筋骨痛消丸HPLC指紋圖譜的建立及其中7個(gè)成分的含量測(cè)定

孫實(shí) 王一方 趙新杰 王昭 張麗 王丹丹 武愛(ài)玲 吳曉龍

中圖分類號(hào) R284 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2021）10-1235-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2021.10.13

摘 要 目的：建立筋骨痛消丸的指紋圖譜，并測(cè)定其中7個(gè)成分的含量。方法：采用高效液相色譜法（HPLC），以Cosmosil 5C18-MS-Ⅱ?yàn)樯V柱，以乙腈-0.02%磷酸水溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm，柱溫為25 ℃，進(jìn)樣量為10 μL。采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012版）》建立10批筋骨痛消丸的HPLC指紋圖譜并進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)，通過(guò)與混合對(duì)照品比對(duì)指認(rèn)共有峰;采用同一HPLC法測(cè)定所指認(rèn)共有峰對(duì)應(yīng)成分的含量。結(jié)果：10批筋骨痛消丸樣品中共確定共有峰20個(gè)，與對(duì)照指紋圖譜的相似度均不低于0.980。通過(guò)與混合對(duì)照品比對(duì)，指認(rèn)化學(xué)成分7個(gè)，分別為馬錢苷酸、龍膽苦苷、芍藥苷、丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA。上述7個(gè)成分檢測(cè)質(zhì)量濃度的線性范圍分別為4.509～45.090、15.090～150.900、14.985～149.850、14.982～149.820、2.967～29.670、1.944～19.440、3.094～30.940 μg/mL（r均大于0.999），檢測(cè)限分別為0.060 1、0.161 0、0.399 6、0.159 8、0.031 6、0.051 8、0.082 5 μg/mL，定量限分別為0.200 4、0.503 0、0.999 0、0.399 5、0.079 1、0.259 2、0.412 6 μg/mL;精密度、穩(wěn)定性（24 h）、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD均小于3.0%（n=6）;平均加樣回收率為98.81%～100.28%，RSD為0.20%～1.21%（n=6）。10批樣品中上述成分的含量分別為0.441 0～0.969 4、3.283 4～4.733 4、1.947 7～3.674 9、1.336 6～2.270 9、0.293 2～0.372 1、0.190 2～0.293 9、0.352 8～0.518 8 mg/g。結(jié)論：本研究成功建立了筋骨痛消丸的HPLC指紋圖譜和含量測(cè)定方法，可用于其質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞 筋骨痛消丸;指紋圖譜;含量測(cè)定;高效液相色譜法

Establishment of HPLC Fingerprints and Content Determination of 7 Components of Jingu Tongxiao Pill

SUN Shi1，2，WANG Yifang1，ZHAO Xinjie1，2，WANG Zhao1，ZHANG Li1，WANG Dandan1，WU Ailing1，2，WU Xiaolong1[1. Dept. of Pharmacy， Luoyang Orthopedic Hospital of Henan Province （Orthopedic Hospital of Henan Province）， Henan Luoyang 471003， China; 2. Research and Development Department， Henan Luozheng Pharmaceutical Co.， Ltd.， Henan Luoyang 471013， China]

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To establish the fingerprint of Jingu tongxiao pill， and to determine the contents of 7 components. METHODS： HPLC method was adopted. The determination was performed on Cosmosil 5C18-MS-Ⅱ column with acetonitrile-0.02% phosphoric acid solution as mobile phase （gradient elution） at the flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was 230 nm and the column temperature was set at 25 ℃. The sample size was 10 μL. HPLC fingerprint of 10 batches of Jingu tongxiao pill was established by using Similarity Evaluation System of TCM Chromatographic Fingerprint （2012 edition）， and common peak was identified by comparing with the mixed reference substance. The contents of corresponding components of the identified common peak were determined by the same HPLC method. RESULTS： There were 20 common peaks in HPLC fingerprint of 10 batches of samples， and the similarity with the control fingerprint was not less than 0.980. By comparing with the mixed reference substance， 7 components were identified， which were loganic acid，gentiopicroside，paeoniflorin，salvianolic acid B，cryptotanshinone，tanshinone Ⅰ and tanshinone ⅡA. The linear range of the above 7 components were 4.509-45.090， 15.090-150.900， 14.985-149.850， 14.982-149.820， 2.967-29.670， 1.944-19.440， 3.094-30.940 μg/mL（all r>0.999），respectively. The limits of detection were 0.060 1， 0.161 0， 0.399 6， 0.159 8， 0.031 6， 0.051 8， 0.082 5 μg/mL， respectively. The limits of quantitation were 0.200 4， 0.503 0， 0.999 0， 0.399 5， 0.079 1， 0.259 2， 0.412 6 μg/mL， respectively. RSDs of precision， stability （24 h） and reproducibility tests were all lower than 3.0% （n=6）. Average recoveries were 98.81%-100.28%， RSDs were 0.20%-1.21% （n=6）. In 10 batches of samples， the contents of the above 7 components were 0.441 0-0.969 4，3.283 4-4.733 4，1.947 7-3.674 9，1.336 6-2.270 9，0.293 2-0.372 1，0.190 2-0.293 9 and 0.352 8-0.518 8 mg/g，respectively. CONCLUSIONS： In this study， HPLC fingerprint and content determination method of Jingu tongxiao pill are successfully established and can be used for quality control.

