胃腸寧膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高研究

龍洋 李小華 夏永芳 寧知貴

摘要：目的：建立胃腸寧膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用TLC法對(duì)胃腸寧膠囊中的主要藥味元胡、黃連、山楂進(jìn)行定性鑒別;采用HPLC法測定元胡中延胡索乙素的含量，色譜柱：Agilent-C18（250mm×4.6mm，5um），流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸溶液（用三乙胺調(diào)節(jié)PH值至6.0）（55：45），檢測波長：280nm，流速：1.0mL/min。結(jié)果：薄層色譜斑點(diǎn)清晰，在與對(duì)照藥材或?qū)φ掌废鄳?yīng)的位置上顯相同的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無干擾;元胡中延胡索乙素的線性范圍40.16～401.6 ug，r=0.9995，平均回收率為99.21%，RSD為0.54%（n=9）。結(jié)論：本方法操作簡單，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，可作為胃腸寧膠囊的質(zhì)量控制方法。

關(guān)鍵詞：胃腸寧膠囊;延胡索乙素;薄層色譜法;高效液相色譜法;含量測定

【中圖分類號(hào)】R453 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1673-9026（2021）04-349-02

胃腸寧膠囊收載于《湖北省醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑規(guī)范》（2011年版），是由蒼術(shù)（炒）、延胡索（醋蒸）、砂仁、白頭翁、山楂（炒）、豬苓、黃連、木香8味中藥組成的復(fù)方制劑，具有清熱燥濕，化滯之功效，臨床主要用于濕熱所致的急慢性胃炎、腸炎、痢疾等[1]。由于該制劑現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定的年代久遠(yuǎn)，只有針對(duì)鹽酸小檗堿的薄層鑒別，不能較全面的反映該中藥制劑的質(zhì)量。本研究對(duì)該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了提高，增加了薄層層析法（TLC）用于定性鑒別該制劑中的延胡索、黃連，并采用高效液相色譜法（HPLC）測定主要藥味延胡索中延胡索乙素的含量。

1儀器與試藥

1.1儀器

BT-125D型電子分析天平（SartoriuS）;WaterS e 2695型高效液相儀（包括WaterS 2998型二極管陣列檢測器，EmPower色譜工作站），PCDX-WJ-20超純水機(jī)（成都品成科技有限公司）;JP-060S型超聲波清洗機(jī)（深圳市潔盟清洗設(shè)備有限公司）;WFH-203B型三用紫外分析儀（上海精科實(shí)業(yè)有限公司）

1.2試藥

延胡索乙素對(duì)照品（批號(hào)：110726-201819）、延胡索對(duì)照藥材（批號(hào)：120928-201609）、黃連對(duì)照藥材（批號(hào)：120913-201310）、鹽酸小檗堿對(duì)照品（批號(hào)：110713-201814），均購自中國食品藥品檢定研究院;胃腸寧膠囊3批（批號(hào)：2019087、2019252、2020114，由恩施州中心醫(yī)院制備）;陰性樣品均為自制;甲醇（色譜級(jí)），其他試劑為分析純。硅膠G薄層板（青島海洋化工廠分廠）

2方法與結(jié)果

2.1 薄層鑒別

2.1.1延胡索的薄層鑒別?取本品20粒，加甲醇50mL，超聲處理30min，濾過，濾液加中性氧化鋁5g，振搖數(shù)分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀m量使溶解，加濃氨試液調(diào)節(jié)PH值至9～10，用乙醚振搖提取3次，每次10mL，乙醚液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。另取延胡索對(duì)照藥材1g，加甲醇50mL，超聲處理30min，濾過，自“濾液蒸干 ”起，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取延胡索乙素對(duì)照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液;取缺延胡索的陰性樣品20粒，按供試品溶液的方法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2020年版通則0502）試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液、對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一用1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以正己烷-三氯甲烷-甲醇 （7.5：4：1）為展開劑，置用展開劑預(yù)飽和15min的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾干，置碘缸中約3min后取出，揮盡板上吸附的碘后，置紫外光燈（365 nm）下檢視[2]。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的熒光斑點(diǎn)。陰性對(duì)照品無干擾。（結(jié)果見圖1）

2.1.2黃連的薄層鑒別?取本品6粒，加甲醇20mL，超聲處理20min，濾過，濾液作為供試品溶液[1]。另取黃連對(duì)照藥材0.2g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取鹽酸小檗堿對(duì)照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液;取缺黃連的陰性樣品6粒，按供試品溶液的方法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2020年版通則0502）試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液、對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照溶液各2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水（5：1：1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。陰性對(duì)照品無干擾。（結(jié)果見圖2）

