不同廠家及批次的復(fù)方丹參制劑的質(zhì)量考察研究

張偲偲，李雯珊，王德勤，李楚源，匡艷輝

(廣州白云山和記黃埔中藥有限公司·廣東廣州·510515）

復(fù)方丹參片是《中國(guó)藥典》2015 年Ⅰ部收載品種，由丹參、三七、冰片3 味藥組成，具有活血化瘀，理氣止痛的功效，用于氣滯血瘀所致的胸痹，癥見(jiàn)胸悶，心前區(qū)刺痛；冠心病心絞痛見(jiàn)上述征候者。在臨床使用和實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)[1-6]，本品國(guó)內(nèi)生產(chǎn)廠家眾多，不同廠家生產(chǎn)的不同批次的復(fù)方丹參片的質(zhì)量和療效存在一定差異。本研究參照2015 版《中國(guó)藥典》[7]，以高效液相色譜法法（HPLC）和氣相色譜法（GC）[8,9]分別對(duì) 43 個(gè)廠家總計(jì)121 批次的復(fù)方丹參制劑進(jìn)行了含量測(cè)定， 對(duì)比不同廠家產(chǎn)品的質(zhì)量差異。

1 儀器與試藥

Agilent 1260 高效液相色譜儀、Agilent 7890A 氣相色譜儀； 電子分析天平 （瑞士沙多利斯Sartorius 公司）；CP225D 電子分析天平 （瑞士沙多利斯Sartorius公司）；丹參酮ⅡA（批號(hào) 110766-200619）；丹酚酸 B（批號(hào) 111562-201110）；人參皂苷 Rg1（批號(hào) 110745-200617）、人參皂苷 Rb1（批號(hào) 110704-201122）、三七皂苷 R1（批號(hào) 110745-200415）、人參皂苷 Re（批號(hào)110754-200320）均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；復(fù)方丹參制劑產(chǎn)品 （43 個(gè)廠家總計(jì)121 批次， 薄膜衣片）；甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 丹參酮ⅡA 的含量測(cè)定

2.1.1 色譜條件

Waters SunFire R C18色譜柱 （5μm，4.8×250mm）；流動(dòng)相： 甲醇-水 （73∶27）， 流速 1ml/min， 檢測(cè)波長(zhǎng)270nm。

2.1.2 溶液的制備

對(duì)照品溶液的制備： 精密稱(chēng)取丹參酮ⅡA 對(duì)照品適量， 加甲醇溶解制成每1mL 含丹參酮ⅡA 0.084μg的溶液。

供試品溶液的制備：取復(fù)方丹參片10 片，去衣后精密稱(chēng)定，研細(xì)，精密稱(chēng)取約1g 置具塞棕色量瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，稱(chēng)定重量，超聲處理（功率250W，頻率 33kHz）15min，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，置棕色瓶中，即得。

分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl,注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

2.2 丹酚酸B 的含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件

Waters SunFire R C18色譜柱 （5μm，4.8×250mm）；流動(dòng)相：乙腈-甲醇-甲酸-水（10∶30∶1∶59），流速 1ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)286nm。

2.2.2 溶液的制備

對(duì)照品溶液的制備： 取丹酚酸B 對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻。 即制成每1ml含丹酚酸B 0.1212mg 的溶液。

供試品溶液的制備：取復(fù)方丹參片10 片，去衣后精密稱(chēng)定，研細(xì)，精密稱(chēng)取約0.15g，置50ml 量瓶中，加水適量，超聲處理（功率 300W，頻率 50kHz）30min，放冷，加水至刻度，搖勻，離心，取上清液，即得。

分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl,注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

2.3 三七皂苷的含量測(cè)定

2.3.1 色譜條件

Waters SunFire R C18色譜柱 （5μm，4.8×250mm）；流動(dòng)相：乙腈（A）-水，梯度洗脫：0~35min，19%A；35~55min，19-29%A；55~70min，29%A；70~100min，29-40%A。 流速 1ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng) 203 nm。

2.3.2 溶液的制備

對(duì)照品溶液的制備：精密稱(chēng)定人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、 三七皂苷R1 和人參皂苷Re 對(duì)照品適量，加70%甲醇制成每1ml 含人參皂苷Rg1， 人參皂苷Rb1， 三 七 皂 苷 R1、 人 參 皂 苷 Re 各 0.2014mg，0.2022mg，0.05mg，0.0502mg 的混合溶液，即得。

