蓋食管、胃、小腸、結(jié)腸和直腸等疾病，發(fā)病率位居前列的有急性或慢性胃炎、胃潰瘍、消化性潰瘍、功能性消化不良等[1-3]。這其中，胃病的發(fā)生和發(fā)展在一定程度上均與胃黏膜損傷有關(guān)[4]。胃黏膜損傷是指各種原因引起的胃黏膜炎性反應(yīng)，發(fā)生局部糜爛或累及黏膜肌層的壞死性缺損病變，是臨床常見病癥和多發(fā)病癥[5-6]。臨床上用于治療胃黏膜損傷的藥品主要有胃酸中和藥、H2 受體拮抗劑、H+泵抑制劑等，然而，服用這些藥物可能存在治療時(shí)間長(zhǎng)，愈合緩慢，復(fù)發(fā)率高，副作用大等問題[7-9]。

大健康是根據(jù)時(shí)代發(fā)展、社會(huì)需求與疾病譜的改變而提出的一種全局理念。十九大明確提出“實(shí)施健康中國戰(zhàn)略”，同時(shí)，《國民營養(yǎng)計(jì)劃（2017—2030年）》、《關(guān)于促進(jìn)食品工業(yè)健康發(fā)展的指導(dǎo)意見》 等一系列政策均明確提出鼓勵(lì)支持中醫(yī)藥功能食品、傳統(tǒng)食養(yǎng)食品，即“食藥同源”食療產(chǎn)品的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展[10-11]。如何開發(fā)和利用“食藥同源”食療產(chǎn)品，預(yù)防和緩解人體疾病和亞健康狀態(tài)，具有重要的科學(xué)意義與社會(huì)價(jià)值。

在“食藥同源”食材中，茯苓是多孔菌科真菌茯苓【Poria cocos（Schw.）Wolf】的干燥菌核，具有利水滲濕、健脾安神的功效[12-14]。山藥（Dioscorea opposita）是薯蕷科植物薯蕷的干燥根莖，具有補(bǔ)脾養(yǎng)胃、補(bǔ)肺益腎之功效[15-16]。猴頭菇（Hericium erinaceus）是一種大型真菌，子實(shí)體和發(fā)酵菌絲體均可入藥，具有助消化，抗?jié)儯迮K的功能[17-18]。本研究采用乙醇誘導(dǎo)建立大鼠急性胃黏膜損傷模型，探討基于茯苓-山藥復(fù)配提取物開發(fā)的米稀和基于猴頭菇提取物開發(fā)的餅干對(duì)大鼠胃黏膜損傷的改善作用，以期為富含“食藥同源”食材提取物的米稀和餅干改善胃黏膜損傷的作用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

茯苓-山藥復(fù)配提取物、米稀、猴頭菇提取物、餅干均由本實(shí)驗(yàn)室自制。

奧美拉唑，美國Sigma 公司；其它試劑均為國產(chǎn)分析純級(jí)。

1.2 儀器與設(shè)備

METTLER TOLEDO XS105 電子分析天平，上海梅特勒-托利多儀器公司；HH-4 數(shù)顯恒溫水浴鍋，國華電器有限公司；光學(xué)倒置顯微鏡，日本Nikon 公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

Sprague-Dawley（SD）大鼠，雄性，SPF 級(jí)，體質(zhì)量為（180±20）g，湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司，許可證號(hào)：SCXK（湘）2011-0003；動(dòng)物飼料墊料，湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 乙醇致大鼠急性胃黏膜損傷模型的建立[19-20]將150 只雄性SD 大鼠隨機(jī)分為15 組：正常組、模型組、陽性組、茯苓-山藥復(fù)配提取物低、中、高劑量組、米稀低、中、高劑量組、猴頭菇提取物低、中、高劑量組、餅干低、中、高劑量組，每組10 只。

