40%聯(lián)苯肼酯·乙螨唑懸浮劑配方研制

楊景涵，許青青，馬英劍，張明明，楊?？?，李 猛，馮建國

(1 揚(yáng)州大學(xué)園藝與植物保護(hù)學(xué)院，江蘇揚(yáng)州，225009；2 山東省德州市陵城區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，山東德州，253500；3 山西奇星農(nóng)藥有限公司，山西運(yùn)城，044000)

柑桔全爪螨(俗稱柑桔紅蜘蛛)Panonychuscitri是柑桔生產(chǎn)上的重要螨類害蟲，以成螨和若螨群集寄主葉片、嫩梢、果皮上吸汁危害，可引致落葉、落果，對產(chǎn)量影響極大[1-2]。聯(lián)苯肼酯(Bifenazate)和乙螨唑(Etoxazole)是防治柑桔紅蜘蛛的代表性藥劑。聯(lián)苯肼酯對螨類中樞神經(jīng)傳導(dǎo)系統(tǒng)的γ-氨基丁酸(GABA)受體具有獨(dú)特作用，對螨的各個生活階段均有效，尤其具有較強(qiáng)的殺卵活性和對成螨的擊倒活性，并且在推薦使用濃度下對作物安全[3-4]。乙螨唑?qū)儆趪f唑類殺螨劑，可抑制螨蛻皮過程，并具有殺卵活性，能有效控制螨的卵期和若螨期，同時對雌性成螨有不育作用[5]。兩者作用機(jī)理不同，混配后可提高防治效果，有效治理害螨抗藥性。目前，已有聯(lián)苯肼酯和乙螨唑復(fù)配制劑在國內(nèi)登記，加工劑型為懸浮劑，然而，存在有效成分復(fù)配比例混雜，且多數(shù)產(chǎn)品在生產(chǎn)、貯存和使用過程中容易出現(xiàn)分層、粒徑增大和膏化等不穩(wěn)定現(xiàn)象，嚴(yán)重影響產(chǎn)品的推廣和使用[6]。因此，本研究通過共毒系數(shù)法確定聯(lián)苯肼酯和乙螨唑最佳復(fù)配比例，采用單因素法篩選助劑獲得最佳懸浮劑配方，同時考察了該配方的田間藥效。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試蟲源：從江西省南昌市橫崗村試驗基地發(fā)生柑桔紅蜘蛛為害的植株上采集雌成螨至室內(nèi)金桔苗上飼養(yǎng)繁殖2代以上。飼養(yǎng)條件如下：溫度(28±1) ℃，相對濕度(65±5)%，光周期16 h/8 h。選擇個體大小一致、健康活潑、體色鮮紅的雌成螨個體供試。

供試藥劑：97%聯(lián)苯肼酯原藥，英德廣農(nóng)康盛化工有限責(zé)任公司；96%乙螨唑原藥，南通泰禾化工有限公司。

潤濕分散劑：NNO(萘磺酸鹽甲醛縮合物)，青島海洋化工有限公司；木質(zhì)素磺酸鈣、木質(zhì)素磺酸鈉，青島優(yōu)索化學(xué)科技有限公司；農(nóng)乳400#(非離子表面活性劑，二芐基二甲酚聚氧乙烯醚)、農(nóng)乳601#(苯乙烯基苯基聚氧乙烯醚)、AEO(脂肪醇聚氧乙烯醚)、APE-10P(烷基酚聚氧乙烯醚磷酸酯)、NP-10P(壬基酚聚氧乙烯醚磷酸酯)，邢臺市藍(lán)天精細(xì)化工有限公司；D-425(烷基萘磺酸縮聚物鈉鹽)，阿克蘇諾貝爾公司；D1002(萘磺酸鹽)，北京漢莫克化學(xué)技術(shù)有限公司。

增稠劑：黃原膠，鄭州凱利化工有限公司；硅酸鎂鋁，蘇州中材礦物材料公司。

防凍劑：乙二醇、丙二醇、丙三醇、尿素，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 儀器和設(shè)備

