ApoE基因多態(tài)性與腦梗死認(rèn)知障礙及復(fù)發(fā)的相關(guān)性分析

孔詠梅，郭醫(yī)杰，王美蓉，劉亞林，張曉林

（邢臺(tái)市第三醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，邢臺(tái) 054000）

腦梗死又被稱為缺血性腦卒中，是臨床較為常見的腦卒中類型，其發(fā)生主要是由于患者供應(yīng)腦部血液的動(dòng)脈出現(xiàn)粥樣硬化和血栓形成，造成管腔狹窄、閉塞，繼而引發(fā)局灶性急性腦供血不足，腦組織壞死［1］。該病病情進(jìn)展迅速，若未及時(shí)采取有效治療，會(huì)對(duì)患者生命安全嚴(yán)重威脅［2］。臨床顯示［3-4］，由于腦梗死患者存在局灶性的血運(yùn)減少，周圍的神經(jīng)元細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞均會(huì)受到損傷，因而易導(dǎo)致患者的神經(jīng)功能的受到一定程度的損害，遺留認(rèn)知障礙等后遺癥。據(jù)統(tǒng)計(jì)［5-6］，急性腦梗死后繼發(fā)認(rèn)知障礙的比例在26.05%～63.04%。近年來有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，載脂蛋白E（Apolipoprotein E，ApoE）對(duì)于調(diào)節(jié)機(jī)體的血脂代謝、膽同醇平衡方面起到了重要作用，在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展及神經(jīng)功能損傷的修復(fù)中也扮演了關(guān)鍵角色［7］。既往研究顯示［8］，腦梗死及血管性認(rèn)知障礙的發(fā)生與ApoE基因多態(tài)性關(guān)系密切。然而，目前有關(guān)腦梗死認(rèn)知障礙及復(fù)發(fā)與ApoE基因多態(tài)性關(guān)系的研究尚不多見。因此，本研究探討了ApoE基因多態(tài)性與腦梗死認(rèn)知障礙及復(fù)發(fā)的相關(guān)性，旨在明確其在腦梗死認(rèn)知障礙及復(fù)發(fā)中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2018年1月～2019年12月本院收治的78例腦梗死后認(rèn)知功能障礙患者為觀察組。其中男42例，女36例；年齡50～82歲，平均（65.48±7.92）歲；既往史：高血壓史50例，冠心病史28例，糖尿病史23例；文化程度：初中及以下48例，高中及以上30例。另選取同期本院收治的腦梗死后認(rèn)知功能正常患者80例作為對(duì)照組，其中男45例，女35例；年齡49～79歲，平均（63.51±7.53）歲；既往史：高血壓史46例，冠心病史31例，糖尿病史20例；文化程度：初中及以下48例，高中及以上32例。兩組各方面比較未見明顯差異（P>0.05），均衡可比。醫(yī)院倫理委員會(huì)通過此項(xiàng)目，患者了解并同意參與。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)腦梗死診斷參考符合2017年《中國腦血管病防治指南》［9］中相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，均經(jīng)顱腦CT、MRI檢查證實(shí)。

認(rèn)知功能障礙診斷根據(jù)蒙特利爾認(rèn)知評(píng)估量表（Montreal Cognitive Assessment，MoCA）評(píng)分［10］、簡(jiǎn)易智力狀態(tài)檢查量表（Mini-mental State Examination，MMSE）評(píng)分［11］及臨床失智評(píng)分（Clinical Dementia Rating，CDR）評(píng)分進(jìn)行判定：①M(fèi)oCA評(píng)分＜26分；②MMSE評(píng)分＜26分（文盲組24分）且CDR評(píng)分=0或0.5分；③19分（文盲組17分）≤MMSE評(píng)分≤26分（文盲組24分），且CDR評(píng)分=1分。滿足①且滿足②、③兩者之一即診斷為認(rèn)知功能障礙［12］。

1.3 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)納入標(biāo)準(zhǔn)：①兩組均符合上述腦梗死診斷標(biāo)準(zhǔn)，觀察組患者同時(shí)符合認(rèn)知功能障礙診斷標(biāo)準(zhǔn)；②首次發(fā)病，腦梗死后2周～3個(gè)月，病情穩(wěn)定；③性別不限，年齡不低于16周歲；④視覺、聽覺正常，意識(shí)清醒，能配合完成檢查。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①觀察組排除因腦梗死原因以外引發(fā)的認(rèn)知功能障礙；②伴嚴(yán)重心、肝、腎等臟器疾??；③伴嚴(yán)重并發(fā)癥；④伴先天免疫缺陷性疾??；⑤伴惡性腫瘤；⑥伴精神疾?。虎叽嬖谑дZ、意識(shí)障礙等無法配合研究者；⑧難以完成隨訪者。