2.2延胡索中延胡索乙素的含量測定

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)?色譜柱為Agilent C18柱（250mm×4.6mm，5μm）;流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸溶液（用三乙胺調(diào)節(jié)PH值至6.0）（55：45），檢測波長：280nm[2]，流速：1.0mL/min。分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液10μL注入液相色譜儀，按上述色譜條件記錄色譜圖（見圖 5），陰性對(duì)照溶液在延胡索乙素峰位置處無干擾峰，延胡索乙素與樣品中其他組分色譜峰可完全分離 。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備?精密稱取延胡索乙素對(duì)照品10.04mg，置100mL量瓶中，加甲醇溶解后稀釋至刻度（延胡索乙素對(duì)照品濃度100ug/mL），搖勻，精密量取5mL置25mL量瓶中加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45um微孔濾膜濾過，即得對(duì)照品溶液（延胡索乙素對(duì)照品溶液濃度為 20.08ug/mL）。

2.2.3 供試品溶液的制備?取本品內(nèi)容物2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液25mL，蒸干，殘?jiān)?0mL，用稀鹽酸調(diào)節(jié)PH為2，用乙醚振搖提取2次，每次20mL，棄去乙醚液，水層用氨試液調(diào)節(jié)PH至11，用乙醚振搖提取，3次，每次20mL，合并乙醚液，回收溶劑至干，加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，用0.45um微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。

2.2.4 缺延胡索陰性樣品溶液的制備?取缺延胡索陰性樣品2g，按供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照溶液，按上述色譜條件測定。結(jié)果在陰性樣品色譜圖上，在與對(duì)照品相應(yīng)保留時(shí)間處無色譜峰出現(xiàn)，表明陰性樣品不干擾延胡索乙素測定（見圖5）。

2.2.5 線性關(guān)系考察?分別精密吸取2、5、10、15、20μL 對(duì)照品溶液，注入液相色譜儀，測得峰面積積分值。以峰面積積分值（Y ）為縱坐標(biāo)，以進(jìn)樣量（X）的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y =31443X -4642.3，r =0.9995。線性范圍為40.16μg～ 401.6μg 進(jìn)樣量與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.2.6 精密度試驗(yàn)?取同一對(duì)照品溶液20μL，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6 次，測定峰面積，結(jié)果延胡索乙素對(duì)照品峰面積的RSD=0.38%。

2.2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)?取同一供試品溶液20μL，按上述色譜條件分別在 0、4、8、12、16、20、24 h 進(jìn)樣測定延胡索乙素的峰面積，計(jì)算延胡索乙素面積RSD為0.81%（n=6），結(jié)果表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8 重現(xiàn)性試驗(yàn)?取同一批樣品按“2.2.3”項(xiàng)下制備6份供試品溶液，依上述測定條件測定，延胡索乙素的平均含量為77.01ug/粒，RSD為 1.63 %。

2.2.9 加樣回收試驗(yàn)?精密稱取本品9份，每3組為一份，分別精密加入對(duì)照品溶液（濃度為 100.4ug/mL）1mL、1.5mL、2mL，按“2.2.3”項(xiàng)下制備供試液，按上述測定條件測定，計(jì)算回收率，結(jié)果表明，延胡索乙素的平均回收率為99.2 %，RSD為1.26 %。結(jié)果見表1

2.2.10 樣品測定?取胃腸寧膠囊3批，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，精密量取10uL注入液相色譜儀，以外標(biāo)法計(jì)算延胡索乙素的含量。結(jié)果見表2

3 討論

3.1 延胡索的含量測定

延胡索為胃腸寧膠囊制劑中的君藥，其主要藥效成分為延胡索乙素，測定延胡索乙素的含量對(duì)控制制劑質(zhì)量有較大意義，所以選用延胡索乙素作指標(biāo)成分進(jìn)行含量測定。延胡索中的延胡索乙素具有抗?jié)兊乃幚碜饔茫R床常配伍其他中藥治療多種消化系統(tǒng)疾病[4-6]。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只有鹽酸小檗堿的薄層鑒別，故本研究增加了延胡索乙素的含量測定，能夠更好的控制該制劑的內(nèi)在品質(zhì)，保證藥物的臨床治療效果[3]。

3.2 延胡索、黃連的鑒別方法優(yōu)化

延胡索TLC鑒別中，供試品溶液的制備，采用酸沉堿提法除去干擾。黃連TLC鑒別中，展開劑用正丁醇-冰醋酸-水（5：1：1）替代甲苯-乙酸乙酯-甲醇-異丙醇-濃氨試液（12：6：3：3：1），降低了毒性，展開效果良好，陰性對(duì)照無干擾。

3.3 本研究在原有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上增加了延胡索藥材的薄層鑒別。

綜上所述，對(duì)胃腸寧膠囊進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，采用薄層色譜法對(duì)胃腸寧膠囊中對(duì)延胡索、黃連、山楂進(jìn)行定性鑒別;采用HPLC對(duì)制劑中的延胡索乙素進(jìn)行含量測定，該方法操作簡單、重現(xiàn)性好、專屬性高，可作為含量測定的指標(biāo)。

參考文獻(xiàn)

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