瑞香素對脊髓損傷大鼠運動功能改善作用的TRL4/NF-κB 信號通路機(jī)制研究

吳 軍關(guān) 濤田 峰劉學(xué)起馬 劍王慶峰趙芬芬

(寧夏回族自治區(qū)人民醫(yī)院骨科,銀川 750021)

脊髓損傷(spinal cord injury,SCI)是由外力導(dǎo)致的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病,會導(dǎo)致運動功能障礙與慢性疼痛綜合征等[1-2]。 近年來WHO 數(shù)據(jù)表明脊髓損傷呈現(xiàn)高發(fā)趨勢,全世界每年大約有25000 ～50000 名脊髓損傷患者[3]。 依據(jù)脊髓損傷的發(fā)病原因、病理變化過程和特征等特點,可將其分為原發(fā)性脊髓損傷和繼發(fā)性脊髓損傷。 研究認(rèn)為,脊髓損傷誘發(fā)的神經(jīng)功能缺損不僅是由于初始的實質(zhì)性損傷,而是損傷后的一系列級聯(lián)分子反應(yīng),導(dǎo)致神經(jīng)元受損。 繼發(fā)性脊髓損傷是一種機(jī)體在細(xì)胞和分子水平的主動調(diào)控過程,包括一系列的病理性生理變化,如脊髓組織發(fā)生的自噬、炎癥、氧化損傷、凋亡、壞死和水腫等,都會嚴(yán)重影響神經(jīng)功能、膠質(zhì)細(xì)胞活化與白質(zhì)恢復(fù)等。 多種因素的聯(lián)合作用進(jìn)而誘發(fā)永久的病理生理性改變,最終導(dǎo)致肢體運動功能和感覺能力喪失等[4-7]。

TRL4/NF-κB 信號通路廣泛參與調(diào)控機(jī)體多種生理和病理變化過程,與機(jī)體免疫調(diào)節(jié)和炎癥反應(yīng)具有密切關(guān)系。 當(dāng)機(jī)體脊髓組織受到損傷后誘發(fā)機(jī)體炎癥反應(yīng),誘導(dǎo)TRL4 激活NF-κB 信號通路,介導(dǎo)下游炎癥因子的釋放和表達(dá)。 瑞香素(daphnetin,DAP)是從瑞香科類中草藥中提取的香豆素類活性成分。 既往研究表明,瑞香素具有抗氧化、抗癌、抗炎和神經(jīng)保護(hù)等多種藥理活性,能夠通過抑制機(jī)體炎癥和氧化應(yīng)激損傷進(jìn)而改善機(jī)體損傷[8-9]。 因此,本研究采用脊髓損傷大鼠模型,以探究瑞香素對脊髓損傷模型大鼠的氧化應(yīng)激損傷、炎癥水平及TRL4/NF-κB 信號通路的調(diào)節(jié)作用,并探究其作用機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

本研究選擇75 只SPF 級雄性Wistar 大鼠,8 周齡,均購買自寧夏醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心[SCXK(寧)2016-0003],動物飼養(yǎng)于寧夏回族自治區(qū)人民醫(yī)院動物實驗室[SYXK(寧)2016-0012],體重為(180±20)g,均飼養(yǎng)恒溫(25℃)、恒濕(50±5)%條件下,并保持飼養(yǎng)間長期保持通風(fēng)、干燥和安靜的環(huán)境,以12 h 的晝夜循環(huán)。 本研究經(jīng)寧夏回族自治區(qū)人民醫(yī)院動物倫理委員會批準(zhǔn)(IACUCNY2018AC04)。 本實驗的所有動物實驗操作均遵循3R 原則,以最大程度保證實驗福利。

1.2 主要試劑與儀器

瑞香素購買自上海吉至生化科技有限公司(純度≥97%,批號:SIG-D5564,上海,中國)；SOD(批號:A001-3-2)、CAT(批號:A007-1-1)、GSH-Px(批號:A005-1-2)、MDA(批號:A003-1-2)均購買自南京建成生物工程研究所(南京,中國)；TNF-α(批號:TNA-H82E3)、IL-1β(批號:IL2-H4256)、IL-6 ( 批 號: CD6-H82E8)、 IL-10 ( 批 號: TRLH5259)均購買自ACRO Biosystems 公司(美國)；Bax(批號:5023S)、Bcl-2(批號:3498S)、Caspase-3(批號:14220S)、Cyt-c(批號:11940S)、BDNF(批號:47808S)、TrkB(批號:4603S)和p-TrkB(批號:4619S)一抗、熒光二抗(批號:5366)均購買自Cell Signaling Technology(US)；BCA 蛋白濃度測定試劑盒(批號:A045-4-2)購買自南京建成生物工程研究所(南京,中國)。

