烏魯木齊地區(qū)健康成人網(wǎng)織血小板參考區(qū)間的建立①

古麗沙提·海米提，劉 瀟，謝伊代·阿不都海力力，太威斯亞·圖爾孫，馮陽(yáng)春

（新疆醫(yī)科大學(xué)第三臨床醫(yī)學(xué)院（附屬腫瘤醫(yī)院）1檢驗(yàn)科；2輸血科，烏魯木齊830011）

網(wǎng)織血小板（reticulated platelet,RP）是在外周血循環(huán)中出現(xiàn)的一種比成熟血小板體積更大，結(jié)構(gòu)更加致密且含有更多活性顆粒，可以被亞甲藍(lán)染色的有殘余信使核糖核酸（mRNA）和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)成分的不成熟血小板，是巨核細(xì)胞轉(zhuǎn)化為成熟血小板過(guò)程中的一種幼稚階段[1,2]。外周血RP計(jì)數(shù)和網(wǎng)織血小板比例（immature platelet fraction,IPF%）可反映骨髓對(duì)血小板減少的代償能力，同時(shí)可預(yù)測(cè)血小板的生成能力，精確反映骨髓血小板的動(dòng)力學(xué)[3,4]。目前國(guó)際上對(duì)RP的研究主要集中于血小板相關(guān)性疾病的診斷和預(yù)后療效[5-10]。伴隨著網(wǎng)織血小板檢測(cè)技術(shù)的不斷發(fā)展，該指標(biāo)有望成為全血細(xì)胞計(jì)數(shù)常規(guī)檢驗(yàn)的一部分[11]。目前在中國(guó)關(guān)于網(wǎng)織血小板的參考區(qū)間缺乏權(quán)威的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，本次研究針對(duì)烏魯木齊地區(qū)成人建立符合人群特點(diǎn)的網(wǎng)織血小板參考區(qū)間，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 以2019年9—12月在新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院健康體檢中心進(jìn)行體檢的1 500例體檢者為研究對(duì)象，男性和女性各750例，每個(gè)性別按年齡分為3組，其中18～35歲組200例，36～60歲組350例，＞60歲組200例。男性平均年齡47.0歲，女性平均年齡46.7歲。另收集2020年1月體檢者40例，其中18～60歲和＞60歲組人群各20例進(jìn)行參考區(qū)間的驗(yàn)證。本研究經(jīng)新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)（1）出生于烏魯木齊市，并生活在烏魯木齊周邊的年滿18周歲人群；（2）近1個(gè)月內(nèi)無(wú)獻(xiàn)血或輸血治療；（3）近期未服用影響血液系統(tǒng)的相關(guān)藥物；（4）無(wú)吸煙無(wú)酗酒史；（5）全血細(xì)胞計(jì)數(shù)常規(guī)檢驗(yàn)未見(jiàn)異常指標(biāo)；（6）女性避開(kāi)生理周期；（7）無(wú)慢性疾?。唬?）健康體檢未發(fā)現(xiàn)機(jī)體功能異常者。

1.3 指標(biāo)的測(cè)定 采集研究對(duì)象EDTA抗凝全血標(biāo)本2～4 mL，顛倒混勻5～8次，采用日本SYSMEX公司XN-9000血液分析儀的CBC+DIFF+PLT-F通道進(jìn)行檢測(cè)，收集整理數(shù)據(jù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 按照極差法檢查有無(wú)離群值，離群值即最大值和次大值或次小值和最小值的差值超過(guò)1/3極差，如有離群值，須刪除離群值。采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，用Kolmogorov-Smirnov正態(tài)性檢驗(yàn)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性分析，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（-x±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析；不符合正態(tài)分布的計(jì)量資料組間比較采用Mann-Whitney非參數(shù)檢驗(yàn)，參考區(qū)間?。?.5～97.5）th，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 1 500例體檢人群中RP和IPF%的分布情況1 500例個(gè)體檢測(cè)結(jié)果中RP和IPF%未出現(xiàn)離群值，1 500例數(shù)據(jù)均納入結(jié)果分析。1 500例個(gè)體中RP屬于正偏態(tài)分布資料（P2.5=1.0×109/L，P97.5=17.9×109/L），IPF%屬于正偏態(tài)分布資料（P2.5=0.5%，P97.5=7.2%），見(jiàn)圖1。

