急性心肌梗死患者血清微小RNA-133a的表達(dá)及臨床意義

張敏，李陽(yáng)春，雷蓉，呂湛

急性心肌梗死（AMI）是指各種原因?qū)е碌墓跔顒?dòng)脈（冠脈）血管堵塞，引發(fā)局部心肌缺血、缺氧、壞死，導(dǎo)致心臟泵血功能急劇下降，嚴(yán)重威脅患者生命。隨著社會(huì)生活模式的轉(zhuǎn)變，AMI的發(fā)病率、死亡率逐年上升且呈年輕化趨勢(shì)，及早診治和預(yù)防是現(xiàn)階段臨床工作的重點(diǎn)[1]。目前，AMI評(píng)估采用肌鈣蛋白、肌酸激酶等心肌損傷標(biāo)志物，但此類(lèi)指標(biāo)在胸痛發(fā)作數(shù)小時(shí)后才可被檢測(cè)，且特異性較差。近年來(lái)，基因組學(xué)發(fā)展迅速，越來(lái)越多微小RNA家族成員被用于心血管疾病的研究，其中微小RNA-133a（miR-133a）是學(xué)者們的重點(diǎn)關(guān)注對(duì)象，其在心肌細(xì)胞中特異性表達(dá)，可能參與了心力衰竭、心肌纖維化、心肌重塑及梗死心肌新生血管形成等病理過(guò)程[2]。已有學(xué)者證實(shí)miR-133a對(duì)心肌梗死早期診斷具有一定應(yīng)用價(jià)值[3]，但具體機(jī)制不清。本研究通過(guò)分析AMI患者血清miR-133a的表達(dá)及臨床意義，以期為AMI的診治及預(yù)防提供幫助。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象選取2018年1月至2019年12月于川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院隨診的AMI患者321例為研究對(duì)象（AMI組）。入組標(biāo)準(zhǔn)：發(fā)病至入院時(shí)間不超過(guò)6 h；AMI的診斷符合美國(guó)心臟病學(xué)院及心臟病學(xué)會(huì)頒布的AMI相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；臨床資料完整；自愿進(jìn)入本研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：既往心血管疾病或心血管疾病治療史；感染性疾?。粣盒阅[瘤；肝、腎等重要器官功能障礙；血液系統(tǒng)及免疫性疾病。另選取同期門(mén)診體檢的健康者100例為對(duì)照組（CON組）?；颊呔炇鹬橥鈺?shū)，本研究已獲我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 臨床資料收集患者一般資料，包括年齡、性別、吸煙、飲酒、高血壓、糖尿病、冠心病家族史、腦卒中、體質(zhì)指數(shù)（BMI）、血壓、左室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）等。

1.2.2 生化指標(biāo)采集入組對(duì)象空腹靜脈血10ml，靜置5 min，經(jīng)3000轉(zhuǎn)/min離心15 min（離心半徑14 cm），置于-20℃冰箱中備用。使用SYSMEXBX-5000全自動(dòng)生化檢測(cè)儀（日本，希森美公司）檢測(cè)生化指標(biāo)：心肌肌鈣蛋白（cTnI）、肌酐（Scr）、腦鈉肽（BNP）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、空腹血糖（FBG）。

1.2.3 miR-133a檢測(cè)采集患者靜脈血10 ml，2 h內(nèi)分離血清，使用定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)血清miR-133a水平，步驟包括：總RNA提取-逆轉(zhuǎn)錄-PCR擴(kuò)增。逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)于Takara公司（日本），引物由生工生物工程有限公司提供（上海），引物序列：上游（5'-CGCCGGTTACTGA GACACATTC-3'）、下游（5'-TGCAGATCGAAT ATTCCAGCATAC-3'）。miR-133a的PCR判讀：ΔCt=樣品Ct均值-內(nèi)參Ct均值，以2-ΔCt表示基因的相對(duì)表達(dá)量。

