厄貝沙坦氫氯噻嗪片劑有關(guān)物質(zhì)的方法學(xué)研究

摘要：目的：建立HPLC法測定厄貝沙坦氫氯噻嗪片有關(guān)物質(zhì)的方法。方法：色譜柱：Agilent ZORBAX SB-CN柱（5μm，4.6×250 mm）;流動相：磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鉀1.36g，加水900mL，加入三乙胺2mL，用磷酸調(diào)pH值至3.0，加水稀釋至1000mL）-甲醇-乙腈（44：34：22）;流速：1.5mL/min;檢測波長：220nm。結(jié)果：主峰位置未受雜質(zhì)影響，主峰和雜質(zhì)峰能較分離。結(jié)論：本法測定厄貝沙坦氫氯噻嗪片劑有關(guān)物質(zhì)，方法簡便、快速、結(jié)果準(zhǔn)確，專屬性好，適用于厄貝沙坦氫氯噻嗪片的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法;厄貝沙坦氫氯噻嗪片;有關(guān)物質(zhì)

高血壓是引起冠心病、心梗、腦梗等多種心腦血管疾病的危險因素[1]。厄貝沙坦氫氯噻嗪片是由血管緊張素-Ⅱ受體拮抗劑厄貝沙坦和噻嗪類利尿藥氫氯噻嗪組成的復(fù)方制劑，比其中任何單一藥物成分的降壓作用都更有效，用于原發(fā)性高血壓的治療，特別是單一治療療效不佳的高血壓[2～3]。兩種藥物的降壓機(jī)制不同，組成固定劑量的復(fù)方制劑后可以協(xié)同降壓、增強(qiáng)降壓效果，且能互相補(bǔ)充其不足，減少或抵消單藥長期用藥可能出現(xiàn)的不良反應(yīng)。因此，兩種藥物組成復(fù)方制劑具有較多優(yōu)勢。

高效液相色譜法具有操作簡便、專屬性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好等優(yōu)點，因此選擇高效液相色譜法測定厄貝沙坦氫氯噻嗪片的有關(guān)物質(zhì)，藥品分析方法的質(zhì)量直接影響著藥品標(biāo)準(zhǔn)的質(zhì)量。故建立有關(guān)物質(zhì)測定方法之后，仍需通過一系列的試驗來驗證該方法的可行性[4～5]，從而為厄貝沙坦氫氯噻嗪片在治療人類疾病中保證其安全性、有效性和可控性提供科學(xué)的依據(jù)。

1實驗儀器與試藥

Agilent 1100高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）;電子天平CPA225D（梅特勒-托利多公司）;厄貝沙坦（批號：100607-201202，中國食品藥品檢定研究院）、氫氯噻嗪（批號：100309-201404，中國食品藥品檢定研究院）、厄貝沙坦有關(guān)物質(zhì)A和氫氯噻嗪有關(guān)物質(zhì)A對照品均由齊魯制藥（海南）有限公司提交提供;厄貝沙坦氫氯噻嗪片（齊魯制藥（海南）有限公司，批號為C1L1308004、C1L1308005、C1L1308006）。

2方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗

流動相：磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鉀1.36g，加水900mL，加入三乙胺2mL，用磷酸調(diào)pH值至3.0，加水稀釋至1000mL）-甲醇-乙腈（44：34：22）;色譜柱：Agilent ZORBAX SB-CN柱（5μm，4.6×250 mm）;流速：1.5mL/min;檢測波長：220nm;進(jìn)樣量：10μL;柱溫：30℃。

2.2 溶液的配制

pH2.0的水溶液：量取水500mL，用磷酸調(diào)pH值至2.0。

稀釋溶液：甲醇-pH2.0的水溶液（70：30）。

厄貝沙坦對照品儲備液：精密稱取厄貝沙坦對照品30mg，置50mL量瓶中，加甲醇至量瓶容積的20%使溶解，再加稀釋溶液稀釋至刻度，搖勻。

氫氯噻嗪對照品儲備液：精密稱取氫氯噻嗪對照品20mg，置200mL量瓶中，加甲醇至量瓶容積的5%使溶解，再加稀釋溶液稀釋至刻度，搖勻。

系統(tǒng)適用性溶液：精密稱取厄貝沙坦有關(guān)物質(zhì)A對照品5mg，置50mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液（1）。精密稱取氫氯噻嗪有關(guān)物質(zhì)A對照品10mg，置200mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液（2）。精密量取厄貝沙坦對照品儲備液8mL、氫氯噻嗪對照品儲備液5mL和上述儲備液（1）1mL、儲備液（2）6mL，置同一100mL量瓶中，加稀釋溶液稀釋至刻度，搖勻。見圖1。

上述試驗結(jié)果表明：氫氯噻嗪有關(guān)物質(zhì)A、氫氯噻嗪、厄貝沙坦有關(guān)物質(zhì)A和厄貝沙坦依次出峰，厄貝沙坦峰和其有關(guān)物質(zhì)A峰的分離度為6.5（應(yīng)不小于1.7），氫氯噻嗪峰和其有關(guān)物質(zhì)A峰的分離度為3.6（應(yīng)不小于1.7），均符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