1.4 方法及分組

1.4.1 資料收集收集所有研究對(duì)象性別、年齡、既往史（包括高血壓、冠心病、糖尿?。?、文化程度等資料。

1.4.2 基因多態(tài)性檢測(cè)采用限制性片段長度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)（PCR-RELP）檢測(cè)ApoE基因分型。采集所有研究對(duì)象的晨起空腹靜脈血2mL，EDTA-2Na抗凝，提取全血基因組DNA，使用美國ABI 7500型PCR擴(kuò)增儀進(jìn)行PCR擴(kuò)增，引物序列：①上游：5’-TCCAAGGAGCTGCA GGCGGCGCA-3’；②下游：5’-ACAGAATYCGCCCCG GCCTGGTACACTGCCA-3’。反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性5 min，，95℃30 min→65℃30 min→72℃30 min循環(huán)45次，72℃延伸10 min，2%凝膠瓊脂糖電泳。ApoE基因酶切10%聚丙烯酰胺凝膠電泳、酶切、銀染，在紫外線凝膠成像儀下觀察電泳結(jié)果。

1.4.3 分組方法對(duì)觀察組患者隨訪1年，隨訪方式為門診復(fù)查、電話。根據(jù)1年內(nèi)腦梗死復(fù)發(fā)情況，將觀察組患者分為復(fù)發(fā)組、未復(fù)發(fā)組。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 22.0軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料均以mean±SD表示，對(duì)先對(duì)計(jì)量資料首行正態(tài)性檢驗(yàn)，滿足正態(tài)性且組間方差齊，采用兩樣本獨(dú)立t檢驗(yàn)、單因素方差分析比較組間差異，兩兩比較采用SNK檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料均以（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組ApoE基因型及等位基因分布對(duì)比2組患者中，最常見的ApoE基因型均為ε3/3（觀察組58.97%、對(duì)照組63.75%）；經(jīng)比較，2組的ε2/3、ε2/4、ε3/3、ε3/4基因型頻率無明顯差異（P>0.05），但觀察組的ε4/4基因型頻率明顯高于對(duì)照組（P<0.05）。2組患者中，最常見的等位基因均為ε3（觀察組70.51%、對(duì)照組78.75%），其次是ε4、ε2；經(jīng)比較，2組的ε2、ε3等位基因頻數(shù)無明顯差異（P>0.05），但觀察組的ε4等位基因頻數(shù)明顯高于對(duì)照組（P<0.05），見表1。

表1 兩組ApoE基因型及等位基因分布對(duì)比［n（%）］

2.2 不同ApoE基因亞型患者的MOCA、MMSE評(píng)分對(duì)比腦梗死患者中，攜帶ε4等位基因患者的MoCA、MMSE評(píng)分均明顯低于攜帶ε2、ε3患者（P<0.05），見表2。

表2 不同ApoE基因亞型患者的MOCA、MMSE評(píng)分對(duì)比

2.3 不同復(fù)發(fā)情況患者的臨床資料對(duì)比觀察組78例患者均獲隨訪，隨訪率100%。據(jù)統(tǒng)計(jì)，有26例患者在為期1年的隨訪中出現(xiàn)腦梗死復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)率33.33%。經(jīng)比較，復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組患者在性別、年齡、合并疾病及文化程度方面均無明顯差異（P>0.05），見表3。

表3 觀察組不同復(fù)發(fā)情況患者的臨床資料對(duì)比［n（%）］

2.4 不同復(fù)發(fā)情況患者ApoE基因型及等位基因分布對(duì)比對(duì)比不同復(fù)發(fā)情況患者ApoE基因型及等位基因分布情況發(fā)現(xiàn)，復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組的ε2/3、ε2/4、ε3/3、ε3/4、ε4/4各基因型頻率無明顯差異（P>0.05），ε2、ε3等位基因頻數(shù)無明顯差異（P>0.05），但復(fù)發(fā)組的ε4等位基因頻數(shù)明顯高于未復(fù)發(fā)組（P<0.05），見表4。

表4 不同復(fù)發(fā)情況患者ApoE基因型及等位基因分布對(duì)比［n（%）］

3 討論

ApoE屬于載脂蛋白家族成員，主要在肝臟合成、代謝，其作為一種多態(tài)性蛋白，能夠參與多種脂蛋白的代謝和運(yùn)輸，其不僅與血漿脂蛋白水平高度相關(guān)，也與機(jī)體的血脂水平關(guān)系密切［13］。ApoE編碼基因位于第19號(hào)染色體長臂13區(qū)2帶，其多態(tài)性的產(chǎn)生是由于第4號(hào)外顯子編碼112位、158位氨基酸密碼子表達(dá)ε2、ε3、ε4共3種等位基因，根據(jù)不同的組合方式可形成ε2/2、ε2/3、ε2/4、ε3/3、ε3/4、ε4/4共6種基因型［14］。

