蘋果中聯(lián)苯肼酯及其代謝物的儲藏穩(wěn)定性研究

孫瑞卿, 王 霞, 李晉棟, 秦 曙

(山西農(nóng)業(yè)大學山西功能農(nóng)產(chǎn)品檢驗檢測中心,農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風險評估實驗室 (太原),山西 太原 030031)

農(nóng)藥殘留試驗開展過程中,因外地試驗樣品寄送過程耗時長,樣品無法保證在完全冷凍狀態(tài)下運送至實驗室,因實驗室人力、資源限制無法及時處理或檢測試驗樣品[1-2]的情況也偶有發(fā)生,有研究證實農(nóng)藥本身性質(zhì)[3]、環(huán)境溫度[4]、儲存時間、基質(zhì)差異[5]等因素均可能對樣品基質(zhì)中待測農(nóng)藥的穩(wěn)定性產(chǎn)生影響,從而不能真實、客觀、準確的反映待測農(nóng)藥的含量[6-7]。因此,研究農(nóng)藥在儲藏、運輸、檢測過程中的儲藏穩(wěn)定性[8]顯得尤為重要。

聯(lián)苯肼酯是美國科聚亞公司研制的產(chǎn)品,于2008年在我國獲得登記,主要用于防治蘋果和葡萄上的紅蜘蛛和二斑葉螨,也用于防治觀賞植物上的二斑葉螨。聯(lián)苯肼酯是一種新型選擇性葉面噴霧用殺螨劑[9],其作用機理為對螨類的線粒體電子傳遞鏈復合體III抑制劑的獨特作用,其對螨的各個生活階段有效,具有殺卵活性和對成螨的擊倒活性(48～72 h),且持效期長,持效期14 d左右,推薦使用劑量范圍內(nèi)對作物安全,對寄生蜂、捕食螨、草蛉低風險[10]。農(nóng)藥殘留聯(lián)席會議 (JMPR) 2006年的殘留試驗報告顯示,聯(lián)苯肼酯風險評估定義為聯(lián)苯肼酯及聯(lián)苯肼酯-二氮烯之和,以聯(lián)苯肼酯表示[11]。

為了明確聯(lián)苯肼酯及其代謝物在蘋果基質(zhì)中的穩(wěn)定性,本研究通過建立高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(UPLC-MS/MS)分析測定蘋果中聯(lián)苯肼酯及其代謝物,探討了聯(lián)苯肼酯及其代謝物在蘋果殘留試驗樣品中冷凍條件下的儲藏穩(wěn)定性、模擬運輸過程中的穩(wěn)定性及樣品提取液的穩(wěn)定性,以期為蘋果中聯(lián)苯肼酯及其代謝物的殘留檢測分析及準確定量分析提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

試驗樣品均采自試驗基地。標準品聯(lián)苯肼酯和聯(lián)苯肼酯二氮烯生產(chǎn)廠家為Dr. Ehrenstorfer GmbH,甲酸(LC-MS,>99.0%)、乙酸(HPLC,>99.7%)和乙腈(LC-MS,>99.9%)均購自賽默飛世爾有限公司,乙腈(HPLC,<99.5%)購自天地有限公司,甲醇(LC-MS,>99.9%)購自默克股份有限公司,凈化管購自島津技邇有限公司,乙酸銨(色譜純,>99.0%)和抗壞血酸(A.R.,≥99.7%)購自天津光復有限公司,氯化鈉(A.R.,≥99.5%)購自國藥集團化學試劑有限公司。

1.2 儀器設備

UPLC-MS/MS(美國沃特世有限公司),超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司),電子天平(美國奧豪斯上海有限公司),離心機(德國Eppendorf有限公司),刀式研磨儀(德國Retsch有限公司),渦旋混合儀(萊普特儀器有限公司)。

1.3 試驗方法

1.3.1 樣品制備

稱取13份10 g蘋果空白樣品于離心管中,取4份添加聯(lián)苯肼酯標準溶液,另取4份添加聯(lián)苯肼酯-二氮烯標準溶液,添加濃度均為0.1 mg/kg,混勻后作為模擬運輸過程穩(wěn)定性試驗和樣品提取液穩(wěn)定性試驗樣品,其余樣品作空白樣品,于≤-18 ℃冰箱中冷凍保存。

1.3.2 取樣分析

模擬運輸過程穩(wěn)定性試驗：在檢測的前一天,各取2份聯(lián)苯肼酯、2份聯(lián)苯肼酯-二氮烯的樣品,放置于冷藏冰箱(1～5 ℃)儲藏24 h后,與冷凍的各2份樣品一起進行提取檢測。冷藏樣品作為模擬運輸過程中的樣品,通過對比冷藏樣品相對于冷凍樣品的降解率模擬分析樣品在運輸過程中的穩(wěn)定性。

