厚皮香地上部分化學(xué)成分研究

劉 明，李驊軒，沈 怡，肖朝江，姜 北*

（1.大理大學(xué)藥物研究所，云南大理 671000；2.大理大學(xué)藥學(xué)院，云南大理 671000）

厚皮香［Ternstroemia gymnanthera（wight et Arn.）Beddome］為山茶科（Theaceae）厚皮香屬（Ternstroemia）植物，別名山茶樹、白花果等，多分布于長江以南各省區(qū)，具有清熱解毒、散瘀消腫的功效，可用于治療瘡癰腫毒、乳癰等多種疾病〔1〕?，F(xiàn)代藥理作用表明厚皮香具有鎮(zhèn)痛、抗炎等作用〔2-3〕。目前有關(guān)厚皮香化學(xué)成分研究的報(bào)道，主要涉及三萜類、酚類等〔2，4〕。本課題組前期研究證實(shí)厚皮香具有一定的鎮(zhèn)痛活性〔5〕，為深入了解厚皮香的化學(xué)成分，并為系統(tǒng)研究厚皮香活性成分創(chuàng)造條件，本實(shí)驗(yàn)對(duì)厚皮香地上部分95%乙醇提取物乙酸乙酯部位進(jìn)行化學(xué)成分研究，共分離鑒定出5個(gè)化合物，分別為白樺酸（1）、3-表熊果酸（2）、熊果酮酸（3）、α-菠甾醇-β-D-吡喃葡萄糖苷（4）、3，4-二羥基苯乙酸丁酯（5）。見圖1。

圖1 化合物1~5的結(jié)構(gòu)式

1 儀器與材料

AvanceⅢ-400核磁共振波譜儀（德國布魯克公司），四甲基硅烷（TMS）為內(nèi)標(biāo)；Sephadex LH-20（瑞典安發(fā)瑪西亞生物技術(shù)公司）；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；BSA224S電子分析天平［賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司］；薄層色譜硅膠板GF254（青島海洋化工有限公司）；柱層層析硅膠（青島海洋化工廠分廠）；石油醚、氯仿、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇等均為工業(yè)純，經(jīng)重蒸后使用。

本實(shí)驗(yàn)樣品（枝葉）于2017年7月采自云南省漾濞縣秀嶺，由大理大學(xué)藥學(xué)院張德全教授鑒定為厚皮香［Ternstroemia gymnanthera（wight et Arn.）Beddome］，標(biāo)本（20151008-6）存放于大理大學(xué)藥物研究所標(biāo)本室。

2 方法

厚皮香地上部分95%乙醇提取物1 792 g，加水分散，依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到乙酸乙酯部位638 g，正丁醇部位525 g，水部位494 g。乙酸乙酯部位（638 g）經(jīng)200~300目硅膠柱層析，以氯仿-丙酮（1：0→0：1）溶劑系統(tǒng)梯度洗脫，最后用甲醇洗脫，薄層色譜法（TLC）檢測(cè)合并相同流分，共得到8個(gè)流分（A~H）。A段（96 g）用石油醚脫脂，經(jīng)硅膠柱色譜（石油醚-丙酮20：1→5：1）得14個(gè)流分（A-1~A-14）。A-8放置后有沉淀析出，經(jīng)石油醚反復(fù)洗滌后得到化合物1（20 mg）；A-6經(jīng)硅膠柱色譜（石油醚-乙酸乙酯15：1）以及Sephadex LH-20（丙酮）凝膠柱色譜分離純化得到化合物2（8 mg）；B段（50 g）經(jīng)硅膠柱色譜（氯仿-丙酮40：1）得到13個(gè)流分（B-1~B-13），B-1經(jīng)硅膠柱色譜（石油醚-丙酮50：1）以及Sephadex LH-20（丙酮）凝膠柱色譜得到化合物3（10 mg）；B-7經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜（氯仿-乙酸乙酯7：1、石油醚-丙酮10：1）以及Sephadex LH-20（丙酮）凝膠柱色譜得到化合物5（30 mg）；E段（16 g）經(jīng)硅膠柱色譜（氯仿-甲醇40：1）得到9個(gè)流分（E-1~E-9），E-9（600 mg）經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜（氯仿-乙酸乙酯2：1、氯仿-甲醇20：1）得到化合物4（12 mg）。

