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    HER-2染色在兩種不同免疫組化染色平臺結(jié)果不一致的分析

    2021-05-21 06:26:18申敬偉董芳莉楊海軍
    關(guān)鍵詞:胃癌乳腺癌

    申敬偉 董芳莉 楊海軍

    安陽市腫瘤醫(yī)院病理中心,河南 455000

    人表皮生長因子受體-2(HER-2)是定位于染色體17q12-21,32 上的原癌基因-人表皮生長因子受體2 基因(C-erbB-2 基因)編碼的相對分子質(zhì)量為185 000 的跨膜受體樣蛋白,具有酪氨酸激酶活性。該蛋白結(jié)構(gòu)分為3 個部分:胞外區(qū)域(ECD)、跨膜區(qū)域與胞內(nèi)酪氨酸激酶區(qū)域。正確檢測和評定乳腺癌和胃癌的HER-2 蛋白表達(dá)和基因擴(kuò)增狀態(tài)對乳腺癌和胃癌的臨床治療及預(yù)后判讀至關(guān)重要[1-3]。目前對HER-2表達(dá)評估的金標(biāo)準(zhǔn)是組織學(xué)方法,即通過免疫組化(IHC)或熒光原位雜交(FISH)技術(shù)對患者的組織標(biāo)本進(jìn)行檢測,免疫組化作為評價(jià)HER-2 蛋白狀態(tài)簡便且實(shí)用的方法被廣泛應(yīng)用。近年全自動免疫組化染色平臺的應(yīng)用在免疫組化染色的標(biāo)準(zhǔn)化控制中起重要作用[4],但不同免疫組化染色平臺染色效果存在一定的差異。本實(shí)驗(yàn)將HER-2 抗體在兩種不同免疫組化染色平臺結(jié)果不一致的原因分析報(bào)道如下。

    1 材料與方法

    1.1 標(biāo)本來源 收集2019 年1—9 月本院病理科存檔的腫瘤標(biāo)本40例,其中浸潤型乳腺癌25例,胃腺癌15例。

    1.2 儀器與試劑 美國Roche Ventana XT 全自動免疫組化儀;德國Leica Bond Max 全自動免疫組化儀;Leica RM2235型石蠟切片機(jī);德國Leica 顯微鏡;HER-2抗體(4B5,工作液)為美國Roche公司產(chǎn)品;Roche封閉式二抗系統(tǒng);Leica封閉式二抗系統(tǒng)。

    1.3 方法 蠟塊連續(xù)3 μm切片2張,分別用貼置Roche、Leica標(biāo)簽的防脫載玻片撈片,添加陽性對照組織,70 ℃烤片50 min,羅氏標(biāo)簽的玻片牛奶浸泡15 min,分別上機(jī)全自動處理。Roche Ventana和Leica Bond全自動免疫組化染色平臺均使用Roche公司的HER-2抗體(4B5,工作液),同一批號,分別使用各自封閉的二抗系統(tǒng)。兩種染色平臺使用各自的標(biāo)準(zhǔn)化SOP操作流程。染色結(jié)果在顯微鏡下觀察對比。

    1.4 判讀標(biāo)準(zhǔn) (1)乳腺癌HER-2免疫組化判讀參照我國乳腺癌HER-2 檢測指南(2019 版)[2],0:陰性,無染色或≤10%的浸潤癌細(xì)胞呈現(xiàn)不完整的、微弱的細(xì)胞膜染色;1+:陰性,>10%的浸潤癌細(xì)胞呈現(xiàn)不完整的、微弱的細(xì)胞膜染色;2+:不確定,>10%的浸潤癌細(xì)胞呈現(xiàn)弱到中等強(qiáng)度的、完整細(xì)胞膜染色或≤10%的浸潤癌細(xì)胞呈現(xiàn)強(qiáng)而完整的細(xì)胞膜染色;3+:陽性,>10%的浸潤癌細(xì)胞呈現(xiàn)強(qiáng)、完整、均勻的細(xì)胞膜染色。(2)胃癌HER-2 免疫組化判讀參照我國胃癌HER-2 檢測指南(2011 版)[5],0:陰性,無反應(yīng)或<10%腫瘤細(xì)胞膜染色;1+:陰性,≥10%腫瘤細(xì)胞微弱或隱約可見細(xì)胞膜染色;僅有部分細(xì)胞膜染色;2+:不確定,≥10%腫瘤細(xì)胞有弱到中度的基底側(cè)膜、側(cè)膜或完全性細(xì)胞膜染色;3+:陽性,≥10%腫瘤細(xì)胞基底側(cè)膜、側(cè)膜或完全性細(xì)胞膜強(qiáng)染色。

    2 結(jié) 果

    2.1 浸潤性乳腺癌HER-2 在兩種全自動免疫組化儀的染色結(jié)果 25 例浸潤性乳腺癌HER-2 在Roche Ventana XT 和Leica Bond Max 全自動免疫組化的染色結(jié)果比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),Kappa 值0.135,一致性較差,具體見表1及圖1~2。

    表1 25例浸潤性乳腺癌HER-2在兩種全自動免疫組化儀的染色結(jié)果(n)

    2.2 胃癌HER-2 在兩種全自動免疫組化儀的染色結(jié)果 15例胃癌HER-2在Roche Ventana XT和Leica Bond Max全自動免疫組化儀的染色結(jié)果比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),Kappa值0.186,一致性較差,具體見表2及圖3~4。

    表2 15例胃癌HER-2在兩種全自動免疫組化儀的染色結(jié)果(n)