大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d 后，開始正式實(shí)驗(yàn)。每2 d 稱重，根據(jù)體重變化調(diào)整灌胃劑量（1 mL/100 g）。每天灌胃茯苓-山藥復(fù)配提取物低、中、高劑量組對(duì)應(yīng)提取物675，1 350，2 700 mg/kg，米稀低、中、高劑量組對(duì)應(yīng)米稀116.1，232.2，464.4 mg/kg，猴頭菇提取物低、中、高劑量組對(duì)應(yīng)提取物2 160，4 320，8 640 mg/kg，餅干低、中、高劑量組對(duì)應(yīng)餅干135，270，540 mg/kg，正常組、模型組和陽性組均灌胃相應(yīng)體積的生理鹽水，持續(xù)灌胃14 d。

第22 天，各組大鼠均嚴(yán)格禁食、不禁水1 d，期間亦禁止給藥。在第23 天，開始造模，陽性組在灌胃無水乙醇之前1 h 先灌胃奧美拉唑（30 mg/kg bw/d），之后除正常組外，其余所有組均灌胃無水乙醇4.0 mL/kg，1 h 后處死所有大鼠。具體流程如圖1所示。

圖1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)流程圖Fig.1 Animal experiment flow chart

1.4.2 臟器指數(shù)測(cè)定 所有大鼠禁食、不禁水1 d，稱量并記錄體重后，處死，取臟器（脾臟、腎臟、

肝臟）并用生理鹽水清洗，濾紙吸干后稱重記錄，用于計(jì)算臟器指數(shù)。

1.4.3 胃黏膜損傷表觀形態(tài)觀察 所有大鼠禁食、不禁水1 d 后，處死，剪開腹部取胃，洗凈內(nèi)容物后展開固定，拍照記錄。

1.4.4 胃黏膜損傷指數(shù)測(cè)定 所有大鼠禁食、不禁水1 d 后，處死，剪開腹部取胃，洗凈內(nèi)容物后展開，肉眼觀察并記錄出血點(diǎn)個(gè)數(shù)，用游標(biāo)卡尺測(cè)量糜爛條帶的長(zhǎng)度和寬度。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見表1[21-25]。

表1 胃黏膜損傷指數(shù)評(píng)分表Table 1 Score of gastric mucosal injury index

1.4.5 胃組織HE 染色病理觀察 所有大鼠禁食、不禁水1 d 后，處死，剪開腹部取胃，選取胃損傷最嚴(yán)重部位，切下約10 mm×2 mm 的組織，固定于4%多聚甲醛溶液中，常規(guī)梯度脫水、包埋、切片、烤片，HE 染色后置于光學(xué)顯微鏡下觀察。

2 結(jié)果與分析

2.1 4 種受試物對(duì)大鼠臟器指數(shù)的影響

如表2所示，各實(shí)驗(yàn)組之間脾臟指數(shù)、腎臟指數(shù)、肝臟指數(shù)均無顯著性差異（P > 0.05），說明乙醇致胃黏膜損傷模型對(duì)大鼠的其它臟器無明顯損傷，4 種受試物對(duì)大鼠無顯著毒副作用。

2.2 4 種受試物對(duì)大鼠體重變化的影響

如表3所示，在持續(xù)給予4 種受試物期間，大鼠體重穩(wěn)定增長(zhǎng)，各組之間均無顯著性差異（P>0.05），說明4 種受試物對(duì)大鼠的正常生長(zhǎng)無顯著影響。

表3 4 種受試物對(duì)大鼠體重變化的影響（n=8）Table 3 Effect of four test substances on body weight change in rats（n=8）