KEYWORDS? ?Jingu tongxiao pill;Fingerprint;Content determination; HPLC

筋骨痛消丸是以國(guó)家級(jí)非物質(zhì)文化遺產(chǎn)“平樂(lè)郭氏正骨法”經(jīng)驗(yàn)方為基礎(chǔ)開(kāi)發(fā)的中藥新藥，為國(guó)家中藥保護(hù)品種，由11味中藥組成。方中丹參、雞血藤活血化瘀、舒筋止痛，為君藥;香附、烏藥行氣止痛、溫經(jīng)散寒，為臣藥;桂枝、威靈仙、秦艽溫經(jīng)通絡(luò)、祛風(fēng)除濕、消腫止痛，白芍、地黃養(yǎng)血斂陰、補(bǔ)虛止痛，川牛膝活血化瘀、通利關(guān)節(jié)，三味藥材共為佐藥;甘草緩急止痛、調(diào)和諸藥，為使藥。全方共奏活血行氣、溫經(jīng)通絡(luò)、消腫止痛之功，臨床上主要用于血瘀寒凝以及骨質(zhì)增生引起的膝關(guān)節(jié)疼痛、腫脹、活動(dòng)受限等癥，療效顯著[1-3]。此外，有臨床研究報(bào)道，筋骨痛消丸單用或與其他藥物聯(lián)用對(duì)肩關(guān)節(jié)周圍炎、髕骨軟化癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腰椎間盤突出癥、膝關(guān)節(jié)骨壞死等疾病均有明顯的改善作用[4-8]。

目前，國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)中筋骨痛消丸僅以丹參酮ⅡA作為“含量測(cè)定”項(xiàng)下的考察指標(biāo)[9]。這種以方中藥材所含單一有效成分作為定量指標(biāo)的方法難以全面控制其內(nèi)在質(zhì)量，更無(wú)法體現(xiàn)“多成分、多靶點(diǎn)”理論下的中藥整體質(zhì)量，故有必要探索一種更加全面、相對(duì)更能反映中藥整體內(nèi)涵的質(zhì)量控制方法。中藥色譜指紋圖譜能夠提供豐富的鑒別信息，其兼顧“整體性”和“模糊性”的特點(diǎn)，非常適合中藥復(fù)雜體系的質(zhì)量控制，是一種國(guó)際公認(rèn)的控制中藥或天然藥材質(zhì)量的方法[10-12]?；诖?，本研究建立了筋骨痛消丸的高效液相色譜（HPLC）指紋圖譜，通過(guò)與對(duì)照品比對(duì)指認(rèn)共有峰，測(cè)定所指認(rèn)共有峰對(duì)應(yīng)成分的含量，以期為建立科學(xué)、合理的筋骨痛消丸質(zhì)量控制方法提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器包括Nexera XR型HPLC儀及配套的LC-20ADXR型二元高壓泵、FCV-11AL型快速流路切換器、DGU-20A5R型脫氣單元、SIL-20AXR型自動(dòng)進(jìn)樣器、CTO-20AC型柱溫箱、SPD-M20A型二極管陣列檢測(cè)器、Labsolution DB（Ver. 6.70）色譜工作站（日本Shimadzu公司），KH-600DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司），MS204S型萬(wàn)分之一電子分析天平、AB135-S十萬(wàn)分之一電子分析天平（瑞士Mettler Toledo公司）等。

