普萘洛爾治療嬰幼兒血管瘤前后血清中色素上皮衍生因子水平探討

周昱川 王冰 李紅 凌彬

[摘要]目的：通過研究普萘洛爾治療嬰幼兒血管瘤前后血清中色素上皮衍生因子（Pigment epithelium-derived factor，PEDF）水平變化，進(jìn)而探討普萘洛爾治療血管瘤的作用機(jī)制。方法：收集增殖期的血管瘤患者35例，消退期的血管瘤患者17例，脈管畸形患者7例，唇腭裂患者10例，增殖期血管瘤患者、消退期血管瘤患者給予心得安治療，并且收集治療前后的血液標(biāo)本。用人PEDF-ELISA試劑盒檢測每個分組中患者的血清PEDF水平，所得數(shù)據(jù)使用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件分析。結(jié)果：增殖期血管瘤組治療前的血清PEDF水平最低，消退期血管瘤組治療前血清PEDF水平最高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。增殖期血管瘤治療后1、3、6、9個月的血清PEDF水平高于治療前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。消退期血管瘤治療后1、3個月的血清PEDF水平高于治療前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：本實驗初步驗證了普萘洛爾治療血管瘤前后PEDF水平變化，提示PEDF在嬰幼兒血管瘤的發(fā)生、發(fā)展、消退中起了重要作用。

[關(guān)鍵詞]嬰幼兒血管瘤;普萘洛爾;色素上皮衍生因子;血管內(nèi)皮生長因子;脈管畸形;β受體阻滯劑

[中圖分類號]R732.2? ? [文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A? ? [文章編號]1008-6455（2021）05-0063-03

Serum levels of Pigment Epithelium-derived Factor before and after Propranolol Treatment of Infantile Hemangioma

ZHOU Yu-chuan，WANG Bing，LI Hong，LING Bin

（Department of Oral and Maxillofacial Oncological Surgery，the First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University/Hospital of Stomatology，Xinjiang Uygur Autonomous Region Institute of Stomatology，Urumqi 830054，Xinjiang，China）

Abstract： Objective? To explore the mechanism of propranolol in the treatment of infantile hemangiomas by studying the serum levels of pigment epithelium-derived factor （PEDF） before and after the treatment of infantile hemangiomas with propranolol. Methods? 35 cases of hemangiomas in proliferating period， 17 cases of hemangiomas in involuting period， 7 cases of vascular malformation and 10 cases of cleft lip and palate were collected， the first two objects were treated with propranolol and blood samples were collected before and after the treatment. The human PEDF-ELISA kits were used to measure the serum of PEDF levels in each group， analysis was performed by using SPSS 21.0. Results? The serum PEDF level before treatment was the lowest in proliferating hemangiomas group， but was the highest in involuting hemangiomas group， the differences were statistically significant （P<0.05）. The serum PEDF levels of proliferating hemangiomas group at 1， 3， 6 and 9 months after treatment were higher than that before treatment （P<0.05）. The serum PEDF levels of involuting hemangiomas group at 1 and 3 months after treatment were higher than that before treatment （P<0.05）. Conclusion? This study preliminarily verified the changes of PEDF in the treatment of infantile hemangiomas with propranolol， which suggested PEDF played an important role in the occurrence， development and regression of infantile hemangiomas.

Key words： infantile hemangiomas; propranolol; pigment epithelium-derived factor; vascular endothelial growth factor; vascular malformation; β-blockers

血管瘤又稱嬰幼兒血管瘤（Infantile hemangiomas，IH），是發(fā)生在嬰幼兒中的最常見的血管源性良性腫瘤，具有自發(fā)性消退的生物學(xué)特點[1-2]，目前，臨床上是口服心得安，即普萘洛爾片來治療血管瘤，但治療機(jī)制尚未明確。色素上皮衍生因子（Pigment epithelium-derived factor，PEDF），在1989年首次由Tombran-Tink等[3]研究人員從胎兒的視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的培養(yǎng)液中分離出，色素上皮衍生因子最重要的作用是誘導(dǎo)血管的退化，是目前所研究出的最具潛力的內(nèi)源性抑制血管形成的因子[4]。所以，本次提出的假設(shè)是：普萘洛爾在治療增殖期嬰幼兒血管瘤時是否可誘導(dǎo)PEDF提前進(jìn)行自分泌，進(jìn)而起到促進(jìn)血管瘤消退的作用。因此，本研究采集血管瘤患兒口服普萘洛爾前后的血液標(biāo)本，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清中PEDF的水平，進(jìn)而探討普萘洛爾治療血管瘤的作用機(jī)制。

1? 資料和方法

1.1 病例資料：本次研究收集了就診于新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院（附屬口腔醫(yī)院）頜面腫瘤外科的血管瘤患兒、脈管畸形患兒、唇腭裂患兒的病歷資料及血液標(biāo)本。收集了52例嬰幼兒血管瘤患兒（其中包括：35例增殖期血管瘤患兒，17例消退期血管瘤患兒），7例脈管畸形患兒（均診斷為靜脈畸形），10例唇腭裂患兒，其中唇腭裂患兒作為非血管疾病組。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn)：①依據(jù)ISSVA血管瘤與脈管畸形的分類標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合彩色多普勒超聲檢查，診斷為增殖期及消退期的血管瘤患兒;②血管瘤患兒在使用普萘洛爾治療前沒有采用過其他治療方法;③血管瘤患兒，根據(jù)血管瘤的自然病程將年齡小于等于12月齡，納入增殖期組;年齡大于12月齡，納入消退期組。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn)：①血管瘤瘤體局部潰瘍;②心動過緩、心臟嚴(yán)重畸形;③哮喘或哮喘家族史患兒;④脈管畸形患兒，唇腭裂患兒出現(xiàn)感冒，上呼吸道感染，肺炎，腹瀉等;⑤年齡大于3歲。

