鴨疫里默氏桿菌的研究進(jìn)展

黃 寧

（西南大學(xué) 動物醫(yī)學(xué)院，重慶 402460）

鴨疫里默氏桿菌（Riemerella anatipestifer,RA），原名鴨疫巴氏桿菌，屬于黃桿菌科里氏桿菌屬，是引起1～8周齡，尤其是2～3周齡雛鴨傳染性漿膜炎的病原菌[1]，已成為嚴(yán)重危害養(yǎng)鴨業(yè)的細(xì)菌性傳染病之一。自1982年郭玉璞等[2]于北京郊區(qū)鴨場中分離出鴨疫里默氏桿菌后，我國各養(yǎng)鴨地區(qū)出現(xiàn)RA感染的報道層出不窮。RA感染后雛鴨主要表現(xiàn)生長發(fā)育受阻、肝周炎、纖維素性心包炎和氣囊炎，嚴(yán)重者甚至死亡。此外，RA還可以侵害雛鵝、野雞、火雞等動物。目前國際認(rèn)可的RA血清型有21個[3-5]，由于其血清型多樣，且不同血清型菌株缺乏交叉免疫保護(hù)力，導(dǎo)致免疫預(yù)防效果不佳、極易產(chǎn)生耐藥性。由此可見，RA給養(yǎng)鴨及其他養(yǎng)禽業(yè)帶來了極大挑戰(zhàn)。

鴨疫里默氏桿菌的防控對養(yǎng)鴨業(yè)的穩(wěn)定持續(xù)發(fā)展尤為重要，本文對鴨疫里默氏桿菌的血清型、耐藥機(jī)制、檢測方法與治療措施進(jìn)行了綜述，以期為進(jìn)一步防控鴨疫里默氏桿菌疾病奠定理論基礎(chǔ)。

1 鴨疫里默氏桿菌的流行情況

鴨疫里默氏桿菌病的傳染源主要是被鴨疫里默氏桿菌感染而發(fā)病的鴨、鵝等動物。RA可以通過空氣、被污染的飼料和飲水等途徑傳播，其主要傳播方式包括消化道傳播、呼吸道傳播，其次是由于皮膚破損而感染[6]。該病屬于接觸性、細(xì)菌性傳染病，在我國呈流行性分布，無明顯季節(jié)性。

鴨疫里默氏桿菌病的最早報道是在美國紐約州長島的養(yǎng)鴨場，在當(dāng)?shù)胤Q作“新鴨?。∟ew duck syndrome）”，后也被稱作“鴨敗血癥（Duck septicemia）”。由于其典型病理表現(xiàn)為全身的漿膜面均可見纖維素性滲出物，且大多伴有炎性細(xì)胞浸潤，Dougherty針對其典型的病理變化將該病命名為“傳染性漿膜炎”[1]。

我國首次在北京發(fā)生鴨疫里默氏桿菌病，此后該病在全國各地，尤其是養(yǎng)鴨密集地區(qū)均有發(fā)生。如2017年雍燕等[7]于廣東3個地區(qū)疑似患鴨疫里默氏桿菌病鴨中分離出16株對部分抗生素耐藥的鴨疫里默氏桿菌；2020年陳國權(quán)等[8]于貴州省三穗縣暴發(fā)大規(guī)模雛鴨死亡的養(yǎng)鴨場中分離出11型血清型的鴨疫里默氏桿菌，首次證明貴州省存在11型RA，并通過耐藥基因檢測出分離菌為5重耐藥菌株；2021年董洪燕等[9]于江蘇從鵝源分離出2型血清型的鴨疫里默氏桿菌，通過藥敏試驗結(jié)果顯示所分離的RA多重耐藥性嚴(yán)重。從各地區(qū)相關(guān)報道來看，我國RA的耐藥現(xiàn)象不斷出現(xiàn)，多重耐藥性逐漸成為基本態(tài)勢。

2 鴨疫里默氏桿菌的血清型

目前國際公認(rèn)的RA血清型有21個[3-5]，該菌血清型多樣復(fù)雜，且各血清型之間免疫交叉保護(hù)性差。1969年，Harry等[10]通過平板凝集試驗將分離得到的鴨疫里默氏桿菌鑒定為16個血清型，并命名為A-P型。此后，隨著其他血清型的相繼發(fā)現(xiàn)，RA被重新用阿拉伯?dāng)?shù)字分為21個血清型[11]。2003年，程安春等[12]通過玻片凝集試驗和瓊脂擴(kuò)散沉淀試驗，對我國29個省分離到的1 842株RA進(jìn)行血清學(xué)鑒定，發(fā)現(xiàn)了4株血清型，分別命名為22、23、24和25型血清型。2005年，張大丙[13]采用瓊脂擴(kuò)散沉淀試驗，從只與血清10型的抗血清發(fā)生凝集反應(yīng)的分離株中分離出4個亞型，分別是C2、C449、C459和C598。隨后，張大丙等[14]又用凝集試驗和瓊脂擴(kuò)散沉淀試驗鑒定出從河北鴨場分離的13個RA株可能屬于一種獨立的血清型。這些發(fā)現(xiàn)刷新了我國及國際的鴨疫里默氏桿菌血清型數(shù)據(jù)，為進(jìn)一步有效防控鴨疫里默示桿菌病奠定了理論基礎(chǔ)。

