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    鐵皮石斛多糖的提取工藝及對生物活性影響研究進展

    2021-06-07 13:36:04喻明軍劉西嶺
    農(nóng)產(chǎn)品加工 2021年9期
    關(guān)鍵詞:閃式鐵皮石斛

    喻明軍,向 敏,夏 勇,劉西嶺,李 濤,徐 娟

    (1.亳州學(xué)院中藥學(xué)院,安徽亳州 236800;2.亳州學(xué)院生物與食品工程系,安徽亳州 236800;3.廬江縣天地禾生物技術(shù)有限公司,安徽廬江 231500)

    0 引言

    鐵皮石斛(Dendrobium officinale)屬于蘭科植物,在我國主要分布在安徽、浙江和廣西等地,自古被奉為“仙草”,藥用價值較高。多糖是鐵皮石斛的主要活性成分,具有抗氧化[1]、增強免疫[2]、降血糖[3]、降血壓[4]、抗炎[5]和抗癌[6-7]等功能。鐵皮石斛多糖含量高低是判斷鐵皮石斛品質(zhì)的主要依據(jù)。近年來,對鐵皮石斛多糖的提取工藝和生物活性研究的報道日益增多,綜述近年來鐵皮石斛多糖提取工藝研究,為鐵皮石斛多糖的提取工藝研究方向提供參考。

    1 鐵皮石斛多糖

    鐵皮石斛多糖的含量與產(chǎn)地、加工方式和生長年限密切相關(guān),不同部位的多糖含量差異性較大,其中莖的多糖含量最高,葉次之,花中含量最低[8]。有文獻研究表明,具有生理活性的鐵皮石斛多糖大多為O-乙酰化葡甘露聚糖,單元骨架通常為(1→4)、(1→3)或(1→6)連接的糖基殘基[9]。

    O-乙酰化葡甘聚糖的結(jié)構(gòu)見圖1。

    圖1 O-乙酰化葡甘聚糖的結(jié)構(gòu)

    2 鐵皮石斛多糖提取

    2.1 浸漬法

    浸漬法是一種常用的提取方法,將藥材浸泡在溶劑中,在常溫或加熱條件下使所含有的有效成分被浸出。劉靜平等人[10]研究了熱水浸提鐵皮石斛多糖工藝,通過正交試驗得出的最佳提取條件為料液比1∶20,提取次數(shù)3次,提取溫度80℃,提取時間2 h。王培培等人[11]通過正交試驗得出最佳提取條件為料液比1∶40,提取溫度降低到70℃,提取次數(shù)2次,每次2 h,多糖提取率為31.6%。黃曉君等人[12]通過響應(yīng)曲面法優(yōu)化得到的最佳提取條件為料液比1∶30,提取溫度90℃,提取時間2 h,多糖提取率為30.56%。王建明等人[13]通過響應(yīng)面法優(yōu)化了浸取工藝,通過二次回歸模型響應(yīng)面分析,得到鐵皮石斛多糖提取最佳工藝條件為料液比1∶75,常溫提取3次,每次2 h,鐵皮石斛多糖提取率為34.96%。肖胤等人[14]運用超聲粉碎-熱水浸提法提取鐵皮石斛多糖,正交試驗確定提取工藝最佳參數(shù)為料液比1:20,提取次數(shù)8次,每次0.5 h,提取率與王培培等人[11]試驗結(jié)果相似。影響浸漬提取收率的主要因素為料液比、提取溫度、提取時間和提取次數(shù),其中料液比為關(guān)鍵因素。浸提法雖然簡單,但是提取次數(shù)較多,時間較長。

    2.2 回流法

    多糖回流提取以水為溶劑,在回流條件下進行提取。提取效率高于浸漬法,但溫度高可能會破壞有效成分。王琳等人[15]研究了回流法提取石斛鮮條的多糖工藝,通過響應(yīng)面法優(yōu)化得出最佳提取工藝條件為料液比1∶31.28,提取次數(shù)3次,提取時間3 h,多糖提取率為30.83%。黃麗等人[16]通過三因素正交法優(yōu)化了得到最佳提取工藝條件為料液比1∶40,回流提取3次,提取時間2 h。

