泌尿生殖道感染支原體的分布及耐藥性分析

吳振安，魏娜，謝立蘋

（北京市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，北京 100039）

0 引言

支原體是一類沒(méi)有細(xì)胞壁、高度多形性、能通過(guò)濾菌器、可用人工培養(yǎng)基培養(yǎng)增殖的最小原核細(xì)胞型微生物，其中解脲脲原體（Uu）和人型支原體（Mh）是引起非淋菌性泌尿生殖道感染的常見(jiàn)重要病原體[1-3]。近年來(lái),隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展及人們生活習(xí)慣的改變，泌尿生殖道支原體感染發(fā)病率有逐年上升的趨勢(shì)，且由于抗菌藥物的不規(guī)范使用和濫用，耐藥菌株日益增多，給臨床治療帶來(lái)較大困難。我們對(duì)1680 例泌尿生殖道支原體感染患者的培養(yǎng)結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2018 年1 月至2019 年12 月我院門診和住院1680 例疑似泌尿生殖道感染的患者臨床資料，其中女性1528 例，年齡19-58 歲，平均（33.6±4.5）歲；男152 例，年齡22-62 歲，平均（37.5±5.3）歲。所有入選患者均訴有尿頻、生殖道分泌物增加或下腹墜脹感等情況，均無(wú)嚴(yán)重合并癥，取標(biāo)本前3天內(nèi)無(wú)性生活，1 周內(nèi)未用抗菌藥物。多次就診者選取首診結(jié)果。

1.2 標(biāo)本采集

所有標(biāo)本由臨床醫(yī)生用無(wú)菌棉拭子按規(guī)范采集，女性：將宮頸口分泌物擦拭干凈后，用采樣拭子于宮頸口內(nèi)約2cm 處旋轉(zhuǎn)拭取分泌物；男性：將尿道口清潔干凈后，用采樣拭子于尿道口內(nèi)約3cm 處拭取分泌物，標(biāo)本采集后置于無(wú)菌試管內(nèi)立即送檢。

1.3 試劑和方法

采用眾愛(ài)生河北生物科技有限公司解脲支原體和人型支原體選擇分離培養(yǎng)、鑒定、藥敏試劑盒，嚴(yán)格按照操作說(shuō)明書進(jìn)行接種、培養(yǎng)和判定結(jié)果。

1.3.1 試劑

該試劑盒中主要試劑為Uu 和Mh 選擇分離培養(yǎng)基及28 孔藥敏板，培養(yǎng)基主要成分有蛋白胨、動(dòng)物血清、生長(zhǎng)因子、底物和酚紅指示劑等，藥敏板藥敏試驗(yàn)微孔中包被的12 種抗生素為：強(qiáng)力霉素、美滿霉素、交沙霉素、克拉霉素、阿奇霉素、羅紅霉素、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、氧氟沙星、左氧氟沙星、司帕沙星及大觀霉素。

1.3.2 方法

取出試劑盒復(fù)溫至室溫并編號(hào)，先從未接種樣本的培養(yǎng)基瓶中取出100ul 的培養(yǎng)基液加入藥敏板陰性對(duì)照孔；再將采集有標(biāo)本的拭子頭插入培養(yǎng)基液體中，充分洗滌，在瓶壁上擠干拭子，然后各取100ul 已接種后的培養(yǎng)基液體樣本分別加入除陰性對(duì)照孔以外的各孔中，每孔滴加1-2 滴石蠟油，蓋上蓋，與剩下的培養(yǎng)基均放在36℃±1℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24 和48 小時(shí)觀察結(jié)果。

1.3.3 培養(yǎng)結(jié)果判定

培養(yǎng)后，對(duì)應(yīng)孔培養(yǎng)基不變色，仍呈清亮黃色液體為陰性；培養(yǎng)基由黃色變成紅色且清亮為陽(yáng)性，顯示有支原體生長(zhǎng)。陰性對(duì)照孔呈陰性，陽(yáng)性對(duì)照孔呈陽(yáng)性，Uu 鑒定孔為陽(yáng)性（培養(yǎng)24 小時(shí)），表示有Uu 生長(zhǎng)，且計(jì)數(shù)≥104ccu/mL，有臨床意義；Mh鑒定孔為陽(yáng)性（培養(yǎng)48 小時(shí)），表示有Mh 生長(zhǎng)，且計(jì)數(shù)≥104ccu/mL，有臨床意義。