FA25型數(shù)顯高剪切分散乳化機(jī)，上海弗魯克流體機(jī)械制造有限公司；GS6324磨砂機(jī)，卓英干燥工程技術(shù)有限公司；BT-9300ST型激光粒度分布儀，丹東百特有限公司；DV2TLV黏度計，美國Brookfield公司；pHS-3C精密pH計，上海圣科儀器設(shè)備有限公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 聯(lián)苯肼酯和乙螨唑配比篩選 將兩種原藥用丙酮溶解配成單劑母液，然后按質(zhì)量比m(聯(lián)苯肼酯)∶m(乙螨唑)為5∶1、5∶2、5∶3、5∶4、5∶5配成混劑母液，根據(jù)預(yù)試驗結(jié)果，分別用0.1%吐溫-80去離子水稀釋制成一定濃度梯度的溶液，置于100 mL燒杯中，備用。

試驗采用孫云沛法[7]，通過毒力指數(shù)計算混劑的聯(lián)合毒力，以共毒系數(shù)(CTC)比較聯(lián)合毒力。當(dāng)CTC≤80表現(xiàn)為拮抗作用，80

1.3.2 懸浮劑加工工藝 采用濕法研磨方法制備40%聯(lián)苯肼酯·乙螨唑懸浮劑。按照配方設(shè)計，準(zhǔn)確稱取原藥、潤濕分散劑、增稠劑、防凍劑和去離子水，使用高剪切分散乳化機(jī)以12 000 rpm速度剪切3 min，然后加入砂磨筒中，在冷卻條件下研磨。砂磨2 h后，將物料用紗布過濾，得到懸浮劑。對樣品進(jìn)行冷、熱貯試驗，同時測定質(zhì)量控制指標(biāo)。

1.3.3 性能測試方法 懸浮率按GB/T 14825—2006方法進(jìn)行，≥90%為合格。pH值按GB/T 1601—1993方法進(jìn)行，6～8范圍內(nèi)為合格。黏度按NY/T 1860.21—2010方法進(jìn)行，通常為400～700 mPa·s。傾倒性按GB/T 31737—2015方法進(jìn)行，≤5%為合格。濕篩試驗按GB/T 16150—1995方法進(jìn)行，洗滌后殘余物≤0.5%為合格。持久起泡性按GB/T 28137—2011方法進(jìn)行，1 min后起泡量≤25 mL為合格。低溫穩(wěn)定性和熱貯穩(wěn)定性分別按照GB/T 19137—2003方法和GB/T 19136—2003方法進(jìn)行，以上各指標(biāo)合格即為合格。平均粒徑測定：將懸浮劑樣品使用去離子水稀釋后，在激光粒度儀上進(jìn)行粒度測試，重復(fù)3次，取其平均值，通常為D50=3～6 μm為合格。

1.3.4 室內(nèi)毒力測定 試材準(zhǔn)備：選取生長一致的柑桔葉片，用打孔器做成葉碟，在培養(yǎng)皿內(nèi)放置一塊濕海綿，其上放濾紙，濾紙上放葉碟，每皿2個葉碟，將室內(nèi)飼養(yǎng)的雌成螨接種到葉碟上，每葉碟20頭。

藥劑處理：將培養(yǎng)皿置于噴霧塔(噴霧壓力為1.47×105Pa)底盤，按對照、低濃度、高濃度的順序依次進(jìn)行噴霧，每皿噴液量1 mL，藥液沉降1 min后取出，轉(zhuǎn)移至溫度為(25±1)℃、光周期16 h/8 h條件下飼養(yǎng)。每處理4次重復(fù)，并設(shè)不含藥劑的處理作為空白對照。

