仙牛腰骶痛顆粒對血瘀證大鼠活血化瘀作用研究

宮海全 ，劉 欣 ，許艷茹 ，石 菊 ，于艷輝 ，吳 萍 ，徐 建 *

(1.吉林修正藥業(yè)新藥開發(fā)有限公司吉林省中藥標(biāo)準(zhǔn)化關(guān)鍵工程技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，長春130103；2.修正藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，通化134001）

仙牛腰骶痛顆粒由淫羊藿、千年健、地楓皮、牛膝組成，功能主治溫陽祛濕，通經(jīng)止痛， 用于治療腰骶痛寒濕阻絡(luò)證。 本研究采用冰浴聯(lián)合皮下注射腎上腺素造成大鼠急性血瘀證模型，檢測相關(guān)指標(biāo)，探究仙牛腰骶痛顆?；钛鲎饔?，為其臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 動(dòng)物

Wistar 大鼠，雌雄各半，體重 200～220g，均購自長春市億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限責(zé)任公司。

1.2 藥物

仙牛腰骶痛顆粒： 由修正藥業(yè)集團(tuán)長春高新制藥有限公司提供，批號：20191110；復(fù)方丹參滴丸：天力士制藥集團(tuán)股份有限公司，批號：161222；鹽酸腎上腺素注射液：遂成藥業(yè)股份有限公司，批號：61903012；磷酸肌酸激酶（CPK）、鈉鉀三磷酸腺苷酶（Na+-K+-ATP）、乳酸脫氫酶（LDH）、內(nèi)皮素（ET-1）、一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒，購自上海江萊生物科技有限公司，批號：201906。

1.3 儀器

SMP500-18272-LSIO 酶標(biāo)儀；Primo 型低溫冷凍離心機(jī)；LBY-N6 compact 全自動(dòng)血液流變儀；JA1103N 天平。

2 方法

2.1 分組

Wistar 大鼠 60 只，隨機(jī)分組，每組 10 只大鼠，雌雄各半，分別為空白組、模型組、復(fù)方丹參滴丸組、仙牛腰骶痛顆粒高、中、低劑量組（8.8、4.4、2.2g·kg-1），每日1 次，連續(xù)灌胃 14d，給藥體積為 10mL·kg-1。

2.2 模型建立[1-2]

除空白組外， 其余各組每日冰浴4～5min， 連續(xù)14d，各組動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)第14d 下午，除空白組外，其余各組皮下注射鹽酸腎上腺素注射液 (0.8mg·kg-1) 制備急性血瘀證大鼠模型， 注射后， 禁食不禁水12h。 第15天，麻醉手術(shù)。

2.3 指標(biāo)檢測

所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采用1.5%戊巴比妥鈉（1.5mL·kg-1）麻醉， 腹主動(dòng)脈取血， 部分血液 3000 r/min 離心10min，取上清液置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩Ａ硪徊糠盅鸿蹤此徕c抗凝， 取全血3mL 立即進(jìn)行血流變學(xué)檢測，具體檢測指標(biāo)：低切變率（10s）、中切變率（60s）、高切變率（150s）。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

數(shù)據(jù)用SPSS19.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理， 進(jìn)行t 檢驗(yàn)，用均值±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，P＜0.05 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 對血瘀證大鼠血液流變學(xué)的影響

采用冰浴聯(lián)合鹽酸腎上腺素造模結(jié)果顯示， 與空白組比較， 模型組全血黏度明顯升高 （P＜0.001，P＜0.01）；與模型組比較，復(fù)方丹參滴丸能夠明顯降低全血黏度（P＜0.01，P＜0.05）；復(fù)方萬年青膠囊組明顯降低全血黏度（低切）（P＜0.05），而中切、高切雖有所降低，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果見表1。

表 1 各組大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)比較（，n=10）

表 1 各組大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)比較（，n=10）

注：與空白組比較，#P＜0.05,##P＜0.01,###P＜0.001;與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001

-1全血粘度/mPa.s低切（10s） 中切（60s） 高切（150s）空白組 － 6.34±0.70 5.14±0.56 3.45±0.40模型組 － 8.51±1.71### 6.63±1.43## 4.03±0.41##復(fù)方丹參滴丸組 0.0729 6.78±1.23** 5.23±1.25* 3.26±1.03*高劑量組 8.8 7.20±0.52* 5.74±0.40 3.83±0.25中劑量組 4.4 7.02±0.61* 6.35±1.08 4.05±0.57低劑量組 2.2 7.18±1.10* 5.77±0.74 3.75±0.35組別 劑量（g/kg）

3.2 對大鼠血清中ET、CPK 含量的影響

與空白組比較，模型組大鼠血清中CPK、ET 含量升高(P＜0.01，P＜0.05)；與模型組比較，復(fù)方丹參滴丸組中CPK、ET 含量降低(P＜0.01，P＜0.05)；仙牛腰骶痛顆粒能夠降低 CPK、ET 含量（P＜0.05，P＜0.001），結(jié)果見表 2。

表 2 大鼠血清中 ET、CPK 含量（，n=10）

表 2 大鼠血清中 ET、CPK 含量（，n=10）

注：與空白組比較，#P＜0.05,##P＜0.01,###P＜0.001;與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001

