全蝎、蜈蚣、蟾酥和土鱉蟲抗腫瘤作用研 究 進 展*

馬家寶，楊正騰

（1.廣西中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院，廣西 南寧 530023；2.廣西壯瑤藥技術(shù)研究中心，廣西 南寧 530200）

歷代醫(yī)書本草文獻對惡性腫瘤的病因、病機、治法等均有較為系統(tǒng)的論述。中醫(yī)將惡性腫瘤歸為“積聚”“癥瘕”等范疇，歷來認為瘀血痰濁、痰凝濕聚、邪毒內(nèi)蘊等體內(nèi)的病理變化是誘發(fā)腫瘤形成和發(fā)展的重要因素，并提出活血化瘀、散結(jié)通絡(luò)、以毒攻毒為祛除腫瘤的重要原則[l-3]。歷代名醫(yī)用于治療腫瘤的傳統(tǒng)藥物中，有毒中藥占據(jù)了大部分，側(cè)面說明古人善用有毒中藥治療癌癥，以藥毒攻毒正是中醫(yī)辨證施治的精髓。在常用的以毒攻毒藥中，有一部分蟲類藥性通常較為猛烈，善搜剔攻毒，可入里入絡(luò)，在草藥不能有效發(fā)揮作用的地方，可引藥力直達病所攻頑除堅，沉疴愈頑疾，故而國內(nèi)外醫(yī)者對有毒動物類中藥抗腫瘤作用的探究越來越多[4]。在我國全蝎、蜈蚣、蟾酥和土鱉蟲4味動物藥應(yīng)用于抗腫瘤已有幾千年的歷史，現(xiàn)代藥理研究亦證實其具有顯著的抗腫瘤效果。筆者以近年全蝎、蜈蚣、蟾酥和土鱉蟲的毒性及其減毒增效的炮制工藝研究為基礎(chǔ)，對其抗腫瘤作用的研究進行總結(jié)。

1 全蝎

1.1 毒性及其炮制工藝 全蝎為鉗蝎科動物東亞鉗蝎的干燥體，具有息風鎮(zhèn)痙、通絡(luò)止痛、攻毒散結(jié)之功效[5]。歷代醫(yī)學著作中特別指出蝎尾為含蝎毒部位，同樣也是藥效部位，現(xiàn)代藥理亦證實，全蝎的毒性成分主要來源于蝎尾部毒囊中的蝎毒液。蝎毒由蛋白質(zhì)和非蛋白質(zhì)兩大類物質(zhì)構(gòu)成，蛋白質(zhì)是主要活性成分，活性蛋白又可分為多肽和酶，非蛋白組分主要為脂類、有機酸及少量游離氨基酸[6]。全蝎毒素類似蛇毒具有神經(jīng)毒特性，毒性甚劇屬高毒范圍，中毒表現(xiàn)為皮膚過敏伴瘙癢、麻痹四肢、腎臟功能受損、呼吸麻痹、神經(jīng)毒反應(yīng)等，嚴重者甚至中毒死亡。各代醫(yī)家一直注重全蝎炮制減毒及臨證配伍，經(jīng)過鹽制、枯礬制、蒸制、酒制等方法炮制后的蝎毒蛋白凝固變性從而毒性降低，還可增加全蝎中的元素含量和更好的發(fā)揮藥性，達到減毒增效的效果[7]。

1.2 抗腫瘤的有效成分 全蝎在臨床上具有較高的防治惡性腫瘤價值，多種活性成分被證實具有抗腫瘤作用，其中蝎毒液為主要效用部分。王晶娟等[8]采用改良MTT法、流式細胞法研究全蝎蛋白對Bel7402腫瘤細胞的作用后，表明全蝎蛋白藥效組分對癌細胞毒性明顯，并具有促進腫瘤細胞凋亡、抑制增殖的作用。賀源等[9]觀察蝎毒素對人結(jié)腸癌細胞Caco-2的影響發(fā)現(xiàn)，蝎毒素可使癌細胞的細胞膜受損、乳酸脫氫酶釋放率增加，促進機體淋巴細胞轉(zhuǎn)化提高機體免疫力，其抑制腫瘤細胞增殖的能力隨毒素濃度增多和時間加長而增強。