結(jié)果調(diào)查：處理72 h后，在體視顯微鏡下檢查各處理成螨死亡數(shù)(死亡標(biāo)準(zhǔn)：蟲體收縮、發(fā)黑、蟲體翻轉(zhuǎn)后不能活動瀕臨死亡的均判為死亡)，分別記錄總蟲數(shù)和死亡數(shù)。按照相關(guān)公式計算死亡率(P)和校正死亡率(P′)。P=(K/N)×100，式中，P為死亡率(單位為%)，K為死亡蟲數(shù)(單位為頭)，N為表示處理總蟲數(shù)(單位為頭)。P′=[(P1-P0)/(1-P0)] ×100，式中，P′為校正死亡率(單位為%)，P1為處理的死亡率(單位為%)，P0為空白對照死亡率(單位為%)。若空白對照死亡率<5%，無需校正；空白對照死亡率在5%～20%之間，應(yīng)校正；空白對照死亡率>20%，需重做試驗。

1.3.5 田間藥效試驗 2017年春季進(jìn)行試驗，試驗地設(shè)在江西省南昌市橫崗村試驗基地，黏土，肥力中等，雜草較少。試驗作物為宮川溫州蜜柑，株行距3 m×4 m，樹齡10年，生長正常，試驗期內(nèi)不施其他殺蟲劑，各小區(qū)條件一致。以市售聯(lián)苯肼酯懸浮劑和乙螨唑懸浮劑為對照藥劑，試驗設(shè)計6個處理：40%聯(lián)苯肼酯·乙螨唑懸浮劑10 000、12 000、14 000倍液，43%聯(lián)苯肼酯懸浮劑2 000倍液，110 g/L乙螨唑懸浮劑5 000倍液，空白對照。每小區(qū)3株柑桔樹，每個處理重復(fù)4次，共24個小區(qū)，采用隨機(jī)區(qū)組排列。每株柑桔樹分東、南、西、北、中5個方位，每個方位按上、中、下隨機(jī)各取2片葉，共30片葉，用10倍手持放大鏡檢查每葉上的柑桔紅蜘蛛各蟲態(tài)數(shù)量。當(dāng)平均每葉達(dá)2～3頭活螨(各蟲態(tài)均算)時施藥1次，使用背負(fù)式噴霧器將藥液均勻噴施于葉片上(具體施藥時間為2017年3月29日)。施藥前調(diào)查螨口基數(shù)，施藥后1、3、10、15、30 d調(diào)查活螨數(shù)(各蟲態(tài)均算)。按照相關(guān)公式計算螨口減退率和防治效果。螨口減退率(%)=[(施藥前活螨數(shù)-施藥后活螨數(shù))/施藥前活螨數(shù)]×100，防治效果(%)=[(處理區(qū)螨口減退率-對照區(qū)螨口減退率)/(100-對照區(qū)螨口減退率)]×100。

1.4 統(tǒng)計分析

采用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，使用Probit回歸模型計算半數(shù)致死濃度(LC50)。采用鄧肯氏新復(fù)極差法檢驗差異顯著性(p<0.05表示顯著，p<0.01表示極顯著)。

2 結(jié)果與分析

2.1 配方篩選

2.1.1 聯(lián)苯肼酯和乙螨唑配比篩選 不同作用機(jī)制的殺螨劑復(fù)配既可以提高防治效果，又可以減緩害螨抗藥性的產(chǎn)生[8]。為了獲得聯(lián)苯肼酯和乙螨唑復(fù)配的最佳比例，本試驗測定了兩種殺螨劑不同質(zhì)量比復(fù)配后對柑桔紅蜘蛛的毒力作用(見表1)。可以看出，聯(lián)苯肼酯和乙螨唑復(fù)配比例為5∶3、5∶5時共毒系數(shù)分別為149.66、120.62，均大于120，共毒系數(shù)越大，增效越明顯[8]。因此，確定聯(lián)苯肼酯與乙螨唑復(fù)配比例為5∶3。

