山東省某市級獸醫(yī)實驗室近5 年檢測工作分析與展望

馬珍馳，劉 兵，王 會，張其暉，徐 毅，陳 峰，黨安坤

（1.棗莊市畜牧漁業(yè)事業(yè)發(fā)展中心，山東棗莊 277800；2.山東省動物疫病預(yù)防與控制中心，山東濟南 250100）

隨著時代發(fā)展以及我國綜合實力與社會經(jīng)濟水平提高，我國動物疫病防控工作也不斷發(fā)展與進步。獸醫(yī)實驗室對動物疫病防控意義重大，并為防疫工作做出相應(yīng)的技術(shù)支持[1]。市級獸醫(yī)實驗室作為獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室中的一級實驗室，在動物疫病診斷、監(jiān)測、流行病學(xué)調(diào)查和動物疫情預(yù)警預(yù)報等方面發(fā)揮了重要作用。本研究匯總分析了山東省某市級獸醫(yī)實驗室“十三五”期間（2016—2020 年）所有收樣、檢測記錄和實驗室檢測能力比對試驗結(jié)果，了解目前市級實驗室的檢測概況及檢測能力，分析收樣、檢測過程中存在的問題，以期為其他地區(qū)獸醫(yī)實驗室提高檢測效率，增強檢測能力，更好地發(fā)揮獸醫(yī)實驗室作用，促進畜禽養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展提供參考。

1 樣品情況

1.1 樣品數(shù)量

“十三五”期間，該市級獸醫(yī)實驗室對該市轄區(qū)內(nèi)種畜禽場、商品代養(yǎng)殖場、散養(yǎng)戶、屠宰場、農(nóng)貿(mào)市場、無害化處理廠和其他場點（寵物醫(yī)院、運輸車輛）采集送檢的血清學(xué)和病原學(xué)樣品進行了檢測。統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，共計接收1 615 場（次）的32 066 份樣品，其中血清學(xué)樣品13 651 份、病原學(xué)樣品18 415 份，平均每場（次）樣品約20份。2016—2020 年，接收樣品數(shù)量分別為8 910、7 892、5 825、5 997、3 442 份，總體呈下降趨勢，其中2020 年接收樣品數(shù)量僅為2016 年的38.63%（3 442/8 910）。場點平均采樣量逐年減少（32、22、19、15、13 份），平均采樣量2020 年較2016年減少了19 份。

1.1.1 不同場點樣品分布情況 不同類型場點樣品分布情況（圖1）顯示，檢測樣品主要來源于商品代養(yǎng)殖場?！笆濉逼陂g，來自商品代養(yǎng)殖場的樣品數(shù)量占總樣品數(shù)量的75.52%（24 217/32 066），共檢測876 場（次）；每年檢測的種畜禽場點數(shù)量較少（2～5 個），共檢測16 場（次）的416 份樣品；對于散養(yǎng)戶，除2018 年外，其余4 年間檢測數(shù)量基本持平（33～41 份）；對于屠宰場，檢測場（次）數(shù)量總體呈上升趨勢；市場（主要包括禽交易市場、縣城市場禽屠宰攤位以及鄉(xiāng)鎮(zhèn)農(nóng)貿(mào)市場）2018 年和2019 年均無送檢樣品，其余3 年以2017年檢測量最多；轄區(qū)內(nèi)無害化處理廠自2018 年開始運營后，該市級獸醫(yī)實驗室對送檢樣品進行檢測，其中2019 年檢測場點和樣品量最多。其他場點于2019 年開始送檢樣品，且2020 年樣品數(shù)量比2019年銳減。

圖1 各年度不同類型場點樣品分布情況

1.1.2 不同動物樣品分布情況 結(jié)果（圖2）顯示，禽樣品送檢數(shù)量最多，占總樣品數(shù)量的37.34%（11 975/32 066），其次是豬、羊、牛樣品，分別占28.03%、27.54%、6.63%。受非洲豬瘟疫情影響，豬樣品送檢場（次）及數(shù)量在2018—2019 年均有所增加，而平均采樣量在5 年內(nèi)逐年降低；牛樣品送檢場（次）和數(shù)量2016 年最高，2017 年最低，其余3 年變化不大；羊樣品送檢場（次）和數(shù)量在2016—2020 年總體呈降低趨勢；受H7N9 流感影響，禽樣品送檢場（次）和數(shù)量在2017 年明顯增加，而后又降低；2019 年以來，該市級獸醫(yī)實驗室接收檢測了少量犬貓樣品。

