阿扎胞苷治療老年骨髓增生綜合征患者的效果及對(duì)TET2、SALL4水平的影響*

陳桂枝, 沈建平, 郎香花, 朱佩禎, 王益群

1永康市第一人民醫(yī)院急診重癥監(jiān)護(hù)室(浙江永康 321300)； 2浙江省中醫(yī)院血液科(浙江杭州 310000)

老年骨髓增生綜合征(myelodysplastic syndrome，MDS)是一組惡性克隆性干細(xì)胞或祖細(xì)胞性疾病，主要以無(wú)效造血所導(dǎo)致的難治性血細(xì)胞減少和極容易發(fā)展為急性白血病為特征[1]。楊波等[2]研究中，MDS在老年中的發(fā)病率最高，平均發(fā)病年齡60～76歲，大約4～10萬(wàn)的總體發(fā)病率，老年人群中發(fā)病率70歲以上已經(jīng)高達(dá)20以上。在血液系統(tǒng)惡性疾病當(dāng)中老年MDS非常常見，其中白細(xì)胞減少、異質(zhì)性增強(qiáng)、骨髓造血功能下降為只要臨床表現(xiàn)。國(guó)內(nèi)研究中認(rèn)為，使用遺傳學(xué)藥物在老年MDS應(yīng)用中耐受性不高，并且會(huì)使老年患者降低免疫力，臨床療效不明顯[3]。阿扎胞苷屬于一種嘧啶核苷胞苷的類似物，可以影響分化細(xì)胞、基因表達(dá)和脫氧核糖核酸的合成與代謝，產(chǎn)生細(xì)胞毒性，而這種細(xì)胞毒可以促死快速分裂的細(xì)胞，包括惡性腫瘤細(xì)胞[4]。因此本文研究阿扎胞苷治療老年MDS的臨床效果及對(duì)患者甲基胞嘧啶雙加氧酶-2(TET2)、婆羅雙樹樣基因-4(Aal-Like 4,SALL4)水平的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年2月至2019年5月在我院接受治療的80例老年MDS患者；按照完全隨機(jī)法分為阿扎胞苷組、地西他濱組各40例。阿扎胞苷組患者男22例，女18例，年齡60～78歲，平均(68.5±7.3)歲，病程1～6年，平均(3.6±2.5)年；地西他濱組患者男21例，女19例，年齡61～79歲，平均(67.2±6.1)歲，病程1～8年，平均(4.2±3.1)年。兩組患者一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。診斷標(biāo)準(zhǔn)：所有納入病例西醫(yī)診斷均要符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)血液科分會(huì)2012年《骨髓增生異常綜合征診斷與治療專家共識(shí)》診斷標(biāo)準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：符合MDS西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)，所有患者及家屬對(duì)本研究均知情，并簽署知情同意書。

排除標(biāo)準(zhǔn)：患有精神疾病者；心腎肺功能不完全者；患有血液系統(tǒng)或非血液系統(tǒng)腫瘤者；對(duì)本研究藥物阿扎胞苷、地西他濱過(guò)敏者。

主要藥物：阿扎胞苷注射劑(Baxter Oncology GmbH，批準(zhǔn)文號(hào)：注冊(cè)證號(hào)H20170238,規(guī)格：100 mg),地西他濱注射劑(正大天晴藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H20143382,規(guī)格：10 mg)。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 對(duì)阿扎胞苷組患者使用阿扎胞苷注射劑進(jìn)行治療，皮下注射，75 mg/(m2·d),28 d為1個(gè)療程。對(duì)地西他濱組患者使用地西他濱注射劑進(jìn)行治療，靜脈輸注3 h以上，15 mg/m2,每8 h 1次，連續(xù)3 d，每6周為1個(gè)周期。兩組患者均治療8個(gè)月，觀察治療效果。