1.3.4 藥敏結(jié)果判定

當(dāng)經(jīng)培養(yǎng)判定為有支原體生長(zhǎng)時(shí)，高、低兩種藥物濃度孔均不變色，判為支原體對(duì)該藥物敏感（S）；高、低濃度孔均變紅，判為支原體對(duì)該藥物耐藥（R）；低濃度孔變紅，高濃度孔不變色，判為支原體對(duì)該藥物中度敏感（I）。

1.4 質(zhì)量控制

取支原體屬培養(yǎng)陽(yáng)性液體50ul 接種于血平皿上，35℃孵育48 小時(shí)，均無(wú)菌生長(zhǎng)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 20.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 支原體培養(yǎng)、鑒定結(jié)果

經(jīng)培養(yǎng)鑒定，1680 份泌尿生殖道標(biāo)本中，支原體培養(yǎng)陽(yáng)性564 份，陽(yáng)性率為33.57%。男性患者支原體陽(yáng)性37 例，女性患者支原體陽(yáng)性527 例，陽(yáng)性率分別為24.34%和34.49%。女性患者支原體培養(yǎng)陽(yáng)性率明顯高于男性患者（P＜0.05）。培養(yǎng)陽(yáng)性的564 例支原體中，解脲脲原體陽(yáng)性445 例，占78.90%；人型支原體陽(yáng)性34 例，占6.03%；Uu+Mh陽(yáng)性85 例，占15.07%。不同性別患者支原體培養(yǎng)陽(yáng)性率及各種支原體分布見(jiàn)表1。

表1 不同性別患者支原體培養(yǎng)陽(yáng)性率及各種支原體分布〔n（%）〕

2.2 解脲脲原體和人型支原體對(duì)抗菌藥物的耐藥率

564 例支原體屬陽(yáng)性株對(duì)美滿霉素、強(qiáng)力霉素、交沙霉素耐藥率較低，均低于15%；對(duì)諾氟沙星、環(huán)丙沙星、氧氟沙星、大觀霉素和司帕沙星的耐藥率較高，均高于75%。Uu 對(duì)美滿霉素、強(qiáng)力霉素和交沙霉素的敏感率分別為96%、95%和86%，對(duì)諾氟沙星、環(huán)丙沙星、氧氟沙星、大觀霉素和司帕沙星的耐藥率分別為99%、93%、90%、81%和72%；Mh 對(duì)美滿霉素、強(qiáng)力霉素和交沙霉素的敏感率分別為100%、100%和82%，對(duì)諾氟沙星、氧氟沙星等其他9 種抗菌藥物的耐藥率均高于80%；Uu+Mh 對(duì)美滿霉素、強(qiáng)力霉素和交沙霉素的敏感率分別為92%、91%和81%，對(duì)諾氟沙星、氧氟沙星等其他9 種抗菌藥物的耐藥率均不低于85%。解脲脲原體和人型支原體對(duì)常用抗菌藥物的耐藥率見(jiàn)表2。

3 討論

（1）本次研究結(jié)果顯示，本院泌尿生殖道標(biāo)本支原體培養(yǎng)陽(yáng)性率為33.57%，支原體以Uu 為主，這與國(guó)內(nèi)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道一致[4-6]。Uu 感染率高于Mh 感染率的可能原因是：機(jī)體感染Uu 后使得感染局部的生殖道系統(tǒng)上皮細(xì)胞損傷，從而利于Mh 侵入，而機(jī)體泌尿生殖道系統(tǒng)上皮細(xì)胞未受損傷時(shí)Mh 則不易侵入[6]。女性患者支原體培養(yǎng)陽(yáng)性率為34.49%,較文獻(xiàn)[7-9]報(bào)道的數(shù)據(jù)低。女性患者支原體培養(yǎng)陽(yáng)性率明顯高于男性患者（P＜0.05），在不同支原體屬類別感染上，男女分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示泌尿生殖道支原體屬感染存在性別差異，但不同性別在支原體屬感染類別上無(wú)差異。這可能原因有：男女兩性泌尿生殖道生理環(huán)境和解剖學(xué)結(jié)構(gòu)不同，女性泌尿生殖道較男性更易于支原體屬定植引起感染；支原體屬感染后的臨床癥狀女性較男性更為隱匿[4]。

