冠心病病人DDAH2基因-449G/C多態(tài)性對(duì)血漿ADMA水平的影響

蘇 銳，白 瑞，邊云飛，肖傳實(shí)

冠心病發(fā)病過程復(fù)雜，目前研究認(rèn)為內(nèi)皮功能不全參與冠心病發(fā)生發(fā)展。內(nèi)皮功能障礙的主要原因是一氧化氮(NO)生物利用度降低，NO是血管內(nèi)皮細(xì)胞合成的一種有效的生物血管舒張劑[1-2]。非對(duì)稱二甲基精氨酸(ADMA)是在甲基化核蛋白水解過程中產(chǎn)生的，通過與L-精氨酸競(jìng)爭(zhēng)，作為內(nèi)源性的內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)抑制劑，導(dǎo)致內(nèi)皮功能障礙和血管疾病[3-4]。ADMA已證明是心血管疾病的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子。二甲基精氨酸二甲基氨基氫化酶2(DDAH2)可促進(jìn)ADMA代謝，在調(diào)節(jié)急性炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。本研究分析冠心病病人DDAH2基因-449G/C多態(tài)性對(duì)血漿ADMA水平的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年12月—2018年12月在我院心內(nèi)科住院行冠狀動(dòng)脈造影檢查的412例病人，年齡31～80歲。根據(jù)造影結(jié)果將分支中任何1支狹窄≥50%的病人作為冠心病組，共212例，男121例，女91例；無狹窄病人200例作為對(duì)照組，其中男114例，女86例。同時(shí)將冠心病病人根據(jù)年齡分組，即31～40歲組、41～0歲組、51～60歲組、61～70歲組、71～80歲組。各組性別比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。所有病人均簽署知情同意書。冠心病根據(jù)1979年世界衛(wèi)生組織制定的缺血性心臟病診斷標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)行冠狀動(dòng)脈造影，將冠狀動(dòng)脈管腔狹窄程度≥50%確診為冠心病。

1.2 觀察指標(biāo)

1.2.1 冠狀動(dòng)脈造影 經(jīng)橈動(dòng)脈進(jìn)行兩個(gè)或兩個(gè)以上體位投照，結(jié)果由兩位專業(yè)介入醫(yī)師評(píng)定。

1.2.2 DDAH2基因-449G/C多態(tài)性分析 通過聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)技術(shù)檢測(cè)兩組DDAH2基因-449G/C多態(tài)性。詳見圖1。

圖1 DDAH2基因的SNPrs805305位點(diǎn)酶切產(chǎn)物電泳圖

1.2.3 ADMA水平測(cè)定 抽取所有病人晨起空腹肘靜脈血5 mL，將血標(biāo)本進(jìn)行離心，取上清血漿，在-20 ℃保存，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定血漿ADMA水平。

2 結(jié) 果

2.1 Hardy-Weinberg平衡吻合度檢驗(yàn) DDAH2基因-449G/C多態(tài)性基因頻數(shù)分布采用χ2 檢驗(yàn)，結(jié)果符合Hardy-Weinberg平衡(χ2=2.981，P>0.05)。

2.2 兩組DDAH2基因-449G/C多態(tài)性位點(diǎn)基因型及等位基因頻率 冠心病組CG、GG基因型頻率及G等位基因頻率高于對(duì)照組。詳見表1。

表1 兩組DDAH2基因-449G/C多態(tài)性位點(diǎn)基因型及等位基因頻率 單位：例(%)

2.3 兩組血漿ADMA水平比較(見表2)

表2 兩組血漿ADMA水平比較(±s) 單位：μmol/L

2.4 冠心病病人DDAH2基因多態(tài)性對(duì)ADMA水平的影響 不同DDAH2基因型之間ADMA呈增加趨勢(shì)，ADMA在GG型中含量最高(0.517±0.090)μmol/L，在CC型中含量最低(0.316±0.080)μmol/L，CG型為(0.461±0.012)μmol/L。詳見圖2。

圖2 DDAH2基因多態(tài)性對(duì)冠心病病人ADMA水平的影響

2.5 冠心病病人血漿ADMA水平與年齡的關(guān)系 冠心病組血漿ADMA水平與年齡呈正相關(guān)(r=0.479，P<0.05)。詳見圖3。

圖3 冠心病病人血漿ADMA水平與年齡的關(guān)系

3 討 論

血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的NO是重要的內(nèi)源性血管舒張因子，而ADMA是精氨酸類似物，是eNOS內(nèi)源性競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑。DDAH可將ADMA水解為瓜氨酸和二甲胺，是一種具有分解代謝ADMA的胞質(zhì)蛋白酶，可調(diào)節(jié)血漿ADMA水平。ADMA水平升高導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的NO含量降低，進(jìn)而導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能紊亂、血小板聚集、白細(xì)胞和單核細(xì)胞在血管壁聚集、血栓形成，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展[5-6]。血漿ADMA水平升高參與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的眾多環(huán)節(jié)[7]，伴有心血管危險(xiǎn)因素(包括高血壓、高脂血癥、吸煙、糖尿病和高同型半胱氨酸血癥)病人均表現(xiàn)為NOS生物活性降低，ADMA升高是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)因素[2-3]。本研究結(jié)果顯示，冠心病病人血清ADMA水平較對(duì)照組增高。

DDAH2主要存在于血管內(nèi)皮細(xì)胞，血管內(nèi)皮細(xì)胞是eNOS表達(dá)的部位。DDAH2定位于6p21.3，該區(qū)域包含多個(gè)參與免疫和炎癥反應(yīng)的基因，與自身免疫性疾病易感性有關(guān)。DDAH2在ADMA代謝和心血管疾病中的作用存在爭(zhēng)議。相關(guān)研究表明，DDAH2基因變異與血清ADMA水平顯著相關(guān)[8-10]。本研究分析冠心病病人DDAH2基因-449G/C多態(tài)性對(duì)血漿ADMA水平的影響。結(jié)果顯示：攜帶DDAH2基因+GG基因型冠心病病人血漿ADMA水平較高。DDAH2基因-449G/C多態(tài)性與多種心腦血管疾病有關(guān)，包括2型糖尿病、高血壓、腦出血和休克等。DDAH2不僅直接影響血漿ADMA水平，且NO參與細(xì)胞分化或在細(xì)胞周期調(diào)控過程中發(fā)揮重要作用。但有研究顯示，DDAH2多態(tài)性與冠心病風(fēng)險(xiǎn)無關(guān)[10-11]?？傊?，DDAH2基因遺傳多態(tài)性(-449G/C，rs805305)與冠心病病人血漿ADMA水平有關(guān)。隨著年齡增長，冠心病發(fā)病率增高，且病情加重，尤其是男性50歲或女性60歲之后，冠狀動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展迅速[12-13]。本研究結(jié)果表明，冠心病病人血漿ADMA水平隨著年齡增加而逐漸升高，表明血漿ADMA水平可作為冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的新型標(biāo)志物。