表1 聯(lián)苯菊酯和乙螨唑不同質(zhì)量比復(fù)配對柑桔紅蜘蛛的聯(lián)合毒力

2.1.2 潤濕分散劑篩選 潤濕分散劑種類的初步篩選：按照質(zhì)量比5∶3準(zhǔn)確稱量聯(lián)苯肼酯原藥和乙螨唑原藥，混勻后用萬能粉碎機(jī)預(yù)粉碎至200目以下，再用氣流粉碎機(jī)粉碎至5 μm左右。準(zhǔn)確稱取5.000 0 g(精確至0.000 1 g)粉碎后的原藥混合物于50 mL小燒杯中，用2 mL注射器向其中緩慢滴加5%潤濕分散劑水溶液，邊加邊攪拌，直至混合后的糊狀物能夠從玻璃棒上自由滴下為止。記錄所加潤濕分散劑水溶液的體積，計算出單位質(zhì)量原藥混合物所用溶液的體積，即為流點。重復(fù)3次取平均值。流點數(shù)值越小，表明潤濕分散劑的表面活性越高[9]。篩選結(jié)果見表2?？梢姡蠖鄶?shù)潤濕分散劑對聯(lián)苯肼酯和乙螨唑原藥混合物具有較高表面活性，其中APE-10P、AEO、D425、木質(zhì)素磺酸鈉和D1002等潤濕分散劑的流點相對較低，可作為進(jìn)一步篩選的對象。

表2 不同潤濕分散劑對聯(lián)苯肼酯和乙螨唑原藥混合物的流點 mL/g

復(fù)配潤濕分散劑配方篩選：單一潤濕分散劑通常不能取得較好的分散穩(wěn)定效果，合適的潤濕分散劑復(fù)配將有利于提高懸浮劑的物理穩(wěn)定性[10-11]。具體做法是將原藥按比例稱量，加入一定量潤濕分散劑復(fù)配組合，0.1%黃原膠，5%乙二醇，以去離子水補(bǔ)足100%。通過熱貯穩(wěn)定性、冷貯穩(wěn)定性確定潤濕分散劑的較優(yōu)復(fù)配組合。具體篩選結(jié)果見表3?？梢姡?jīng)過熱貯后，所有樣品均出現(xiàn)不同程度的析水，以APE-10P和D425為潤濕分散劑組合制備的懸浮劑樣品不流動，其余潤濕分散劑組合制備的懸浮劑樣品均可流動。經(jīng)過冷貯后，各樣品的穩(wěn)定性差異較大，部分潤濕分散劑組合制備的懸浮劑樣品出現(xiàn)了凝固、流動性差等現(xiàn)象，只有以AEO、D1002和木質(zhì)素磺酸鈉為潤濕分散劑組合制備的懸浮劑樣品析水率低且流動性好。因此，以AEO、D1002和木質(zhì)素磺酸鈉復(fù)配作為懸浮劑的較佳潤濕分散劑。

表3 不同復(fù)配潤濕分散劑制備的40%聯(lián)苯肼酯·乙螨唑懸浮劑樣品的穩(wěn)定性

潤濕分散劑用量篩選：固定配方組分，改變潤濕分散劑用量，以析水率、粒徑變化為考察指標(biāo)篩選用量，結(jié)果見表4?？梢姡瑵櫇穹稚┯昧枯^低時，常溫粒徑較大且熱貯后粒徑變化明顯；當(dāng)用量為10%時，常溫粒徑小且熱貯后粒徑變化不明顯，析水率較小。因此，復(fù)配潤濕分散劑的最佳用量為10%，即2% AEO+2% D1002+6%木質(zhì)素磺酸鈉。

表4 不同復(fù)配潤濕分散劑用量制備的40%聯(lián)苯肼酯·乙螨唑懸浮劑樣品的穩(wěn)定性

2.1.3 增稠劑篩選 添加合適的增稠劑可提高分散介質(zhì)黏度，降低原藥粒子的沉降速度，從而提高懸浮劑的穩(wěn)定性[12-13]。試驗結(jié)果看出，黃原膠用量為0.1%時，樣品黏度為613 mPa·s，懸浮劑分散性良好，熱貯后流動性良好，析水率較低；用量為0.2%時，出現(xiàn)分散性不合格和熱貯后流動性變差的現(xiàn)象。當(dāng)以硅酸鎂鋁為增稠劑時，制備的懸浮劑樣品流動性好，但析水率較高，穩(wěn)定性較差(見表5)。因此，確定以0.1%黃原膠做為40%聯(lián)苯肼酯·乙螨唑懸浮劑增稠劑。