表2 解脲脲原體和人型支原體對(duì)常用抗菌藥物的耐藥率（%）

（2）由于支原體無(wú)細(xì)胞壁，B-內(nèi)酰胺類抗生素等作用于細(xì)胞壁的抗生素對(duì)其無(wú)效。本研究選用了12 種阻斷細(xì)菌蛋白質(zhì)合成的抗菌藥物進(jìn)行支原體屬藥敏試驗(yàn)。Uu、Mh 和兩者混合感染對(duì)美滿霉素、強(qiáng)力霉素耐藥率均低于10%，對(duì)交沙霉素的耐藥率均低于15%。美滿霉素、強(qiáng)力霉素是臨床經(jīng)驗(yàn)治療時(shí)首選藥，但具有肝腎毒性，可引起骨和牙齒的損傷；交沙霉素是新型大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥物，對(duì)支原體屬抗菌作用強(qiáng)，為非誘導(dǎo)抗菌藥物，不易誘導(dǎo)耐藥菌株，且對(duì)其他藥物誘導(dǎo)的耐藥菌株仍具有抗菌活性，副作用輕微，推薦臨床醫(yī)師宜選擇交沙霉素作為支原體屬感染的經(jīng)驗(yàn)用藥。除Uu 對(duì)左氧氟沙星的耐藥率為43%外，支原體屬對(duì)喹諾酮類耐藥率均高于70%。喹諾酮類藥物抗菌譜廣，在泌尿生殖道組織中濃度高，臨床大量使用此類藥物治療泌尿生殖道感染。近年來(lái)，支原體屬對(duì)喹諾酮類耐藥率不斷增高，并且喹諾酮類藥物還會(huì)誘導(dǎo)支原體屬多藥耐藥性產(chǎn)生。其原因可能是大量使用喹諾酮類藥物使支原體DNA螺旋酶發(fā)生變異，以及主動(dòng)泵出機(jī)制等造成支原體屬對(duì)喹諾酮類藥物敏感性降低。此外，由于臨床上抗菌藥物濫用與不規(guī)范用藥，以及支原體耐藥基因的出現(xiàn)，導(dǎo)致支原體對(duì)常規(guī)抗菌藥物出現(xiàn)不同程度的耐藥，產(chǎn)生較高耐藥率[10]。為避免更多多藥耐藥株產(chǎn)生造成臨床治療更加困難，對(duì)于非培養(yǎng)方法檢出泌尿生殖道支原體屬感染時(shí)，盡量避免常規(guī)使用喹諾酮類藥物。

（3）近年來(lái)，由于抗菌藥物濫用、治療不規(guī)范等因素使得病原菌獲得性耐藥機(jī)制迅速發(fā)展，病原菌耐藥問(wèn)題變得十分復(fù)雜，導(dǎo)致病原菌發(fā)生多重耐藥，耐藥性也在不斷發(fā)生變化，支原體屬耐藥情況也日益嚴(yán)重[11-12]。支原體屬對(duì)各種抗菌藥物的耐藥率亦不盡一致，泌尿生殖道支原體感染患者時(shí)常遇到反復(fù)抗菌藥物治療無(wú)效的情況，治愈者短期內(nèi)復(fù)發(fā)的也屢見(jiàn)不鮮，不經(jīng)病原微生物檢測(cè)而僅憑經(jīng)驗(yàn)使用抗生素會(huì)使泌尿生殖道支原體感染的控制面臨越來(lái)越大的困難。因此，在泌尿生殖道感染疾病的診療中，臨床醫(yī)生應(yīng)在使用抗菌藥物之前，及時(shí)留取標(biāo)本送檢，盡早完成病原微生物培養(yǎng)、鑒定和藥敏試驗(yàn)，根據(jù)檢驗(yàn)結(jié)果合理選擇抗生素，并規(guī)范化使用，且應(yīng)避免長(zhǎng)時(shí)間使用同一種抗菌藥物，從而減少支原體耐藥的發(fā)生。