反相高效液相色譜法測(cè)定鹽酸普萘洛爾片中鹽酸普萘洛爾的含量

鄭風(fēng)敏，王繁華，李 彬

（鶴壁市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，河南 458030）

鹽酸普萘洛爾作為非選擇性的β 受體阻斷劑，臨床上常用做高血壓、心絞痛、心率失常等疾病的常用藥［1，2］。隨著我國人口老齡化的到來，特別是老年性高血壓的增加，該藥用量呈增加的趨勢(shì)?！吨袊幍洹?015年版中規(guī)定，鹽酸普萘洛爾片中的含量測(cè)定采用紫外-可見分光光度法［3］，該方法沒有高效液相色譜法的分離功能，所測(cè)定的結(jié)果容易受片劑中的各種輔料的影響，因此，采用高效液相色譜法可以有效去除輔料的干擾，更準(zhǔn)確地測(cè)定鹽酸普萘洛爾的含量。本試驗(yàn)通過采用反相高效液相色譜法來測(cè)定鹽酸普萘洛爾片中鹽酸普萘洛爾的含量，方法簡(jiǎn)單，回收率高，重復(fù)性好，可以做為一種測(cè)定鹽酸普萘洛爾含量的方法。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 Waters e2695 高效液相色譜儀，waters 2998 二極管陣列檢測(cè)器，Agilent 20Rbax C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），賽多利斯CPA225D 電子分析天平，F(xiàn)RQ-1008HT 型超聲波清洗機(jī)（杭州法蘭特超聲波科技有限公司），賽多利斯mini 超純水系統(tǒng)（德國賽多利斯集團(tuán)）。

1.2 試藥 鹽酸普萘洛爾對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)100783-201202，100%）；色譜純乙腈（德國默克），色譜純磷酸（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司），分析純磷酸二氫鉀（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司），水為試驗(yàn)室自制超純水。鹽酸普萘洛爾片（江蘇亞邦愛普森藥業(yè)有限公司，10 mg，批號(hào)200102、190915、190806）。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件 Waters e2695 高效液相色譜儀，waters 2998 二極管陣列檢測(cè)器，Agilent 20Rbax C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈-水（含1%庚烷磺酸鈉）（45∶55），檢測(cè)波長(zhǎng)為290 nm，進(jìn)樣體積：20 μl，流速：1.0 ml/min，柱溫：35 ℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品貯備液與對(duì)照品溶液的制備 精密稱取鹽酸普萘洛爾對(duì)照品約20 mg，置于20 ml 棕色量瓶中，加入流動(dòng)相10 ml，超聲使溶解，自然放冷，繼續(xù)加流動(dòng)相并定容至刻度作為對(duì)照品貯備液。精密量取對(duì)照品貯備液2 ml，置于100 ml 的棕色量瓶中，加流動(dòng)相稀釋并定容至刻度，作為對(duì)照品溶液，備用。

2.2.2 供試品溶液的制備 取重量差異項(xiàng)下的鹽酸普萘洛爾片20 片，研細(xì)，精密稱取約20 mg，置于100 ml棕色量瓶中，加流動(dòng)相60 ml，超聲使溶解，自然放冷，繼續(xù)加流動(dòng)相并定容至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10 ml，置于100 ml 的棕色量瓶?jī)?nèi)，用流動(dòng)相稀釋至刻度，作為供試品溶液，備用。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液制備 按該藥的處方，取各輔料適量，按照該藥處方比例和制備方法制成陰性對(duì)照藥品。取此種藥品，按照文中上述“2.2.2”項(xiàng)下方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 取文中上述的對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液，按照“2.1”項(xiàng)下設(shè)置的色譜條件分別進(jìn)樣，根據(jù)試驗(yàn)的色譜圖可知，該試驗(yàn)條件下的色譜峰峰形較好，出峰時(shí)間較短，理論板數(shù)為17 488，試驗(yàn)結(jié)果所得的參數(shù)符合《中國藥典》2015 年版的相關(guān)規(guī)定。色譜圖見圖1。