圖1 1 500例體檢人群中RP和IPF%的分布情況

2.2 1 500例體檢人群中不同性別RP和IPF%的分布情況 1 500例體檢人群中男性和女性RP均屬于正偏態(tài)分布資料（男性：P2.5=1.0×109/L，P97.5=18.0×109/L；女性：P2.5=1.0×109/L，P97.5=17.9×109/L）；IPF%均屬于正偏態(tài)分布資料（男性：P2.5=0.6%，P97.5=7.2%；女性：P2.5=0.5%，P97.5=7.2%）。在不同性別組之間RP和IPF%差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=0.914,P=0.361；Z=0.703,P=0.482）。

2.3 RP和IPF%在1 500例體檢人群中不同年齡段的分布情況 由于RP和IPF%在不同性別組的分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可對(duì)3個(gè)年齡段的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)。RP和IPF%在18～35歲組和36～60歲組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可將這兩個(gè)年齡段合并為一個(gè)年齡段，最終建立的參考區(qū)間，即RP的參考區(qū)間為：18～60歲（1.3×109/L～18.4×109/L），＞60歲（0.8×109/L～14.9×109/L）；IPF%的參考區(qū)間為：18～60歲（0.6%～7.3%），＞60歲（0.5%～6.8%），見(jiàn)表1、2。

2.4 參考區(qū)間的驗(yàn)證 對(duì)所建立的RP和IPF%參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證，驗(yàn)證結(jié)果100%通過(guò)，符合專(zhuān)業(yè)要求，證明本研究建立的參考區(qū)間有效。

表1 RP和IPF%在3個(gè)年齡段的正態(tài)性檢驗(yàn)和兩兩比較結(jié)果

表2 RP和IPF%在18～60歲和＞60歲參考區(qū)間

3 討論

隨著全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀的發(fā)展，實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行RP檢測(cè)越來(lái)越容易，現(xiàn)有的研究已經(jīng)表明，Sysmex的XE2100，XE-5000及XN系統(tǒng)均可以用于RP檢測(cè)，并能給出IFP%值，而且在RP的高中低3個(gè)結(jié)果范圍中均和傳統(tǒng)的流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果具有較好的一致性，大大降低了網(wǎng)織血小板的檢測(cè)成本，為網(wǎng)織血小板從科研走向臨床提供了簡(jiǎn)便快捷的檢測(cè)手段[12-13]。

參考區(qū)間作為檢驗(yàn)項(xiàng)目進(jìn)入臨床應(yīng)用的必要條件，建立符合特定人群的各檢驗(yàn)項(xiàng)目合適的參考區(qū)間已經(jīng)成為檢驗(yàn)領(lǐng)域亟待解決的問(wèn)題[14-15]。研究表明北京地區(qū)成人IPF%參考區(qū)間為0.57%～6.83%，男女之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[16]；蘭州地區(qū)成人IPF%參考區(qū)間為0.50%～6.04%，老年人IPF%參考區(qū)間為0.20%～4.03%[17]。同時(shí)韓國(guó)的研究表明在韓國(guó)人群中男性IPF%參考區(qū)間為0.5%～3.1%，女性參考區(qū)間為0.5%～3.4%；男性RP參考區(qū)間為1.30×109/L～6.80×109/L，女性參考區(qū)間為1.21×109/L～7.15×109/L[18]。英國(guó)的一項(xiàng)研究報(bào)道顯示英國(guó)不同性別人群中IPF%存在分布差異，男性和女性人群IPF%參考區(qū)間分別是1.8%～10.0%和1.5%～10.1%[19]。針對(duì)IPF%的參考區(qū)間，本研究和北京地區(qū)的結(jié)果類(lèi)似，均顯示男女之間無(wú)差異，且參考區(qū)間范圍接近。同時(shí)本次研究顯示老年人的IPF%相比于其它成年人呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，和蘭州地區(qū)的研究結(jié)果相符，老年人由于機(jī)體造血及營(yíng)養(yǎng)吸收等方面功能降低，血小板生成率降低，導(dǎo)致RP和IPF%的減少。

不同地區(qū)各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)服務(wù)人群建立適合本實(shí)驗(yàn)室的RP和IPF%的參考區(qū)間，為臨床醫(yī)生在網(wǎng)織血小板相關(guān)疾病的輔助診斷和療效判斷等方面提供依據(jù)[20]。本次研究?jī)H為1個(gè)實(shí)驗(yàn)室的單一中心研究，且納入人群數(shù)量有限，未來(lái)應(yīng)該針對(duì)烏魯木齊地區(qū)人群進(jìn)行多中心大規(guī)模的人群研究。