MAP混懸洗滌紅細(xì)胞質(zhì)控指標(biāo)確認(rèn)*

許 茜，彭 楷，秦偉斐，廖玉英，駱展鵬

(重慶市血液中心，重慶 400052)

洗滌紅細(xì)胞是采用特定方法將保存期內(nèi)全血及懸浮紅細(xì)胞用大量等滲溶液洗滌，去除幾乎所有血漿成分和部分非紅細(xì)胞成分，并將紅細(xì)胞懸浮在氯化鈉注射液或紅細(xì)胞懸液中所制成的紅細(xì)胞成分[1]?！堆炯夹g(shù)操作規(guī)程(2019版)》(簡(jiǎn)稱(chēng)《規(guī)程2019版》)規(guī)定，如果是在密閉無(wú)菌環(huán)境中制備且最后以紅細(xì)胞保存液混懸，洗滌紅細(xì)胞保存期與洗滌前紅細(xì)胞懸液相同。但在前期抽檢懸浮紅細(xì)胞過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，儲(chǔ)存期末大多數(shù)懸浮紅細(xì)胞上清液外觀均有偏紅現(xiàn)象，與懸浮紅細(xì)胞外觀質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不符，且紅細(xì)胞在反復(fù)洗滌過(guò)程中經(jīng)多次振搖和離心后儲(chǔ)存期損傷必然加劇[2-3]。因此，在滿(mǎn)足制備工藝流程要求下確定洗滌紅細(xì)胞的最佳保存期限及相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)尤為重要。本研究探討了本中心制備的紅細(xì)胞保養(yǎng)液(MAP)混懸洗滌紅細(xì)胞的最佳保存期限及相關(guān)質(zhì)量指標(biāo)，旨在為MAP混懸洗滌紅細(xì)胞制備流程的規(guī)范化管理提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1樣本 選取2019年6月至2020年3月本中心制備的MAP混懸洗滌紅細(xì)胞107袋，其中符合國(guó)家質(zhì)量要求的1 U懸浮紅細(xì)胞77袋、2 U去白懸浮紅細(xì)胞30袋作為起始血液。

1.1.2儀器 韋氏比重儀、電子秤、SYSMEXXS-500i全自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀、OLYMPUS AU400全自動(dòng)生化儀、瑞爾達(dá)4040半自動(dòng)生化分析儀、BacT/Alert微生物監(jiān)測(cè)系統(tǒng)、BacT/Aler培養(yǎng)瓶等。

1.1.3試劑 SYSMEX血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀配套試劑、伊普諾康腦脊液/尿微量蛋白檢測(cè)試劑、瑞爾達(dá)血漿游離血紅蛋白試劑等。

1.2方法

1.2.1樣本留取 將采集的樣本稱(chēng)重后垂直懸掛于4 ℃冰箱中，于第7、14、21、35天分別觀察樣本外觀，同時(shí)，留取上清液測(cè)定溶血率。第35天檢測(cè)樣本血紅蛋白含量、比重、上清蛋白含量，以及進(jìn)行無(wú)菌試驗(yàn)。

1.2.2樣本檢測(cè)

1.2.2.1外觀檢查 肉眼觀察樣本色澤是否出現(xiàn)異常、溶血、凝塊、氣泡等情況。

1.2.2.2比重測(cè)定 參照《中華人民共和國(guó)藥典》四部通則的相對(duì)密度測(cè)定法，采用韋氏比重秤測(cè)定樣本比重[4]。

1.2.2.3容量測(cè)定 采用電子秤稱(chēng)取樣本重量，根據(jù)空袋重量和樣本比重，按容量計(jì)算公式[容量=(血液重量-空袋重量)/血液比重][1]計(jì)算樣本容量。

1.2.2.4血紅蛋白含量測(cè)定 采用SYSMEXXS-500i全自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定樣本血紅蛋白含量。

1.2.2.5上清蛋白含量測(cè)定 采用OLYMPUS AU400全自動(dòng)生化儀檢測(cè)樣本上清蛋白含量。

1.2.2.6溶血率 采用瑞爾達(dá)4040半自動(dòng)生化儀檢測(cè)樣本血漿游離血紅蛋白水平，計(jì)算溶血率。

1.2.2.7無(wú)菌試驗(yàn) 采用BacT/Alert微生物監(jiān)測(cè)系統(tǒng)取樣進(jìn)行需(厭)氧菌培養(yǎng)[1]。

2 結(jié) 果

2.1MAP混懸洗滌紅細(xì)胞比重及容量 107袋MAP混懸洗滌紅細(xì)胞比重為1.048～1.063，平均1.058±0.003；1 U洗滌紅細(xì)胞容量為133～160 mL，2 U洗滌紅細(xì)胞容量為260～312 mL。見(jiàn)表1。

表1 洗滌紅細(xì)胞容量實(shí)測(cè)結(jié)果

2.2不同儲(chǔ)存時(shí)間溶血率、外觀比較 儲(chǔ)存第7天MAP混懸洗滌紅細(xì)胞上清液均為淡黃透明的；第14天95%的上清液為淡黃透明的；第21天70%的上清液出現(xiàn)輕度溶血；第35天10%的上清液出現(xiàn)輕度溶血，70%的上清液出現(xiàn)中度溶血，20%的上清液出現(xiàn)重度溶血。21 d溶血率明顯高于14 d，35 d溶血率明顯高于21 d，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 不同儲(chǔ)存時(shí)間溶血率、外觀比較(n=107)

