沙庫(kù)巴曲纈沙坦通過(guò)調(diào)控心力衰竭大鼠TGF-β1/Smad3 和NF-κB 信號(hào)通路抑制心肌損傷

宋建敏陳 燦宋 波

(1.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬隨州醫(yī)院心血管內(nèi)科,湖北 隨州 441300； 2.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬隨州醫(yī)院心胸血管外科,湖北 隨州 441300)

心肌梗死在全世界范圍內(nèi)具有較高的致殘率和死亡率。 盡管由于早期溶栓、經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療或冠狀動(dòng)脈搭橋術(shù)明顯降低了急性心肌梗死的死亡率,但幸存患者中仍會(huì)發(fā)生左心室(LV)重塑[1]。 心肌梗死后這種不良的心臟重塑可導(dǎo)致心室功能障礙和心力衰竭,從而導(dǎo)致預(yù)后不良和死亡率升高[2]。 心力衰竭是心肌梗死的主要并發(fā)癥,其在心肌梗死患者死亡原因中位于第二位[3]。 因此,抑制心臟重塑是治療心肌梗死后心力衰竭的主要策略。

心肌梗死后左心室間質(zhì)纖維化和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)是心臟重塑的常見(jiàn)病理特征。 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)已被確認(rèn)為心臟纖維化的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑,其可影響細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡和分化、增加膠原蛋白和基質(zhì)蛋白的產(chǎn)生、保持成纖維細(xì)胞的活力。 心肌梗死動(dòng)物模型的結(jié)果表明,心肌梗死中TGF-β1 的高表達(dá)以及使用TGF-β 受體抑制劑阻斷TGF-β 途徑可以減輕心肌梗死動(dòng)物模型中的心臟纖維化[4]。 此外,核因子κB(NF-κB)是心肌梗死后心臟重塑和心力衰竭發(fā)展的關(guān)鍵因素,并且在炎癥和先天免疫中起著至關(guān)重要的作用[5]。 NF-κB 家族成員p65 形成同二聚體或異二聚體,這些同二聚體或異二聚體與細(xì)胞質(zhì)中的κB(IκB)蛋白抑制劑結(jié)合。 IκB 的降解會(huì)釋放NF-κB 二聚體,并使NF-κB 易位進(jìn)入細(xì)胞核,從而可以啟動(dòng)靶基因的轉(zhuǎn)錄。 NF-κB 的激活可誘導(dǎo)趨化因子(MCP-1)、細(xì)胞因子(TNF-α、IL-6)和基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)的轉(zhuǎn)錄,并進(jìn)一步促進(jìn)炎癥和纖維化[6]。 多項(xiàng)研究表明抑制NF-κB 可抑制炎癥反應(yīng)和心臟纖維化[6]。 因此,研究TGF-β1 和NF-κB 信號(hào)通路對(duì)于抑制心肌梗死后心力衰竭患者的心臟重塑具有巨大的潛在治療價(jià)值。

沙庫(kù)巴曲纈沙坦(sacubitril/valsartan)的商品名叫諾欣妥(entresto),是一種血管緊張素II 受體及腦啡肽酶的雙重抑制劑類藥物,由血管緊張素II 受體拮抗劑的纈沙坦及腦啡肽酶抑制劑前體AHU377 組成[7]。 沙庫(kù)巴曲纈沙坦于2015 年獲美國(guó)FDA 批準(zhǔn)上市,2016 年被推薦為心力衰竭指南的I 類藥物,并且取得了較好的療效。 然而,沙庫(kù)巴曲纈沙坦對(duì)心臟重塑的作用機(jī)制尚不明確。 因此,本研究建立了心肌梗死后心力衰竭模型,評(píng)估了沙庫(kù)巴曲纈沙坦對(duì)心臟功能、心臟纖維化以及TGF-β1、p-Smads、collagen I、TNF-α 和IL-6 的影響。 并進(jìn)一步探討TGF-β1 和NF-κB 通路是否參與心臟重塑過(guò)程中沙庫(kù)巴曲纈沙坦的保護(hù)作用。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

60 只SPF 級(jí)雄性Sprague-Dawley 大鼠(7 周齡,體重220 ～250 g) 由湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供[SCXK(鄂)2019-0008],飼養(yǎng)于湖北醫(yī)藥學(xué)院屏障環(huán)境中[SYXK(鄂)2019-0031]。 給動(dòng)物飼喂標(biāo)準(zhǔn)飼料和水,并飼養(yǎng)在12 h 光照和12 h 黑暗、(20±2)℃溫度和(50±2)%濕度的環(huán)境中。 所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方案均已獲得湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬隨州醫(yī)院倫理審查委員會(huì)的批準(zhǔn)(20180211),并符合實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物管理和使用規(guī)定,實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)符合3R 原則。

