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    車前草飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的制備與質(zhì)控探究

    2021-08-05 11:51:33王東升
    婚育與健康 2021年2期
    關(guān)鍵詞:縮宮素產(chǎn)后出血治療效果

    王東升

    【關(guān)鍵詞】麥角新堿;縮宮素;產(chǎn)后出血;治療效果

    車前草是中醫(yī)臨床工作中的常用藥材,具有祛痰涼血、清熱解毒和利尿等作用,對(duì)水腫尿少、痰熱咳嗽或臃腫瘡毒的患者,可以起到顯著的治療效果[1]。本文詳細(xì)探討了車前草飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的制備與質(zhì)控方法,以此為車前草在臨床治療工作中更好的應(yīng)用提供信息參考,具體研究內(nèi)容如下。

    1準(zhǔn)備階段

    在制備車前草飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑前,應(yīng)先準(zhǔn)備相關(guān)的儀器設(shè)備、試劑試藥和樣品,確保制備工作的順利開展。儀器主要包括液相色譜儀、分析天平、超聲波清洗器和電子天平,試劑試藥為大車前對(duì)照品和分析純,樣品由四川川村中藥材有限公司、北京華邈藥業(yè)有限公司、亳州市譙城區(qū)萬事祥中藥飲片有限公司、安徽省萬生中藥飲片有限公司和浙江英特中藥飲片有限公司分別提供。樣品共計(jì)5個(gè)批次,產(chǎn)地分別為重慶、河北、江蘇、江西和浙江。

    2方法與結(jié)果

    2.1制備流程

    首先選用車前草飲片100g,向其中加入1.2L的水,進(jìn)行浸泡、回流和過濾處理。其中,浸泡和回流的時(shí)間均為30min,過濾時(shí)應(yīng)趁熱。

    然后向藥渣中加入1L的水,再進(jìn)行回流和過濾處理,本次回流時(shí)間控制在20min。最后將兩次濾液合并,通過減壓濃縮的方式,將濾液縮減為500ml即可。

    2.2含量測定

    2.2.1色譜分析

    利用色譜分析的方式對(duì)車前草飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑含量進(jìn)行測定,首先將濃度為0.1%的甲酸水溶液和乙腈,作為大車前苷對(duì)照品和車前草飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的流動(dòng)相。并將柱溫和流速分別調(diào)整為40℃和1ml/min,可檢測出波長和進(jìn)樣量為330nm和20μl,確保測定結(jié)果的穩(wěn)定可靠。經(jīng)測定可得,在該種條件下,供試品溶液中的大車前苷分離效果較好[1]。

    2.2.2制備對(duì)照品溶液及供試品溶液

    選取適量的大車前苷對(duì)照品,對(duì)其進(jìn)行稱定處理,同時(shí)向?qū)φ掌分屑尤爰状迹蛊涑蔀闈舛葹?.146μg/ml的對(duì)照品溶液。緊接著取1ml的車前草標(biāo)準(zhǔn)湯劑進(jìn)行搖勻、加25%甲醇、稀釋、超聲10min、冷卻、定容、搖勻和取續(xù)濾液的處理,完成供試品溶液的制備工作[2]。

    2.2.3線性關(guān)系考察

    將2ml、4ml、6ml、8ml和10ml的大車前苷對(duì)照品溶液,分別放置于10ml的量瓶中,并加入60%的甲醇至刻度,進(jìn)行適當(dāng)力度的搖勻處理。然后按照上述的色譜分析方法,測定大車前苷的峰面積,可得進(jìn)樣量為10μl。緊接著將進(jìn)樣量和封面量設(shè)為橫縱坐標(biāo),完成標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制工作。經(jīng)計(jì)算可得出回歸方程、R2值和線性范圍,分別為:Y=1321707.1X+61.6、0.9998、0.043-0.2146μg。

    2.2.4試驗(yàn)

    車前草飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的試驗(yàn),主要包括精密度試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)和加樣回收試驗(yàn)。精密度試驗(yàn)需要選取同一車前草飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品溶液,采用上述的色譜分析方法反復(fù)進(jìn)樣6次即可。通過分析可得,供試品溶液中大車前苷的峰面積的RSD為0.61%,此數(shù)據(jù)代表儀器設(shè)備精密度較為良好。

    重復(fù)性試驗(yàn)需要通過平行制備的方式,將6份車前草飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品溶液按照上述的色譜分析方法進(jìn)樣處理。由此可得,車前草標(biāo)準(zhǔn)湯劑中的大車前苷平均含量和峰面積的RSD,分別為0.27g/L和1.23%,此數(shù)據(jù)代表該方法重復(fù)性較好[3]。

    穩(wěn)定性試驗(yàn)需要選取車前草飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品溶液,在其制備的0h、4h、8h、12h和24h,按照上述的色譜分析方法,分別計(jì)算出大車前苷的峰面積的RSD。經(jīng)測算可得,RSD為2.32%,此數(shù)據(jù)代表車前草飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品溶液在制備后24小時(shí)內(nèi)效果穩(wěn)定。

    加樣回收試驗(yàn)需要先取已知含量的車前草飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑,增加同樣容量的大車前苷對(duì)照品,并平行制備6份試品,利用上述的色譜分析方法,計(jì)算大車前苷的峰面積的RSD和平均加樣回收率。經(jīng)測算可得,這兩種數(shù)據(jù)分別為1.52%和98.55%,表明該方法的準(zhǔn)確度較高。