    2.3 超聲法

    超聲法是通過機械、熱學(xué)及空化等作用,加速有效成分進入溶劑,從而提高提取效率,節(jié)約了溶劑。葉余原[17]報道了超聲法提取鐵皮石斛多糖,通過正交試驗得到了最佳的超聲提取工藝為超聲頻率45 kHz,料液比10∶30,提取溫度50℃,提取時間1.5 h,多糖提取率為15.3%。韓冉等人[18]研究表明,超聲提取的最佳條件為超聲頻率24 kHz,25℃下超聲提取20 min,提取率為15.78%±0.072%,與葉余原報道的收率相似。邱現(xiàn)創(chuàng)等人[1]研究了低超聲波提取鐵皮石斛多糖,研究結(jié)果顯示,在超聲波功率250 W,料液比1∶50.26,在41.74℃下超聲28.65 min,鐵皮石斛多糖得率提高到25.39%,高于傳統(tǒng)熱水浸提法的18%。金蓉等人[19]的研究表明,常溫下100 W超聲提取3 min的鐵皮石斛多糖提取率高于傳統(tǒng)浸漬提取2 h的提取率,而在100℃,500 W下超聲提取3 min的提取率與回流提取2 h相當。Cui H Y等人[20]研究表明,鐵皮石斛超聲提取物的抗氧化活性弱于熱水提取法。這些研究表明超聲提取法的提取效率遠高于傳統(tǒng)浸漬法和回流提取法,但可能會降低提取物的生物活性。

    2.4 微波法

    微波能將能量穿透固體材料,直接作用植物細胞內(nèi),使細胞內(nèi)溫度迅速上升,導(dǎo)致細胞壁破裂,加速有效成分轉(zhuǎn)移到溶劑中。因此,微波輔助提取是一種以較短的時間、較低的溶劑和能耗提取高產(chǎn)多糖的創(chuàng)新提取系統(tǒng)[21]。陳盛余等人[22]報道了微波輔助提取鐵皮石斛多糖的研究,對料液比、微波功率、提取時間和提取溫度因素進行了四因素三水平正交設(shè)計試驗,得到最佳提取工藝參數(shù)為料液比1∶45,微波功率900 W,提取溫度95℃,提取時間30 min,鐵皮石斛多糖的提取率為9.77%。尚喜雨等人[23]研究表明,在微波功率400 W,pH值8,料液比1∶50條件下,微波提取6 min,鐵皮石斛多糖提取率為17.48%。

    2.5 酶法

    在植物多糖的提取過程中,細胞壁和細胞間質(zhì)是影響提取率和速率的關(guān)鍵因素。酶可以有效地破壞植物細胞壁,從而提高多糖的提取效率[24]。韓冉等人[18]研究了酶解提取石斛多糖工藝,最優(yōu)提取條件為在60℃控制提取液pH值6.0,果膠酶質(zhì)量濃度1 500 U/L下,石斛多糖得率為14.89%±0.053%。謝集照等人[25]研究了果膠酶、中性纖維素酶、β-葡聚糖酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、半纖維素酶和中溫α-淀粉酶對鐵皮石斛多糖提取率的影響,結(jié)果表明木瓜蛋白酶與α-淀粉酶按1∶2混合使用效果最好,控制酶解溫度55℃,pH值7,酶解時間3 h,鐵皮石斛多糖的提取率與《中國藥典》規(guī)定的鐵皮石斛多糖含量測定方法提取率基本一致。薛燕等人[26]也報道了使用復(fù)合酶提取鐵皮石斛多糖,將果膠酶、中性蛋白酶和纖維素酶兩兩組合來研究復(fù)合酶對鐵皮石斛多糖提取率的影響,結(jié)果表明中性蛋白酶與纖維素酶按照2∶1混合效果最佳,通過正交試驗得出最佳提取條件為復(fù)合酶濃度10%,料液比1∶120,pH值6.0,酶解溫度55℃,酶解時間3 h,多糖提取率為43.85%±1.8%。楊巖等人[27]報道了利用α-L-鼠李糖苷酶輔助提取鐵皮石斛多糖,在酶添加量為2.5%時多糖提取率達到最大值38.4%,優(yōu)于不加酶處理的21.7%。唐政等人[28]研究表明,纖維素酶和果膠酶按照1∶1混合得到的復(fù)合酶,復(fù)合酶添加量1%,酶解液pH值6.5,在50℃下提取135 min,提取率達到41.33%。酶的種類、用量、酶解pH值、酶解溫度和時間都能影響多糖的提取率,其中酶種類為關(guān)鍵因素。

    2.6 閃式提取法

    閃式提取通過高速攪拌、振動和滲濾,將植物組織中的有效成分有效轉(zhuǎn)移出來,其具有溶劑用量小、提取時間短、提取效率高且不會破壞成分,目前在多糖提取中應(yīng)用較多[29]。李貝貝等人[30]研究了閃式提取法提取鐵皮石斛多糖,正交法優(yōu)化后的最佳工藝條件為料液比1∶30,浸泡30 min后,常溫提取3次,每次2 min,閃式提取器電壓控制在120 V左右,提取率達到31.45%。李嬌等人[31]研究表明,閃式提取2 min,鐵皮石斛多糖的提取率為24.05%,高于超聲提取20 min的18.75%和水提2 h的10.90%。閃式提取法提取石斛多糖具有時間短、收率高的特點,適合實驗室制備樣品。