1.2 主要藥品與試劑

筋骨痛消丸（批號(hào)201127、201128、201129、201130、201131、201132、201133、201135、201201、201203，編號(hào)S1～S10，規(guī)格每袋裝6 g）購(gòu)自河南省洛正藥業(yè)有限責(zé)任公司;馬錢苷酸對(duì)照品（批號(hào)111865-201704，純度≥98%）、龍膽苦苷對(duì)照品（批號(hào)110770-201918，純度≥98%）、丹酚酸B對(duì)照品（批號(hào)111562-201716，純度≥98%）、丹參酮ⅡA對(duì)照品（批號(hào)110766-202022，純度≥98%）均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院;芍藥苷對(duì)照品（批號(hào)MUST-18032901，純度≥98%）、隱丹參酮對(duì)照品（批號(hào)MUST-18041115，純度≥98%）、丹參酮Ⅰ對(duì)照品（批號(hào)MUST-18032207，純度≥98%）均購(gòu)自成都曼斯特生物科技有限公司;乙腈（色譜純）、甲醇（色譜純）均購(gòu)自美國(guó)TEDIA公司;磷酸（色譜純）、甲酸（色譜純）均購(gòu)自天津科密歐化學(xué)試劑有限公司;其余試劑均為分析純或?qū)嶒?yàn)室常用規(guī)格，水為純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 指紋圖譜的建立

2.1.1 色譜條件 以Cosmosil 5C18-MS-Ⅱ（250 mm× 4.6 mm，5 ?m）為色譜柱，以乙腈（A）-0.02%磷酸水溶液（B）為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫（0～15 min，5%A→12%A;15～35 min，12%A→15%A;35～75 min，15%A→32%A;75～90 min，32%A→60%A;90～130 min，60%A→70%A）;檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm;流速為1.0 mL/min;柱溫為25 ℃;進(jìn)樣量為10 μL。

2.1.2 混合對(duì)照品溶液的制備 精密稱取馬錢苷酸、龍膽苦苷、芍藥苷、丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA對(duì)照品各適量，分別置于10 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容，制成質(zhì)量濃度分別為0.300 6、0.503 0、0.499 5、0.499 4、0.197 8、0.216 0、0.206 3 mg/mL的單一對(duì)照品貯備液。吸取上述單一對(duì)照品貯備液適量，用甲醇配制成馬錢苷酸、龍膽苦苷、芍藥苷、丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA質(zhì)量濃度分別為45.090、150.900、149.850、149.820、29.670、19.440、30.940 μg/mL的混合對(duì)照品溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備 取筋骨痛消丸樣品，研磨至細(xì)粉，過(guò)六號(hào)篩（下同）。精密稱取細(xì)粉0.4 g，置于150 mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇30 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲（頻率45 kHz，功率600 W）提取45 min，放至室溫;再次稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.1.4 精密度試驗(yàn) 取“2.1.3”項(xiàng)下供試品溶液（編號(hào)S1）適量，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次。以丹酚酸B為參照，計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果，20個(gè)共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD為0.02%～0.42%（n=6），相對(duì)峰面積的RSD為0.19%～2.91%（n=6），表明本方法精密度良好。

2.1.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“2.1.3”項(xiàng)下供試品溶液（編號(hào)S1）適量，分別于室溫下放置0、3、6、9、12、24 h時(shí)按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定。以丹酚酸B為參照，計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果，20個(gè)共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD為0.04%～0.16%（n=6），相對(duì)峰面積的RSD為0.25%～2.93%（n=6），表明供試品溶液于室溫下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取筋骨痛消丸樣品（編號(hào)S1）約0.4 g，共6份，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。以丹酚酸B為參照，計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果，20個(gè)共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD為0.09%～0.73%（n=6），相對(duì)峰面積的RSD為0.66%～2.85%（n=6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.1.7 HPLC指紋圖譜的建立 取10批筋骨痛消丸樣品，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。將色譜圖導(dǎo)入《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012版）》，選取S1樣品色譜圖作為參照，將時(shí)間窗設(shè)置為0.2 min，經(jīng)多點(diǎn)校正（3點(diǎn)）后自動(dòng)匹配，生成HPLC疊加指紋圖譜，采用中位數(shù)法生成HPLC對(duì)照指紋圖譜（R）詳見(jiàn)圖1、圖2。