1.2 主要試劑與儀器

沙庫(kù)巴曲纈沙坦( 諾新妥, 國(guó)藥準(zhǔn)字J20171054,Novatis Pharma Stein AG)；Masson 三色染色劑染色(貨號(hào):G1340,北京索萊寶科技有限公司)；α-SMA 一抗(免疫組化) (ab119952,英國(guó)Abcam 公司)；HRP-聚合物標(biāo)記的抗兔IgG 二抗(ab6721,英國(guó)Abcam 公司)；RIPA 裂解緩沖液(產(chǎn)品編號(hào):P0013 K,碧云天生物技術(shù)研究所)；TGF-β1一抗(ab215715,英國(guó)Abcam 公司)；p-Smad3 和Smad3 一抗(ab52903 和ab40854,英國(guó)Abcam 公司)； p-Smad7 和 Smad7 一 抗 ( ab227309 和ab226872, 英 國(guó) Abcam 公 司)； TNF-α 一 抗(ab215188,英國(guó)Abcam 公司)；IL-6 一抗(1 ∶1000,ab233706,英 國(guó) Abcam 公 司)； Collagen I 一 抗(ab138492, 英 國(guó) Abcam 公 司)； α-SMA 一 抗(ab265588,英 國(guó)Abcam 公 司)；NF-κBp65 一 抗(ab183559,英國(guó)Abcam 公司)；p-IκBα 一抗(sc-8404,美國(guó)Santa Cruz Biotechnology 公司)；GAPDH一抗(ab8245,英國(guó)Abcam 公司)；辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG(ab205718,英國(guó)Abcam 公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 心肌梗死后心力衰竭動(dòng)物模型

結(jié)扎左前降支冠狀動(dòng)脈(LAD)后由心肌梗死誘發(fā)心力衰竭。 腹膜內(nèi)注射1%戊巴比妥鈉(50mg/kg)麻醉大鼠,然后進(jìn)行氣管插管并連接呼吸機(jī)正壓通氣,術(shù)前記錄12 導(dǎo)聯(lián)心電圖。 皮膚消毒后于胸腔開(kāi)口,于左心耳根部下方2 mm 結(jié)扎LAD。 假手術(shù)組的大鼠在不結(jié)扎LAD 的情況下進(jìn)行相同的手術(shù)操作。 實(shí)驗(yàn)后記錄十二導(dǎo)聯(lián)心電圖。 將大鼠正常喂養(yǎng)1 周。 根據(jù)經(jīng)胸超聲心動(dòng)圖檢查結(jié)果,當(dāng)LVEF 降低45%時(shí)表示心力衰竭模型建模成功。

1.3.2 動(dòng)物分組及給藥

將存活大鼠隨機(jī)分為以下組:假手術(shù)組(n=15)、模型組(n=15)和沙庫(kù)巴曲纈沙坦組(n=15)。沙庫(kù)巴曲纈沙坦組大鼠每天一次通過(guò)管飼法給予沙庫(kù)巴曲纈沙坦10 mg/kg。 共治療4 周。 模型組和假手術(shù)組給予等體積的生理鹽水。

1.3.3 經(jīng)胸超聲心動(dòng)圖檢查

采用無(wú)創(chuàng)經(jīng)胸超聲心動(dòng)圖方法評(píng)估左心室的形態(tài)和功能。 在麻醉動(dòng)物中進(jìn)行超聲心動(dòng)圖檢查。記錄左心室收縮末期內(nèi)徑(LVIDs)和左心室舒張末期內(nèi)徑(LVIDd)以及左心室射血分?jǐn)?shù)(EF)和左心室縮短分?jǐn)?shù)(FS)。

1.3.4 心肌纖維化的測(cè)量

給藥4 周后,收集大鼠心臟,并在磷酸鹽緩沖液中洗滌,在4%多聚甲醛中固定過(guò)夜,然后包埋在石蠟中。 將每個(gè)石蠟包埋的心臟切成4 μm 厚的切片,并用MASSON 三色染色劑染色。 每個(gè)切片在尼康顯微鏡下成像,通過(guò)Image J 軟件計(jì)算纖維化程度。