近年來，我國流行菌株主要以1型血清型和2型血清型為主，其次是血清6型、10型。山東、廣東、廣西、湖北等地區(qū)的優(yōu)勢血清型為1型，浙江、貴州等地區(qū)的優(yōu)勢血清型為2型，江蘇、安徽的優(yōu)勢血清型包括1型、2型[15]。部分地區(qū)的RA流行菌株暫不確定。

3 檢測方法與防治措施

3.1 檢測方法

目前，可根據(jù)患病動物的臨床癥狀、病理剖檢變化進(jìn)行初步診斷，確診需要進(jìn)行實驗室診斷。

3.1.1 臨床癥狀 該病可根據(jù)病程長短分為最急性型、急性型、亞急性型和慢性型。急性型發(fā)病急，較少見。慢性型主要見于日齡大的雛鴨[16]?；鉴喼饕憩F(xiàn)為精神沉郁，食欲減退，消瘦，生長遲滯，喜臥惡動，縮頸垂翅；呼吸道癥狀主要見于咳嗽、打噴嚏，鼻、眼等天然孔可見大量黏液性、漿液性、膿性分泌物；神經(jīng)癥狀表現(xiàn)為角弓反張，步態(tài)不穩(wěn)，頭頸歪斜，呈劈叉姿勢，抽搐痙攣，最終死亡?；疾※Z等其他易感禽類癥狀與患鴨相似。

3.1.2 病理剖檢變化 該病的病理變化主要以纖維素性物質(zhì)滲出為主，常見典型癥狀有心包炎、肝周炎、氣囊炎等[1]。此外，可見肝、脾腫大，被膜顯著增厚，表面被覆灰白色或灰黃色、易剝離的纖維素膜。大多數(shù)急性型病例可見心臟腫大，表面被覆灰白色絨毛狀的纖維素性滲出物，且伴有大量炎性細(xì)胞浸潤；大多數(shù)病鴨氣囊也可見灰白色纖維素性滲出物，且炎性細(xì)胞浸潤；少數(shù)病鴨生殖系統(tǒng)可見病變，如輸卵管膨大，橫切可見內(nèi)含大量豆腐渣樣的白色干酪樣物質(zhì)；關(guān)節(jié)液明顯增多，關(guān)節(jié)（尤其是跗關(guān)節(jié)）腫大；大腦為纖維素性腦膜炎，也可見大量纖維素性滲出物和炎性細(xì)胞浸潤；極少數(shù)病例肺臟出現(xiàn)充血、出血和實變等明顯病變[17]。

3.1.3 鑒別診斷 由于鴨疫里默氏桿菌病、大腸桿菌性敗血癥和鴨沙門氏菌病理變化均可見漿膜炎病理變化，故三者容易混淆，需要通過細(xì)菌的分離培養(yǎng)和生化試驗進(jìn)一步鑒定。

3.1.4 實驗室診斷 一是細(xì)菌的分離與鑒定。無菌條件下采集病鴨的腦組織、心血、肝臟等病原菌較豐富的部位，分別接種于普通瓊脂、胰酶大豆瓊脂培養(yǎng)基（TSA）、巧克力瓊脂培養(yǎng)基、鮮血瓊脂培養(yǎng)基和麥康凱瓊脂培養(yǎng)基，置于CO2培養(yǎng)箱或蠟燭缸，37℃培養(yǎng)24～48 h[1,6,18]。

肉眼觀察菌落形態(tài)特點，鴨疫里默氏桿菌在普通瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上不生長（該特點可與大腸桿菌區(qū)別），在巧克力或TSA培養(yǎng)基上可見呈灰白色、圓形隆起、奶油狀、表面光滑、濕潤、直徑1～2 mm的菌落。挑取巧克力瓊脂培養(yǎng)基上的單個疑似菌落涂片，采用革蘭氏染色或瑞氏染色等方法染色，鏡檢，可見鴨疫里默氏桿菌呈短桿狀或橢圓形，散在、成雙或短鏈排列，革蘭氏染色呈陰性、瑞氏染色呈兩極著染[1]。

二是生化試驗診斷。挑取平板上的單個疑似菌落分別接種于生化反應(yīng)管中，37℃培養(yǎng)24～48 h，與多殺性巴氏桿菌病不同，鴨疫里默氏桿菌不發(fā)酵葡萄糖、蔗糖。硝酸鹽還原、VP試驗、甲基紅試驗、尿素分解試驗等均呈陰性，不產(chǎn)生硫化氫。觸酶試驗、氧化酶試驗呈陽性。無溶血現(xiàn)象，可液化明膠[1]。