    2.7 凍融提取

    凍融法是分解植物組織和細胞膜的一種有效且廉價的物理技術(shù)。植物樣品經(jīng)凍融后,能夠增加細胞膜通透性,使細胞里的物質(zhì)更快更徹底地流出[32-33]。譚青云等人[34]研究了凍融法提取鐵皮石斛多糖工藝,凍融3次,多糖提取率達到40%以上。Lian H等人[35]也報道了凍融法提取鐵皮石斛多糖,多糖提取率達到20.33%,高于熱水提取、微波熱水提取和酶輔助熱水提取,略低于超聲熱水提取的20.55%。

    2.8 多種技術(shù)聯(lián)合提取法

    在提取過程中常將多種提取方法聯(lián)合使用以提高提取率。廖霞等人[36]研究了酶提取法聯(lián)合微波輔助提取法提取鐵皮石斛多糖。將鐵皮石斛和果膠酶(2 500 U/g)在常溫下反應(yīng)2 h,然后在微波輔助下提取鐵皮石斛多糖,在最佳條件下,鐵皮石斛的多糖提取率為29.40%,高于單獨酶法或微波輔助提取。

    從植物中提取多糖需要遵循一系列程序,包括溶劑滲透、多糖溶解和擴散。溶劑滲透進入細胞和溶質(zhì)擴散的改善是促進提取效率和提取率的關(guān)鍵因素。熱水提取可以很容易地加速多糖的擴散速率,一般提取率隨水溫度升高而提高。微波提取、超聲提取、酶法提取、閃式提取和凍融提取可以通過生物降解或機械破壞植物細胞壁,可以很大程度上促進多糖的溶解和擴散。

    多糖提取機理見圖2,不同提取方法鐵皮石斛多糖提取率見圖3。

    圖2 多糖提取機理

    圖3 不同提取方法鐵皮石斛多糖提取率

    圖3總結(jié)了不同提取方法鐵皮石斛多糖的提取率,從圖3中可以看出,酶法提取、凍融提取和閃式提取的收率相對較高;同種提取方法提取率的差異性可能是原料來源不同。

    3 提取方式對鐵皮石斛多糖生物活性影響

    不同提取方式提取的鐵皮石斛多糖生理活性有一定的差異性。譚青云等人[34]比較了傳統(tǒng)熱水提取法、超聲提取法、酶法提取、閃式提取法和凍融提取法提取的鐵皮石斛多糖對α-葡萄糖苷酶抑制活性影響,結(jié)果表明凍融提取的鐵皮石斛多糖活性最高,閃式提取次之,再次是超聲提取,酶法提取與傳統(tǒng)熱水提取活性相近。可能的原因是凍融提取是在低溫條件下進行,不經(jīng)過加熱和機械等物料處理,以及酶解等化學(xué)處理,多糖的結(jié)構(gòu)保持較好。Lian H等人[35]比較了熱水提取法、超聲提取法、微波熱水提取法、酶輔助熱水提取法、冷壓法和凍融法提取的鐵皮石斛多糖的抗氧化性能。凍融法提取的鐵皮石斛多糖的ABTS自由基去除性能和清除H2O2的能力最強,冷壓法次之,超聲提取的多糖略高于熱水提取,而微波提取的多糖抗氧化能力最弱。邱現(xiàn)創(chuàng)等人[1]的研究也表明超聲提取比熱水提取的多糖提取率提高了18%,時間縮短了75%,且沒有降低對1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基和羥自由基去除能力。

    4 結(jié)語

    鐵皮石斛多糖具有多種生理、藥理活性,具有降血糖、降血壓、抗氧化、調(diào)節(jié)免疫等作用,但是不同的提取方式對鐵皮石斛多糖提取率及活性影響較大。微波提取雖然速度快、提取率高,但多糖活性相對較低。酶法和超聲提取效率和得率相近,抗氧化活性能力也相似。凍融法提取的多糖能夠很好地保持原有結(jié)構(gòu),活性較好,是一種新的研究方向,但是凍融提取作為一種新的提取方式,目前還處在實驗室階段。閃式提取也能很好地保證鐵皮石斛多糖的活性,多糖提取率和速率也較超聲提取高,但該方法只適合實驗室使用。2種提取方法,如酶法-微波,聯(lián)合提取鐵皮石斛多糖比單一方法提取的提取率高。在研究鐵皮石斛多糖提取時,不僅要考慮提取率,更要考慮多糖的生理活性。

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