• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    HPLC法一測(cè)多評(píng)法對(duì)補(bǔ)氣養(yǎng)血合劑中人參、三七的含量測(cè)定研究

    2021-07-29 21:11:50牟娟李健田毛子春
    云南中醫(yī)中藥雜志 2021年5期
    關(guān)鍵詞:HPLC法含量測(cè)定

    牟娟 李健田 毛子春

    摘要:目的 創(chuàng)建應(yīng)用HPLC法對(duì)“補(bǔ)氣養(yǎng)血合劑” 中含有的三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rf、人參皂苷Rb1(后文稱“4種皂苷”)進(jìn)行含量測(cè)定的方法。方法 采用HPLC法。色譜柱:ZORBAX Eclipse Plus C18(長(zhǎng)度:250 mm,直徑:4.6 mm,孔徑:5μm),P.N.959990—902。柱溫:30℃。流速:1.0 mL/min。檢測(cè)波長(zhǎng):203nm。進(jìn)樣量:10μL。流動(dòng)相:水(A)—乙腈(B),程序洗脫。結(jié)果 三七皂苷R1:線性關(guān)系在0.0829—2.0454μg范圍內(nèi)良好(R=0.9995)。平均加樣回收率為:95.17%(RSD為0.65%,n為6)。人參皂苷Rg1:線性關(guān)系在0.2944—5.1263μg范圍內(nèi)良好(R=0.9999)。平均加樣回收率為:96.81%(RSD為1.17%,n為6)。人參皂苷Rf:線性關(guān)系在0.0039—0.0586μg范圍內(nèi)良好(R=0.9993)。平均加樣回收率為:104.05%(RSD為1.78%,n為6)。人參皂苷Rb1:線性關(guān)系在0.2350—3.5256μg范圍內(nèi)良好(R=0.9999)。平均加樣回收率為:96.61%(RSD為1.33%,n為6)。結(jié)論 創(chuàng)建了應(yīng)用HPLC法對(duì)“補(bǔ)氣養(yǎng)血合劑”中含有的4種皂苷進(jìn)行含量測(cè)定的可信度較高的方法。

    關(guān)鍵詞:三七皂苷R1;含量測(cè)定;人參皂苷Rg1;人參皂苷Rf;補(bǔ)氣養(yǎng)血合劑;人參皂苷Rb1;HPLC法

    中圖分類號(hào):R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A 文章編號(hào):1007-2349(2021)05-0073-05

    “補(bǔ)氣養(yǎng)血合劑”系醫(yī)院多年使用協(xié)定處方,臨床效果顯著。方中使用了“三七”、“人參”兩味藥材;具有“活血益氣,補(bǔ)肝腎”等功效。《中國(guó)藥典》(2015年版)一部收載的“三七”藥材,載有“散瘀止血,消腫止痛”等功效;“人參”載有“生津養(yǎng)血”等功效[1]?!把a(bǔ)氣養(yǎng)血合劑”目前在標(biāo)準(zhǔn)制訂研究階段,使用HPLC法對(duì)補(bǔ)氣養(yǎng)血合劑中人參、三七含有的4種皂苷進(jìn)行含量測(cè)定。對(duì)“補(bǔ)氣養(yǎng)血合劑”作進(jìn)質(zhì)量控制。對(duì)色譜條件、提取方法等進(jìn)行考察,來(lái)確保實(shí)驗(yàn)方法的可靠性、準(zhǔn)確性。

    1 儀器與試藥

    1.1 儀器 高效液相色譜儀(四元泵,DAD檢測(cè)器,自動(dòng)進(jìn)樣器),Agilent1260化學(xué)工作站;萬(wàn)分之一分析天平(賽多利斯BP211D-OCE)。

    1.2 試藥 補(bǔ)氣養(yǎng)血合劑(醫(yī)院自制);人參皂苷Rg1對(duì)照品(批號(hào):110703-201128,中國(guó)食品藥品檢定研究院,含量以91.1%計(jì));人參皂苷Rf標(biāo)準(zhǔn)品(批號(hào):110719-201505,中國(guó)食品藥品檢定研究院);人參皂苷Rb1標(biāo)準(zhǔn)品(批號(hào):110704-201726,中國(guó)食品藥品檢定研究院,含量以92.4%計(jì))三七皂苷R1標(biāo)準(zhǔn)品(批號(hào):110745-201128318,中國(guó)食品藥品檢定研究院,含量以94.0%計(jì));乙腈、甲醇(色譜純);其他化學(xué)試劑為分析純;水為超純水。