圖1 陰性對(duì)照（A）對(duì)照品（B）供試品（C）高效液相色譜圖

2.4 線性關(guān)系試驗(yàn) 分別精密量取“2.2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品貯備液0.5、1 和2 ml，分別放置于100 ml 的量瓶中，另取對(duì)照品貯備液3 和5 ml 分別放置于20 ml 的量瓶中，用流動(dòng)相稀釋并定容，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)，記錄其色譜圖。以峰面積（Y）對(duì)濃度（X）進(jìn)行線性回歸分析，計(jì)算可得回歸方程為Y=7 368 X+14 587（r=0.999 9），結(jié)果表明鹽酸普萘洛爾在5.84～246.47 μg/ml 的濃度內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn) 取文中上述“2.2.1”項(xiàng)下制備的對(duì)照品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6 次，記錄色譜圖，通過計(jì)算可得其RSD 為0.84%（n=6），結(jié)果表明，在該色譜條件下，鹽酸普萘洛爾的精密度較高。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取批號(hào)200102 的供試品6 份，按“2.2.2”項(xiàng)下的條件制成供試品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，分別記錄其色譜圖。鹽酸普萘洛爾峰面積的RSD 為0.84%（n=6）。計(jì)算結(jié)果表明，在該色譜條件下供試品重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取批號(hào)200102 的供試品配置成的供試品溶液，室溫下避光放置。分別在0、1、3、5、8、12和24 h 分別取樣，取樣后立即檢測(cè)，分別記錄其液相色譜圖，根據(jù)鹽酸普萘洛爾的峰面積計(jì)算其RSD 為0.94%。結(jié)果表明，供試品溶液室溫避光放置24 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 回收率試驗(yàn) 取批號(hào)200102 的供試品（含量已知）9 份（每份約含鹽酸普萘洛爾20 mg），分別加入鹽酸普萘洛爾對(duì)照品適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制成供試品加標(biāo)回收溶液1～9，按文中“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣，以鹽酸普萘洛爾的峰面積計(jì)算其回收率。結(jié)果鹽酸普萘洛爾的平均回收率為99.92%，RSD 為0.17%。見表1。

表1 鹽酸普萘洛爾回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品含量測(cè)定對(duì)比 取批號(hào)為200102、190915、190806 的3 批供試品各2 份，按照“2.2.2”項(xiàng)下方法分別制成供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣。另取批號(hào)為200102、190915、190806 的3 批供試品各2份，按照2015 年版《中國藥典》中規(guī)定的方法測(cè)定鹽酸普萘洛爾的含量。分別計(jì)算其含量，對(duì)結(jié)果進(jìn)行比較。見表2。

表2 不同試驗(yàn)方法測(cè)定鹽酸普萘洛爾含量結(jié)果

3 討論

3.1 流動(dòng)相的選擇 通過查詢相關(guān)文獻(xiàn)，筆者發(fā)現(xiàn)有采用甲醇-鹽、甲醇-乙腈-鹽、甲醇-磷酸二氫鉀等系統(tǒng)［4-6］作為流動(dòng)相，本文也對(duì)這些條件進(jìn)行了試驗(yàn)，但結(jié)果沒有在筆者設(shè)置的條件下峰形對(duì)稱，出峰時(shí)間也沒有該條件下的快。本文設(shè)置的條件下，出峰時(shí)間快，峰形對(duì)稱，理論板數(shù)較高，因此，流動(dòng)相最后采用了乙腈-水（含1%庚烷磺酸鈉）（45∶55）。

3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，對(duì)其進(jìn)行了紫外-可見掃描檢測(cè)，最后發(fā)現(xiàn)在290 nm 的波長(zhǎng)處有最大吸收，因此選用290 nm 為最后的檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.3 結(jié)果分析 通過含量測(cè)定結(jié)果比較，發(fā)現(xiàn)紫外和液相所測(cè)得結(jié)果基本相同，但是高效液相色譜法可以有效地去除藥品中輔料的干擾，自動(dòng)化程度也高。因此，本文通過試驗(yàn)所得到的高效液相色譜方法可以作為測(cè)定鹽酸普萘洛爾片含量的一種方法。