3 結(jié)果

化合物1：白色粉末。1H-NMR（400 MHz，CDCl3-CD3OD）δ：4.87（1H，brs，H-29a），4.74（1H，brs，H-29b），3.31（1H，brs，H-3），3.17（1H，brs，H-19），1.84（3H，s，Me-30），1.15（3H，s，Me-27），1.11（6H，s，Me-23，26），0.99（3H，s，Me-25），0.90（3H，s，Me-24）；13C-NMR（100 MHz，CDCl3-CD3OD）δ：39.5（t，C-1），27.4（t，C-2），79.2（d，C-3），39.4（s，C-4），56.1（d，C-5），18.9（t，C-6），35.0（t，C-7），41.3（s，C-8），51.2（d，C-9），37.7（s，C-10），21.5（t，C-11），26.2（t，C-12），38.9（d，C-13），43.0（s，C-14），31.1（t，C-15），32.8（t，C-16），56.8（s，C-17），47.7（d，C-18），49.8（d，C-19），151.3（s，C-20），30.3（t，C-21），37.7（t，C-22），28.3（q，C-23），15.8（q，C-24），16.3（q，C-25），16.5（q，C-26），15.1（q，C-27），179.7（s，C-28），109.9（t，C-29），19.6（q，C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)〔6〕報(bào)道基本一致，故鑒定化合物1為白樺酸。

化合物2：白色粉末。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：5.23（1H，brt，J=3.8 Hz，H-12），3.41（1H，brs，H-3），2.16（1H，d，J=12.2 Hz，H-18），1.08，0.82，0.77（each 3H，s，3×Me），0.92~0.94（9H，overlap，3×Me），0.84（3H，d，J=6.4 Hz，Me-29）；

13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ：33.2（t，C-1），25.3（t，C-2），76.3（d，C-3），37.5（s，C-4），49.1（d，C-5），18.3（t，C-6），32.9（t，C-7），39.7（s，C-8），47.4（d，C-9），37.2（s，C-10），23.3（t，C-11），126.0（d，C-12），138.0（s，C-13），42.1（s，C-14），28.1（t，C-15），24.2（t，C-16），48.1（s，C-17），52.6（d，C-18），39.1（d，C-19），38.9（d，C-20），30.7（t，C-21），36.9（t，C-22），28.4（q，C-23），22.4（q，C-24），15.4（q，C-25），17.1（q，C-26），23.9（q，C-27），183.8（s，C-28），17.2（q，C-29），21.3（q，C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)〔7〕報(bào)道基本一致，故鑒定化合物2為3-表熊果酸。

化合物3：白色固體。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：5.24（1H，t，J=3.3 Hz，H-12），1.07（3H，s，Me-23），1.07（3H，s，Me-27），1.04（3H，s，Me-26），1.01（3H，s，Me-24），0.94（3H，d，J=6.3 Hz，Me-30），0.85（3H，d，J=6.7 Hz，Me-29），0.81（3H，s，Me-25）；13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ：39.4（t，C-1），34.3（t，C-2），218.1（s，C-3），47.5（s，C-4），55.3（d，C-5），19.6（t，C-6），32.5（t，C-7），39.6（s，C-8），46.9（d，C-9），36.8（s，C-10），23.5（t，C-11），125.7（d，C-12），138.1（s，C-13），42.1（s，C-14），28.1（t，C-15），24.1（t，C-16），48.1（s，C-17），52.7（d，C-18），39.1（d，C-19），38.9（d，C-20），30.7（t，C-21），36.8（t，C-22），26.6（q，C-23），17.1（q，C-24），15.3（q，C-25），17.1（q，C-26），23.7（q，C-27），184.3（s，C-28），21.6（q，C-29），21.3（q，C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)〔8〕報(bào)道基本一致，故鑒定化合物3為熊果酮酸。