1.3 抗腫瘤機制 張璐璐等[10]研究發(fā)現(xiàn)，蝎毒多肽能明顯減緩小鼠S180肉瘤細胞增殖，提示其機理可能是蝎毒多肽能夠通過上調(diào)自噬相關(guān)因子Beclin1、MAP1LC3A的蛋白表達促進自噬的發(fā)生及降低腫瘤組織中CD133的表達從而發(fā)揮作用。周青等[11]研究發(fā)現(xiàn)，全蝎水提物取物在體外可通過影響細胞周期使人前列腺癌PC-3細胞停滯于S期，從而抑制腫瘤細胞生長和誘導凋亡。孫曉佳等[12]研究觀察了蝎毒多肽對血管生成主要調(diào)控因子的作用，發(fā)現(xiàn)蝎毒多肽能明顯抑制血管生成而發(fā)揮抗腫瘤的功效，可能與減少腫瘤微環(huán)境中血管生成相關(guān)因子Dll4及Notch1的表達相聯(lián)系。

2 蜈 蚣

2.1 毒性及其炮制工藝 蜈蚣為蜈蚣科動物少棘蜈蚣的干燥體，具有息風鎮(zhèn)痙、活血化瘀、解毒散結(jié)等功效，秦漢時期藥學著作《神農(nóng)本草經(jīng)》中蜈蚣被列為下品，為防治疾病且有毒的藥物，之后記載蜈蚣的醫(yī)學書籍均言其“有毒”。蜈蚣毒液位于蜈蚣頭部領(lǐng)足的毒腺和胸部及尾部基板下腺體中，毒液包括多種酶類、活性多肽和一些小分子化合物，蛋白質(zhì)含量高達86%為主要活性物質(zhì)。現(xiàn)代毒理學研究表明，蜈蚣的毒性反應(yīng)多是組織胺樣物質(zhì)、溶血性蛋白質(zhì)及多肽毒素等引起，可致皮膚過敏，溶血反應(yīng)，神經(jīng)系統(tǒng)、肝腎和妊娠毒性，心肌損傷等[13]。本草文獻記載的蜈蚣炮制方法大致可分為如下兩類，不加輔料炮制工藝包括烘培法、燒灰、煨、炒炙，加輔料的有酒浸、姜制焙法、薄荷制及酥制等。蜈蚣的毒性主要存在于活體中，高溫炮制能降低毒性和滅菌，加入輔料可起到改善藥性、矯臭矯味的作用[14]。

2.2 抗腫瘤的有效成分 蜈蚣在臨床上被廣泛應(yīng)用于腫瘤治療，綜合前人的研究發(fā)現(xiàn)，蜈蚣毒素、多糖、蜈蚣多肽、堿性蛋白、類組胺物質(zhì)、多種提取物等均報道過有抗腫瘤活性。蜈蚣水提物在一定劑量范圍內(nèi)能有效抑制腫瘤細胞的生長，減輕實體瘤小鼠的瘤質(zhì)量，具有顯著的體內(nèi)抗腫瘤活性。

廖興華[16]研究發(fā)現(xiàn)，蜈蚣小分子多肽類有效部位對肝癌細胞有明顯的殺傷作用，并能促進腫瘤細胞凋亡和有效抑制腫瘤生長，表明在體外有確切的抗腫瘤功效。陳茂華等[17]開展體內(nèi)、體外實驗研究金頭蜈蚣多糖抗肝癌的作用，結(jié)果顯示金頭蜈蚣多糖能夠使細胞周期停留在S期，干預(yù)癌細胞DNA合成、阻斷細胞分裂，從而抑制人肝癌HepG2細胞的生長增殖，有一定的調(diào)節(jié)小鼠免疫功能。

2.3 抗腫瘤機制 周永芹等[18]用不同濃度、不同蜈蚣提取物處理荷瘤小鼠，結(jié)果顯示蜈蚣提取物能有效阻礙小鼠宮頸腫瘤生長，明顯上調(diào)Bax和降低Bcl-2的表達，相關(guān)的機制可能是通過Bax和Caspase-3介導的線粒體信號轉(zhuǎn)導途徑來誘導腫瘤組織凋亡和壞死。李興暖等[19]研究發(fā)現(xiàn)，在一定濃度范圍內(nèi)蜈蚣多糖（SSP）可顯著抑制Hela腫瘤細胞的增殖,進一步探索其機制，提示SSP能影響Hela腫瘤細胞的細胞周期,使細胞阻滯于G2/M期，抑制細胞周期進程，誘導細胞凋亡。劉細平等[20]指出，蜈蚣提取液可通過下調(diào)血管內(nèi)皮細胞生長因子和促血管生成素2的表達來抗新生血管生成、誘導腫瘤細胞凋亡，從而達到抑制裸鼠Bel-7404人異位肝癌移植瘤生長的目的。