圖2 各年度不同動物種類樣品分布情況

1.2 樣品質(zhì)量

“十三五”期間，該市級獸醫(yī)實驗室對送檢的13 651 份血清學(xué)樣品進行了64 440 份次不同項目檢測。檢測過程中，出現(xiàn)血清樣品不能滿足檢測要求的情況，具體表現(xiàn)為血清溶血嚴重、血清出現(xiàn)膠凍樣、血清量少不能完成全部檢測項目等，這里統(tǒng)稱為“不合格樣品”。據(jù)統(tǒng)計，全部64 440 份次血清學(xué)檢測記錄中，467 場（次）的50 473 份次樣品做到了應(yīng)檢盡檢，92 場（次）的13 967 份次樣品中有798 份次“不合格樣品”，未能完成應(yīng)檢項目。“不合格樣品”來源場（次）占血清樣品總場（次）的16.46%（92/559）；“不合格樣品”份次占存在“不合格樣品”檢測份次總數(shù)的5.71%（798/13 967），“不合格樣品”份次占血清樣品總檢測份次的1.24%（798/64 440）。根據(jù)統(tǒng)計結(jié)果（圖3～4），“不合格樣品”來源場點中，禽場中“不合格場點”占比最高（28.05%，46/164），豬場次之（17.80%，21/118），牛、羊場點較低（9.03%，25/277）。牛羊血清“樣品不合格率”為6.40%（210/3 280），禽血清為6.28%（442/7 043），豬血清為4.01%（146/3 644）。2016—2020 年，“不合格樣品”的場（次）數(shù)量分別為51、11、13、6、11，呈下降趨勢，但“樣品不合格率”2020 年最高，為12.55%（102/813），高于2016—2019 年。

圖3 各年度血清學(xué)“不合格樣品”場次情況

1.3 接收樣品時間

接收樣品時間分布情況（圖5）顯示，2016—2018 年，每年5—6 月份和11—12 月份出現(xiàn)2 次集中送樣時期，這與每年國家、省、市獸醫(yī)主管部門下達的監(jiān)測任務(wù)有關(guān)。2018 年11 月份以后表現(xiàn)為各送樣單位常年送樣狀態(tài)，這與非洲豬瘟疫情發(fā)生后，要求強化監(jiān)測有關(guān)。

圖5 “十三五”期間收樣數(shù)量柱形圖

2 檢測情況

2.1 檢測能力

“十三五”期間，該市級獸醫(yī)實驗室共參加了6 次由山東省畜牧獸醫(yī)局組織的檢測能力比對試驗。對5 種檢測方法的9 個比對項目的90 份盲樣進行檢測，將檢測值與參考值進行比對。比對結(jié)果全部正確，其中熒光RT-PCR、凝集試驗、ELISA和液相阻斷ELISA 檢測結(jié)果均正確或檢測值與參考值一致；共參加了4 次血凝抑制試驗比對，其中1 次檢測值與參考值一致，3 次檢測值在允許誤差內(nèi)。具體情況見表1。

表1 2016—2020 年獸醫(yī)實驗室檢測能力比對結(jié)果統(tǒng)計

2.2 檢測數(shù)量

“十三五”期間，該市級獸醫(yī)實驗室共開展了36 個項目的檢測工作，共計對32 066 份樣品進行了91 271 份次檢測，平均每份樣品約檢測3 個項目。其中各種疫病檢測數(shù)量和在總檢測數(shù)中的占比分別為：口蹄疫檢測26 263 份次，占28.77%；高致病性禽流感檢測22 648 份次，占24.81%；新城疫檢測9 359 份次，占10.25%；布魯氏菌病檢測9 146 份次，占10.02%；小反芻獸疫檢測8 000 份次，占8.77%；非洲豬瘟檢測5 509 份次，占6.04%；其他豬病檢測8 201 份次，占8.99%；其他疫病檢測2 145 份次，占2.35%。具體信息見表2。