表5 不同增稠劑處理對40%聯(lián)苯肼酯·乙螨唑懸浮劑樣品穩(wěn)定性的影響

2.1.4 防凍劑篩選 為了防止產(chǎn)品在貯存、運(yùn)輸過程中出現(xiàn)凍結(jié)現(xiàn)象，影響使用效果，需要在配方中添加防凍劑[14]。試驗考察了相同用量(5%)不同防凍劑(乙二醇、丙二醇、丙三醇和尿素)對40%聯(lián)苯肼酯·乙螨唑懸浮劑防凍效果，結(jié)果見表6。可見，添加4種防凍劑制備的樣品熱貯后流動性均合格，但使用丙二醇和尿素的熱貯后粒徑變化較大，而且使用尿素制備的懸浮劑冷貯后出現(xiàn)膏化現(xiàn)象。乙二醇和丙三醇均適用作本制劑的防凍劑，但綜合考慮生產(chǎn)成本，選用乙二醇作為防凍劑，添加量為5%。

表6 不同防凍劑處理對40%聯(lián)苯肼酯·乙螨唑懸浮劑樣品穩(wěn)定性的影響

2.1.5 優(yōu)化配方制劑及其性能指標(biāo) 通過對潤濕分散劑、增稠劑和防凍劑的篩選，得到40%聯(lián)苯肼酯·乙螨唑懸浮劑的優(yōu)化配方：聯(lián)苯肼酯原藥25%，乙螨唑原藥15%，AEO 2%，D1002 2%，木質(zhì)素磺酸鈉6%，乙二醇5%，黃原膠0.1%，去離子水補(bǔ)足100%。對采用優(yōu)化配方制備的40%聯(lián)苯肼酯·乙螨唑懸浮劑進(jìn)行性能指標(biāo)檢測，結(jié)果均符合要求(見表7)。

表7 采用優(yōu)化配方制備的40%聯(lián)苯肼酯·乙螨唑懸浮劑的性能指標(biāo)

2.2 田間藥效

田間藥效試驗結(jié)果表明，藥后3 d，使用40%聯(lián)苯肼酯·乙螨唑懸浮劑10 000倍液對柑桔紅蜘蛛的平均防治效果達(dá)93.6%，顯著優(yōu)于對照藥劑聯(lián)苯肼酯和乙螨唑單劑；藥后30 d，使用40%聯(lián)苯肼酯·乙螨唑懸浮劑10 000倍液對柑桔紅蜘蛛的平均防治效果達(dá)90.1%，極顯著優(yōu)于對照藥劑聯(lián)苯肼酯、乙螨唑單劑。此外，相對于稀釋倍數(shù)來講，復(fù)配對藥效的影響更明顯(見表8)?？梢?，40%聯(lián)苯肼酯·乙螨唑懸浮劑對柑桔紅蜘蛛種群有較好的控制作用，在供試濃度下能迅速降低田間柑桔紅蜘蛛種群數(shù)量，持效期為20～30 d，可以在柑桔樹上推廣使用。

表8 40%聯(lián)苯肼酯·乙螨唑懸浮劑對桔園中柑桔紅蜘蛛的防治效果 %

3 結(jié)論

通過共毒系數(shù)法確定聯(lián)苯肼酯和乙螨唑最佳配比為5∶3。制備40%聯(lián)苯肼酯·乙螨唑懸浮劑的優(yōu)化配方為：聯(lián)苯肼酯原藥25%、乙螨唑原藥15%、AEO 2%、D1002 2%、木質(zhì)素磺酸鈉6%、乙二醇5%、黃原膠0.1%、去離子水補(bǔ)足100%。該配方的40%聯(lián)苯肼酯·乙螨唑懸浮劑經(jīng)冷、熱貯后，穩(wěn)定性、傾倒性均合格，中位粒徑在4 μm左右，粒子分布集中，各項性能指標(biāo)均合格。40%聯(lián)苯肼酯·乙螨唑懸浮劑有效成分復(fù)配比例合理，田間防治效果優(yōu)良，可以做為防治柑桔紅蜘蛛的高效、環(huán)保藥劑。