3 蟾 酥

3.1 毒性及其炮制工藝 蟾酥是蟾賒科動物中華大蟾蜍或黑眶蟾蜍耳后腺及皮膚腺的的干燥分泌物，蟾酥辛、溫，有毒，歸心經(jīng)，具有解毒、止痛、開竅醒神的功效。根據(jù)近代醫(yī)學研究分析，蟾酥的毒性成分為蟾蜍甾烯類、吲哚類生物堿、甾醇等物質(zhì)，蟾蜍甾烯類分為蟾毒配基和蟾蜍毒素兩類，脂蟾毒配類有脂蟾毒配基、華蟾毒精、蟾毒靈等，蟾酥毒素類包括蟾毒、蟾毒配基脂肪酸酯和蟾毒配基硫酸酯等，其中脂蟾毒配基和華蟾酥毒基為主要毒性成分，又是蟾酥的重要有效成分。蟾酥毒性較大用藥不當會引起循環(huán)、消化及神經(jīng)系統(tǒng)等的中毒癥狀，蟾蜍毒素及蟾蜍配基可作用于心臟迷走神經(jīng)中樞或末梢引起心律失常，吲哚烷基類化合物有致幻作用，兒茶酚類化合物能引起微小血管劇烈收縮，導致組織缺血缺氧等[21-22]。研究表明，蟾酥毒性經(jīng)過煮沸或酒泡后減緩，配伍牛黃能減小毒副作用，故臨床可采用炮制、應(yīng)用新劑型、適當配伍等起到降低蟾酥毒性，提高藥效的目的[23]。

3.2 抗腫瘤的有效成分 現(xiàn)代醫(yī)學研究表明蟾酥的抗腫瘤有效成分有水溶性和脂溶性兩類，水溶性成分大部分為吲哚類生物堿，有效成分為蟾蜍噻嚀，脂溶性成分可分類為游離型和結(jié)合型化合物，游離型稱為蟾毒配基，如蟾毒靈、蟾毒它靈、華蟾酥毒基等，結(jié)合型稱為蟾蜍毒素等[24]。陳稀煩等[25]研究發(fā)現(xiàn)，從蟾酥皮中提取出來的華蟾素可顯著降低肺癌模型大鼠的腫瘤體積和血清腫瘤標志物癌胚抗原水平，抑瘤率顯著增加。朱大誠等[26]研究發(fā)現(xiàn)蟾酥具有逆轉(zhuǎn)白血病CEM/VCR細胞多藥耐藥，促進腫瘤細胞凋亡的功效。胡紅珍等[27]研究發(fā)現(xiàn)蟾酥水提取可通過降低對子宮頸癌HeLa細胞外基質(zhì)和基底膜的降解，而削弱細胞侵襲力，阻止癌細胞的擴散和轉(zhuǎn)移，同時能在體外誘導HeLa細胞凋亡。

3.3 抗腫瘤機制 牛天力等[28]研究發(fā)現(xiàn)華蟾酥毒基能夠較好地抑制前列腺癌PC3細胞的增殖，顯著促進腫瘤細胞凋亡，其可能是通過降低抗凋亡蛋白髓樣細胞白血病-1蛋白表達來實現(xiàn)的。何春鋒等[29]采用CCK-8法和流式細胞術(shù)證明了蟾毒靈能導致人膀胱癌細胞株T24細胞周期停滯于G0/G1期，延緩細胞周期的進展，從而誘導腫瘤細胞凋亡和抑制增殖。馮靜等[30]研究發(fā)現(xiàn)蟾酥作用于肝癌HepG2細胞，可以殺傷腫瘤細胞并阻礙增殖和誘導其凋亡，凋亡機制與蟾酥能引起線粒體膜電位下降，同時與活化凋亡相關(guān)因子Caspase9/3有聯(lián)系。