    2 方法條件選擇與結(jié)果

    2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定 需要檢測(cè)的補(bǔ)氣養(yǎng)血合劑中含有的這4種皂苷主要來(lái)自處方中的三七和人參,本實(shí)驗(yàn)方法的檢測(cè)波長(zhǎng)確定為203nm。是參考《中國(guó)藥典》(2015年版)一部収載的用HPLC法測(cè)定“三七”、“人參”中這4種皂苷的含量的方法。

    2.2 色譜條件的確定

    2.2.1 流動(dòng)相 本次實(shí)驗(yàn)首先參考《參考《中國(guó)藥典》(2015年版)一部収載的“三七”、“人參”標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定時(shí)的流動(dòng)相。開(kāi)展后對(duì)梯度洗脫的流動(dòng)相比例以及比例轉(zhuǎn)化時(shí)間進(jìn)行了一系列的探索[11],最終篩選出適合此次實(shí)驗(yàn)的如“表1”所示的梯度洗脫程序。使用其他條件洗脫程序,出現(xiàn)樣品中目標(biāo)物質(zhì)的吸收峰均分不開(kāi),有相鄰的吸收峰合并等問(wèn)題。

    2.2.2 柱溫 設(shè)置25、27、30℃進(jìn)行篩選[10],25、27℃目標(biāo)物質(zhì)的分離度小于1.5。柱溫為30℃時(shí),分離度才達(dá)到要求,柱溫確定30℃。

    2.2.3 色譜柱 多次實(shí)驗(yàn)確定使用ZORBAX Eclipse Plus C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色譜柱,分離效果好達(dá)到要求。

    3 溶液的配制

    3.1 樣品溶液的準(zhǔn)備 使用不同的溶劑如三氯甲烷、乙醚、水飽和的正丁醇等提取,采取大孔樹(shù)脂柱、氨試液等方法洗脫雜質(zhì)。進(jìn)行實(shí)驗(yàn)反復(fù)對(duì)比、優(yōu)化最終確認(rèn)樣品制備方法如下。

    精密量取樣品10 mL,用三氯甲烷萃取3次,每次10 mL,棄去三氯甲烷液。再用水飽和的正丁醇萃取3次,每次20 mL;合并水飽和的正丁醇液,再用氨試液60 mL萃取,棄去氨試液;再取適量水飽和的正丁醇來(lái)洗滌分液漏斗,收集洗滌液。合并水飽和的正丁醇液于蒸發(fā)皿中,在水浴鍋上蒸干。殘?jiān)眉状既芙庵?0 mL容量瓶,甲醇定容至刻度、搖勻、濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。

    3.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的準(zhǔn)備 分別精密稱取一定質(zhì)量4種皂苷的標(biāo)準(zhǔn)品,加甲醇使其溶解于適當(dāng)?shù)娜萘科俊T儆眉状级ㄈ葜量潭?,制成一定濃度的“單一成分?biāo)準(zhǔn)品溶液”。精密量取一定體積上述“單一成分標(biāo)準(zhǔn)品溶液”于同一適當(dāng)?shù)娜萘科?,甲醇定容至刻度。作為“混合?biāo)準(zhǔn)品溶液”。。

    3.3 陰性對(duì)照溶液的準(zhǔn)備 根據(jù)“補(bǔ)氣養(yǎng)血合劑”的處方。只去除“三七”、“人參”藥材。其他的條件不變。按“補(bǔ)氣養(yǎng)血合劑”的制作方法制作。制成“缺三七和人參的補(bǔ)氣養(yǎng)血合劑”。按“3.1”項(xiàng)制備,來(lái)作為陰性對(duì)照溶液。

    4 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性

    色譜柱:ZORBAX Eclipse Plus C18(長(zhǎng)度: ?[LL]250 mm,直徑:4.6 mm,孔徑:5μm),P.N.959990—902。柱溫:30℃。流速:1.0 mL/min。檢測(cè)波長(zhǎng):203nm。進(jìn)樣量:10μL。流動(dòng)相:水(A)—乙腈(B)。按“表1”中程序進(jìn)行梯度洗脫。三七皂苷R1的保留時(shí)間為32.75 min。人參皂苷Rg1的保留時(shí)間為44.91 min。人參皂苷Rf的保留時(shí)間為69.85 min。人參皂苷Rb1的保留時(shí)間為87.41 min。分離度均大于1.5。缺三七、缺人參的補(bǔ)氣養(yǎng)血合劑作為陰性對(duì)照。在32.75、44.91、69.85、87.41 min處無(wú)吸收峰干擾。如“圖1”所示。

    5 方法學(xué)研究

    5.1 專屬性考察 按照上述色譜條件,分別取3.1、3.2、3.3項(xiàng)下溶液進(jìn)樣,采集色譜圖(見(jiàn)圖1),由圖可知,陰性對(duì)照色譜(缺三七、人參)在對(duì)照品相應(yīng)出峰位置上處無(wú)干擾峰,對(duì)測(cè)定干擾小,系統(tǒng)誤差小;對(duì)照品、樣品色譜圖(Rt=32.75、44.91、69.85、87.41 min)分離效果良好,本實(shí)驗(yàn)方法專屬性強(qiáng)。

    Ⅰ:4種皂苷的混合對(duì)照.Ⅱ:補(bǔ)氣養(yǎng)血合劑樣品.Ⅲ:缺三七和人參的補(bǔ)氣養(yǎng)血合劑.