1.2.2 檢測(cè)TET2、SALL4水平 使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測(cè)TET2、SALL4水平，抽取患者空腹清晨血液5 mL,離心處理，取血清，待測(cè)。緩沖液把使用50 mmol/L碳酸鹽包的抗原進(jìn)行溶解，為濃度10～20 μg/mL，將100 μL/孔加入96孔酶標(biāo)板中，過(guò)夜保存4℃。第2天舍棄包被液，使用PBST洗3次，將1%的150 μL BSA加入每個(gè)孔中，封閉在37℃環(huán)境中1 h。使用PBST洗滌3次，在每個(gè)孔中加入100 μL不同倍比稀釋度的血清，加入對(duì)照樣品，37℃孵育2 h。使用PBST洗滌5次,加入100 μL稀釋后的HRP標(biāo)記的二抗，在37℃孵育1 h。PBST洗滌5次，使用顯色劑顯色20 min后，在酶標(biāo)儀上讀取A405吸收值。

1.2.3 血常規(guī)檢測(cè) 將采集后的血清樣本，使用全自動(dòng)凝血分析儀對(duì)血紅蛋白(Hb)、骨髓有核細(xì)胞(all nucleated cells,ANC)、血小板(Plt)檢測(cè)，嚴(yán)格按照儀器說(shuō)明書進(jìn)行操作，并進(jìn)行比較。

1.2.4 檢測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)水平 將采集后的血清樣本，將化學(xué)發(fā)光物質(zhì)加入，與氧化劑發(fā)生氧化反應(yīng)，與催化劑發(fā)生催化反應(yīng)，之間體激發(fā)狀態(tài)形成時(shí)，當(dāng)中間體達(dá)到穩(wěn)定時(shí)，光子被發(fā)射出，操作步驟嚴(yán)格按照化學(xué)發(fā)光分析儀進(jìn)行，使用發(fā)光信號(hào)測(cè)量?jī)x測(cè)量光子數(shù)值，對(duì)比分析兩組血清VEGF水平。

1.2.5 治療效果評(píng)估 將兩組治療效果分為顯效、有效、無(wú)效3個(gè)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。顯效：臨床癥狀完全消失，骨髓增生程度恢復(fù)正常；有效：臨床癥狀明顯減輕，血常規(guī)檢查部分恢復(fù)正常；無(wú)效：臨床癥狀不但沒有減輕反而加重。

1.2.6 不良反應(yīng)發(fā)生率 統(tǒng)計(jì)兩組患者合并感染、胃腸不適、惡心、呃逆、肝功能損傷等不良反應(yīng)，并作出比較。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者TET2、SALL4水平比較 治療前兩組患者TET2、SALL4水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后兩組患者TET2水平升高，且阿扎胞苷組患者TET2水平高于地西他濱組(P<0.05);兩組患者SALL4水平均降低，且阿扎胞苷組患者SALL4水平低于地西他濱組(P<0.05)。見表1。

表1 兩組患者TET2、SALL4水平比較

2.2 兩組患者血常規(guī)比較 兩組患者治療前Hb、ANC、Plt比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后兩組患者Hb、ANC、Plt均升高，且阿扎胞苷組患者血常規(guī)指標(biāo)高于地西他濱組(P<0.05)。見表2。

表2 兩組患者血常規(guī)比較

2.3 兩組患者VEGF水平比較 治療前兩組患者VEGF水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后兩組患者VEGF水平均降低，且阿扎胞苷組患者VEGF水平低于地西他濱組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 兩組患者VEGF水平比較

2.4 兩組患者治療效果比較 阿扎胞苷組患者治療總有效率高于地西他濱組患者治療總有效率(2=7.813，P=0.005)。見表4。

表4 兩組患者治療效果比較 例(%)

2.5 兩組患者不良反應(yīng)發(fā)生率比較 阿扎胞苷組患者合并感染、胃腸不適、惡心、呃逆、肝功能損傷等不良反應(yīng)發(fā)生率低于地西他濱組患者(2=5.000，P=0.025)。見表5。

