重度抑郁癥患者血漿前列腺素E含量分析

蔣婭玲，陳振健，吳金慶，戴麗霞

（江門市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 廣東 江門 529000）

重度抑郁癥（Major depressive disorder, MDD）是一種嚴(yán)重威脅人民身心健康的精神疾病，以抑郁心境或者興趣或愉悅感減退的發(fā)作持續(xù)至少2周為主要臨床特征，患者常伴有典型的相關(guān)癥狀如：睡眠紊亂，食欲或體重改變，思維活動遲緩或激越，疲勞感或注意力難以集中，無價(jià)值感或過度自責(zé)，反復(fù)的自殺觀念或行為。前列腺素為有五元脂肪環(huán)，帶有兩個(gè)側(cè)鏈的20碳不飽和脂肪酸衍生物，主要由花生四烯酸（ArachadonicAcid, AA；20:4 n-6）在環(huán)氧合酶（cyclooxygenases, COXs）的作用下分解成不穩(wěn)定的中間產(chǎn)物PGH2，再由不同的前列腺素合成酶合成更穩(wěn)定的PGD2、PGE2等二型前列腺素。生成的前列腺素再通過與各自的受體結(jié)合，在體內(nèi)主要發(fā)揮抗炎癥的作用。但在此之外，還存在以亞麻酸（Dihomo Gamma Linolenic Acid, DGLA; 20:3 n-6）為合成底物的一型前列腺素合成途徑[1]。研究顯示，一型前列腺素與二型前列腺素在相當(dāng)程度上存在競爭和相互拮抗的關(guān)系，但是在常態(tài)下，一型前列腺素在生物體內(nèi)的含量極低，主要以二型前列腺素發(fā)揮生物學(xué)功能[2]。

前列腺素代謝的改變與重度抑郁癥密切相關(guān)[3]。一方面，體外研究發(fā)現(xiàn)抑郁癥患者來源的單核細(xì)胞在受到刺激時(shí)PGE2表達(dá)水平明顯升高[4]，并且增高的PGE2之前已見諸于患者的唾液、血清、腦脊液中。另一方面，三環(huán)類抗抑郁劑（Tricycle Antidepressants, TCA）和選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑（Selective SeraloninRe-uptake Inhibitor, SSRIs）被表明能抑制PGE2的合成[5]。此外，臨床上COX-2抑制劑如塞來昔布（Celecoxib）用于抑郁癥患者治療的有效性也進(jìn)一步說明了前列腺素可能參與了重度抑郁癥發(fā)病[6]。目前對于PGE1在抑郁癥中的改變及作用，鮮有文獻(xiàn)報(bào)道。

目前已知前列腺素可以通過直接或間接的方式影響神經(jīng)元的活性從而參加中樞神經(jīng)系統(tǒng)生理或病理過程的調(diào)節(jié)[7]。例如，中腦多巴胺能神經(jīng)元的激活在介導(dǎo)社會挫敗應(yīng)激誘導(dǎo)趨避行為中發(fā)揮了重要作用，研究發(fā)現(xiàn)PGE2-EP1信號通路通過削弱中腦多巴胺能神經(jīng)元的功能介導(dǎo)了小鼠對慢性社會挫敗應(yīng)激的易感性。具體表現(xiàn)在重復(fù)的社會挫敗應(yīng)激使小鼠皮層和海馬的PGE2水平顯著上升，缺乏COX-1或EP1受體的小鼠經(jīng)歷了社會挫敗應(yīng)激后則表現(xiàn)出逃避不能。而同樣有研究顯示，PGE1-EP4信號通路能夠可以通過與AP-1等信號分子結(jié)合從而直接阻斷PGE2-EP1信號通路。但對此在MDD疾病中的研究尚未見報(bào)道。

研究對MDD患者血漿中PGE1和PGE2的水平進(jìn)行了檢測，發(fā)現(xiàn)PGE1在患者中顯著升高，而PGE2并沒有顯著改變。這一結(jié)果提示，在MDD的發(fā)病過程中，PGE1的升高可能部分阻斷了PGE2-EP1信號通路，從而影響了患者對壓力應(yīng)激的保護(hù)性反應(yīng)。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年1月—2019年12月在江門市第三人民醫(yī)院精神科門診募集的重度抑郁癥患者40例作為研究組，另選取同期40例健康體檢者作為對照組，所有研究組患者均接受兩名副主任及以上級別醫(yī)生確診，應(yīng)用《DSM-Ⅳ定式臨床會談量表》（Structured Clinical Interview for DSM-Ⅳ, SCID）作為標(biāo)準(zhǔn)化臨床診斷工具，且《漢密爾頓抑郁量表》（17項(xiàng)）評分≥17分。健康對照人群募集于北京協(xié)和醫(yī)院體檢中心，經(jīng)《簡明抑郁自評量表》評估，無分項(xiàng)達(dá)到抑郁癥診斷級別。所有受試者均抽取5 mL外周靜脈血，經(jīng)離心分層后收集上層血漿，分裝編號后于-80℃保存。所有受試者，重度抑郁癥患者經(jīng)家屬同意簽署知情同意書，健康組簽署知情同意書。對兩組研究對象一般資料對比統(tǒng)計(jì)分析，差異無顯著性，有可比性。見表1。