    5.2 線性關(guān)系考察 用 上述確定的色譜條件。測(cè)定不同濃度的混合對(duì)照品。以三七皂苷R1標(biāo)準(zhǔn)品的含量作為橫坐標(biāo),對(duì)應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線[8-10]。結(jié)果如“表2”、“圖2”所示。以人參皂苷Rg1標(biāo)準(zhǔn)品的含量作為橫坐標(biāo),其對(duì)應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果如“表3”、“圖3”所示。以人參皂苷Rf標(biāo)準(zhǔn)品的含量作為橫坐標(biāo),其對(duì)應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果如“表4”、“圖4”所示。以人參皂苷Rb1標(biāo)準(zhǔn)品的含量作為橫坐標(biāo),其對(duì)應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果如“表5”、“圖5”所示?;貧w方程為:三七皂苷R1:y=407.18x-3.6129,線性關(guān)系在0.0829—2.0454μg范圍內(nèi)良好(R=0.9995)。人參皂苷Rg1:y=504.32x+31.652,線性關(guān)系在0.2944—5.1263μg范圍內(nèi)良好(R=0.9999)。人參皂苷Rf:y=498.04x+1.4303,線性關(guān)系在0.0039—0.0586μg范圍內(nèi)良好(R=0.9993)。人參皂苷Rb1:y=429x+0.1306,線性關(guān)系在0.2350—3.5256μg范圍內(nèi)良好(R=0.9999)。

    5.3 穩(wěn)定性考察 用準(zhǔn)備好的同一樣品溶液,用上述的色譜條件。分別在0、2、4、8、24h進(jìn)樣。來(lái)測(cè)定樣品中含有的4種皂苷的峰面積。計(jì)算4種皂苷峰面積的RSD如“表6”所示。依次為:三七皂苷R1為1.44%。人參皂苷Rg1為0.49%。人參皂苷Rf為1.53%。人參皂苷Rb1為0.69%。說(shuō)明了樣品溶液在24h內(nèi)比較穩(wěn)定。

    5.4 精密度試驗(yàn) 用“混合對(duì)照品溶液”。按上述的色譜條件。測(cè)定4種皂苷的吸收峰面積。連續(xù)測(cè)定6次。然后計(jì)算4種皂苷的峰面積RSD如“表7”所示。依次為:三七皂苷R1為0.86%。人參皂苷Rg1為0.57%。人參皂苷Rf為1.41%。人參皂苷Rb1為0.62%。說(shuō)明了使用“2.1”的色譜條件。該儀器的精密度比較良好。

    5.5 重復(fù)性考察 用準(zhǔn)備好的同一批次的6份樣品溶液,用上述的色譜條件。檢測(cè)4種皂苷的峰面積。計(jì)算他們的平均含量及RSD值如“表8”所示。結(jié)果依次為:三七皂苷:含量=0.0847 mg/mL,RSD=1.45%。人參皂苷Rg1:含量=0.3246 mg/mL,RSD=0.98%。人參皂苷Rf:含量=0.0033 mg/mL,RSD=1.49%。人參皂苷Rb1:含量=0.3087 mg/mL,RSD=0.97%。說(shuō)明此次實(shí)驗(yàn)的方法具有比較良好的重復(fù)性。

    5.6 加樣回收率考察 精密量取5 mL已知含量的樣品于分液漏斗中。再精密量取適量的“混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液”加入其中。按“3.1”樣品溶液的準(zhǔn)備方法,準(zhǔn)備6份溶液。作為加樣回收試驗(yàn)的溶液。用上述的色譜條件。進(jìn)行吸收峰面積的檢測(cè)。然后計(jì)算平均加樣回收率如“表9”、“表10”、“表11”、“表12”所示。

    5.7 供試品含量測(cè)定 用3個(gè)批次的樣品按“3.1”樣品溶液的準(zhǔn)備方法,各準(zhǔn)備2份樣品溶液。采用上述的色譜條件。對(duì)樣品中含有的4種皂苷峰面積進(jìn)行了2次檢測(cè)。然后計(jì)算出他們的平均含量如“表13”所示。