2.3 4 種受試物對(duì)大鼠胃黏膜損傷表觀形態(tài)的影響

如圖2所示，正常組大鼠胃黏膜完整，形態(tài)及色澤均正常，未見出血、潰瘍、糜爛等異常；模型組大鼠胃黏膜有明顯的出血、潰瘍和糜爛，可見粗大的出血條帶及大量的出血點(diǎn)，胃黏膜呈暗紅色，表明乙醇致大鼠急性胃黏膜損傷模型造模成功；茯苓-山藥復(fù)配提取物及其米稀各劑量組可見大鼠胃黏膜的損傷程度均有明顯緩解，出血點(diǎn)和出血條帶明顯減少，且茯苓-山藥復(fù)配提取物和米稀的中劑量組效果均較好；猴頭菇提取物及其餅干各劑量組可見大鼠胃黏膜的損傷程度均有緩解，出血點(diǎn)和出血條帶有所減少，與茯苓-山藥復(fù)配提取物及其米稀各劑量組相比效果略差?？傊?，4 種受試物各劑量組均可減輕大鼠胃黏膜損傷程度，對(duì)胃黏膜具有一定的保護(hù)作用。

圖2 大鼠胃黏膜損傷形態(tài)觀察Fig.2 Observation of gastric mucosal injury in rats

2.4 4 種受試物對(duì)大鼠胃黏膜損傷指數(shù)的影響

由表4和圖3可知，與正常組相比，模型組的胃黏膜損傷指數(shù)顯著升高（P<0.01）；與模型組相比，陽性組的胃黏膜損傷指數(shù)顯著降低（P<0.01）；4 種受試物的低、中、高劑量組與模型組相比，均能顯著降低胃黏膜損傷指數(shù)和升高胃黏膜損傷抑制率（P<0.01），并且損傷抑制率在茯苓-山藥復(fù)配提取物的中劑量組達(dá)到最高為64.36%。結(jié)果表明，4 種受試物均可顯著改善大鼠胃黏膜損傷情況，對(duì)大鼠胃黏膜損傷有一定的保護(hù)作用。

圖3 4 種受試物對(duì)大鼠胃黏膜損傷指數(shù)的影響（n=8）Fig.3 Effect of four test substances on gastric mucosal injury index in rats（n=8）

表4 4 種受試物對(duì)大鼠胃黏膜損傷指數(shù)的影響（n=8）Table 4 Effect of four test substances on gastric mucosal injury index in rats（n=8）

2.5 4 種受試物對(duì)大鼠胃組織病理學(xué)的影響

如圖4所示，正常組大鼠胃組織結(jié)構(gòu)完整，腺體排列整齊，未見胃黏膜上皮細(xì)胞脫落、水腫及充血現(xiàn)象。與正常組相比，模型組大鼠胃組織腺體結(jié)構(gòu)紊亂，胃黏膜嚴(yán)重充血，上皮細(xì)胞大量脫落，可見明顯的炎性細(xì)胞浸潤。與模型組相比，預(yù)先給予4 種受試物及奧美拉唑均可明顯改善胃黏膜損傷狀態(tài)，胃黏膜上皮細(xì)胞脫落及胃黏膜充血情況減輕，炎性細(xì)胞浸潤減少。由此可知，預(yù)先給予大鼠4 種受試物2 周對(duì)胃黏膜損傷有顯著的預(yù)防保護(hù)作用。

圖4 4 種受試物對(duì)大鼠胃組織病理學(xué)觀察（倍數(shù)×100）Fig.4 Effect of four test substances on morphological changes of gastric tissue in rats（magnification×100）

3 結(jié)論

本研究以基于“食藥同源”食材（茯苓、山藥、猴頭菇）開發(fā)的米稀和餅干為研究對(duì)象，探究其對(duì)胃黏膜損傷的預(yù)防改善作用。結(jié)果表明，茯苓-山藥復(fù)配提取物及其米稀、猴頭菇提取物及其餅干對(duì)乙醇誘導(dǎo)的大鼠急性胃黏膜損傷均有較好的預(yù)防保護(hù)作用，且茯苓-山藥復(fù)配提取物及其米稀的效果優(yōu)于猴頭菇提取物及其餅干，茯苓-山藥復(fù)配提取物的中劑量組效果最好。本研究結(jié)果可以為基于茯苓-山藥復(fù)配提取物開發(fā)的米稀和基于猴頭菇提取物開發(fā)的餅干以改善胃黏膜損傷作用提供理論依據(jù)，并為改善胃腸道功能健康食品的開發(fā)提供數(shù)據(jù)支持。