1.3 實驗方法

1.3.1 給藥及分組和實驗大鼠模型的制備

各組實驗用大鼠均需在適應(yīng)一周后開始進(jìn)行以下試驗。 脊髓損傷模型的建立:采用電磁力驅(qū)動沖擊器(10 g,12.5 mm)進(jìn)行T10 挫傷性脊髓損傷；而空白組則只接受椎板切除術(shù)。 術(shù)后各實驗鼠在加熱墊燈下維持體溫在36℃～37℃,直至其完全蘇醒[1-2,5]。 術(shù)后給予大鼠相應(yīng)劑量的鎮(zhèn)痛(50 mg/kg Temgesic,皮下)和生理鹽水(0.5 mL,皮下)以防止疼痛和脫水,然后在飲用水中加入抗生素使其接受抗生素1 周。 創(chuàng)傷后6 h 進(jìn)行BBB 運動功能評分和CBS 評分測試,并將75 只大鼠隨機(jī)均分為5 組(n=15):空白組(Sham),模型組(Model),瑞香素低劑量組(30 mg/kg)、中劑量組(60 mg/kg)和高劑量組(90 mg/kg)；術(shù)后第4 天開始連續(xù)給予瑞香素,連續(xù)給藥4 周。

1.3.2 運動功能評價

采用BBB 評分法和CBS 評分法以評價各組試驗大鼠的脊髓功能的恢復(fù)情況。 在造模前1 d、造模后第1、8、15、22 和30 天對各組實驗大鼠分別進(jìn)行BBB 評分和CBS 評分,以評價各組實驗大鼠后肢的運動功能狀況。 在BBB 評分中分為0～21 分:其中,0 分表示后肢完全無運動能力,21 分為后肢能力完全正常；若BBB 評分在5 分以下則表示脊髓損傷大鼠造模成功。 在CBS 評分中分為0 ～100 分:其中,正常為0 分,全癱為100 分。

1.3.3 各組實驗大鼠脊髓組織中氧化應(yīng)激相關(guān)酶與細(xì)胞因子的測定

大鼠分組和處理同上。 各組大鼠連續(xù)給藥4 周后,經(jīng)腹腔注射戊巴比妥鈉(40～60 mg/kg)麻醉后,處死,快速抽取脊髓組織樣本,然后采用冷生理鹽水進(jìn)行沖洗,以后續(xù)實驗。 在脊髓組織中加入適量的PNS 緩沖液,采用液氮進(jìn)行研磨、勻漿,在4℃、3500 r/min 條件下離心15 min 后取上清。 所有實驗操作均嚴(yán)格按照相應(yīng)試劑盒說明書進(jìn)行,檢測SOD、CAT、GSH-Px 酶活性及MDA 含量,以及細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10 的表達(dá)量。

1.3.4 Western blot 檢測炎癥相關(guān)蛋白的表達(dá)量

大鼠分組和處理同上。 將實驗大鼠麻醉、處死后迅速抽取各組實驗大鼠的脊髓組織樣本,采用液氮猝滅并在液氮條件下進(jìn)行研磨成粉末狀,再加入適量的RIPA 裂解液使得蛋白組織充分裂解后,在冰浴條件下放置1h,并且在此期間對樣本溶液進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼鹗?、搖勻；然后在4℃條件下,以12000 r/min 離心15 min 后取上清。 然后使用BCA 試劑盒法測定其上清液中的總蛋白濃度。 在10% SDS-PAGE 上分離提取的蛋白,并轉(zhuǎn)移到PVDF 膜上,37℃條件下封閉1h。然后加入相應(yīng)的一抗在4℃條件下孵育過夜,后將其在TBST 中洗滌3 次。 然后加入二抗,在37℃條件下孵育1h 后進(jìn)行洗膜。 以β-actin 為內(nèi)參。 凝膠成像系統(tǒng)成像,Image J 軟件計算灰度值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