化合物4：白色片狀結(jié)晶（甲醇）。1H-NMR（400 MHz，C5D5N）δ：5.05-5.19（3H，overlap，H-7，22，23），5.04（1H，d，J=8.4 Hz，H-1'），4.61（1H，dd，J=11.8，1.9 Hz，H-6'a），4.46（1H，dd，J=11.8，5.3 Hz，H-6'b），4.30-4.38（2H，m，H-3'，4'），4.10（1H，t，J=8.1 Hz，H-2'），4.01（2H，overlap，H-3，5'），1.09（3H，d，J=6.5 Hz，Me-21），0.99（3H，d，J=6.7 Hz，Me-26），0.94（3H，d，J=6.5 Hz，Me-27），0.87（3H，overlap，Me-29），0.73（3H，s，Me-19），0.59（3H，s，Me-18）；13C-NMR（100 MHz，C5D5N）δ：37.8（t，C-1），30.5（t，C-2），79.2（d，C-3），35.2（t，C-4），40.6（d，C-5），30.5（t，C-6），118.4（d，C-7），140.0（s，C-8），50.0（d，C-9），35.0（s，C-10），22.2（t，C-11），40.1（t，C-12），43.9（s，C-13），55.7（d，C-14），23.8（t，C-15），29.4（t，C-16），56.5（d，C-17），13.1（q，C-18），13.6（q，C-19），41.7（d，C-20），21.8（q，C-21），139.2（d，C-22），130.1（d，C-23），51.9（d，C-24），32.7（d，C-25），22.2（q，C-26），19.7（q，C-27），26.2（t，C-28），12.7（q，C-29），102.7（d，C-1'），75.9（d，C-2'），79.1（d，C-3'），72.2（d，C-4'），77.5（d，C-5'），63.4（t，C-6'）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)〔9〕報(bào)道基本一致，故鑒定化合物4為α-菠甾醇-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物5：白色油狀物。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：6.74（1H，d，J=1.9 Hz，H-2），6.71（1H，d，J=8.1 Hz，H-5），6.60（1H，dd，J=8.1，1.9 Hz，H-6），4.09（2H，t，J=6.7 Hz，H-1'），3.48（2H，s，H-7），1.60（2H，m，H-2'），1.35（2H，m，H-3'），0.91（3H，t，J=7.2 Hz，H-4'）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)〔10〕報(bào)道基本一致，故鑒定化合物5為3，4-二羥基苯乙酸丁酯。

4 討論

本實(shí)驗(yàn)從厚皮香地上部分分離鑒定出5個(gè)化合物，其中化合物2、3、5為首次從厚皮香屬植物中分離得到，對(duì)該植物的化學(xué)成分有了進(jìn)一步認(rèn)識(shí)。根據(jù)文獻(xiàn)〔11〕報(bào)道，三萜類化合物有豐富的藥理活性，如白樺酸（1）可影響與炎癥相關(guān)的多種細(xì)胞因子和信號(hào)，具有多途徑的抗炎作用，由于抗炎與鎮(zhèn)痛作用密切相關(guān)，初步推斷前期研究中厚皮香的鎮(zhèn)痛作用與此成分有關(guān)，白樺酸（1）具有抗氧化應(yīng)激活性，對(duì)正常細(xì)胞和機(jī)體具有一定的保護(hù)作用〔12〕。3-表熊果酸（2）可作為競爭性的組織蛋白酶L抑制劑，在開發(fā)新型抗癌藥物方面有較大潛力〔13〕。本研究可為系統(tǒng)了解厚皮香的化學(xué)成分，更好地開發(fā)與利用該植物資源提供參考。