1.3.5 免疫組織化學(xué)染色

通過(guò)免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)α-SMA 蛋白的表達(dá)。 將心臟組織切片放在烤箱中烤片20 min,然后二甲苯脫蠟,梯度乙醇水化。 使用PH 9.0 的Tris/EDTA 緩沖液進(jìn)行抗原修復(fù)。 在3% H2O2中孵育10 min 來(lái)封閉內(nèi)源性過(guò)氧化物酶。 將切片在1%PBS 中洗滌3 次,每次6 min,并在4℃下與1%牛血清白蛋白中的一抗(1 ∶500 稀釋)一起孵育過(guò)夜。 將切片用1% PBS 洗滌3 次,每次6 min。 然后將切片與HRP-聚合物標(biāo)記的抗兔IgG 二抗(1 ∶500 稀釋)室溫孵育1 h。 將切片再次用1%PBS 洗滌3 次,每次6 min,然后用蘇木精復(fù)染30 s。 使用OLYMPUS BX 50 數(shù)字顯微鏡。 在×400 放大倍數(shù)下觀察圖像。隨機(jī)選擇5 個(gè)視野進(jìn)行陽(yáng)性染色評(píng)分,陽(yáng)性染色評(píng)分=陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)評(píng)分×染色強(qiáng)度評(píng)分。 陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)評(píng)分如下:＜5%為0 分,5 ～25%為1 分,5 ～25%為1 分,26～50%為2 分,51～75%為3 分,＞75%為4分。 染色強(qiáng)度評(píng)分如下:未染色為0 分,淺黃色為1分,棕黃色為2 分,深棕色為3 分。

1.3.6 蛋白質(zhì)印跡分析

給藥4 周后,對(duì)所有動(dòng)物實(shí)施安樂(lè)死,立即收獲心臟并保存在液氮中。 使用RIPA 裂解緩沖液裂解組織。 通過(guò)BCA 法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。 蛋白質(zhì)通過(guò)10% SDS-PAGE 分離并轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上,然后與以下一抗在4℃下過(guò)夜孵育:TGF-β1(1 ∶500)、p-Smad3 和Smad3(1 ∶500)、p-Smad7 和Smad7(1 ∶500)、TNF-α(1 ∶1000)、IL-6(1 ∶1000)、Collagen I(1 ∶1000)、αSMA(1 ∶500)、NF-κBp65(1 ∶1000)、p-IκBα(1 ∶1000)和GAPDH(1 ∶1000)。 將膜與辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG(1 ∶2000)在室溫下孵育2h。 GAPDH 作為內(nèi)部對(duì)照。 通過(guò)ECL 法顯影并使用Gene Gnome 凝膠成像系統(tǒng)捕獲生成的圖像。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 沙庫(kù)巴曲纈沙坦改善心力衰竭大鼠心臟結(jié)構(gòu)和功能

通過(guò)超聲心動(dòng)圖評(píng)估心力衰竭大鼠治療后的心臟功能。 研究顯示(圖1),與假手術(shù)組相比,模型組大鼠的EF 和FS 顯著降低,而LVIDs 和LVIDd 顯著升高(P＜0.05)。 此外,與模型組相比,沙庫(kù)巴曲纈沙坦組的EF 和FS 顯著升高,而LVIDs 和LVIDd顯著降低(P＜0.05)。

2.2 沙庫(kù)巴曲纈沙坦減輕心力衰竭大鼠心肌纖維化

間質(zhì)纖維化是心梗后心臟重塑的主要特征。通過(guò)Masson 對(duì)間質(zhì)纖維化進(jìn)行的三色染色顯示(圖2),與假手術(shù)組相比,心肌梗死組的左室壁結(jié)扎部分梗死區(qū)域邊界出現(xiàn)明顯的間質(zhì)纖維化,膠原蛋白染色區(qū)域顯著增加(P＜0.05)。 此外,與模型組相比,沙庫(kù)巴曲纈沙坦組的膠原蛋白染色區(qū)域顯著降低(P＜0.05)。

圖3 和圖4 顯示,與假手術(shù)組相比,模型組大鼠心臟組織中肌成纖維細(xì)胞標(biāo)志物α-SMA 的表達(dá)顯著升高(P＜0.05)。 與模型組相比,沙庫(kù)巴曲纈沙坦組α-SMA 的表達(dá)顯著降低(P＜0.05)。 α-SMA 陽(yáng)性的肌成纖維細(xì)胞可促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的合成。本研究檢測(cè)了Collagen I 的表達(dá),這是心臟成纖維細(xì)胞產(chǎn)生的主要膠原蛋白亞型。 研究顯示(圖3),與假手術(shù)組相比,模型組的Collagen I 表達(dá)顯著升高(P＜0.05)。 與模型組相比,沙庫(kù)巴曲纈沙坦組Collagen I 的表達(dá)顯著降低(P＜0.05)。