本實驗中實驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析采用SPSS 26.0軟件,圖表的制作采用GraphPad 5.0 軟件,計量數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示；實驗數(shù)據(jù)中多組間實驗數(shù)據(jù)的比較采用單因素方差分析,以P＜0.05 認(rèn)為具有顯著性統(tǒng)計學(xué)差異；BBB 評分和CBS 評分等實驗數(shù)據(jù)的分析則采用方差分析進(jìn)行比較。

注:A:假手術(shù)組；B:模型組:C:脊髓損傷+瑞香素30 mg/kg；D:脊髓損傷+瑞香素60 mg/kg；E:脊髓損傷+瑞香素90 mg/kg；與假手術(shù)(Sham)組相比,*P＜0.05,**P＜0.01；與模型(SCI)組相比,#P＜0.05,##P＜0.01。圖1 給予治療后SCI 大鼠在造模前、造模后的BBB 評分圖Note. A, Normal group. B, Model group. C, Spinal cord injury +daphnetin 30 mg/kg. D, Spinal cord injury + daphnetin 60 mg/kg. E, Spinal cord injury + daphnetin 90 mg/kg. Compared with sham group, *P＜0.05, **P＜0.01. Compared with SCI group,#P＜0.05,##P＜0.05.Figure 1 BBB score map of SCI rats before and after treatment

2 結(jié)果

2.1 SCI 大鼠BBB 評分

BBB 評分結(jié)果如圖1 所示；造模前各組實驗大鼠的BBB 評分無統(tǒng)計學(xué)差異,表明各組實驗大鼠的運動功能均無障礙。 然而,當(dāng)實驗大鼠開始接受脊髓損傷后,各模型大鼠的運動功能均明顯降低,表明造模成功。 假手術(shù)組中各實驗大鼠的BBB 評分在術(shù)前、術(shù)后均無顯著性差異(P＞0.05),表明手術(shù)對實驗大鼠的活動并無明顯影響。 當(dāng)給予瑞香素30 d 后,實驗大鼠的下肢運動功能得到了明顯得到提升,其BBB 評分也得到顯著性升高(P＜0.05),呈現(xiàn)劑量-時間依賴性關(guān)系。

2.2 Combine behavioral score (CBS)評分

CBS 評分結(jié)果如圖2 所示；造模前各組實驗大鼠的CBS 評分無統(tǒng)計學(xué)差異,表明各組實驗大鼠的運動功能均無障礙。 然而,當(dāng)實驗大鼠開始接受脊髓損傷后,各模型大鼠的運動功能均明顯降低。 當(dāng)大鼠接受脊髓損傷后1 d,模型組與空白組出現(xiàn)顯著性差異(P＜0.05),表明模型建立成功,當(dāng)模型大鼠各給藥組給予相應(yīng)藥物治療后,各給藥組實驗大鼠的CBS 評分較模型組實驗大鼠的CBS 評分均明顯降低(P＜0.05),表明瑞香素對于實驗大鼠的脊髓損傷均具有一定的改善作用,且高劑量治療組效果優(yōu)于低劑量組的治療效果。

注:A:假手術(shù)組；B:模型組:C:脊髓損傷+瑞香素30 mg/kg；D:脊髓損傷+瑞香素60 mg/kg；E:脊髓損傷+瑞香素90 mg/kg；與假手術(shù)(Sham)組相比,*P ＜0.05,**P＜0.01；與模型(SCI)組相比,#P＜0.05,##P＜0.01。圖2 給予治療后SCI 大鼠在造模前、造模后的CBS 評分圖Note. A, Normal group. B, Model group. C, Spinal cord injury +daphnetin 30 mg/kg. D, Spinal cord injury + daphnetin 60 mg/kg. E,Spinal cord injury + daphnetin 90 mg/kg. Compared with sham group,*P ＜0.05, **P＜0.01. Compared with SCI group,# P ＜0.05,##P＜0.05.Figure 2 CBS score map of SCI rats before and after treatment

2.3 瑞香素對SCI 大鼠脊髓組織氧化應(yīng)激狀態(tài)的影響

機(jī)體氧化應(yīng)激水平嚴(yán)重影響脊髓損傷后恢復(fù)。本研究結(jié)果顯示,與假手術(shù)組實驗大鼠相比,模型組實驗大鼠脊髓組織中SOD(圖3A)、GSH-Px(圖3B)與CAT(圖3C)活性較空白實驗大鼠顯著性降低(P＜0.05),MDA(圖3D)含量顯著性升高；然而,當(dāng)給予實驗大鼠相應(yīng)劑量的瑞香素治療之后,其脊髓組織中SOD、CAT、GSH-Px 活性和MDA 含量均有顯著性回調(diào),表明給予藥物治療后脊髓損傷大鼠的氧化應(yīng)激狀態(tài)具有顯著的改善作用。 其中,高劑量組的治療效果優(yōu)于低劑量組的療效。