    6 結(jié)論

    本試驗(yàn)采用DAD UV HPLC色譜法測(cè)定樣品中 三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rf、人參皂苷Rb1的含量,本檢驗(yàn)方法得到的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線相關(guān)系數(shù)為0.9999,精密度的RSD值小于1.5%,重復(fù)性的RSD值0.4%,加標(biāo)回收率在95.0%~105.0%間。該方法適用“補(bǔ)氣養(yǎng)血合劑”中含有4種皂苷的含量測(cè)定??尚哦容^高,對(duì)“補(bǔ)氣養(yǎng)血合劑”的標(biāo)準(zhǔn)起草及質(zhì)量控制有著重要的意義。

    7 討論

    對(duì)處方中同時(shí)調(diào)配三七和人參2味中藥情況,無(wú)論是在制劑還是臨床方劑中不多見(jiàn)。在常見(jiàn)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中三七含量測(cè)定成分為人參皂甙Rb1、Rg1、三七皂甙R1三者總和,三七皂甙R1為三七鑒別的專屬性指標(biāo)成分;人參含量測(cè)定成分為人參皂甙Rg1、Rb1、Re三者總和,人參皂甙Rf為人參鑒別的專屬性指標(biāo)成分。本次實(shí)驗(yàn)研究在選取含量測(cè)定控制指標(biāo)性成分時(shí)選定三七皂苷R1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rf 四個(gè)對(duì)照物質(zhì)進(jìn)行控制,便于對(duì)處方中的三七和人參質(zhì)量控制。但因在同一方法中控制指標(biāo)多,在樣品分離度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性等方面要求高、難度較大;對(duì)檢測(cè)設(shè)備的性能要求較高。

    對(duì)樣品提取環(huán)節(jié)也有要求,皂苷類物質(zhì)在溶液中穩(wěn)定性不高容易發(fā)生分解。在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究階段可以通過(guò)精細(xì)控制達(dá)到不同批次樣品差異性不大。但在中試及大生產(chǎn)過(guò)程中不易控制,須在藥品研發(fā)生產(chǎn)工藝時(shí)總體控制調(diào)節(jié):如調(diào)節(jié)溶液pH值、在提取環(huán)節(jié)進(jìn)一步純化中間品等,進(jìn)一步改善藥品的穩(wěn)定性。

    參考文獻(xiàn):

    [1]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)人民共和國(guó)藥典[S].1部.中國(guó)醫(yī)藥科技出版社.

    [2]劉穎.應(yīng)用HPLC法對(duì)參烏合劑中人參皂苷Rb1、Rg1含量測(cè)定的研究[J].中國(guó)處方藥,2018,12(16):33-34.

    [3]潘俊杰,鄭琴,陽(yáng)明.三七中三七總皂苷的提取、分離純化及分析方法的研究進(jìn)展[J].世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化,2007.9(6):77-82.

    [4]劉鳳艷,張二勇,周波,等.皂苷提取分離新技術(shù)研究進(jìn)展[J].遼寧化工,2009,38(1):60-61.

    [5]蔡芷辰,周艷麗,李振麟,等.HPLC法同時(shí)測(cè)定9個(gè)不同產(chǎn)區(qū)人參花中5種皂苷含量[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2019,25(2):86-88.

    [6]韓利平,高家榮,李靜雯,等.HPLC法同時(shí)測(cè)定黃安消膠囊中4種化學(xué)成分的含量[J].中醫(yī)藥臨床雜志,2018,30(3):475-478.

    [7]艾強(qiáng),雷陽(yáng),張厚才,等.HPLC法測(cè)定三七總皂苷含量[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2016(14):274-275.

    [8]田蜜,陳芳,賀健昌.HPLC法測(cè)定黃七化瘀丸中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1及人參皂苷Rb1的含量[J].吉林中醫(yī)藥,2018,38(11):1319-1322.

    [9]焦傳新,袁武,黃任嵩,等.人參花中人參皂苷Re和Rg1成分提取工藝優(yōu)選[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2019,15(1):60-62.

    [10]朱連連,欒曉寧,竇德強(qiáng).黑參中人參皂苷Rg3、的含量測(cè)定[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥,2019(3):323-327.

    [11]劉夢(mèng)楠,薛雪,熊慧,等.不同凈制工藝對(duì)三七質(zhì)量的影響[J].世界中醫(yī)藥,2019,14(2):297-300.