表5 兩組患者不良反應(yīng)發(fā)生率比較 例

3 討論

老年MDS屬于異質(zhì)性造血干細(xì)胞疾病，臨床表現(xiàn)為多樣化，預(yù)后不佳還會(huì)導(dǎo)致為急性髓細(xì)胞白血病[5-6]。艾昊等[7]和冷青等[8]研究中顯示，臨床主張對(duì)老年MDS分層治療，以支持治療為主的為低危、中危類老年MDS患者，免疫抑制治療為輔助治療，選擇去甲基化藥物聯(lián)合化療為老年MDS高危患者[9]。老年MDS患者由于體能低下，臟器功能缺陷只能選擇支持治療[10]。阿扎胞苷可以促進(jìn)脫氧核糖核酸去甲基化，促進(jìn)造血干細(xì)胞分化[11]。王文明等[12]研究中顯示，阿扎胞苷在治療老年MDS患者中，主要不僅可以對(duì)脫氧核糖核酸去甲基化，還可以對(duì)骨髓異常造血細(xì)胞的直接細(xì)胞毒作用。阿扎胞苷在低甲基化時(shí)可以把過(guò)度甲基化的抑癌基因的正常功能進(jìn)行恢復(fù)，細(xì)胞毒作用就可以殺傷腫瘤細(xì)胞在內(nèi)的快速分裂細(xì)胞[13]。

TET2是TET精華高度保守的家族成員之一，可以催化脫氧核糖核酸去甲基化反應(yīng)[14]。張睿等[15]研究中顯示，在老年MDS患者治療中，TET2越高老年MDS患者對(duì)去甲基化的反應(yīng)率越高，其中包括治療效果。SALL4是一種過(guò)蠅婆羅雙樹的同源基因，可以調(diào)節(jié)分化胚胎干細(xì)胞具有重要意義[16]。張鵬等[17]研究中顯示，SALL4在造血功能中，隨著血細(xì)胞分化發(fā)育成熟表達(dá)水平也跟著降低，在成熟的血細(xì)胞中甚至不表達(dá)，在血液系統(tǒng)腫瘤中則表達(dá)水平會(huì)異常升高。楊軻等[18]研究中顯示，在老年MDS患者中SALL4表達(dá)顯著升高，尤其在中危期和高危期中。本研究結(jié)果顯示，使用阿扎胞苷對(duì)老年MDS進(jìn)行治療后，老年MDS患者TET2水平升高，SALL4水平降低，說(shuō)明使用阿扎胞苷治療老年MDS可以調(diào)控TET2、SALL4水平，從而達(dá)到良好的治療效果。

劉煒洋等[19]研究中顯示，阿扎胞苷在治療老年MDS患者中，可促進(jìn)造血干細(xì)胞分化，激活沉默基因，是患者感染、出血風(fēng)險(xiǎn)降低。本研究顯示，使用阿扎胞苷對(duì)老年MDS進(jìn)行治療后，老年MDS患者Hb、ANC、PLT水平均升高，說(shuō)明使用阿扎胞苷治療老年MDS患者，可以調(diào)控血常規(guī)指標(biāo)，從而達(dá)到改善血常規(guī)的效果。

阿扎胞苷可以通過(guò)抑制脫氧核糖核酸甲基化轉(zhuǎn)移酶，激活基因，導(dǎo)致細(xì)胞分化、凋亡，從而使細(xì)胞惡性克隆性增生減少，達(dá)到改患者病情的效果[20]。因此本研究顯示，使用阿扎胞苷對(duì)老年MDS進(jìn)行治療后，VEGF水平降低，說(shuō)明使用阿扎胞苷治療老年MDS可以降低患者VEGF水平。

本研究結(jié)果顯示，使用阿扎胞苷對(duì)老年MDS進(jìn)行治療后，患者合并感染、胃腸不適、惡心、呃逆、肝功能損傷等不良反應(yīng)發(fā)生率均降低，說(shuō)明使用阿扎胞苷治療老年MDS可以降低患者不良反應(yīng)發(fā)生率。

本研究結(jié)果顯示，使用阿扎胞苷治療老年MDS治療總有效率高于地西他濱治療老年MDS的治療總有效率，說(shuō)明使用阿扎胞苷治療老年MDS可以提高患者治療有效率。

綜上所述，阿扎胞苷治療老年MDS可以提高TET2水平，降低SALL4水平，降低VEGF水平，改善血常規(guī)及患者合并感染、胃腸不適、惡心、呃逆、肝功能損傷等不良反應(yīng)發(fā)生，提高有效率，效果顯著。