2.4 瑞香素對GM1 對SCI 大鼠脊髓組織中TNFα、IL-1β、IL-6 和IL-10 含量的影響

炎癥在脊髓損傷的發(fā)生、發(fā)展過程中也具有重要作用。 因此,本研究測定了各組實驗大鼠脊髓組織中TNF-α、IL-1β、IL-6 和IL-10 炎癥因子水平的變化,具體如下圖所示。 與假手術(shù)組實驗大鼠相比,模型組實驗大鼠脊髓組織中TNF-α(圖4A)、IL-1β(圖4B)、 IL-10(圖4C)和IL-6(圖4D)含量均顯著性升高(P＜0.05),表明機(jī)體處于過炎癥狀態(tài)。 當(dāng)給予藥物治療后,機(jī)體內(nèi)細(xì)胞因子水平均有所回調(diào)(P＜0.05),表明瑞香素對脊髓損傷誘發(fā)的機(jī)體炎癥具有顯著性的調(diào)節(jié)作用。

注:A:假手術(shù)組；B:模型組:C:脊髓損傷+瑞香素30 mg/kg；D:脊髓損傷+瑞香素60 mg/kg；E:脊髓損傷+瑞香素90 mg/kg；與假手術(shù)(Sham)組相比,*P＜0.05,**P＜0.01。 與模型(SCI)組相比,#P＜0.05,##P＜0.01。圖3 瑞香素對SCI 大鼠脊髓中SOD(A)、GSH-Px(B)、CAT(C)活性和MDA(D)含量的影響Note. A, Normal group. B, Model group. C, Spinal cord injury + daphnetin 30 mg/kg. D, Spinal cord injury + daphnetin 60 mg/kg. E, Spinal cord injury + daphnetin 90 mg/kg. Compared with sham group, *P＜0.05, **P＜0.01. Compared with SCI group,#P＜0.05, ##P＜0.05.Figure 3 Effect of daphnetin on the activity of SOD (A), GSH-Px (B), CAT (C) and MDA (D) in spinal cord of rats were affected by treatment

2.5 瑞香素對SCI 大鼠脊髓組織中凋亡信號通路的影響

如圖5 所示,與假手術(shù)組相比較,模型組的Bax/Bcl-2(圖5A、5B)、Caspase-3(圖5C、5D)和Cytc(圖5E、5F)含量均顯著性升高,表明脊髓損傷導(dǎo)致了大鼠脊髓組織促凋亡相關(guān)蛋白顯著性增加；當(dāng)給予瑞香素后,其Bax/Bcl-2(圖5A、5B)、Caspase-3(圖5C、5D)和Cyt-c(圖5E、5F)含量的變化均發(fā)生顯著性回調(diào),表明瑞香素對脊髓損傷誘發(fā)的凋亡相關(guān)蛋白異常表達(dá)具有顯著的調(diào)節(jié)作用,且高劑量組治療效果優(yōu)于低劑量組。

2.6 瑞香素對SCI 大鼠脊髓組織中BDNF/TrkB和TRL4/NF-κB 信號通路的影響

如圖6 所示,與假手術(shù)組相比較,模型組的BDNF(圖6A、6B)、TrkB(圖6C、6D)、p-TrkB(圖6E、6F)、TRL4(G/H)和NF-κB p65(I/K)含量均顯著性升高,表明脊髓損傷導(dǎo)致了大鼠脊髓組織BDNF/TrkB 信號通路和TRL4/NF-κB 信號通路相關(guān)蛋白異常表達(dá)；當(dāng)給予瑞香素后,其BDNF(圖6 A、6B)、TrkB(圖6C、6D)、p-TrkB(圖6E、6F)、TRL4(G/H)和NF-κB p65(I/K)含量的變化均發(fā)生顯著性回調(diào),且呈現(xiàn)劑量依賴性,表明瑞香素能夠顯著性調(diào)節(jié)BDNF/TrkB 信號通路和TRL4/NF-κB 信號通路。