2.1.8 相似度評(píng)價(jià) 采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012版）》對(duì)10批筋骨痛消丸樣品進(jìn)行相似度分析。結(jié)果，10批樣品圖譜與對(duì)照指紋圖譜間的相似度均不低于0.980，提示不同批次樣品的相似度較高，生產(chǎn)工藝相對(duì)穩(wěn)定，詳見(jiàn)表1。

2.1.9 共有峰指認(rèn) 由圖2可見(jiàn)，10批筋骨痛消丸樣品共有20個(gè)共有峰，通過(guò)與混合對(duì)照品溶液（圖3A，同一色譜條件下測(cè)得）比對(duì)，指認(rèn)共有峰7個(gè)，分別為馬錢苷酸（峰5）、龍膽苦苷（峰6）、芍藥苷（峰8）、丹酚酸B（峰14）、隱丹參酮（峰17）、丹參酮Ⅰ（峰18）和丹參酮ⅡA（峰19）。

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 同“2.1.1”項(xiàng)。

2.2.2 混合對(duì)照品溶液的制備 同“2.1.2”項(xiàng)。

2.2.3 供試品溶液的制備 同“2.1.3”項(xiàng)。

2.2.4 陰性對(duì)照溶液的制備 按筋骨痛消丸處方組成分別稱取方中藥材，按照制劑工藝分別制得缺秦艽、白芍、丹參的陰性對(duì)照樣品，再按“2.1.3”項(xiàng)下方法分別制成缺味藥材陰性對(duì)照溶液。

2.2.5 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 取“2.2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液、“2.2.3”項(xiàng)下供試品溶液（編號(hào)S1）、“2.2.4”項(xiàng)下陰性對(duì)照溶液各適量，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果，各待測(cè)峰與相鄰色譜峰間的分離度均大于1.5，理論板數(shù)均不低于10 000，陰性對(duì)照溶液對(duì)測(cè)定均無(wú)干擾，詳見(jiàn)圖3。

2.2.6 線性關(guān)系考察 精密量取“2.2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液1、2、4、6、8、10 mL，分別用甲醇定容至10 mL量瓶中，得不同質(zhì)量濃度的系列工作溶液。取上述系列工作溶液各適量，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以各待測(cè)成分質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（x，μg/mL）、峰面積為縱坐標(biāo)（y）進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.2.7 檢測(cè)限與定量限考察 將“2.2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液用甲醇逐級(jí)稀釋，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，分別以信噪比3 ∶ 1和10 ∶ 1計(jì)算檢測(cè)限和定量限，結(jié)果見(jiàn)表3。

2.2.8 精密度試驗(yàn) 精密吸取“2.2.6”項(xiàng)下稀釋后的混合對(duì)照品溶液（馬錢苷酸、龍膽苦苷、芍藥苷、丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA的質(zhì)量濃度分別為27.054、90.540、89.910、89.892、17.802、11.664、18.564 μg/mL）各10 μL，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，馬錢苷酸、龍膽苦苷、芍藥苷、丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA峰面積的RSD分別為1.99%、2.15%、1.98%、1.06%、1.17%、1.03%、1.20%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“2.2.3”項(xiàng)下同一供試品溶液（編號(hào)S1），分別于室溫下放置0、3、6、9、12、24 h時(shí)按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，馬錢苷酸、龍膽苦苷、芍藥苷、丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA峰面積的RSD分別為0.59%、0.28%、0.65%、1.24%、1.35%、0.95%、1.38%（n=6），表明供試品溶液在室溫下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.10 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一批筋骨痛消丸樣品（編號(hào)S1）6份，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量。結(jié)果，馬錢苷酸、龍膽苦苷、芍藥苷、丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA含量的RSD分別為2.71%、1.42%、1.65%、1.78%、0.82%、1.48%、1.25%（n=6），表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.11 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的筋骨痛消丸樣品（編號(hào)S1）0.2 g，共6份，置于具塞錐形瓶中，分別加入與待測(cè)成分近似等量的混合對(duì)照品溶液，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率。結(jié)果，7個(gè)待測(cè)成分的平均加樣回收率為98.81%～100.28%，RSD為0.20%～1.21%（n=6），詳見(jiàn)表4。

2.2.12 樣品含量測(cè)定 取10批筋骨痛消丸樣品粉末各0.4 g，精密稱定，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算馬錢苷酸、龍膽苦苷、芍藥苷、丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA的含量。每樣品重復(fù)測(cè)定3次，取平均值，結(jié)果見(jiàn)表5。

