水牛角生藥粉滅菌工藝研究

肖 暢，張 穎，劉元雪，王 玉，3，霍志鵬，4，何 毅*

（1.創(chuàng)新中藥關(guān)鍵技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300410；2.天士力控股集團(tuán)有限公司，天津 300410；3.天津大學(xué)藥物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，天津 300072；4.天津中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，天津 301617）

水牛角為?？苿游锼ubalus bubalis Linnaeu的角，性寒，味咸、苦，歸心、肝經(jīng)，具有清熱解毒及涼血、安神定驚之功效［1］。主要用于熱病、斑疹、熱盛出血等證。主要活性成分有氨基酸、微量活性元素、肽類、胍基衍生物、蛋白質(zhì)以及膽甾醇等。現(xiàn)今隨著對野生動物保護(hù)意識的加強(qiáng)，國內(nèi)外臨床中已經(jīng)禁止使用犀牛角，金長敏等［2］發(fā)現(xiàn)水牛角與犀牛角氨基酸含量很接近，劉睿等［3］發(fā)現(xiàn)水牛角中可溶性蛋白及肽類、游離氨基酸等與犀、廣角相似，僅含量存在一定差異，提示水牛角或可代替犀牛角應(yīng)用于臨床，水牛角的應(yīng)用也將更加廣泛。研究表明，在臨床上水牛角代替犀牛角用于治療紫癜病，具有較好療效［4-6］。此外在皮膚科疾病也多有應(yīng)用，如痤瘡、頑固性皮膚瘙癢、帶狀皰疹等［7-9］，除此以外，在治療頭痛方面也有初步的探究［10］。

水牛角為動物藥，微生物超限風(fēng)險(xiǎn)較高，超過限度的微生物可能對使用者造成健康風(fēng)險(xiǎn)?！吨袊幍洹罚?015 年版）中明確規(guī)定了非無菌藥材原粉的中藥制劑需氧菌限度為104cfu/g。本試驗(yàn)對水牛角生藥粉的滅菌條件進(jìn)行考查，根據(jù)微生物限度檢查結(jié)果，以性狀和滅菌效率和工藝成本綜合評價(jià)最終確定合適滅菌工藝。確定了最佳的滅菌方式、滅菌溫度等，最終得到可大規(guī)模使用的滅菌方法。

1 材料

1.1 儀器 VT6130P 真空干燥箱（Thermo Fisher），3870 ELV 高壓滅菌器（TUTTNAUER）。

1.2 試藥 水牛角生藥粉（批號1704003），滅菌前微生物需氧菌7×104cfu/g。

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀 水牛角生藥粉為灰褐色粉末，氣微腥，味淡。

2.2 微生物限度檢查方法 微生物限度檢查方法照《中國藥典》（2015 年版）檢查。中藥固體口服給藥制劑（含藥材原粉）需氧菌總數(shù)不得過104cfu/g。

2.3 干熱滅菌法 取水牛角生藥粉（過四號篩）裝入托盤中，厚度約為3 cm，放入真空干燥箱，分別在80、105、120 和160 ℃減壓干燥3 和6 h。在干燥箱中冷卻后，放冷，裝入滅菌后的自封袋中，進(jìn)行性狀以及微生物檢查。

2.4 濕熱滅菌法 取水牛角生藥粉（過四號篩）裝入托盤中，厚度約為3 cm，放入高壓滅菌器中，分別在116 ℃高壓滅菌20 和40 min，在121 ℃高壓滅菌15 和30 min。冷卻后，將樣品轉(zhuǎn)移至真空干燥箱70 ℃減壓干燥，干燥后放冷再裝入滅菌后的自封袋中，進(jìn)行性狀以及微生物檢查。

2.5 滅菌效率分析 滅菌效率=（滅菌前菌數(shù)-滅菌后菌數(shù)）/滅菌后菌數(shù)×100%?！吨袊幍洹罚?015 年版）規(guī)定非無菌（含藥材原粉）的中藥制劑需氧菌數(shù)目應(yīng)低于104cfu/g。滅菌前水牛角生藥粉的需氧菌菌數(shù)為7×104cfu/g，水牛角生藥粉經(jīng)干熱滅菌和濕熱滅菌后，再次檢查微生物數(shù)目得到如表1 所示結(jié)果。采用干熱滅菌法溫度低于120 ℃時(shí)反而對微生物生長有促進(jìn)作用，當(dāng)達(dá)到160 ℃后，滅菌3 h 以上即可有效殺滅需氧菌，符合《中國藥典》（2015 年版）限度要求。而采用濕熱滅菌方法，在116 ℃滅菌20 min 以上，121 ℃滅菌15 min 以上，均能有效殺滅需氧菌，并符合限度要求，溫度、時(shí)間要求均較低。綜合考慮，如果使用干熱滅菌法，滅菌溫度要達(dá)到160 ℃，并且需要較長滅菌時(shí)間；濕熱滅菌法滅菌溫度僅需要達(dá)到116 ℃、20 min 即可較好達(dá)到限度要求，對水牛角生藥粉的性狀也無影響，滅菌效率更高。綜上，選取濕熱滅菌法116 ℃滅菌20 min作為水牛角生藥粉的滅菌工藝。

3 討論

綜上分析，常規(guī)干熱滅菌法用于水牛角生藥粉滅菌需要溫度達(dá)到160 ℃，且時(shí)長需達(dá)到3 h 及以上，所耗時(shí)間較長，溫度較高，在這種極端條件下水牛角生藥粉中的活性物質(zhì)可能遭到破壞，化學(xué)性質(zhì)可能會因此發(fā)生改變，且不易進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)。然而采用濕熱滅菌法在116 ℃條件下20 min 即可達(dá)到需氧菌微生物少于10 cfu/g 的效果，滅菌時(shí)長大大縮短，減少對水牛角生藥粉中活性成分的破壞，保留其藥效。吳飛等［11］在對三七生藥粉滅菌工藝研究中發(fā)現(xiàn)，在各滅菌條件下，溫度超過121 ℃，活性成分損失約40%，藥效會大打折扣。因而滅菌更短的時(shí)間和更低的溫度對于活性成分的保留至關(guān)重要。

生藥粉的滅菌方法在《中國藥典》（2015 年版）中未作明確表述，只規(guī)定了限度，因而需要再進(jìn)行摸索嘗試，找到更適合生產(chǎn)需要的滅菌方法，規(guī)范操作。本試驗(yàn)通過比較干熱及濕熱滅菌法確定了水牛角生藥粉的滅菌方法，為建立生產(chǎn)所需的標(biāo)準(zhǔn)滅菌方法提供了參考。