3 討論

脊髓損傷是由脊柱損傷后誘發(fā)的嚴(yán)重并發(fā)癥之一,包括原發(fā)性脊髓損傷與繼發(fā)性脊髓損傷。 其中繼發(fā)性脊髓損傷是損傷后機(jī)體細(xì)胞和分子水平的一種主動調(diào)節(jié)過程,具有可逆性和可控性；這也是目前脊髓損傷治療的主要階段[10-11]。 目前,藥物治療是降低脊髓損害程度最為快捷和有效的方法之一。 然而,目前臨床治療中,尚無一種安全有效的藥物。 因此,尋找一種安全、有效、多靶點的抗脊髓損傷藥物,已成為脊髓損傷相關(guān)疾病及其藥物研發(fā)的新熱點和難點。

注:A:假手術(shù)組；B:模型組:C:脊髓損傷+瑞香素30 mg/kg；D:脊髓損傷+瑞香素60 mg/kg；E:脊髓損傷+瑞香素90 mg/kg；與假手術(shù)(Sham)組相比,*P＜0.05,**P＜0.01。 與模型(SCI)組相比,#P＜0.05,##P＜0.01。圖4 瑞香素對SCI 大鼠脊髓中TNF-α(A)、IL-1β(B)、IL-10(C)和IL-6(D)含量的影響Note. A, Normal group. B, Model group. C, Spinal cord injury + daphnetin 30 mg/kg. D, Spinal cord injury + daphnetin 60 mg/kg. E, Spinal cord injury + daphnetin 90 mg/kg. Compared with sham group, *P＜0.05, **P＜0.01. Compared with SCI group,#P＜0.05, ##P＜0.05.Figure 4 Effect of daphnetin on the contents of TNF-α (A), IL-1β (B), IL-10 (C) and IL-6 (D) in spinal cord of SCI rats

注:A:假手術(shù)組；B:模型組:C:脊髓損傷+瑞香素30 mg/kg；D:脊髓損傷+瑞香素60 mg/kg；E:脊髓損傷+瑞香素90 mg/kg；與假手術(shù)(Sham)組相比,*P＜0.05,**P＜0.01。 與模型(SCI)組相比,#P＜0.05,##P＜0.01。圖5 瑞香素對實驗大鼠脊髓組織中Bax/Bcl-2(A/B)、Caspase-3(C/D)和Cyt-c(E/F)水平的影響Note. A, Normal group. B, Model group. C,Spinal cord injury + daphnetin 30 mg/kg. D,Spinal cord injury + daphnetin 60 mg / kg. E,Spinal cord injury + daphnetin 90 mg/kg. Compared with sham group, *P＜0.05, **P＜0.01. Compared with SCI group,#P＜0.05, ##P＜0.05.Figure 5 Effect of daphnetin on Bax/Bcl-2 (A/B), Caspase-3 (C/D) and Cyt-C (E/F)levels in spinal cord tissue of experimental rats

大量研究表明,脊髓損傷過程中伴隨著氧化應(yīng)激損傷[12-13]。 抗氧化劑能夠有效降低損傷脊髓組織中乳酸脫氫酶活性,減少超氧陰離子對機(jī)體的損害和繼發(fā)性水腫,繼而達(dá)到治療SCI 的目的。 瑞香素是一種天然抗氧化劑,能夠激活并促進(jìn)機(jī)體內(nèi)抗氧化酶活性,對自由基有著高效的清除作用[14-16]。 此外,脊髓損傷過程中伴隨著炎癥反應(yīng)的發(fā)生。 TNF-α 是炎癥早期機(jī)體釋放的促炎因子,其表達(dá)水平的變化與機(jī)體的損傷程度密切相關(guān)。 IL-1β 參與機(jī)體脊髓損傷的過程可能與其能夠損傷血腦屏障的完整性密切相關(guān)。脊髓損傷誘發(fā)大量炎癥因子產(chǎn)生,最終導(dǎo)致機(jī)體組織處于過度炎癥反應(yīng)和損傷狀態(tài)[17-19]。 本研究結(jié)果顯示,瑞香素能夠抑制IL-1β 分泌,減少由IL-1β 刺激成骨細(xì)胞所產(chǎn)生的NO、PGE2 含量,進(jìn)而抑制TNF-α 含量,進(jìn)而發(fā)揮抗炎作用。