注:A-D:依次為EF、FS、LVIDs 和LVIDd；與假手術(shù)組比較,*P＜0.05；與模型組比較,#P＜0.05。圖1 各組大鼠的EF、FS、LVIDs 和LVIDdNote. A-D, EF, FS, LVIDs and LVIDd in sequence. Compared with sham group, *P＜0.05. Compared with model group, #P＜0.05.Figure 1 EF, FS, LVIDs and LVIDd of each group of rats

2.3 沙庫(kù)巴曲纈沙坦抑制心力衰竭大鼠心肌TGF-β1/ Smad3 信號(hào)通路

TGF-β1/ Smad3 信號(hào)通過(guò)參與調(diào)控心肌梗死后心肌纖維化的原因,本研究顯示(圖5),與假手術(shù)組相比,模型組大鼠心臟組織中TGF-β1 的蛋白表達(dá)以及Smad3 的磷酸化水平顯著升高,而Smad7 的磷酸化水平顯著降低(P＜0.05)。 與模型組相比,沙庫(kù)巴曲纈沙坦組TGF-β1 的蛋白表達(dá)以及Smad3 的磷酸化水平顯著降低,而Smad7 的磷酸化水平顯著升高(P＜0.05)。

2.4 沙庫(kù)巴曲纈沙坦抑制心力衰竭大鼠細(xì)胞因子的表達(dá)

細(xì)胞因子(TNF-α 和IL-6)的表達(dá)在心臟重塑和心力衰竭中起著關(guān)鍵作用。 本研究顯示(圖6),與假手術(shù)組相比,模型組TNF-α 和IL-6 的蛋白表達(dá)顯著升高(P＜0.05)。 與模型組相比,沙庫(kù)巴曲纈沙坦組TNF-α 和IL-6 的蛋白表達(dá)顯著降低(P＜0.05)。

2.5 沙庫(kù)巴曲纈沙坦抑制心力衰竭大鼠心肌NFκB 信號(hào)通路

先前的研究表明,促炎細(xì)胞因子誘導(dǎo)IκB 的磷酸化和降解,然后誘導(dǎo)NF-κB 從抑制性信號(hào)小體中釋放出來(lái),轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核并誘導(dǎo)許多基因的轉(zhuǎn)錄,從而導(dǎo)致炎性因子如TNF-α 和IL-6 的表達(dá)。 本研究顯示(圖7),與假手術(shù)組相比,模型組NF-κBp65和p-IκBα 的蛋白表達(dá)顯著升高(P＜0.05)。 與模型組相比,沙庫(kù)巴曲纈沙坦組NF-κBp65 和p-IκBα 的蛋白表達(dá)顯著降低(P＜0.05)。

3 討論

心臟重塑是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程,有許多連續(xù)和重疊的生物過(guò)程[8]。 在早期階段,心臟重塑是壞死區(qū)域纖維化修復(fù)并形成疤痕的結(jié)果。 接下來(lái),重塑過(guò)程由存活心肌的結(jié)構(gòu)重排所驅(qū)動(dòng),包括心肌細(xì)胞肥大、心肌纖維化以及進(jìn)行性左心室擴(kuò)張。 心肌梗死后的心室擴(kuò)張是心臟衰竭的代償反應(yīng)之一。 但是,過(guò)度擴(kuò)張會(huì)引起心室收縮和舒張功能障礙,從而導(dǎo)致心力衰竭。 預(yù)防不良的心室重塑對(duì)于降低心肌梗死后心力衰竭的發(fā)病率和死亡率非常重要。 已經(jīng)證實(shí),間質(zhì)纖維化是心力衰竭后心臟重塑的典型特征,其特征在于細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的過(guò)度積累[9]。 Collagen I 和Collagen III 是最豐富的ECM 成分。 在心臟纖維化模型中,Collagen I 比Collagen III表現(xiàn)出更強(qiáng)烈和更長(zhǎng)時(shí)間的上調(diào)。 活化的成纖維細(xì)胞是纖維化心臟中膠原蛋白的主要細(xì)胞來(lái)源。 α-SMA 表達(dá)已被廣泛用作成纖維細(xì)胞分化成活化狀態(tài)的肌成纖維細(xì)胞的標(biāo)記物[10]。 在本研究中,我們觀察到心肌梗死后心力衰竭大鼠心臟中Collagen I和α-SMA 蛋白被上調(diào),這兩者均通過(guò)沙庫(kù)巴曲纈沙坦治療得以抑制,這表明沙庫(kù)巴曲纈沙坦可能通過(guò)抑制成纖維細(xì)胞活化和膠原生成而具有抗纖維化作用。