    除此之外,再分別選取20μl的對(duì)照品溶液和試品溶液,按照上述的色譜分析方法,完成5個(gè)批次的樣品測定工作,統(tǒng)計(jì)每批次樣品中大車前苷的含量。

    2.3轉(zhuǎn)移率、出膏率及PH

    通過公式:湯劑中指標(biāo)成分含量÷飲片中指標(biāo)成分含量×100%=轉(zhuǎn)移率,可以得出5批車前草飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的大車前苷轉(zhuǎn)移率在9.11%-30.42%之間。在計(jì)算出膏率時(shí),應(yīng)先取適量的車前草飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑,依次完成搖勻、水浴蒸干、105℃烘3h和冷卻30min處理,對(duì)膏體進(jìn)行稱定質(zhì)量。而PH值則利用PH計(jì)測定即可,經(jīng)計(jì)算可得,出膏率在17.35%-25.21%之間,PH值在4.9-5.6之間。

    2.4建立指紋圖譜

    2.4.1色譜條件

    色譜條件與上述色譜分析時(shí)的各項(xiàng)參數(shù)設(shè)置一致。

    2.4.2制備供試品溶液

    供試品溶液的制備方法與上述的制備方法保持一致。

    2.4.3試驗(yàn)

    該精密度試驗(yàn)的溶液選取、進(jìn)樣次數(shù)和操作流程,均與上述的精密度試驗(yàn)保持一致,但以6號(hào)峰為參照峰,分別計(jì)算出各峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD和相對(duì)峰面積的RSD。經(jīng)測算可得,相對(duì)保留時(shí)間RSD<0.41%,相對(duì)峰面積RSD<25.43%,這兩項(xiàng)數(shù)據(jù)表示儀器精密度較好。

    該重復(fù)性試驗(yàn)的溶液選取、進(jìn)樣次數(shù)和操作流程,均與上述重復(fù)性試驗(yàn)保持一致,也是將6號(hào)峰作為參考峰,計(jì)算出各峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD 和相對(duì)峰面積的RSD。經(jīng)測算可得,相對(duì)保留時(shí)間RSD < 0.31%,相對(duì)峰面積RSD < 35.73%,這兩項(xiàng)數(shù)據(jù)表示制備方法重復(fù)性較好。

    該穩(wěn)定性試驗(yàn)的溶液選取、進(jìn)樣次數(shù)、操作流程和色譜條件,均與上述的穩(wěn)定性試驗(yàn)保持一致,計(jì)算出各峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD和相對(duì)峰面積的RSD。經(jīng)測算可得,相對(duì)保留時(shí)間RSD<0.49%,相對(duì)峰面積RSD<35.69%,此數(shù)據(jù)代表車前草飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品溶液在制備后24小時(shí)內(nèi)效果穩(wěn)定。

    除此之外,分別取5個(gè)批次的車前草飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑,按照上述的供試品溶液制備方法和色譜分析流程,完成HPLC的記錄工作。利用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)軟件,將時(shí)間窗設(shè)置為0.1,采取中位數(shù)法,可以計(jì)算出5批車前草飲片標(biāo)準(zhǔn)與對(duì)照指紋圖譜相似度均>0.74。

    3討論

    3.1供試品處理及濃縮前后的考察

    供試品處理的考察重點(diǎn)為溶劑濃度和稀釋倍數(shù),本次考察的甲醇濃度為25%、50%、75%和100%四種。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn),采用不同濃度和不同稀釋倍數(shù)的甲醇定容,對(duì)大車前苷含量的影響,均無明顯差異[2]。但甲醇為有毒物質(zhì),故選取25%的甲醇溶液作為供試品的定容濃度,其稀釋倍數(shù)設(shè)定為25倍。通過供試品的制備方法和上述的色譜分析流程,觀察濃縮和非濃縮標(biāo)準(zhǔn)湯劑,對(duì)大車前苷的具體影響。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn),濃縮處理對(duì)大車前苷無任何影響。

    3.2切制處理對(duì)全草類有效成分的溶出的影響

    在5批次車前草飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑中,有2批次樣品為未切制狀態(tài),將其與剩余3批已切制樣品對(duì)比,可以發(fā)現(xiàn)大車前苷含量和出膏率均明顯低于后者。由此可得,切制處理對(duì)全草類有效成分的溶出,具有著有利的影響[3]。

    3.3相似度低的原因

    5組車前草飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑的相似度低的原因,主要由于生產(chǎn)環(huán)境、采收時(shí)間、加工方式和儲(chǔ)藏方式等方面的不同所致。

    3.4質(zhì)量控制

    根據(jù)《中國藥典》篩選車前,選取符合制備標(biāo)準(zhǔn)的5批次車前作為主要材料,通過研究車前的標(biāo)準(zhǔn)湯劑治療控制方法,可以將大車前苷轉(zhuǎn)移率范圍控制在9.11%-30.42%之間,出膏率的范圍控制在17.35%-25.21%之間,PH值控制在4.9-5.6之間,使各樣品圖譜與對(duì)照?qǐng)D譜的相似度>0.74。

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