注:A:假手術(shù)組；B:模型組:C:脊髓損傷+瑞香素30 mg/kg；D:脊髓損傷+瑞香素60 mg/kg；E:脊髓損傷+瑞香素90 mg/kg；與假手術(shù)(Sham)組相比,*P＜0.05,**P＜0.01。 與模型(SCI)組相比,#P＜0.05,##P＜0.01。圖6 瑞香素對實驗大鼠脊髓組織中BDNF(A/B)、TrkB(C/D)、p-TrkB(E/F)、TRL4(G/H)和NF-κB p65(I/K)水平的影響Note. A, Normal group. B, Model group. C, Spinal cord injury + daphnetin 30 mg/kg. D, Spinal cord injury + daphnetin 60 mg/kg. E, Spinal cord injury + daphnetin 90 mg/kg. Compared with sham group, *P＜0.05, **P＜0.01. Compared with SCI group,#P＜0.05, ##P＜0.05.Figure 6 Effect of daphnetin on the levels of BDNF (A/B), TrkB (C/D), p- TrkB (E/F),TRL4 (G/H) and NF-κB p65 (I/K) in spinal cord tissue of experimental rats

神經(jīng)元細(xì)胞凋亡程序的啟動對繼發(fā)性脊髓損傷有直接的促進(jìn)作用,Bax 蛋白具有促進(jìn)細(xì)胞凋亡,并拮抗Bcl-2 的抑制凋亡作用,并能夠激活Caspase蛋白酶家族,最終加速細(xì)胞凋亡。 Caspase-3 是評價細(xì)胞凋亡的重要指標(biāo)之一,可介導(dǎo)多種細(xì)胞凋亡途徑。 此外,TNF-α 又可激活凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3的活化,進(jìn)而促進(jìn)機(jī)體細(xì)胞凋亡[20-23]。 為了進(jìn)一步探究瑞香素對脊髓損傷誘發(fā)的凋亡作用的改善作用,本實驗檢測了瑞香素對脊髓組織的凋亡蛋白表達(dá)的改善作用,結(jié)果顯示,瑞香素能夠降低脊髓組織中Bax、Caspase-3、Cyt-c 凋亡蛋白的表達(dá),進(jìn)而減少或抑制脊髓神經(jīng)元細(xì)胞凋亡,修復(fù)中樞神經(jīng)系統(tǒng),并發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。

研究表明,腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)可誘導(dǎo)和促進(jìn)多種神經(jīng)元的存活和分化,并能夠改善受損神經(jīng)元的修復(fù)作用。 然而,當(dāng)機(jī)體脊髓組織發(fā)生損傷后,可誘導(dǎo)BDNF 活化,并促進(jìn)其與高親和力酪氨酸蛋白激酶受體B(tyrosine kinase B,TrkB)相互作用并發(fā)生結(jié)合,促進(jìn)機(jī)體受損神經(jīng)細(xì)胞的生存和發(fā)育,進(jìn)而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用,有效促進(jìn)機(jī)體脊髓組織損傷后的軸突修復(fù)和肢體運動功能的恢復(fù)等作用[24],在調(diào)節(jié)神經(jīng)節(jié)生長和神經(jīng)再生過程中起著至關(guān)重要的作用。 TLR4 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是目前發(fā)現(xiàn)的重要的炎性通路之一,TLR4 高表達(dá)時,激活NF-κB,進(jìn)而啟動細(xì)胞因子TNF-α、IL-6 激活TLR4,最終引起級聯(lián)反應(yīng)[25-26]。 此外,NF-κB 的活化還可進(jìn)一步激活Caspase-3 信號通路介導(dǎo)細(xì)胞凋亡。 細(xì)胞異常凋亡在繼發(fā)性脊髓損傷過程中起著重要作用。 本研究發(fā)現(xiàn),瑞香素能夠調(diào)節(jié)模型大鼠凋亡相關(guān)蛋白的異常表達(dá),這一作用可能與其能夠抑制TRL4/ NF-κB信號通路的活化有關(guān)。 因此,TLR4/NF-κB 信號通路同脊髓損傷后的恢復(fù)具有密切關(guān)系。

綜述所述,瑞香素能夠改善SCI 大鼠的運動功能,減輕SCI 大鼠的氧化應(yīng)激損傷和炎癥水平,并能夠抑制脊髓組織的凋亡,進(jìn)而改善脊髓損傷,其作用機(jī)制可能是通過調(diào)節(jié)TLR4/NF-κB 信號通路來發(fā)揮作用的。