注:A:Masson 三色染色圖像；B:膠原染色區(qū)域百分比；與假手術(shù)組比較,*P＜0.05；與模型組比較,#P＜0.05。圖2 大鼠心臟組織的Masson 三色染色Note, A, Masson three-color staining image. B, Percentage of collagen staining area. Compared with sham group, *P＜0.05.Compared with model group, #P＜0.05.Figure 2 Masson trichrome staining of rat heart tissue

注:A:Collagen I 的蛋白相對(duì)表達(dá)量；B:α-SMA 的蛋白相對(duì)表達(dá)量；C:Western blot 代表性條帶；與假手術(shù)組比較,*P＜0.05；與模型組比較,#P＜0.05。圖3 Western blot 檢測(cè)大鼠心臟組織Collagen I 和α-SMA 的蛋白表達(dá)Note. A, Relative protein expression of Collagen I. B, Relative protein expression of α-SMA. C, Representative Western blot bands. Compared with sham group, *P＜0.05. Compared with model group, #P＜0.05.Figure 3 Western blot detection of collagen I and α-SMA protein expression in rat heart tissues

注:A:α-SMA 的免疫組化染色圖像；B:α-SMA 的陽(yáng)性染色評(píng)分；與假手術(shù)組比較,*P ＜0.05；與模型組比較,#P＜0.05。圖4 大鼠心臟組織α-SMA 的免疫組化染色Note. A, immunohistochemical staining image of α-SMA. B, positive staining score of α-SMA. Compared with sham group, *P＜0.05. Compared with model group, #P＜0.05.Figure 4 Immunohistochemical staining of α-SMA in rat heart tissue

注:A:TGF-β1 的蛋白相對(duì)表達(dá)量；B:Smad3 的磷酸化水平； C:Smad7 的磷酸化水平；D:Western blot 代表性條帶；與假手術(shù)組比較,*P＜0.05；與模型組比較,#P＜0.05。圖5 Western blot 檢測(cè)大鼠心臟組織TGF-β1 的蛋白表達(dá)以及Smad3 和Smad7 的磷酸化Note. A, Relative protein expression of TGF-β1. B, hosphorylation levels of Smad3. C, Phosphorylation levels of Smad7.D, Representative Western blot bands. Compared with sham group, *P＜0.05. Compared with model group, #P＜0.05.Figure 5 Western blot detection of TGF-β1 protein expression and phosphorylation of Smad3 and Smad7 in rat heart tissues

注:A:TNF-α 的蛋白相對(duì)表達(dá)量；B:IL-6 的蛋白相對(duì)表達(dá)量；C:Western blot 代表性條帶；與假手術(shù)組比較,*P＜0.05；與模型組比較,#P＜0.05。圖6 Western blot 檢測(cè)大鼠心臟組織TNF-α 和IL-6 的蛋白表達(dá)Note. A, Relative protein expression of TNF-α. B, Relative protein expression of IL-6. C, Representative Western blot bands. Compared with sham group, *P＜0.05. Compared with model group, #P＜0.05.Figure 6 Western blot detection of TNF-α and IL-6 protein expression in rat heart tissues

注:A:NF-κBp65 的蛋白相對(duì)表達(dá)量；B:p-IκBα 的蛋白相對(duì)表達(dá)量；C:Western blot 代表性條帶；與假手術(shù)組比較,*P＜0.05；與模型組比較,#P＜0.05。圖7 Western blot 檢測(cè)大鼠心臟組織NF-κBp65 和p-IκBα 的蛋白表達(dá)Note. A, Relative protein expression of NF-κBp65. B,Relative protein expression of p-IκBα. C,Representative Western blot bands. Compared with sham group, *P＜0.05. Compared with model group,#P＜0.05.Figure 7 Western blot detection of NF-κBp65 and p-IκBα protein expression in rat heart tissues