組別 劑量（g/kg） CPK（ng/mL） ET-1（pg/mL）空白組 － 11.84±1.40 177.2±9.6模型組 － 15.39±3.23## 187.1±8.7#復(fù)方丹參滴丸組 0.0729 11.58±3.03** 179.8±8.2*高劑量組 8.8 12.57±2.12* 167.4±9.1***中劑量組 4.4 12.32±1.81* 179.3±25.1低劑量組 2.2 10.11±1.55* 176.6±14.1

3.3 對大鼠血清中MDA、NO、SOD 含量的影響

與空白組比較， 模型組大鼠血清中MDA 含量升高，SOD 含量下降(P＜0.05)；與模型組比較，復(fù)方丹參滴丸組血清中SOD 含量升高（P＜0.05）；仙牛腰骶痛顆粒能夠降低 MDA、NO 含量（P＜0.05，P＜0.001），提高 SOD含量（P＜0.05），結(jié)果見表 3。

表 3 大鼠血清中 MDA、NO、SOD 含量（，n=10）

表 3 大鼠血清中 MDA、NO、SOD 含量（，n=10）

注：與空白組比較，#P＜0.05,##P＜0.01,###P＜0.001;與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001

SOD(ng/mL)空白組 － 3.11±0.30 25.76±1.44 5.33±0.22模型組 － 3.41±0.25# 27.20±3.56 4.75±0.71#復(fù)方丹參滴丸組 0.0729 3.21±0.47 26.52±1.78 5.34±0.32*高劑量組 8.8 3.32±1.03 24.72±1.41* 5.04±0.48中劑量組 4.4 3.10±0.17** 24.42±1.88* 4.80±0.64低劑量組 2.2 3.05±0.13*** 24.77±0.96* 5.38±0.46*組別 劑量（g/kg）MDA（nmol/mL）NO（μmol/l）

3.4 對大鼠血清中Na+-K+-ATP、LDH 含量的影響

與空白組比較， 模型組大鼠血清中Na+-K+-ATP含量降低，LDH 含量升高(P＜0.01)；與模型組比較，復(fù)方丹參滴丸組血清中 LDH 含量降低 （P＜0.05），Na+-K+-ATP 含量有所升高，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；仙牛腰骶痛顆粒能夠提高 Na+-K+-ATP 含量（P＜0.05），降低 LDH 含量（P＜0.05），結(jié)果見表 4。

表 4 大鼠血清中 Na+-K+-ATP、LDH 含量

4 討論

血液流變學(xué)，是研究血液及其有形成分的流動(dòng)性、變形性和聚集性的變化規(guī)律及其在醫(yī)學(xué)中應(yīng)用的科學(xué)。血液流變學(xué)異常與中醫(yī)血瘀證理論“脈不通則血不流”和“血行失度”的理念相似[3-4]。 血黏度升高，是血瘀證的主要表現(xiàn)形式， 其主要作用因素是腎功能的異常導(dǎo)致許多活性物質(zhì)直接作用于血管，如內(nèi)皮素、腎上腺素均能收縮血管，引起血黏度的升高。 同時(shí)，血管平滑肌細(xì)胞膜增加了對鈣離子的通透性， 使細(xì)胞內(nèi)鈣離子增加，進(jìn)而增強(qiáng)了血管平滑肌興奮-收縮耦聯(lián)，增加血收縮和痙攣而使血液黏度升高，造成血瘀[5-8]。

磷酸肌酸激酶活性高低， 只反映臟器細(xì)胞被破壞或細(xì)胞通透性的情況。是與能量代謝最為密切的酶。

CPK 活性水平越高，表明機(jī)體損傷越嚴(yán)重[9]。 仙牛腰骶痛顆粒能夠降低磷酸肌酸激酶、內(nèi)皮素活性，進(jìn)而改善血管壁彈性，降低血液粘度，促進(jìn)血液流通，達(dá)到活血化瘀的作用。

氧自由基受損，會造成血液循行障礙、循環(huán)阻力增加、血流速度減慢、微循環(huán)遭破壞，引起組織缺血缺氧,導(dǎo)致氣行受阻、瘀血內(nèi)停，出現(xiàn)血瘀。血清SOD 活性的高低反映機(jī)體清除氧自由基的能力，MDA 濃度反映機(jī)體脂質(zhì)過氧化水平，SOD 活性和MDA 水平能直接反映氧自由基損傷情況。仙牛腰骶痛顆粒中、低劑量組降低MDA 含量，提高SOD 水平，具有抗氧化作用，而高劑量組雖降低MDA 含量， 但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 Na+-K+-ATP 酶鑲嵌于線粒體內(nèi)膜，是維持線粒體膜流動(dòng)性正常的關(guān)鍵酶，酶活性下降，線粒體鈉泵功能障礙，致線粒體內(nèi)膜水腫，線粒體膜流動(dòng)性下降，導(dǎo)致線粒體氧化磷酸化功能障礙，ATP 合成不足，又直接降低Na+-K+-ATP 酶的活力，二者互為因果，構(gòu)成惡性循環(huán)[10]。 研究表明與模型組相比， 仙牛腰骶痛顆粒高劑量組鈉鉀ATP 酶活性升高、LDH 含量降低。 表明仙牛腰骶痛顆粒高劑量組具有保護(hù)線粒體膜流動(dòng)性的作用。

綜上所述， 仙牛腰骶痛顆粒可能通過降低磷酸肌酸激酶、內(nèi)皮素改善血管壁彈性；同時(shí)，提高鈉鉀ATP酶活力， 降低乳酸脫氫酶生成進(jìn)而降低血液粘度達(dá)到活血化瘀的作用。