1.2.4 冠脈鈣化評(píng)分患者行冠脈造影后，使用Gensini評(píng)分系統(tǒng)[5,6]對(duì)冠脈病變狹窄程度進(jìn)行定量評(píng)分：以最狹窄處為標(biāo)準(zhǔn)，狹窄直徑1%～25%記1分，26%～50%記2分，51%～75%記4分，76%～90%記8分，91%～99%記16分，完全閉塞記32分。病變血管權(quán)重：左主干為5，前降支：近段為2.5，中段為1.5；對(duì)角支：D1為1，D2為0.5；回旋支：近段為2.5，遠(yuǎn)段及后降支均為1，后側(cè)支為0.5；右冠：近、中、遠(yuǎn)段和后降支均為1。各病變血管積分為評(píng)分與權(quán)重之積，總積分為各病變血管積分之和，積分越高病變?cè)街亍?/p>

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法本研究數(shù)據(jù)使用SPSS 23.0進(jìn)行分析。計(jì)量資料符合正態(tài)分布使用均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料使用例（構(gòu)成比）表示，組間差異使用χ2進(jìn)行分析。使用Pearson相關(guān)分析miR-133a與AMI相關(guān)指標(biāo)的相關(guān)性，應(yīng)用Logistic回歸分析AMI的危險(xiǎn)因素，采用受試者工作特征曲線（ROC）檢測(cè)miR-133a對(duì)AMI的診斷效能。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清miR-133a及一般資料比較AMI組患者血清miR-133a、TC、BNP、cTnI、CKMB、Gensini評(píng)分、年齡、高血壓及冠心病比例明顯高于CON組，而LVEF明顯低于CON組（均P＜0.05）；兩組患者在性別、吸煙、飲酒、糖尿病、腦卒中、BMI、收縮壓、舒張壓、FBG、TG、LDL、HDL、Scr等方面比較，無(wú)明顯差異（P＜0.05），表1。

表1 兩組miR-133a水平及一般資料比較

2.2 血清miR-133a水平與AMI指標(biāo)的相關(guān)性Pearson相關(guān)分析顯示AMI患者血清miR-133a水平與cTnI（r=0.673，P＜0.001）、CK-MB（r=0.768，P＜0.001）、Gensini評(píng)分（r=0.772，P＜0.001）均呈明顯正相關(guān)，與LVEF（r=-0.667，P＜0.001）呈明顯負(fù)相關(guān)，相關(guān)性趨勢(shì)圖見(jiàn)圖1。

圖1 血清miR-133a水平與AMI相關(guān)指標(biāo)的相關(guān)性

2.3 AMI發(fā)病的危險(xiǎn)因素分析Logistic回歸分析顯示miR-133a（OR=1.924）、年齡（OR=1.874）、高血壓（OR=3.696）、冠心病家族史（OR=2.758）及Gensini評(píng)分（OR=1.674）均為AMI發(fā)病的危險(xiǎn)因素（P＜0.05），表2。

表2 AMI發(fā)病的危險(xiǎn)因素分析

2.4 血清miR-133a對(duì)AMI的診斷價(jià)值分析miR-133a診斷AMI的ROC曲線下面積為0.872（95%CI：0.796～0.896，P＜0.001），約登指數(shù)、敏感度、特異度分別為0.722、88.16%和84.00%。ROC曲線見(jiàn)圖2。

圖2 血清miR-133a診斷AMI的ROC曲線

3 討論

AMI是常見(jiàn)的心血管急重癥之一，是冠心病的嚴(yán)重類(lèi)型，臨床表現(xiàn)為急性胸痛、胸悶，甚至致死性心律失常、心力衰竭而導(dǎo)致猝死。AMI早期行缺血心肌再灌注，可明顯改善患者預(yù)后，這對(duì)AMI診斷的及時(shí)、準(zhǔn)確性提出了更高的要求[7]。心肌細(xì)胞缺氧壞死后，CK-MB、cTnI、BNP等心肌損傷標(biāo)志物釋放入血，與既往研究相符[8]，此類(lèi)指標(biāo)對(duì)AMI的早期診斷做出了較大貢獻(xiàn)，但在疾病早期其敏感度欠佳，峰值出現(xiàn)多在患者發(fā)病數(shù)小時(shí)后，對(duì)于時(shí)間就是生命的AMI患者來(lái)說(shuō)極為不利[8]。