    3 討 論

    正確檢測和評定乳腺癌和胃癌的HER-2 蛋白表達(dá)和基因擴(kuò)增狀態(tài)對乳腺癌和胃癌的臨床治療及預(yù)后判斷至關(guān)重要[3,6],因此,HER-2 檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性非常重要。全自動免疫組化染色平臺在免疫組化技術(shù)中應(yīng)用廣泛,染色結(jié)果可靠,操作簡單,背景清晰,染色效果更佳[7]。本實(shí)驗(yàn)室一直使用Roche Ventana XT 染色平臺進(jìn)行HER-2(4B5)檢測,染色效果滿意。HER-2(4B5)抗體含有足夠50 次試驗(yàn)的試劑,50 次用完后試劑瓶里還存有1 ml左右的試劑量,殘存的試劑在Leica Bond Max 染色平臺進(jìn)行HER-2(4B5)檢測,未達(dá)到理想效果。本實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)HER-2(4B5)在Roche Ventana XT 染色平臺效果優(yōu)于 Leica Bond Max,25 例浸潤性乳腺癌 HER-2 在 Roche Ventana XT和Leica Bond Max 全自動免疫組化儀的染色結(jié)果比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),Kappa值0.135,一致性較差;15例胃癌 HER-2 在 Roche Ventana XT 和 Leica Bond Max 全自動免疫組化儀的染色結(jié)果比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),但是Kappa 值0.186,一致性較差??赡茉蚴菢颖纠龜?shù)較少,有待后續(xù)實(shí)驗(yàn)增加樣本例數(shù)進(jìn)行驗(yàn)證。

    HER-2(4B5)抗體是一種兔單克隆抗體,與石蠟包埋的組織切片中的HER-2 相結(jié)合。使用可識別兔免疫球蛋白的生物素結(jié)合二抗,使用二抗HRP 結(jié)合物對特異性抗體進(jìn)行定位。隨后通過酶反應(yīng)底物的沉淀使特異性抗體-酶復(fù)合物顯色。Roche 封閉式二抗系統(tǒng)即Ultra View Universal DAB Detection Kit 含有HRP 標(biāo)記的抗體混合物(山羊抗小鼠IgG,山羊抗小鼠IgM 和山羊抗兔)。Leica 封閉式二抗系統(tǒng)即Bond Polymer Refine Detection 含有抗兔多聚物HRP-IgG。 HER-2(4B5)工 作 液 和 Roche 二 抗 系 統(tǒng) 是Ventana XT 的封閉式一抗和二抗,兩者匹配運(yùn)用于Roche Ventana XT 染色平臺,效果最優(yōu)。HER-2(4B5)工作液用于Leica Bond Max 染色平臺屬于開放型一抗,需要用Bond 一抗稀釋液稀釋到合適的濃度,才能結(jié)合Bond Polymer Refine Detection 達(dá)到最優(yōu)化的使用條件。本實(shí)驗(yàn)直接使用HER-2(4B5)工作液用于Leica Bond Max 染色平臺,出現(xiàn)3+陽性例數(shù)增多和染色過深,可能和一抗的濃度有關(guān)。

    決定免疫組化染色效果的重要因素是抗原修復(fù),腫瘤標(biāo)本經(jīng)10%中性福爾馬林固定和石蠟包埋后,大量蛋白相互交聯(lián),抗原修復(fù)打開交聯(lián)的蛋白,暴露抗原[8]。合適的修復(fù)液是影響抗原修復(fù)效果的重要因素,Roche Ventana XT 抗原修復(fù)液pH 8.0~8.5,Leica Bond Max 抗原修復(fù)液pH 9.0。本實(shí)驗(yàn)HER-2(4B5)工作液用于Leica Bond Max 染色平臺2+和3+結(jié)果多于Roche Ventana XT 染色平臺,其中2 例染色比陽性對照組織染色深,非特異背景增加,可能與高pH值抗原修復(fù)液有關(guān)。在實(shí)際工作中,抗原有最合適的pH 值范圍。因?yàn)榻M織經(jīng)固定、包埋后抗原表面所帶電荷發(fā)生改變,從而影響抗原與抗體的結(jié)合,在一定pH 值修復(fù)液中進(jìn)行修復(fù),會恢復(fù)抗原表面原來的帶電荷狀態(tài),達(dá)到最佳染色效果[9]。

    圖1 Roche Ventana XT 染色平臺浸潤型乳腺癌2+(HER-2 ×20) 圖2 Leica Bond Max 染色平臺浸潤型乳腺癌3+(HER-2 ×20) 圖3 Roche Ventana XT 染色平臺胃癌2+(HER-2 ×20) 圖4 Leica Bond Max 染色平臺胃癌3+(HER-2 ×20)

    決定免疫組化染色效果的另一重要因素是一抗的染色,兩種免疫組化染色平臺的技術(shù)原理不同,Roche Ventana XT 采用液體封蓋膜技術(shù),防止試劑揮發(fā),同時采用空氣渦流技術(shù)混勻試劑,一抗受到稀釋,達(dá)到最佳濃度。Leica Bond Max 采用Covertiles 技術(shù),試劑側(cè)面微量泵抽吸,直接滴加在組織表面,抗原抗體結(jié)合,對于開放性一抗,如果沒有稀釋,濃度偏高,影響染色結(jié)果。

    綜上所述,不同的免疫組化染色平臺的技術(shù)原理及配套的封閉試劑不同,其染色效果液存在一定差異。因此,為了提高病理切片質(zhì)量,推進(jìn)規(guī)范化操作流程,針對不同的抗體選用合適的染色平臺。

    利益沖突:作者已申明文章無相關(guān)利益沖突。

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