圖4 各年度血清學(xué)“不合格樣品”情況

表2 “十三五”期間各種疫病檢測數(shù)量情況

2.2.1 不同疫病檢測情況 如圖6 所示，口蹄疫和禽流感是該市級獸醫(yī)實驗室的主要檢測疫病，口蹄疫檢測數(shù)量在2016、2018、2019 年檢測總量中占比最高（32.87%、37.13%、27.24%），禽流感檢測數(shù)量在2017、2020 年中占比最高（39.38%、29.31%）。布魯氏菌病除2017 年檢測數(shù)量占比為6.85%外，其余4 年檢測數(shù)量約占每年檢測總量的10%。小反芻獸疫2016—2020 年每年檢測數(shù)量占比為7.48%～9.38%，變化較平穩(wěn)。新城疫除2017 年檢測數(shù)量占比為17.13%外，其余4 年檢測數(shù)量均較低。2018 年非洲豬瘟檢測數(shù)量占比為19.88%，僅次于口蹄疫，成為當年排名第二的疫病檢測項目，而后逐年降低。其他豬病除2019年檢測數(shù)量占比為15.01%外，其余4 年檢測數(shù)量均較低。其他疫病在2017、2018 年未開展檢測，2016 年檢測數(shù)量高于2019 年和2020 年。

圖6 各年度不同疫病種類檢測情況

2.2.2 不同檢測方法檢測情況 如圖7 所示，熒光RT-PCR 除2016 年在全年檢測數(shù)量的占比（15.76%）較低外，之后每年的占比（45.05%、31.82%、37.85%、30.75%）均為全年最高。凝集試驗在每年的檢測占比（10.68%、6.85%、9.38%、12.77%、10.39%）均為最低。

圖7 各年度不同檢測方法檢測情況

2.3 檢測質(zhì)量

由于操作不當、儀器設(shè)備故障等原因，檢測過程中會出現(xiàn)試驗不成立情況。分析每年試驗成立與試驗不成立的樣品檢測份次數(shù)可見，2018 年試驗成功率低于其他年份，為94.87%。根據(jù)統(tǒng)計，發(fā)生試驗不成立的檢測項目分布在A 型口蹄疫抗體、O 型口蹄疫抗體、亞洲I 型口蹄疫抗體和口蹄疫非結(jié)構(gòu)蛋白抗體這4 個檢測項目，具體見表3～4。

表3 “十三五”期間試驗成立與否情況統(tǒng)計

表4 “十三五”期間試驗不成立發(fā)生的檢測項目情況統(tǒng)計

2.4 檢測時效性

由于樣品每年上下半年集中送樣，相應(yīng)的在每年7、8 月和12 月、翌年1 月檢測數(shù)量顯著增加。檢測數(shù)量的曲線要滯后于收樣數(shù)量曲線1 個月左右（圖8）。

圖8 “十三五”期間收樣數(shù)量和檢測數(shù)量折線圖

不同時間段歷時天數(shù)箱線圖（圖9）顯示，采樣至收樣歷時天數(shù)平均為9.3 d，中位數(shù)為6 d，最大值為67 d。收樣至試驗開始歷時天數(shù)平均為25 d，中位數(shù)為17 d，最大值為133 d。收樣至試驗結(jié)束歷時天數(shù)平均為33.5 d，中位數(shù)為28 d，最大值為219 d；采樣至試驗結(jié)束歷時天數(shù)平均為42.7 d，中位數(shù)為37 d，最大值為238 d。