供試品溶液的制備：取復(fù)方丹參片10 片，去衣后精密稱(chēng)定，研細(xì)，精密稱(chēng)取約1g，精密加入70%甲醇50ml，稱(chēng)定重量，超聲處理（功率250W，頻率 33kHz）30min，放冷，再稱(chēng)定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

三七皂苷按照人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1 和人參皂苷Re 總量計(jì)。

2.4 冰片的含量測(cè)定

2.4.1 色譜條件

DB-FFAP 毛細(xì)管柱（0.25μm，0.32mm×30m，柱溫為110℃，進(jìn)樣口溫度為200℃，檢測(cè)器溫度200℃，分流比為 1∶1。

2.4.2 溶液的制備

對(duì)照品溶液的制備：精密稱(chēng)定異龍腦、龍腦對(duì)照品適量， 加無(wú)水乙醇制成每1ml 各含0.2mg、0.3mg 的混合對(duì)照品溶液。

供試品溶液的制備：取復(fù)方丹參片10 片，去衣后精密稱(chēng)定，研細(xì)，精密稱(chēng)取約0.2g，置錐形瓶中，精密加入無(wú)水乙醇10ml， 稱(chēng)定重量， 超聲處理15min （功率350W，頻率37kHz），放冷，用無(wú)水乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液2μl 注入氣相色譜儀， 理論板數(shù)按照龍腦峰計(jì)算不低于3000。測(cè)定，即得。 冰片含量按照異龍腦、龍腦總量計(jì)。

2.5 線性關(guān)系的考察

分別精密吸取對(duì)照品溶液（丹參酮ⅡA、丹酚酸B、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1 和人參皂苷Re）不同體積進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，丹參酮ⅡA、丹酚酸B、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1、人參皂苷Re、異龍腦和龍腦的線性方程見(jiàn)表1。

表1 丹參酮ⅡA、丹酚酸B、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1 和人參皂苷Re 的線性方程

2.6 精密度試驗(yàn)

對(duì)于樣品A1 號(hào)，按照上述色譜條件，連續(xù)測(cè)定6次， 結(jié)果 6 次平均含丹參酮ⅡA 為 0.3723mg/片，RSD為 0.77% ； 含 丹 酚 酸 B 為 14.5775mg/片 ，RSD 為0.93%； 含 人 參 皂 苷 Rg1 為 1.3801mg/片 ，RSD 為0.67%，人參皂苷 Rb1 為 1.1139mg/片，RSD 為 1.03%，三七皂苷 R1 為 0.2785mg/片，RSD 為 1.39%，人參皂苷Re 為 0.1823mg/片 ，RSD 為 0.84% ； 含 龍 腦 為1.5932mg/片，RSD 為 0.68%， 異龍腦為 0.9701 mg/片，RSD 為0.89%。試驗(yàn)表明，以上使用的方法精密度均較好。

2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

對(duì)于樣品A1 號(hào)，按照測(cè)定方法平行測(cè)定6 次，結(jié)果含丹參酮ⅡA 為 0.3784mg/片，RSD 為 0.63%； 含丹酚酸B 為 14.6185mg/片，RSD 為 0.53%； 含人參皂苷Rg1 為 1.3773mg/片，RSD 為 0.81%， 人參皂苷 Rb1 為1.1197mg/片 ，RSD 為 1.21% ， 三 七 皂 苷 R1 為0.2813mg/片 ，RSD 為 1.15% ， 人 參 皂 苷 Re 為0.1765mg/片，RSD 為 0.97%； 含龍腦為 1.6001mg/片，RSD 為 0.54%，異龍腦為 0.9583 mg/片，RSD 為 0.43%。試驗(yàn)表明，以上使用的方法重復(fù)性均較好。

2.8 穩(wěn)定性考察

對(duì)于樣品 A1 號(hào)，在 1、2、4、8、12、24h 按照測(cè)定方法測(cè)定，在24h 內(nèi)丹參酮ⅡA 的RSD 為0.71%；丹酚酸 B 的 RSD 為 0.87%； 含人參皂苷 Rg1 的 RSD 為1.12%，人參皂苷Rb1 的 RSD 為1.21%，三七皂苷 R1的 RSD 為0.68%，人參皂苷 Re 的RSD 為 1.33%；龍腦的RSD 為1.04%，異龍腦的RSD 為1.26%。 表明以上被測(cè)物質(zhì)穩(wěn)定。