三是藥敏試驗診斷。由于大多數(shù)養(yǎng)殖場存在抗生素濫用的現(xiàn)象，不同血清型的RA對多種抗生素均產(chǎn)生不同程度的耐藥性。因此，RA耐藥性的鑒定對養(yǎng)殖場合理防治鴨疫里默氏桿菌病顯得尤為重要。主要采用K-B紙片擴(kuò)散法，在已涂布分離菌的TSA平板表面貼上不同的抗生素紙片，48 h后通過測量各抑菌圈直徑大小判斷分離菌的耐藥性。抑菌圈直徑大于20 mm，非常敏感；抑菌圈直徑為15～20 mm，高度敏感；抑菌圈直徑為10～15 mm，中等敏感；抑菌圈直徑小于10 mm，低等敏感甚至不敏感[6]。

四是免疫學(xué)診斷。目前國內(nèi)外常用的血清型鑒定方法包括玻片凝集試驗、試管凝集試驗和瓊脂擴(kuò)散沉淀試驗[19,20]。1982年，Brogden[21]等認(rèn)為瓊脂擴(kuò)散沉淀試驗可以有效進(jìn)行血清型分型，且通過稀釋瓊擴(kuò)抗原可避免交叉反應(yīng)。1991年，Sandhu和Leister[22]提出采用細(xì)菌洗滌的玻片凝集試驗可以快速有效檢測出大量野外分離菌。

近年來，Bin Huang[23]等建立了用RA的P45 N末端重組蛋白作為包被抗原的間接ELISA檢測方法，對RA早期感染進(jìn)行檢測。2004年，程安春[24,25]等以采用超聲波裂解的血清1型、2型、4型RA作為包被抗原，建立血清1型、2型、4型的RA抗體水平檢測的間接ELISA檢測方法。這些新建立的ELISA法具有定性或定量檢測血清中的抗體水平、判定疫苗免疫效果、判定是否RA感染、特異性強(qiáng)等特點。

五是分子生物學(xué)診斷。PCR法也可用于RA鑒定，具有操作簡便、快捷、特異性強(qiáng)、靈敏度高等特點，適用于大量樣本的檢測。2002年胡清海[26]等以RA的15型CVL110/89株編碼42-kDa主要外膜蛋白的基因序列設(shè)計合成一對引物，建立了RA的PCR檢測方法，并利用該法對7個血清型的RA純培養(yǎng)菌的DNA成功擴(kuò)增出809 bp的DNA，而對照組的大腸桿菌和沙門氏菌純培養(yǎng)物DNA擴(kuò)增結(jié)果呈陰性。2005年，Hsiang-Jung Tsai[27]等建立了16S rRNA法，并利用該法擴(kuò)增了18株臺灣株和10株參考株。

3.2 防治措施

3.2.1 日常預(yù)防措施 加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和生物安全措施。對于規(guī)模化養(yǎng)殖場，應(yīng)采取全進(jìn)全出的管理模式。合理控制飼料配比，飼喂?fàn)I養(yǎng)充足的飼料，適時補(bǔ)充維生素和礦物質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)，有利于提高機(jī)體免疫力。盡量減少各種應(yīng)激因素，定期進(jìn)行環(huán)境衛(wèi)生消毒，尤其避免飼料和飲水被污染。避免養(yǎng)殖場鴨群或鵝群接觸野生動物，也可以根據(jù)藥敏試驗結(jié)果選用合適的抗菌藥物。此外，如果養(yǎng)殖場位于疫病流行區(qū)，應(yīng)及時對動物群體進(jìn)行疫苗接種。由于RA血清型多樣，且各血清型之間無交叉免疫保護(hù)，因此可以制備當(dāng)?shù)亓餍芯甑臏缁钜呙邕M(jìn)行預(yù)防接種。

3.2.2 疫病發(fā)生時的措施 如果發(fā)生疫病，應(yīng)及時將患病動物群與假定健康動物進(jìn)行隔離。對患病及病死鴨、鵝等動物尸體和糞便進(jìn)行焚燒、填埋等無害化處理。對被污染的禽舍環(huán)境可以使用高效消毒劑消毒[28]。根據(jù)藥敏試驗結(jié)果，對患病鴨、鵝進(jìn)行藥物治療，嚴(yán)重者需及時淘汰，防止病原擴(kuò)散。

4 結(jié)論與展望

鴨疫里默氏桿菌在我國養(yǎng)鴨地區(qū)廣泛分布，其復(fù)雜多樣的血清型和嚴(yán)重的耐藥性阻礙著我國養(yǎng)鴨業(yè)的健康發(fā)展。近年來，我國各地區(qū)的RA流行血清型有所變化且不斷發(fā)現(xiàn)新的亞型，此形勢對我國防控鴨疫里默氏桿菌病帶來了嚴(yán)峻挑戰(zhàn)，應(yīng)對RA的耐藥機(jī)制加強(qiáng)研究，以便進(jìn)一步為鴨疫里默氏桿菌病的預(yù)防和治療提供有效解決辦法。