圖9 “十三五”期間不同時間段歷時天數(shù)箱線圖

3 分析與討論

“十三五”期間，該市級獸醫(yī)實驗室對不同類型場點、不同動物樣品開展了大量檢測工作。通過同步開展病原學(xué)和血清學(xué)檢測，不僅對口蹄疫、高致病性禽流感、小反芻獸疫、非洲豬瘟等重大動物疫病進行了重點監(jiān)測，還對其他動物疫病進行了持續(xù)監(jiān)測。特別是我國在2017 年初H7N9 流感變異毒株引發(fā)疫情和2018 年8 月暴發(fā)非洲豬瘟疫情后，及時開展了專項檢測。其在動物疫病監(jiān)測、流行病學(xué)調(diào)查和動物疫情預(yù)警預(yù)報等方面發(fā)揮了一定作用，為獸醫(yī)主管部門提供了重要的技術(shù)支撐，為廣大養(yǎng)殖場戶防控重要疫病提供了科學(xué)的技術(shù)指導(dǎo)。

從收樣及檢測數(shù)據(jù)看，2016—2020 年不同類型場點的平均采樣量逐年減少，2020 年平均采樣量較2016 年減少了19 份。獸醫(yī)實驗室通過對樣本調(diào)查來推斷總體情況，因此要兼顧準確性、效益性和實際可操作性3 個方面，需選擇科學(xué)、合理的抽樣方法，以達到保證樣本代表性、調(diào)查可操作性的目的[2]。應(yīng)通過獸醫(yī)流行病學(xué)相關(guān)理論計算采樣量，使檢測結(jié)果更具有科學(xué)性和嚴謹性。

2016—2020 年在所有開展血清學(xué)檢測的場點中，16.46%的場點存在“不合格樣品”，樣品不合格率為5.71%。在動物疫病采樣過程中，只有通過規(guī)范操作采集合格監(jiān)測樣品，才可以保證采集的有效性[3]。這提示應(yīng)加強采樣人員技術(shù)培訓(xùn)，根據(jù)檢測項目數(shù)量足量采集樣品，并且注意樣品采集后制樣、運輸?shù)冗^程中對樣品的保護。

從收樣時間看，集中送樣時期和省市級檢測任務(wù)開展期相吻合，其余時間僅有少量送樣行為，說明該市級獸醫(yī)實驗室動物診療工作相對薄弱，且養(yǎng)殖場戶、動物診療機構(gòu)等主動送樣情況少，這是動物疫病監(jiān)測預(yù)警的一種缺失。獸醫(yī)實驗室應(yīng)發(fā)揮其社會功能，提供社會化服務(wù)[4]。建議加強獸醫(yī)實驗室動物診療工作，發(fā)揮實驗室服務(wù)養(yǎng)殖場戶、動物診療機構(gòu)的作用，增加被動檢測數(shù)量，從而拓展動物疫情信息收集渠道。

從檢測時效性看，樣品采集到檢測結(jié)果反饋至采樣單位各個階段的歷時時間，都有較大減少空間。建議提高采樣、送樣人員工作效率，隨采隨送；開展集中監(jiān)測時，統(tǒng)籌安排，市域內(nèi)各采集區(qū)域盡量同步行動，集中時間完成采樣、送樣；完善獸醫(yī)實驗室內(nèi)部人員設(shè)置，增加實驗室人員數(shù)量，提前做好檢測準備工作，做到收樣后及時安排檢測；盡量壓縮采樣至檢測結(jié)果反饋時間間隔，提高檢測結(jié)果在動物疫情防控工作中作為技術(shù)支持的敏感性，以及在養(yǎng)殖場戶防控動物疫病中的時效性。

在今后工作中，各獸醫(yī)實驗室需科學(xué)計算采樣量，加強人員培訓(xùn)，提高樣品質(zhì)量，提升樣品采集的有效性；要整合各項資源，明確服務(wù)性質(zhì)，構(gòu)建長效機制，提升獸醫(yī)實驗室的社會化服務(wù)功能；加大人力物力投入，提升檢測時效性，使檢測結(jié)果的運用及時、有效，更好地發(fā)揮獸醫(yī)實驗室在動物疫病防控、應(yīng)對突發(fā)公共衛(wèi)生事件、處置突發(fā)疫情中的作用，促進畜禽養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展。