    猜你喜歡
    HPLC法含量測(cè)定
    HPLC法測(cè)定注射用腺苷鈷胺有關(guān)物質(zhì)
    高效液相色譜法用于丙酸睪酮注射液的含量測(cè)定
    HPLC法測(cè)定彝藥火把花根中雷公藤甲素的含量
    HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地爬山虎莖中白藜蘆醇的含量
    山苓祛斑凝膠劑提取物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究
    空氣中氧氣含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)的改進(jìn)與拓展
    考試周刊(2016年95期)2016-12-21 01:17:51
    藥物含量測(cè)定操作技能考核設(shè)計(jì)的探討
    不同pH條件下五倍子中EGCG,EGC,ECG含量測(cè)定及分析
    HPLC法測(cè)定注射用鹽酸表柔比星的有關(guān)物質(zhì)
    HPLC法測(cè)定清熱解毒口服液中木犀草苷的含量
    色噜噜av男人的天堂激情| 18禁观看日本| 不卡一级毛片| 国产一级毛片七仙女欲春2| 国产视频一区二区在线看| 怎么达到女性高潮| 久久这里只有精品19| 欧美黑人巨大hd| 啪啪无遮挡十八禁网站| av在线天堂中文字幕| 淫秽高清视频在线观看| 五月玫瑰六月丁香| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 精品人妻1区二区| 国产乱人视频| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产欧美日韩精品亚洲av| a在线观看视频网站| 亚洲成a人片在线一区二区| 久久久久久久久免费视频了| 亚洲国产高清在线一区二区三| 久久这里只有精品中国| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 久久久国产成人精品二区| 国产成人精品久久二区二区免费| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 长腿黑丝高跟| 欧美日韩一级在线毛片| 午夜日韩欧美国产| 国产av在哪里看| 国产三级黄色录像| 可以在线观看的亚洲视频| 天堂网av新在线| 一区二区三区激情视频| 天堂动漫精品| 女警被强在线播放| 亚洲成av人片在线播放无| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产av不卡久久| 香蕉国产在线看| 国产精品一区二区免费欧美| 男人舔女人的私密视频| 久久中文字幕人妻熟女| 一级毛片精品| h日本视频在线播放| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 18禁美女被吸乳视频| 久久久国产成人精品二区| 国产精品99久久久久久久久| 少妇丰满av| 岛国在线免费视频观看| 欧美国产日韩亚洲一区| 欧美日韩综合久久久久久 | 亚洲成av人片免费观看| 怎么达到女性高潮| 日韩精品青青久久久久久| 麻豆国产97在线/欧美| 欧美色视频一区免费| 黑人欧美特级aaaaaa片| 久久久久久人人人人人| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 欧美日韩一级在线毛片| 人人妻人人看人人澡| 国产乱人视频| 嫩草影院精品99| 老司机午夜十八禁免费视频| 亚洲av成人一区二区三| 欧美又色又爽又黄视频| 91av网站免费观看| 欧美极品一区二区三区四区| 黄色日韩在线| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 嫁个100分男人电影在线观看| 在线播放国产精品三级| 身体一侧抽搐| 天天添夜夜摸| 午夜福利成人在线免费观看| 成人特级黄色片久久久久久久| 色综合亚洲欧美另类图片| 欧美黑人巨大hd| 国产久久久一区二区三区| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 一级a爱片免费观看的视频| 嫩草影院精品99| 国产69精品久久久久777片 | 丝袜人妻中文字幕| 国内精品久久久久精免费| 三级国产精品欧美在线观看 | 91九色精品人成在线观看| 国产精品亚洲美女久久久| 日韩欧美国产一区二区入口| 观看美女的网站| 校园春色视频在线观看| 在线a可以看的网站| 丰满的人妻完整版| 欧美色视频一区免费| 精品一区二区三区av网在线观看| 男人舔奶头视频| 国产精品av久久久久免费| 女人被狂操c到高潮| 色老头精品视频在线观看| 亚洲片人在线观看| 亚洲精品久久国产高清桃花| 欧美一级a爱片免费观看看| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 91av网站免费观看| 亚洲天堂国产精品一区在线| 又粗又爽又猛毛片免费看| 最近视频中文字幕2019在线8| 日本黄色片子视频| 曰老女人黄片| 99久久精品热视频| 熟女人妻精品中文字幕| 无限看片的www在线观看| 亚洲精品在线美女| 男女床上黄色一级片免费看| 99在线视频只有这里精品首页| 99久国产av精品| 一个人看的www免费观看视频| 免费av毛片视频| 毛片女人毛片| 看黄色毛片网站| 成人三级黄色视频| 禁无遮挡网站| 一区二区三区国产精品乱码| 精华霜和精华液先用哪个| 嫩草影院入口| 免费一级毛片在线播放高清视频| avwww免费| 性色avwww在线观看| 久久久精品大字幕| 亚洲欧美日韩无卡精品| a在线观看视频网站| 美女被艹到高潮喷水动态| 欧美日本亚洲视频在线播放| 99riav亚洲国产免费| 亚洲在线观看片| 