表1 研究對象一般資料情況

1.2 方法

主要試劑：PGE1和PGE2同位素內(nèi)標(biāo)及抗氧化劑BHT（美國Cayman Chemicals）；液相質(zhì)譜級甲醇、乙腈、水（美國Fisher Scientific）；高效液相級醋酸銨（美國Sigma-Aldrich）。

1.2.1試劑配制 抗氧化劑BHT的配置：準(zhǔn)確稱取20 mg BHT，用水配置為10 mg/mL；穩(wěn)定性同位素內(nèi)標(biāo)PGE1/PGE2母液的濃度為100μg/mL，用30%的乙腈稀釋成濃度為20 ng/mL的工作液。

1.2.2樣品前處理 取250 μL血清，加20 μL同位素內(nèi)標(biāo)工作液，加5μL BHT，混勻。將混合液加到固相萃取柱（美國Waters），用1 mL 5%甲醇清洗后使用1 mL 100%甲醇洗脫。通過真空旋干法去除洗脫液，用40μL 30%乙腈復(fù)溶，上機(jī)檢測。

1.3 觀察指標(biāo)

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS）檢測樣本中的PGE1和PGE2含量：采用LC-20AD超高效液相色譜儀（日本島津）和QTRAP5500串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國AB SCIEX）對所有樣本進(jìn)行檢測。數(shù)據(jù)采用AB SCIEX公司的MultiQuant 3.0軟件進(jìn)行處理，色譜圖經(jīng)過人工手動校正確認(rèn)后再進(jìn)行積分。信噪比為3時(shí)的峰面積值設(shè)為方法的檢測限（limit of detection, LOD）。每個(gè)樣品的濃度用色譜峰的峰高與峰面積的比值來表示。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用GraphPad Prism6.0軟件進(jìn)行處理，使用Student-T檢驗(yàn)比較組間受試者年齡差異以及PGE1和PGE2水平的差異性，使用χ2檢驗(yàn)比較組間性別差異。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

血漿PGE水平在MDD患者中顯著升高

通過LC-MS系統(tǒng)對所有受試者的血漿PGE1和PGE2水平進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示，與健康對照相比，PGE1在MDD患者血漿中顯著上升[（22.21±18.37）ng/L vs.（13.34±11.05）ng/L,P=0.01]，PGE2也有顯著差異[（330.887±42.592）ng/L vs.（224.807±57.853）ng/L,P=0.00]，見圖1。

圖1 PGE1和PGE2的血漿含量水平

3.討論

MDD是一種多基因復(fù)雜疾病，具有高患病率、高復(fù)發(fā)率、高致殘率和高自殺率等特征。神經(jīng)內(nèi)分泌假說和神經(jīng)炎癥假說認(rèn)為人體代謝產(chǎn)生的各種具有生物學(xué)活性的小分子物質(zhì)在MDD發(fā)生中發(fā)揮了至關(guān)重要的作用。前列腺素是廣泛分布于哺乳動物和人類中樞神經(jīng)系統(tǒng)和外周組織及體液中的一類不飽和脂肪酸衍生物，主要包含一型和二型兩大系列。研究表明，前列腺素代謝改變與重度抑郁癥密切相關(guān)，這一過程參與了中樞神經(jīng)系統(tǒng)中一系列重要的生理功能的調(diào)節(jié)，比如促進(jìn)睡眠、改善食欲、削弱疼痛反應(yīng)等，這些生理功能與MDD患者的臨床癥狀緊密相關(guān)。另外，亦有報(bào)道顯示前列腺素的合成酶在MDD患者中存在著顯著下調(diào)[8]。這些信息提示，前列腺素合成途徑的異常與MDD的發(fā)生密切相關(guān)。但是，目前為止的相關(guān)研究都主要集中在二型前列腺素中，對于生物體內(nèi)含量較少的一型前列腺素關(guān)注很少。本研究在一個(gè)40例首發(fā)未用藥MDD患者和40例健康對照的隊(duì)列中證明了PGE在MDD患者血漿中顯著上升。這一結(jié)果提示，在MDD的疾病狀態(tài)中，前列腺素合成的最上游階段就已經(jīng)出現(xiàn)了異常。這種異常狀態(tài)可能直接或間接影響了MDD典型表型的發(fā)生，如失眠、食欲減退和軀體化疼痛等。后續(xù)的研究應(yīng)進(jìn)一步擴(kuò)大樣本隊(duì)列以明確前列腺素合成途徑上各個(gè)節(jié)點(diǎn)分子在MDD中的改變程度，以及在動物模型中通過調(diào)控各型前列腺素的水平明確其對MDD表型的影響。