miRNA是一系列高度保守、長(zhǎng)度在18～23個(gè)核苷酸間的非編碼核糖核酸，通過(guò)與目標(biāo)mRNA中的特異性序列結(jié)合，對(duì)靶基因轉(zhuǎn)錄后的翻譯和修飾進(jìn)行調(diào)控，可維持靶基因的穩(wěn)定性，在細(xì)胞分化、生長(zhǎng)及程序性調(diào)亡等過(guò)程中起到重要作用[9]。不同狀態(tài)下的miRNA具有組織和細(xì)胞特異性，釋放入血后可保持穩(wěn)態(tài)，這為AMI早期診斷提供了新思路。miR-133a是一種具有橫紋肌組織表達(dá)特異性的miRNA，在心肌和骨骼肌中廣泛表達(dá)，參與了心臟發(fā)育、心律失常、心肌肥厚及心肌調(diào)亡等病理生理過(guò)程，研究發(fā)現(xiàn)miR-133a可能是調(diào)節(jié)心肌缺血應(yīng)激損傷后心臟適應(yīng)性的重要因子[10,11]。Gacoń等[12]研究發(fā)現(xiàn)，病變冠脈閉塞的心肌梗死患者血清miR-133a水平是病變冠脈未閉塞患者的7倍，但CTnI的表達(dá)無(wú)明顯差異，提示miR-133a可較好反應(yīng)患者的病情程度。唐冬娟等[13]研究顯示，AMI患者血清miR-133a水平顯著升高，與CK-MB、cTnI、Gensini評(píng)分呈正相關(guān)，且對(duì)AMI和30 d內(nèi)不良心血管事件的發(fā)生均有較好的診斷價(jià)值，說(shuō)明miR-133a與冠脈病變程度及預(yù)后具有一定相關(guān)性。馮俊等[14]報(bào)道證實(shí)，丹參酮Ⅱ可激活MAPK ERK1/2通路上調(diào)miR-133a的表達(dá)，增強(qiáng)心肌細(xì)胞的抗低氧損害、較少低氧導(dǎo)致的心肌細(xì)胞調(diào)亡。Xu等[15]研究顯示，miR-133a在蛋白和基因水平抑制Caspase-9的表達(dá)，Caspase-9是一種蛋白質(zhì)切割酶，可造成細(xì)胞凋亡，增加miR-133a水平有利于細(xì)胞的生存。還有研究[16]顯示，TAGLN2是miR-133a的潛在目的基因之一，TAGLN是一種肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白，可與肌動(dòng)蛋白纖維結(jié)合參與其聚合和降解，具有穩(wěn)定和調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架、維持細(xì)胞正常運(yùn)動(dòng)等作用，上調(diào)miR-133a可能促進(jìn)TAGLN2的分泌，間接保護(hù)心肌。上述研究均提示miR-133a的上調(diào)可能發(fā)揮增強(qiáng)心肌細(xì)胞抗損傷、抑制調(diào)亡等重要生理作用。

理想生物學(xué)標(biāo)志物，不僅可準(zhǔn)確判斷病情嚴(yán)重程度，且對(duì)疾病預(yù)測(cè)具有較高敏感性和特異性。本研究分析發(fā)現(xiàn)，AMI患者血清miR-133a與心肌損傷標(biāo)志物、冠脈鈣化評(píng)分、心功能均具有較好的相關(guān)性，miR-133a可作為AMI的獨(dú)立危險(xiǎn)預(yù)測(cè)因素。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)其診斷AMI的敏感性、特異性及準(zhǔn)確度較高，證實(shí)了miR-133a與AMI患者心肌損傷、病變嚴(yán)重程度具有較好的量化關(guān)系，可作為預(yù)防和早期干預(yù)AMI的標(biāo)志物之一，與既往研究相符[12-15]。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)年齡、高血壓、冠心病家族史及Gensini評(píng)分均是AMI的危險(xiǎn)因素，AMI的發(fā)生與個(gè)體差異、遺傳等因素相關(guān)，上述因素也是較為明確的AMI危險(xiǎn)因素，臨床中對(duì)于此類(lèi)患者應(yīng)及早制定相關(guān)措施，以減少不良心血管事件的發(fā)生。

綜上所述，AMI患者血清miR-133a的表達(dá)水平明顯升高，且對(duì)AMI的預(yù)測(cè)和診斷價(jià)值較高，可為AMI的早期診治提供新思路。