成人国产一区最新在线观看| 久久久久久久精品吃奶| 99精品在免费线老司机午夜| 免费看a级黄色片| 两个人视频免费观看高清| 日韩欧美在线二视频| 国产精品久久久久久久电影 | 午夜精品久久久久久毛片777| 中文字幕高清在线视频| 一区福利在线观看| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 美女黄网站色视频| 欧美黄色淫秽网站| 亚洲精品在线美女| 成人午夜高清在线视频| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 亚洲欧美日韩无卡精品| 精品一区二区三区视频在线 | 亚洲国产精品sss在线观看| 亚洲精华国产精华精| 精品国内亚洲2022精品成人| 欧美日本亚洲视频在线播放| 一本一本综合久久| 成人国产综合亚洲| 亚洲av免费在线观看| 国产麻豆成人av免费视频| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 国产私拍福利视频在线观看| 欧美色欧美亚洲另类二区| 手机成人av网站| 亚洲av美国av| 久久久久国产一级毛片高清牌| 日本黄色视频三级网站网址| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 国产精品野战在线观看| 久久99热这里只有精品18| 99精品久久久久人妻精品| 国产精品亚洲美女久久久| 免费av毛片视频| 99久久国产精品久久久| 国产毛片a区久久久久| 欧美黑人欧美精品刺激| 午夜福利成人在线免费观看| 欧美一区二区精品小视频在线| 午夜亚洲福利在线播放| 国产精品一及| bbb黄色大片| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 日本与韩国留学比较| 18美女黄网站色大片免费观看| 看免费av毛片| 一区福利在线观看| 99久久精品国产亚洲精品| 网址你懂的国产日韩在线| 免费高清视频大片| www.精华液| 国产乱人视频| 国产精华一区二区三区| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 18禁国产床啪视频网站| 成年女人毛片免费观看观看9| 亚洲熟女毛片儿| 国产精品精品国产色婷婷| 国产精品永久免费网站| 91av网一区二区| 精品欧美国产一区二区三| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 88av欧美| 欧美成人免费av一区二区三区| 成人特级黄色片久久久久久久| 国产精品av久久久久免费| 国产 一区 欧美 日韩| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| tocl精华| 一个人看的www免费观看视频| 久久久久久久午夜电影| 日韩欧美在线二视频| 亚洲 国产 在线| 99久久无色码亚洲精品果冻| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 搡老妇女老女人老熟妇| 99精品在免费线老司机午夜| 国产精品免费一区二区三区在线| 99久国产av精品| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 全区人妻精品视频| а√天堂www在线а√下载| 一级毛片女人18水好多| 欧美av亚洲av综合av国产av| 亚洲欧美日韩高清专用| 网址你懂的国产日韩在线| 90打野战视频偷拍视频| 91老司机精品| 无遮挡黄片免费观看| 毛片女人毛片| 一级黄色大片毛片| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 国产伦一二天堂av在线观看| 国产一区二区在线av高清观看| 日本三级黄在线观看| 又粗又爽又猛毛片免费看| 这个男人来自地球电影免费观看| 曰老女人黄片| 我要搜黄色片| netflix在线观看网站| 久久中文看片网| 三级毛片av免费| 婷婷亚洲欧美| 国产欧美日韩一区二区三| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 午夜两性在线视频| 国产野战对白在线观看| 九色成人免费人妻av| 99在线视频只有这里精品首页| 国产综合懂色| 久久精品91蜜桃| 哪里可以看免费的av片| 午夜激情福利司机影院| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 午夜视频精品福利| 欧美一区二区国产精品久久精品| 免费在线观看亚洲国产| 在线观看舔阴道视频| 精品久久久久久,| 欧美日韩乱码在线| 色av中文字幕| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 国产欧美日韩一区二区三| 日本一二三区视频观看| 精品久久久久久久久久免费视频| 国产高潮美女av| 听说在线观看完整版免费高清| 国产成人欧美在线观看| 少妇熟女aⅴ在线视频| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 99久久成人亚洲精品观看| 91av网一区二区| 国产成人av教育| 全区人妻精品视频| 丝袜人妻中文字幕| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 淫秽高清视频在线观看| 一级毛片高清免费大全| 亚洲精品色激情综合| 亚洲男人的天堂狠狠| 欧美又色又爽又黄视频| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 免费在线观看影片大全网站| 欧美成狂野欧美在线观看| 国产黄片美女视频| 精品久久久久久久毛片微露脸| 国产精品一区二区免费欧美| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 