TGF-β1 是一種局部產(chǎn)生的細(xì)胞因子,也是組織纖維炎性變化的主要刺激因子。 在心肌梗死后的大鼠心臟中觀察到TGF-β1 明顯高表達(dá),它與成纖維細(xì)胞向成肌纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)化以及典型的Smad 信號(hào)通路的激活有關(guān)[11]。 作為T(mén)GF-β1 的主要下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子,Smad3 可被激活的TGF-β1 的I 型受體磷酸化,然后與Smad4 形成復(fù)合物并易位進(jìn)入細(xì)胞核,在其中它作為轉(zhuǎn)錄因子并促進(jìn)靶基因的表達(dá),包括Collagen I 和Collagen III。 有研究表明,TGF-β的大多數(shù)促纖維化活性是由Smad3 介導(dǎo)的[12-13]。Smad7 是一種抑制性Smad 蛋白,能夠與Smad3 和TGF-β 受體復(fù)合物TGF-βRI 結(jié)合競(jìng)爭(zhēng),從而阻止隨后的信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程。 外源性Smad7 的高表達(dá)可以抑制Smad3 的磷酸化[14]。 在本研究中,沙庫(kù)巴曲纈沙坦均抑制了心力衰竭大鼠心臟中的TGF-β1/ psmad3 信號(hào)通路和下游Collagen I 的表達(dá)。 同時(shí),在經(jīng)沙庫(kù)巴曲纈沙坦治療的心力衰竭大鼠中,α-SMA表達(dá)水平受到抑制。 而p-smad7 表達(dá)上調(diào)。 這些結(jié)果表明,沙庫(kù)巴曲纈沙坦通過(guò)上調(diào)Smad7 的蛋白表達(dá)來(lái)抑制TGF-β1/ Smad3 的信號(hào)通路,并進(jìn)一步抑制成肌纖維細(xì)胞的增殖和Collagen I 的上調(diào)。

盡管促炎性細(xì)胞因子的表達(dá)可能與心肌梗死后的傷口愈合有關(guān),但即使在非梗死的心肌中,細(xì)胞因子的過(guò)表達(dá)也會(huì)損害心臟組織并引起纖維化成分的過(guò)量沉積。 NF-κB 信號(hào)通路是炎癥的“主要調(diào)控者”。 它主要存在于與其抑制劑IκB 蛋白結(jié)合的胞質(zhì)溶膠中。 受細(xì)胞因子或其他誘導(dǎo)物刺激后,IκB 蛋白被IκB 激酶降解。 IκB 降解后,NF-κB 易位至細(xì)胞核,并與促炎基因調(diào)控區(qū)域κB 位點(diǎn)的DNA結(jié)合并促進(jìn)其轉(zhuǎn)錄[15-16]。 活化的NF-κB 會(huì)增加TGF-β1、TNF-α、IL-6 和IL-1β 的表達(dá),從而激活膠原蛋白沉積和心肌纖維化,導(dǎo)致心肌重塑[17-20]。NF-κB 在細(xì)胞因子和纖維化因子的協(xié)同反式激活中起著關(guān)鍵作用,這些因子與心力衰竭后法心肌損傷有關(guān)。 在本研究中,沙庫(kù)巴曲纈沙坦抑制了心力衰竭大鼠心臟中的NF-κBp65、p-IκB 和下游TGF-β1、TNF-α 和IL-6 的表達(dá)。 這些結(jié)果表明,沙庫(kù)巴曲纈沙坦至少部分通過(guò)抑制IκB 磷酸化來(lái)抑制NF-κB的信號(hào)通路并進(jìn)一步抑制促炎細(xì)胞因子的表達(dá)。

總之,本研究發(fā)現(xiàn)沙庫(kù)巴曲纈沙坦可預(yù)防心力衰竭過(guò)程總的心臟重塑。 潛在的機(jī)制可能與沙庫(kù)巴曲纈沙坦對(duì)心肌的抗纖維化和抗炎作用有關(guān)。沙庫(kù)巴曲纈沙坦通過(guò)抑制膠原蛋白的產(chǎn)生、心臟成纖維細(xì)胞的活化和成纖維細(xì)胞的形成有效地減輕了心肌纖維化。 沙庫(kù)巴曲纈沙坦主要通過(guò)抑制TGF-β1/ Smad3 信號(hào)傳導(dǎo)途徑來(lái)發(fā)揮其抗纖維化作用。 另外,沙庫(kù)巴曲纈沙坦可通過(guò)抑制NF-κB 信號(hào)傳導(dǎo)從而抑制促炎性細(xì)胞因子的過(guò)度表達(dá)。