2.9 樣品含量測(cè)定

按照2.1 到2.4 項(xiàng)下色譜條件檢測(cè)，每個(gè)樣品進(jìn)樣3 次，把測(cè)定的峰面積平均值代入2.5 項(xiàng)下的線性方程求得各個(gè)樣品中被測(cè)成分的含量見(jiàn)表2。

表2 不同廠家復(fù)方丹參制劑的含量測(cè)定結(jié)果

注：1. 108-121 為A43 廠家的滴丸劑型， 只檢測(cè)了冰片含量。2. 《中國(guó)藥典》2015 年版1 部規(guī)定復(fù)方丹參片中，本每片含丹參以丹參酮ⅡA 計(jì)，薄膜衣小片（0.32g/片）和糖衣片不得少于0.20mg；薄膜衣大片不得少于0.60mg。 以丹酚酸B=計(jì)，薄膜衣小片（0.32g/片）和糖衣片不得少于5.0mg；薄膜衣大片不得少于15.0mg。 三七皂苷按照人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1 和人參皂苷Re 總量計(jì)，薄膜衣小片（0.32g/片）和糖衣片不得少于6.0mg，薄膜衣大片（0.8g/片）不得少于18.0mg。58 和 103 號(hào)樣品為薄膜衣大片，80、81 和 105 樣品為糖衣片。

3 結(jié)果與討論

3.1 不同廠家復(fù)方丹參片中丹參酮ⅡA、 丹酚酸B 及三七總皂苷含量比較

本研究在市面上收集了43 個(gè)廠家總計(jì)121 批次的樣品，其中包括107 批次的復(fù)方丹參片及14 批次的復(fù)方丹參滴丸，對(duì)其中丹參酮ⅡA、丹酚酸B、三七總皂苷、冰片的含量進(jìn)行了對(duì)比研究，發(fā)現(xiàn)除丹參酮ⅡA 以外的其他指標(biāo)均有不達(dá)標(biāo)的批次，其中丹酚酸B 不合格的批次較少，僅3 個(gè)廠家的3 個(gè)批次（序號(hào)38-廠家A3-批次161010-3.74mg/片； 序號(hào)90-廠家A29-批次20161001015-4.72 mg/片， 序號(hào) 102-廠家 A38-批次151103-4.28 mg/片）。三七總皂苷含量有較多批次不合格，有11 個(gè)廠家的15 個(gè)批次，詳見(jiàn)表3。 說(shuō)明不同廠家之間的質(zhì)量差異相差很大。 即使同一廠家的不同批次的復(fù)方丹參片的質(zhì)量也會(huì)存在較大差異， 有效成分含量相差較大。

表3 三七總皂苷不合格的廠家及批次

3.2 不同廠家復(fù)方丹參片中冰片含量比較

本研究同時(shí)對(duì)冰片的含量進(jìn)行了研究， 不同廠家的冰片含量差異較大， 按照處方量計(jì)算每天服用冰片的量應(yīng)該為72mg，實(shí)際結(jié)果基本均未達(dá)標(biāo)，這與冰片本身容易揮發(fā)有較大的關(guān)系。在冰片含量均一性方面，量高的達(dá)到96mg，而低的則只有5mg，總計(jì)了100 多批復(fù)方丹參制劑的龍腦含量RSD 值接近50%，說(shuō)明不同廠家的冰片含量差異極大。 同時(shí)考察了同廠家不同批次之間的差異， 廠家A43 的含量RSD 值為2.51%，廠家 A4 的含量 RSD 值為 3.58%， 廠家 A2 的含量RSD 值為 8.15%，廠家A1 的含量RSD 值為7.43%，廠家A5 的含量RSD 值為21.73%，由此可見(jiàn)同廠家不同批次之間差異大的RSD 值大于20%， 差異小的RSD值小于3%。 其中片劑中以A4 的最低。

以上數(shù)據(jù)說(shuō)明不同廠家的復(fù)方丹參片中的三七總皂苷含量以及冰片含量均一性存在較大的差異， 在生產(chǎn)過(guò)程中的質(zhì)量控制及生產(chǎn)工藝具有很大的改進(jìn)空間。