99在线视频只有这里精品首页| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 亚洲五月天丁香| 国产成+人综合+亚洲专区| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 在线播放国产精品三级| 久久这里只有精品中国| 成人亚洲精品av一区二区| 婷婷精品国产亚洲av在线| 成年人黄色毛片网站| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 亚洲黑人精品在线| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 久久久精品欧美日韩精品| 亚洲av成人精品一区久久| 国产成人系列免费观看| 亚洲成a人片在线一区二区| 精品电影一区二区在线| 欧美乱妇无乱码| 黄色日韩在线| 午夜福利在线观看吧| 日韩国内少妇激情av| 亚洲性夜色夜夜综合| 成人一区二区视频在线观看| 波多野结衣高清作品| 99久久成人亚洲精品观看| 色噜噜av男人的天堂激情| 少妇的丰满在线观看| 精品人妻1区二区| 亚洲人与动物交配视频| 999久久久国产精品视频| 一本一本综合久久| 色哟哟哟哟哟哟| 美女cb高潮喷水在线观看 | 欧美日韩一级在线毛片| 精品电影一区二区在线| 热99re8久久精品国产| 麻豆久久精品国产亚洲av| 男插女下体视频免费在线播放| 黄色日韩在线| 这个男人来自地球电影免费观看| 中文亚洲av片在线观看爽| 精品久久久久久久末码| 一个人看的www免费观看视频| 欧美激情在线99| 日本熟妇午夜| 亚洲av熟女| 国产免费男女视频| 岛国在线免费视频观看| 亚洲av五月六月丁香网| 母亲3免费完整高清在线观看| 天天一区二区日本电影三级| cao死你这个sao货| 老司机在亚洲福利影院| 啪啪无遮挡十八禁网站| 激情在线观看视频在线高清| 日本 欧美在线| h日本视频在线播放| 欧美激情在线99| 岛国在线观看网站| a级毛片在线看网站| 又黄又爽又免费观看的视频| 91久久精品国产一区二区成人 | 国产一级毛片七仙女欲春2| 亚洲五月婷婷丁香| 身体一侧抽搐| 国产成人aa在线观看| 999久久久国产精品视频| 在线观看免费午夜福利视频| 波多野结衣高清无吗| 国产麻豆成人av免费视频| 国产乱人视频| e午夜精品久久久久久久| 人人妻人人澡欧美一区二区| 国产精品亚洲av一区麻豆| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产单亲对白刺激| 亚洲成人中文字幕在线播放| 日韩欧美在线二视频| 婷婷六月久久综合丁香| 国产av一区在线观看免费| 精品国产三级普通话版| 黄色丝袜av网址大全| 亚洲片人在线观看| 中文在线观看免费www的网站| 国产私拍福利视频在线观看| 91老司机精品| 国产午夜精品久久久久久| 天堂网av新在线| 欧美黑人欧美精品刺激| 免费一级毛片在线播放高清视频| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 国产1区2区3区精品| 国产av不卡久久| 亚洲在线观看片| 变态另类丝袜制服| 亚洲国产欧美网| 最近视频中文字幕2019在线8| 久久久久免费精品人妻一区二区| 精品国产乱码久久久久久男人| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 亚洲av第一区精品v没综合| 亚洲一区二区三区不卡视频| 欧美在线一区亚洲| 手机成人av网站| 国产精品久久视频播放| 国产99白浆流出| tocl精华| 国产精品影院久久| 久久草成人影院| 一级a爱片免费观看的视频| 校园春色视频在线观看| 国产欧美日韩一区二区三| 三级国产精品欧美在线观看 | 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 欧美黄色淫秽网站| avwww免费| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 免费av毛片视频| 久久久久久久久免费视频了| 成年女人永久免费观看视频| 欧美高清成人免费视频www| 久久中文字幕一级| 亚洲欧美日韩东京热| 岛国在线免费视频观看| 日本成人三级电影网站| 男插女下体视频免费在线播放| 三级国产精品欧美在线观看 | 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 国产高清激情床上av| 国产 一区 欧美 日韩| 国产精品一区二区三区四区久久| 午夜日韩欧美国产| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产伦一二天堂av在线观看| 久久亚洲真实| 亚洲精品在线美女| 在线免费观看不下载黄p国产 | 久久久久精品国产欧美久久久| 美女黄网站色视频| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 最近视频中文字幕2019在线8| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| a级毛片在线看网站| 一区二区三区激情视频| 午夜激情欧美在线| 美女大奶头视频| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 精品国产三级普通话版| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 日韩三级视频一区二区三区| 一区二区三区国产精品乱码| 日本a在线网址| av福利片在线观看| 成年人黄色毛片网站| 欧美+亚洲+日韩+国产| 