2.2.1 專屬性試驗

供試品溶液：精密稱取細(xì)粉0.25g，置100mL量瓶中，加pH值2.0的水溶液至量瓶容積的30%，超聲10min并每隔3min振搖一次;再加甲醇至量瓶容積的90%，超聲5min并隔2min振搖一次，再振搖15min，用甲醇稀釋至刻度，搖勻;取上述溶液適量，以4000r/min離心10min，精密量取上清液3mL，置20mL量瓶中，用稀釋溶液稀釋至刻度，搖勻。

混合輔料：按處方比例取混合輔料約90mg，精密稱定，置100mL量瓶中，配制方法同供試品溶液。

結(jié)果顯示，混合輔料和空白溶劑對樣品的測定沒有干擾。

2.2.2 破壞性試驗

破壞試驗結(jié)果顯示，在各種極限條件下進(jìn)行破壞，主藥呈現(xiàn)不同程度的降解。

（1）1N HCl/2h酸破壞，在保留時間約為7.0min、14.1min和19.7min處有新的雜質(zhì)生成。各雜質(zhì)峰和主峰均能完全分離。（2）1N NaOH/2h堿破壞，在保留時間約為7.0min、12.9min、14.2min和19.7min處有新的雜質(zhì)生成，所有雜質(zhì)峰和主峰均能完全分離。（3）10%H2O2/1h、氧化破壞，在保留時間約為7.0min和14.2min處有新的雜質(zhì)生成，所有雜質(zhì)峰和主峰均能完全分離。（4）105℃/2h高溫破壞，在保留時間約為7.0min、14.1min和18.5min處有新的雜質(zhì)生成，所有雜質(zhì)峰和主峰均能完全分離。

日光照射/24h破壞，在保留時間約為7.0min處有新的雜質(zhì)生成，所有雜質(zhì)峰和主峰均能完全分離。

結(jié)果表明，樣品經(jīng)酸、堿、氧化、加熱和光照破壞后，采用所建立的色譜方法進(jìn)行測定，各降解產(chǎn)物、輔料和主藥所對應(yīng)的色譜峰分離良好。

2.2.3 重復(fù)性試驗

供試品溶液：按照專屬性試驗項下供試品溶液的制備方法。平行制備六份樣品。

結(jié)果顯示，重復(fù)性試驗六份樣品的結(jié)果均為0.1%，符合方法學(xué)驗證的要求。

2.2.4 穩(wěn)定性試驗

取重復(fù)性試驗項下的J1樣品，進(jìn)行樣品穩(wěn)定性考察。分別于0、2、4、6和10h進(jìn)樣分析，計錄色譜圖。見表2。

結(jié)果顯示，樣品在配置后10h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.5 線性關(guān)系考察

主藥混和對照品溶液：精密量取厄貝沙坦對照品儲備液4ml和氫氯噻嗪對照品儲備液2ml，置同一10ml量瓶中，加稀釋溶液稀釋至刻度，搖勻。分別進(jìn)樣2ul、5ul、8ul、10ul、20ul、30ul和50ul。記錄色譜圖，結(jié)果見圖2、圖3。

雜質(zhì)混和對照品溶液：精密量取氫氯噻嗪有關(guān)物質(zhì)A儲備液2ml和厄貝沙坦有關(guān)物質(zhì)A儲備液4ml，置500ml量瓶中，加稀釋劑稀釋至刻度，搖勻。分別進(jìn)樣2ul、5ul、8ul、10ul、20ul、30ul和50ul。記錄色譜圖，結(jié)果見圖4、圖5。

試驗測得氫氯噻嗪線性回歸方程為Y=4.2974X+5.7586，R2=1.0000，結(jié)果表明：本品濃度在40.960～1024.0ng范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。測得厄貝沙坦線性回歸方程Y=2.4537X+29.5368，R2=1.0000，結(jié)果表明：本品濃度在487.680～12192ng范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。測得氫氯噻嗪有關(guān)物質(zhì)A線性回歸方程為Y=4.9466X+0.1422，R2=0.9999，結(jié)果表明：本品濃度在0.406～10.150ng范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。測得厄貝沙坦有關(guān)物質(zhì)A線性回歸方程Y=2.0711X-1.8157，R2=0.9997，結(jié)果表明：本品濃度在1.757～43.920ng范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.3 樣品的有關(guān)物質(zhì)測定

上述方法學(xué)驗證結(jié)果表明，有關(guān)物質(zhì)測定的方法切實、可行。三批樣品依標(biāo)準(zhǔn)檢驗。見表3。

3結(jié)論

本實驗采用高效液相色譜法，對氫氯噻嗪有關(guān)物質(zhì)A、厄貝沙坦有關(guān)物質(zhì)A以及單個未知雜質(zhì)和總雜質(zhì)進(jìn)行了控制。經(jīng)方法學(xué)驗證，輔料不干擾測定，專屬性及重復(fù)性均符合中國藥典的規(guī)定;穩(wěn)定性試驗結(jié)果表明，供試品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定。經(jīng)檢驗，三批樣品均未檢出厄貝沙坦有關(guān)物質(zhì)A及其他單個未知雜質(zhì)，總雜分別為0.1%、0.1%和0.1%，結(jié)果均符合規(guī)定。

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