3 討論

3.1 色譜條件的選擇

3.1.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 本課題組前期采用二極管陣列檢測(cè)器在190～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)對(duì)待測(cè)成分進(jìn)行掃描。結(jié)果顯示，在230 nm波長(zhǎng)處色譜圖中的峰容量較多、峰形較好，故本研究選擇230 nm作為最終檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.1.2 流動(dòng)相的選擇 由于筋骨痛消丸中化學(xué)成分眾多、理化性質(zhì)各異，故本研究采用梯度洗脫的模式，先后考察了甲醇-水、乙腈-水以及甲醇-0.1%甲酸水溶液、乙腈-0.1%甲酸水溶液、乙腈-磷酸水溶液（0.02%～0.1%）的分離效果。結(jié)果表明，當(dāng)流動(dòng)相為乙腈-磷酸水溶液時(shí)，所得色譜圖基線平穩(wěn)，各色譜峰分離效果相對(duì)更好。同時(shí)，本課題組對(duì)流動(dòng)相中磷酸的濃度進(jìn)行了考察，發(fā)現(xiàn)不同磷酸濃度（0.02%～0.1%）對(duì)分離效果幾乎沒(méi)有影響，故最終選擇乙腈-0.02%磷酸水溶液作為流動(dòng)相。

3.1.3 柱溫的選擇 本課題組前期分別對(duì)25、30、35、40 ℃等不同柱溫進(jìn)行了考察。結(jié)果表明，當(dāng)柱溫為25 ℃時(shí)，各待測(cè)成分的色譜峰峰形及分離度最好，故本研究柱溫選擇為25 ℃。

3.2 參照峰的選擇

由于丹酚酸B的峰面積較大、保留時(shí)間適中，同時(shí)與其他色譜峰的分離度較好，故選擇丹酚酸B作為指紋圖譜的參照峰。

3.3 指標(biāo)性成分的確認(rèn)

通過(guò)與對(duì)照品比對(duì)，本研究共指認(rèn)了馬錢苷酸、龍膽苦苷、芍藥苷、丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA共7個(gè)成分，分別來(lái)自于丹參、白芍和秦艽。這3種藥材是筋骨痛消丸處方中用量較大的組分。同時(shí)，指認(rèn)的7個(gè)成分也是2020年版《中國(guó)藥典》中上述3種藥材“含量測(cè)定”項(xiàng)規(guī)定的定量檢測(cè)指標(biāo)，可以說(shuō)是各藥材的代表性成分[13]。除此之外，有研究表明，這7個(gè)成分均有良好的抗炎、鎮(zhèn)痛活性，與筋骨痛消丸發(fā)揮其抗骨關(guān)節(jié)炎作用直接相關(guān)[14-16]。因此，選擇這7個(gè)成分作為本研究的定量分析指標(biāo)對(duì)筋骨痛消丸的質(zhì)量控制具有一定的意義。

3.4 指紋圖譜與含量測(cè)定結(jié)果分析

本研究建立的筋骨痛消丸HPLC指紋圖譜共獲取20個(gè)共有峰，通過(guò)與混合對(duì)照品比對(duì)，共指認(rèn)出其中7個(gè)化合物，分別為馬錢苷酸、龍膽苦苷、芍藥苷、丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA。另外，在未指認(rèn)的色譜峰中，通過(guò)與陰性樣品比對(duì)，可以得出峰7、8可能來(lái)源自白芍，峰13、16可能來(lái)源自丹參，具體歸屬有待進(jìn)一步確認(rèn)。與此同時(shí)，10批筋骨痛消丸樣品圖譜與對(duì)照指紋圖譜間的相似度均不低于0.980，說(shuō)明這10批樣品的成分相似。為進(jìn)一步考察筋骨痛消丸的質(zhì)量，本研究建立了這7個(gè)成分的含量測(cè)定方法，并對(duì)10批筋骨痛消丸進(jìn)行了定量測(cè)定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，雖然圖譜間相似度很高，但不同批次間各成分的含量依然存在較大差異，因此可以考慮將多成分含量測(cè)定加入至筋骨痛消丸的質(zhì)量控制中，以更全面地提高該制劑的質(zhì)量。

綜上所述，本研究成功建立了筋骨痛消丸的HPLC指紋圖譜和含量測(cè)定方法，可用于其質(zhì)量控制。

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（收稿日期：2021-02-05 修回日期：2021-04-01）

（編輯：鄒麗娟）