2.3MAP洗滌紅細(xì)胞質(zhì)量檢測(cè)情況 MAP洗滌紅細(xì)胞在制備、洗滌中各項(xiàng)指標(biāo)均符合國(guó)家質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。見(jiàn)表3。

表3 MAP洗滌紅細(xì)胞質(zhì)量檢測(cè)情況

3 討 論

洗滌紅細(xì)胞屬常用紅細(xì)胞制品之一，可降低患者輸血后產(chǎn)生的不適應(yīng)，是提高部分疾病救治率和提高患者生活質(zhì)量的重要方式。主要用于自身免疫性溶血性貧血、高鉀血癥、血漿蛋白過(guò)敏及陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿患者。近年來(lái)，臨床對(duì)洗滌紅細(xì)胞的需求呈明顯增多趨勢(shì)[5-7]。本中心以往制備洗滌紅細(xì)胞時(shí)使用0.9%氯化鈉溶液懸浮，其保存期僅為24 h，醫(yī)院需提前預(yù)約后再進(jìn)行制備，不能滿(mǎn)足臨床急診患者的需求，從而極大地限制了洗滌紅細(xì)胞的應(yīng)用。MAP為紅細(xì)胞代謝提供了所需的能量物質(zhì)，可使紅細(xì)胞保存期延長(zhǎng)至35 d[8]。利用MAP懸浮，可延長(zhǎng)洗滌紅細(xì)胞保存期，從而建立洗滌紅細(xì)胞儲(chǔ)備庫(kù)，及時(shí)為臨床應(yīng)用提供血液資源，滿(mǎn)足患者治療需求[9]。

《規(guī)程2019版》規(guī)定，每單位洗滌完畢后的紅細(xì)胞中可加入MAP 50 mL或適量生理鹽水，混勻保存。有研究表明，以MAP作為保養(yǎng)液的洗滌紅細(xì)胞容量均高于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)[10]。若以國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)作為洗滌紅細(xì)胞容量的判斷依據(jù)，不可避免會(huì)丟棄一些紅細(xì)胞，造成血液資源浪費(fèi)。容量主要與血液比重相關(guān)，不同制備工藝流程，其血液比重也會(huì)產(chǎn)生差異。為確保洗滌紅細(xì)胞容量標(biāo)準(zhǔn)相對(duì)精確，須測(cè)定MAP混懸洗滌紅細(xì)胞比重。本研究測(cè)定的比重為1.048～1.063，平均1.058±0.003，并以此作為洗滌紅細(xì)胞比重標(biāo)準(zhǔn)，通過(guò)計(jì)算得出1 U洗滌紅細(xì)胞容量為133～160 mL，2 U洗滌紅細(xì)胞容量為260～312 mL，與《全血及成分血質(zhì)量要求》(GB18469-2012)的洗滌紅細(xì)胞容量(1 U為112.5～137.5 mL，2 U為225～275 mL)相比，下限增高，容量范圍增大，更加適合本中心實(shí)際工作。

《規(guī)程2019版》規(guī)定，如果在密閉無(wú)菌環(huán)境中制備且最后以紅細(xì)胞保存液混懸，洗滌紅細(xì)胞保存期與洗滌前紅細(xì)胞懸液相同。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，懸浮紅細(xì)胞[11]及去白懸浮紅細(xì)胞[12]在制備時(shí)需要進(jìn)行離心及過(guò)濾等處理，與同期全血比較，其溶血率明顯偏高。然而，洗滌紅細(xì)胞在制備過(guò)程中還要經(jīng)過(guò)鹽水洗滌等機(jī)械性損傷，其溶血率變化更加顯著。本研究對(duì)儲(chǔ)存第7、14、21、35天溶血率和其他質(zhì)控指標(biāo)進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果顯示，隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng)溶血率逐漸提高，21 d溶血率明顯高于14 d，35 d溶血率明顯高于21 d，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。儲(chǔ)存期第1～14天MAP混懸洗滌紅細(xì)胞上清液外觀均正常；第21天大多數(shù)MAP混懸洗滌紅細(xì)胞上清液呈輕度溶血；第35天大多數(shù)MAP混懸洗滌紅細(xì)胞上清液呈中度溶血。雖然MAP混懸洗滌紅細(xì)胞在保存期(35 d)內(nèi)血紅蛋白含量、上清蛋白含量、溶血率及無(wú)菌試驗(yàn)均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，但考慮到血液制品外觀要求和血液輸注后效果，本中心將MAP混懸洗滌紅細(xì)胞的最佳保存期確定為14 d，與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果相似[13]。

綜上所述，隨著近年來(lái)輸血醫(yī)療技術(shù)的不斷提高，為更好地滿(mǎn)足臨床需求，本研究按規(guī)程及標(biāo)準(zhǔn)要求并結(jié)合本中心實(shí)際確定了MAP混懸洗滌紅細(xì)胞的內(nèi)控質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和最佳保存期限。既為工作人員提供了實(shí)際可行的數(shù)據(jù)，又為臨床提供了便利。開(kāi)展MAP混懸洗滌紅細(xì)胞的制備具有重要的臨床意義，值得推廣應(yīng)用。