日本黄色片子视频| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 欧美精品啪啪一区二区三区| 久久亚洲真实| 亚洲精品在线美女| 99久久精品国产亚洲精品| 91av网一区二区| 高清在线国产一区| 日韩三级视频一区二区三区| 欧美乱色亚洲激情| 18美女黄网站色大片免费观看| 亚洲精品在线美女| 99久久精品国产亚洲精品| 精华霜和精华液先用哪个| 在线播放国产精品三级| 国产精品九九99| 91在线观看av| 国产精品久久久久久人妻精品电影| e午夜精品久久久久久久| 嫩草影视91久久| 国产成人欧美在线观看| 久久天堂一区二区三区四区| 99热精品在线国产| 久久久精品欧美日韩精品| 色老头精品视频在线观看| 久久久久九九精品影院| 大型黄色视频在线免费观看| 色av中文字幕| 亚洲国产精品999在线| 一进一出抽搐动态| av在线蜜桃| 美女cb高潮喷水在线观看 | 精品久久久久久久末码| 国产一级毛片七仙女欲春2| 国产欧美日韩一区二区精品| 亚洲精品一区av在线观看| 精品久久久久久成人av| 国产高清视频在线观看网站| 香蕉久久夜色| 这个男人来自地球电影免费观看| 日韩精品青青久久久久久| 亚洲欧美精品综合久久99| 免费电影在线观看免费观看| 看片在线看免费视频| 一个人免费在线观看电影 | 可以在线观看的亚洲视频| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 两个人看的免费小视频| 亚洲性夜色夜夜综合| 老司机在亚洲福利影院| 精品熟女少妇八av免费久了| av国产免费在线观看| 制服人妻中文乱码| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 老司机在亚洲福利影院| 亚洲人成电影免费在线| 少妇丰满av| 99热精品在线国产| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 欧美日韩福利视频一区二区| 男人舔女人下体高潮全视频| 99热精品在线国产| 国产成人精品久久二区二区91| 亚洲国产高清在线一区二区三| 亚洲欧美激情综合另类| 色综合亚洲欧美另类图片| 一区二区三区国产精品乱码| 91久久精品国产一区二区成人 | 国产精品久久久av美女十八| 最近最新中文字幕大全电影3| 最近视频中文字幕2019在线8| 国产精品1区2区在线观看.| 国产真实乱freesex| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 国产高清三级在线| 免费看美女性在线毛片视频| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 青草久久国产| 欧美av亚洲av综合av国产av| 欧美一级a爱片免费观看看| 免费观看人在逋| 免费看光身美女| 国产成人精品久久二区二区91| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 成人av在线播放网站| 亚洲成人中文字幕在线播放| 脱女人内裤的视频| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 三级国产精品欧美在线观看 | 久久久久久久久久黄片| 欧美高清成人免费视频www| 中亚洲国语对白在线视频| 日韩精品青青久久久久久| 美女扒开内裤让男人捅视频| 久久精品综合一区二区三区| 成人国产综合亚洲| 亚洲人与动物交配视频| 热99在线观看视频| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产精品 国内视频| ponron亚洲| 亚洲国产精品久久男人天堂| 午夜福利免费观看在线| 99视频精品全部免费 在线 | 国产私拍福利视频在线观看| 国产亚洲精品av在线| 桃红色精品国产亚洲av| 亚洲乱码一区二区免费版| 日本一本二区三区精品| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 亚洲国产看品久久| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲国产精品成人综合色| 嫩草影视91久久| 在线播放国产精品三级| 偷拍熟女少妇极品色| 亚洲精品在线美女| 人妻久久中文字幕网| 国产一区二区在线av高清观看| 国产精品1区2区在线观看.| aaaaa片日本免费| avwww免费| 99久久99久久久精品蜜桃| www.www免费av| 精品电影一区二区在线| av黄色大香蕉| 舔av片在线| 欧美三级亚洲精品| 亚洲欧美精品综合久久99| 九色成人免费人妻av| 亚洲色图av天堂| 国内精品久久久久久久电影| 美女黄网站色视频| 欧美乱色亚洲激情| 欧美日韩一级在线毛片| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 黑人操中国人逼视频| 俺也久久电影网| 五月伊人婷婷丁香| 国内精品久久久久精免费| 免费搜索国产男女视频| 日韩精品青青久久久久久| 最新美女视频免费是黄的| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产乱人视频| 久久人妻av系列| 黄频高清免费视频| 12—13女人毛片做爰片一| 欧美中文综合在线视频| 亚洲九九香蕉| 成人特级黄色片久久久久久久| 日韩有码中文字幕| 男女午夜视频在线观看| 精品日产1卡2卡| 国产免费av片在线观看野外av| 天堂影院成人在线观看| 国产欧美日韩精品亚洲av| 黑人操中国人逼视频| 国模一区二区三区四区视频 | 2021天堂中文幕一二区在线观| 国产激情久久老熟女| 99国产综合亚洲精品| 身体一侧抽搐| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 叶爱在线成人免费视频播放|