4 土鱉蟲

4.1 毒性及其炮制工藝 土鱉蟲為鱉蠊科昆蟲地鱉或冀地鱉的雌蟲干燥體，是一味傳承久遠、藥理活性廣泛的動物類藥材，早在秦漢時期就開始用于預(yù)防和治療疾病?！吨腥A人民共和國藥典》記載土鱉蟲“味咸、性寒、有微毒”,有破血逐瘀、續(xù)筋接骨之功效，目前對于土鱉蟲的毒性成分研究較少，其毒性可能來源于所含的生物堿。田軍鵬[31]開展土鱉蟲生物堿提取物的急性毒理研究后發(fā)現(xiàn)，土鱉蟲生物堿提取物對小鼠半數(shù)致死劑量為294.26 mg/kg，95%置信區(qū)間（CI）為（373.77，231.63）mg/kg，屬中等毒性物質(zhì)，但與全蟲的毒理作用區(qū)別較大。人體應(yīng)用土鱉蟲發(fā)生的中毒癥狀為皮膚過敏、全身乏力、腹痛、治療量出現(xiàn)人竇性心率減慢等。在臨床使用，雜質(zhì)較多，主要是土鱉蟲腹內(nèi)容物較多，影響了藥物的質(zhì)量和臨床用藥的劑量準確性，故炮制多以去除雜質(zhì)的凈土鱉蟲炒制為主，亦有酒制，文火焙干。不僅去除了雜質(zhì)、降低了毒性，也提高了藥效[32]。

4.2 抗腫瘤的有效成分 近年來，藥用土鱉蟲抗腫瘤活性成分的研究取得了一定的進展，研究人員指出土鱉蟲抗腫瘤有效成分為脂溶性脂肪酸、纖溶活性蛋白、多糖、多種提取物等。張東梅等[33]發(fā)現(xiàn)地鱉蟲活性蛋白對人舌癌細胞Tea-8113有直接殺傷和抑制腫瘤細胞增殖的作用，有較強的體外抗腫瘤活性。葛鋼鋒等[34]研究發(fā)現(xiàn)，土鱉蟲醇提物能有效的抑制人肝癌細胞株和人胃癌細胞株的增殖，同時還能促進人肝癌細胞株的凋亡，并呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。

4.3 抗腫瘤機制 李興暖等[35]將地鱉蟲纖溶活性蛋白組分作用于體外培養(yǎng)的Hela腫瘤細胞，發(fā)現(xiàn)腫瘤細胞周期被阻斷在G2/M期，不能進行分裂生長，從而抑制腫瘤細胞的增殖，最終導致細胞凋亡。韓雅莉等[36]采用流式細胞術(shù)檢測土鱉蟲纖溶活性蛋白對小鼠S180和H22實體瘤組織細胞凋亡的誘導作用，結(jié)果顯示是通過下調(diào)瘤細胞端粒酶活性，增加Caspase-3表達水平，從而達到誘導腫瘤細胞凋亡的目的。

5 展 望

在我國秦漢時期就開啟了運用藥性劇烈的有毒中藥治療惡性腫瘤的先河，應(yīng)用動物類有毒中藥以毒攻毒治療腫瘤歷史悠久，經(jīng)過多代醫(yī)者大量臨床觀察與反復(fù)實踐驗證后取得較好成果，并成為了一大特色。尤其隨著近代中藥毒理學、細胞生物學技術(shù)、免疫學、分子生物學等現(xiàn)代醫(yī)學逐漸融入到有毒藥物抗癌研究中，其主要毒性、發(fā)揮藥效成分及作用機制的研究取得了一定的進展，這為有毒中藥合理使用提供了科學依據(jù)。目前華蟾素注射液、去甲斑蝥素等從毒性動物類中藥中提取開發(fā)出來的抗癌中成藥已在臨床使用數(shù)年，且療效顯著。然而，動物類有毒中藥本身具有的毒性也限制了其臨床使用范圍和程度，其有毒成分可分為非有效成分和有效成分的活性成分，對于前者可除去毒性部位，后者在應(yīng)用中可結(jié)合現(xiàn)代制藥工藝運用新炮制工藝、藥物配伍、分離純化技術(shù)、有機化學等方法以期減少毒性，降低不良反應(yīng)，提高藥物的生物利用度和臨床療效。在中醫(yī)藥理論指導下，融入現(xiàn)代科學理論和技術(shù)，有毒類動物藥有望能更好的應(yīng)用在腫瘤患者身上。