樣品提取液穩(wěn)定性試驗：取1份聯(lián)苯肼酯、1份聯(lián)苯肼酯-二氮烯的添加樣品進行提取,提取液分為4份于進樣小瓶中,2份當天檢測,另外2份置于≤-18 ℃冷凍冰箱中保存,48 h后取出檢測,分析測定提取液儲藏期間的穩(wěn)定性。

1.3.3 樣品處理方法

稱取粉碎的蘋果樣品10 g于離心管中,加入10 mL乙腈,渦旋提取10 min后加入5.0 g氯化鈉,繼續(xù)渦旋5 min,5 000 r/min離心3 min,取上清液加入盛有150 mg無水硫酸鎂和25 mg C18的凈化管中,2 500 r/min渦旋3 min,5 000 r/min離心2 min,上清液過膜后進UPLC-MS/MS分析聯(lián)苯肼酯。另取1 mL上清液加入1 mL0.5%抗壞血酸水溶液,超聲15 min,過膜后進UPLC-MS/MS分析聯(lián)苯肼酯及聯(lián)苯肼酯-二氮烯之和(以聯(lián)苯肼酯計)。

2 結果與分析

2.1 儲藏穩(wěn)定性結果

經(jīng)查詢,JMPR于2006年對聯(lián)苯肼酯和聯(lián)苯肼酯-二氮烯的儲藏穩(wěn)定性進行了評估,評估結果見表1。評估結果顯示,于蘋果空白樣品中分別添加0.1 mg·kg-1聯(lián)苯肼脂和聯(lián)苯肼脂-二氮烯標準溶液,0 d時剩余殘留量分別為0.090 mg·kg-1和0.076 mg·kg-1,第224天時聯(lián)苯肼酯和聯(lián)苯肼酯-二氮烯在蘋果中的殘留量在冷凍條件(-24～-20 ℃)下仍是穩(wěn)定的。因此,聯(lián)苯肼酯在蘋果上的殘留試驗樣品從采集到檢測的最長儲藏時間為224 d,若沒有超過有效儲藏期,儲藏期間不會對樣品的殘留量產(chǎn)生影響。

表1 蘋果中聯(lián)苯肼酯和聯(lián)苯肼酯-二氮烯殘留冷凍(-24～-20℃)儲藏穩(wěn)定性結果

2.2 模擬運輸過程中儲藏穩(wěn)定性結果

聯(lián)苯肼酯和聯(lián)苯肼酯-二氮烯在蘋果中模擬運輸過程儲藏穩(wěn)定性數(shù)據(jù)結果見表2。結果表明,在1～5 ℃下儲藏24 h,蘋果中聯(lián)苯肼酯的降解率為0,聯(lián)苯肼酯-二氮烯的降解率為12.0%,均小于30%,說明此條件下殘留量是穩(wěn)定的。

表2 聯(lián)苯肼酯及聯(lián)苯肼酯-二氮烯在蘋果中模擬運輸過程儲藏穩(wěn)定性結果

2.3 樣品提取液穩(wěn)定性結果

聯(lián)苯肼酯和聯(lián)苯肼酯-二氮烯在蘋果中樣品提取液穩(wěn)定性數(shù)據(jù)結果見表3。結果顯示,蘋果樣品的提取液置于-24～-20 ℃冰箱中冷凍保存48 h,聯(lián)苯肼酯和聯(lián)苯肼酯-二氮烯的降解率分別為8.3%和8.0%,說明此條件下殘留量是穩(wěn)定的。

表3 聯(lián)苯肼酯及聯(lián)苯肼酯-二氮烯在蘋果提取液的儲藏穩(wěn)定性結果

3 結論

本研究表明,儲藏時間、儲藏溫度均會對聯(lián)苯肼酯及其代謝物在蘋果中的殘留量產(chǎn)生影響。根據(jù)JMPR 2006年報告,-24～-20 ℃冷凍條件下聯(lián)苯肼酯和聯(lián)苯肼酯-二氮烯在蘋果中的殘留量在224 d內(nèi)是穩(wěn)定的,在模擬運輸過程中1～5 ℃的儲藏條件下24 h之內(nèi)是穩(wěn)定的,樣品提取液在-24～-20 ℃的儲藏條件下儲藏48 h是穩(wěn)定的。因此,蘋果聯(lián)苯肼酯農(nóng)藥殘留試驗樣品從采集到檢測的儲藏時間最長不能超過224 d,所有樣品運輸?shù)綄嶒炇視r溫度需控制在5 ℃以下,樣品提取液須在48 h之內(nèi)完成檢測,可確保檢測結果準確可靠。