近些年研究顯示，ApoE基因多態(tài)性具有多重生物學(xué)意義，其與認(rèn)知功能障礙有一定聯(lián)系。羅伏鋼等［15］分析了腦梗死后血管性癡呆（vascular dementia，VD）患者的ApoE基因多態(tài)性分布情況，發(fā)現(xiàn)腦梗死后VD患者的ε4等位基因頻率明顯高于健康人群，ApoE ε4基因可能是腦梗死后VD發(fā)生的易感基因，且其可縮短患者出現(xiàn)VD的時(shí)間。朱燁等［16］研究指出，不同年齡段的老年阿爾茨海默?。ˋlzheimer disease，AD）患者ApoE基因表達(dá)不一，且ApoE ε4基因與認(rèn)知功能障礙關(guān)系密切。本研究結(jié)果顯示，觀察組的ε4/4基因型頻率明顯高于對(duì)照組，觀察組的ε4等位基因頻數(shù)明顯高于對(duì)照組，提示ε4/4基因型在腦梗死認(rèn)知障礙患者中可能是潛在的危險(xiǎn)性因素，ApoE ε4基因可能與腦梗死認(rèn)知障礙發(fā)生有關(guān)，與國內(nèi)外學(xué)者研究結(jié)論類似。同時(shí)，本研究對(duì)比不同ApoE基因亞型患者的MOCA、MMSE評(píng)分發(fā)現(xiàn)，與ApoE ε2、ε/3基因等位基因攜帶者相比，ApoE ε4基因攜帶者的上述認(rèn)知功能評(píng)分顯著下降，進(jìn)一步證實(shí)了ApoE ε4基因可能是導(dǎo)致腦梗死認(rèn)知障礙發(fā)生的危險(xiǎn)因素。目前，有關(guān)ApoE ε4基因在腦梗死認(rèn)知障礙中的作用機(jī)制尚未明確，推測(cè)其可能與以下因素有關(guān)：①ApoE ε4活性增加，可引發(fā)大量脂質(zhì)內(nèi)吞，提升機(jī)體的膽固醇水平，造成血脂代謝紊亂，加速動(dòng)脈粥樣硬化的形成；②在神經(jīng)元損傷后的修復(fù)過程中，髓鞘磷脂代謝起到了重要作用，ApoE正是髓鞘磷脂代謝關(guān)鍵因子，然而這一作用是E3單體特異性的，E4無此功能，因此攜帶ε4基因可能會(huì)阻礙神經(jīng)細(xì)胞損傷后神經(jīng)功能的恢復(fù)；③與ε3相比，ε4的抗氧化能力更弱，其對(duì)缺血性神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用也更差，因此ApoE ε4基因攜帶者出現(xiàn)神經(jīng)細(xì)胞缺血性損傷的程度也會(huì)較重。

ApoE基因多態(tài)性與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生具有密切關(guān)聯(lián)，在冠心病、腦梗死等心腦血管疾病的發(fā)生、發(fā)展中有一定的作用［17-18］。吉維忠等［19］的研究顯示，青海世居藏族人群腦血管病患者中ApoE基因型以ε2/3最常見，ε3等位基因可能是藏族人群腦梗死的易感因素。張晉霞等［20］則認(rèn)為ε4等位基因是漢族人群缺血性腦卒中患者危險(xiǎn)及遺傳易感因素。目前，關(guān)于何種ApoE基因多態(tài)性對(duì)腦梗死復(fù)發(fā)的影響最大尚未見報(bào)道，本研究對(duì)比不同復(fù)發(fā)情況患者ApoE基因型及等位基因分布情況發(fā)現(xiàn)，復(fù)發(fā)組的ε4等位基因頻數(shù)明顯高于未復(fù)發(fā)組，提示ε4等位基因則是腦梗死復(fù)發(fā)的潛在危險(xiǎn)因素。推測(cè)其原因可能是ε4基因則具有升高膽固醇的作用，患者體內(nèi)的血脂紊亂狀態(tài)更易造成疾病復(fù)發(fā)。

ApoE基因多態(tài)性與腦梗死認(rèn)知障礙及復(fù)發(fā)存在相關(guān)性，攜帶ε4基因可能是腦梗死認(rèn)知障礙及復(fù)發(fā)的易感因素。