1.3 分組：嚴(yán)格依據(jù)納入、排除標(biāo)準(zhǔn)入選病例，將入選的病例分為4組：①增殖期血管瘤組;②消退期血管瘤組;③脈管畸形組;④非血管疾病組。采用普萘洛爾治療血管瘤患兒，進(jìn)行治療前后比較。

1.4 方法

1.4.1 嬰幼兒血管瘤的治療方法及隨訪：明確診斷為血管瘤的患兒，普萘洛爾口服治療，口服劑量為2mg/kg/d[5-6]，連續(xù)口服后1、3、6、9個月復(fù)查。病變處進(jìn)行拍照存檔，患兒血液留取樣本。

1.4.2 PEDF檢測：血管瘤患兒留取治療前、后的血液，脈管畸形組、非血管疾病組患兒均留取治療前的血液標(biāo)本，使用無任何添加劑的采血管采集約1.5～2ml外周靜脈血，離心后抽取血清后分裝、標(biāo)號，-80℃冰箱保存。實驗試劑選擇人PEDF-ELISA試劑盒（武漢博士德生物公司，產(chǎn)品編號：EK0896），采用酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme-linked immunosorent asssy，ELISA）測定血清中PEDF的含量，實驗步驟參照說明書。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析：實驗數(shù)據(jù)使用SPSS 21.0軟件分析，數(shù)據(jù)為計量資料，用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用秩和檢驗進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2? 結(jié)果

2.1 各組治療前血清中PEDF的表達(dá)：治療前增殖期血管瘤組血清PEDF水平最低，消退期血管瘤組明顯高于其余三組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。這一結(jié)果提示，色素上皮衍生因子在血管瘤的消退期參與一定的促進(jìn)血管瘤病變消退的作用。

2.2 普萘洛爾治療后嬰幼兒血管瘤患兒血清中PEDF的表達(dá)：將增殖期血管瘤治療前與治療后1、3、6、9個月的血清中PEDF水平進(jìn)行比較，結(jié)果提示：隨著普萘洛爾治療時間的推移，血清PEDF水平逐漸升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。將消退期血管瘤治療前與治療后1、3個月的血清PEDF水平進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，通過普萘洛爾藥物治療后，血清PEDF水平明顯增高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表3。這一結(jié)果提示普萘洛爾可能誘導(dǎo)PEDF的分泌從而促進(jìn)血管瘤的消退。

2.3 典型病例：腮腺區(qū)血管瘤患兒，口服普萘洛爾片，劑量為2mg/kg/d，口服后1、3、6、9個月后隨訪復(fù)查，可見右側(cè)腮腺區(qū)血管瘤逐漸消退。見圖1。

3? 討論

色素上皮衍生因子PEDF是絲氨酸蛋白酶抑制劑家族成員，于1999年首次被Dawson DW[4]發(fā)現(xiàn)具有抗血管新生的活性，在人體大部分器官及血漿中均有表達(dá)，在腫瘤研究領(lǐng)域，PEDF被認(rèn)為可通過直接抑制腫瘤細(xì)胞和間接抑制血管新生兩種方式來抑制腫瘤組織的生長[7]。研究顯示，他與其他抑制血管的因子不同，他是選擇性的促使血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，即只對異常的新生血管起到抑制作用，并不對已經(jīng)成熟的血管起作用[8-9]。血管內(nèi)皮生長因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）是一種重要的調(diào)節(jié)血管生成的因子，可以促使血管內(nèi)皮細(xì)胞增長，研究顯示增殖期嬰幼兒血管瘤中，VEGF的表達(dá)是升高的[10-11]。VEGF和PEDF是相互作用的一對血管生成、抑制因子，研究顯示在低氧的條件下，可以誘導(dǎo)VEGF等因子高表達(dá)，同時降低PEDF的生成，當(dāng)VEGF與PEDF之間的平衡關(guān)系被打破時，繼而出現(xiàn)病理性的新生血管。Li M等[12]研究發(fā)現(xiàn)PEDF在消退期的血管瘤組織中和mRNA表達(dá)中顯著高于增殖期，而VEGF在消退期的血管瘤組織中和mRNA表達(dá)中明顯低于增殖期。Kyung-Jin Kim[13]等研究者，將增殖期、消退期、消退完成期的血管瘤組織進(jìn)行免疫組化實驗，結(jié)果提示：PEDF在增殖期血管瘤組織中低表達(dá)，而在消退期組織中則為高表達(dá)。

通過口服普萘洛爾治療嬰幼兒血管瘤后，瘤體逐漸消退，血清中PEDF的含量也較治療前逐漸升高，值得注意的是，增殖期嬰幼兒血管瘤治療后PEDF的變化水平并沒有消退期的PEDF變化明顯，但是從治療效果上來說，增殖期即開展治療比等到消退期時再治療其效果更好。而本次研究發(fā)現(xiàn)治療前消退期的PEDF水平明顯高于增殖期時PEDF水平，若在增殖期時使用普萘洛爾聯(lián)合PEDF進(jìn)行治療，可能可以縮短臨床治療時間，增加治療效果，同時為存在普萘洛爾口服禁忌的患兒提供新的且有效的治療方法，進(jìn)一步指導(dǎo)新藥的研發(fā)。

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[收稿日期]2020-05-27

本文引用格式：周昱川，王冰，李紅，等.普萘洛爾治療嬰幼兒血管瘤前后血清中色素上皮衍生因子水平探討[J].中國美容醫(yī)學(xué)，2021，30（5）：63-65.